THỰC HÀNH MÔN VI SINH THÚ Y - CÁC CÔNG VIỆC SINH VIÊN CẦN LÀM Các bước tiến hành trình phân lập vi khuẩn buổi học Mẫu (bệnh phẩm) Phân lập môi trường thạch máu, MCK, BGA, MSA Quan sát màu sắc, hình thái kích thước khuẩn lạc Cấy vào mơi trường thử phản ứng sinh hóa Quan sát ghi nhận kết kết thử phản ứng sinh hóa Kết luận vi khuẩn Thử kháng sinh đồ BUỔI 1: Phân lập mẫu gồm có BÀI Gram dương) BÀI (Gram âm) - THẠCH MÁU - THẠCH MÁU - MSA - MCK - BGA - XLD ( Xem nội dung yêu cầu thực tập trang ) YÊU CẦU CÁC BẠN PHẢI LÀM: - Quan sát môi trường trước cấy: màu môi trường, tên môi trường - Cấy mẫu vào môi trường: ghi đĩa để vào tủ ấm - Lấy mẫu nhuộm Gram: quan sát hình thái, bắt màu, kết luận Gram âm hay Gram dương BUỔI 2: - Lấy môi trường nuôi cấy quan sát: tính chất khuẩn lạc, màu mơi trường - Lấy khuẩn lạc nhuộn Gram so sánh với nhuộn Gram - Sau lấy khuẩn lạc nhuộm cho vào ống có nước muối sinh lý lắc - Từ ống sinh lý có vi khuẩn cấy qua mơi trường thử sinh hóa (Indol, MR-VP, NA, Gelatin, Citrat, TSI), cấy xong cho vào tủ ấm - Từ ống sinh lý có vi khuần dùng tăm bơng cấy ria mặt thạch NA cho đều, sau đặt đĩa kháng sinh để thử kháng sinh đồ Cấy xong cho vào tủ ấm BUỔI 3: - Lấy môi trường ni cấy để thử phản ứng sinh hóa - Mơi trường thạch máu: khuẩn lạc có tượng gây dung huyết, khuẩn lạc có màu trắng - MSA (màu hồng): môi trường khuẩn lạc chuyển qua màu vàng - Indol: thuốc thử Kowacs - MR: thuốc thử Methy Red - VP: hai loại thuốc thử (NAOH ,α-Naphtol) - Citrat: quan sát môi trường sau nuôi cấy - TSI: quan sát môi trường sau nuôi cấy - Quan sát đo vòng kháng khuẩn ghi nhận: kháng, nhạy trung gian Kết luận phản ứng sinh hóa - oOo BÀI 1: GRAM DƯƠNG (có hai loại vi khuẩn) 1/ - Hình thái vi khuẩn: cầu, hình chùm, màu tím Gram dương - Mơi trường thạch máu: khuẩn lạc có tượng gây dung huyết, khuẩn lạc có màu trắng - MSA: môi trường khuẩn lạc chuyển qua màu vàng - Indol: âm → có vòng màu vàng - MR: dương → có màu đỏ - VP: âm → khơng có màu đỏ - Catalazơ dùng oxy già thử): dương → sủi bọt - Gelatin: tan chảy Kết luận: vi khuẩn STAPHYLOCOCCUS AUREUS 2/ - Hình thái vi khuẩn: cầu, hình chuỗi, màu tím Gram dương - Mơi trường thạch máu: khuẩn lạc khơng có tượng gây dung huyết, khuẩn lạc có màu trắng - MSA: khuẩn lạc khơng mọc - Indol: âm → có vòng màu vàng - MR: dương → có màu đỏ - VP: âm → khơng có màu đỏ - Catalazơ (dùng oxy già thử): âm → không sủi bọt - Gelatin: không tan chảy Kết luận: vi khuẩn STREPTOCOCCUS BÀI 2: VI KHUẨN GRAM ÂM (có hai loại vi khuẩn) 1/ - Hình thái vi khuẩn: hình trực hai đầu tròn, màu hồng Gram âm - Mơi trường thạch máu khuẩn lạc có tượng gây dung huyết, khuẩn lạc có màu trắng - Môi trường MCK: khuẩn lạc không màu - Môi trường BGA: khuẩn lạc khơng màu - Indol: âm → có vòng màu vàng - MR: dương → có màu đỏ - VP: âm → khơng có màu đỏ - Citrat (màu xanh cây): đổi màu (màu xanh nước biển) - TSI (đỏ/đỏ): đỏ/vàng (kiềm/acid), có khơng sinh hơi, có khơng sinh H2S (nếu sinh H2S → có màu đen phần thạch đứng ống môi trường) Kết luận: vi khuẩn SALMONELLA 2/ - Hình thái vi khuẩn: hình trực hai đầu tròn, màu hồng Gram âm - Mơi trường thạch máu: khuẩn lạc có tượng gây dung huyết, khuẩn lạc có màu trắng - Mơi trường MCK (hồng): khuẩn lạc có màu hồng - Mơi trường BGA (hồng lợt): khuẩn lạc môi trường chuyển sang màu vàng - Indol: dương → có vòng màu đỏ - MR: dương → có màu đỏ - VP: âm → khơng có màu đỏ - Citrat: khơng đổi màu (màu xanh cây) - TSI (đỏ/đỏ): vàng/vàng (acid/acid), có khơng sinh hơi, khơng sinh H2S Kết luận: vi khuẩn E.COLI Qua buổi học yêu cầu bạn ghi lại thu hoạch nắm mục đích buổi học Để nắm mục đích ba buổi học, bạn cần trả lời câu hỏi đây: Các bạn học ba buổi học này? Khi nhận mẫu bệnh phẩm yêu cầu phân lập vi khuẩn, bạn cần phải làm gì? Tại sao? Các bạn cho biết mục đích việc thử kháng sinh đồ gì? Khi có kết đo vòng kháng khuẩn, bạn kết luận cho hướng giải vấn đề nào?