Bước đầu xác định sáu hợp chất isoflavone có trong hạt đậu nành bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA  - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: BƯỚC ĐẦU XÁC ĐỊNH SÁU HỢP CHẤT ISOFLAVONE CÓ TRONG HẠT ĐẬU NÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO - HPLC Sinh viên thực Lớp Chuyên ngành Khóa GVHD Đà Nẵng, 04/2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA  - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: BƯỚC ĐẦU XÁC ĐỊNH SÁU HỢP CHẤT ISOFLAVONE CÓ TRONG HẠT ĐẬU NÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO - HPLC Sinh viên thực Lớp Chuyên ngành Khóa GVHD Đà Nẵng, 04/2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Võ Văn Hùng Lớp: : 14CHP Tên đề tài Bước đầu xác định sáu hợp chất isoflavone có hạt đậu nành phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - HPLC Mục đích đề tài  Khảo sát điều kiện tối ưu để xác định sáu hợp chất isoflavone từ dịch chiết phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao -HPLC  Khảo sát quy trình xử lý mẫu để xác định isoflavone phương pháp HPLC  Xác định sáu hợp chất isoflavone hạt đậu nành phương pháp HPLC Thời gian thực  Ngày nhận đề tài: 01 tháng 01 năm 2018  Ngày bảo vệ: 27 tháng 04 năm 2018 Giáo viên hƣớng dẫn: TS Bùi Xuân Vững Phạm vi thực Nghiên cứu phòng thí nghiệm trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng, địa chỉ: 459 Tơn Đức Thắng, phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, Tp Đà Nẵng Chủ nhiệm khoa Giáo viên hướng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) - Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày….tháng….năm 2018 - Kết điểm đánh giá Đà Nẵng, ngày … tháng…… năm 2018 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) MỤC LỤC CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ ĐẬU NÀNH 1.1.1 Nguồn gốc đặc điểm a) Nguồn gốc b) Đặc điểm 1.1.2 Thành phần hóa học đậu nành 1.2 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ ISOFLAVONE 1.2.1 Nguồn gốc Isoflavone 1.2.2 Thành phần hóa học, tính chất, cấu trúc isoflavone 1.2.3 Tác dụng isoflavone phòng điều trị bệnh a) Tác dụng chuyển hóa xương b) Tác dụng tim mạch c) Nâng cao chất lượng sống phụ nữ d) Tác dụng phụ gặp với isoflavone đậu nành e) Ứng dụng isoflavone 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 1.3.1 Các nghiên cứu nước a) Tại Hàn Quốc 10 b) Tại Australia 11 1.3.2 Các nghiên cứu nước 11 1.4 Cơ sở lý thuyết phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 12 1.4.1 Khái niệm 12 1.4.2 Nguyên tắc trình sắc ký 12 1.4.3 Phân loại sắc ký hấp phụ 13 1.4.4 Các đại lượng đặc trưng sắc ký đồ 14 a) Thời gian lưu thực t’R 15 b) Hệ số dung lượng K’ 15 c) Độ chọn lọc α 15 d) Số đĩa lý thuyết 15 e) Độ phân giải 16 f) Hệ số không đối xứng 17 1.4.5 Hệ thống HPLC 17 a) Bình đựng dung mơi 18 b) Bộ phận khử khí 19 c) Bơm cao áp 19 d) Bộ phận tiêm mẫu 19 e) Cột sắc ký 19 f) Đầu dò 20 g) Bộ phận ghi tín hiệu 21 h) Thiết bị in liệu 21 1.4.6 Phương pháp chọn điều kiện sắc ký 21 a) Lựa chọn pha tĩnh 21 b) Lựa chọn pha động 22 1.4.7 Các bước tiến hành sắc ký 23 a) Chuẩn bị dụng cụ máy móc 23 b) Chuẩn bị dung môi pha động 24 c) Chuẩn bị mẫu đo HPLC 24 d) Cách vận hành thiết bị 24 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Nguyên liệu hạt đậu nành 26 2.2 Hóa chất dụng cụ, thiết bị 26 2.2.1 Hóa chất 26 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 26 2.3 Chuẩn hóa kỹ thuật phân tích 28 2.4 Nội dung nghiên cứu 28 2.4.1 Khảo sát phương pháp trích ly isoflavone 28 a) Quy trình cơng nghệ chiết isoflavone phòng thí nghiệm phương pháp chiết lắc thơng thường 29 b) Phương pháp trích ly isoflavone phương pháp lắc có hỗ trợ siêu âm 30 2.4.2 Phương pháp định tính, định lượng isoflavone hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao - HPLC 31 a) Khảo sát điều kiện tối ưu cho hệ thống HPLC để phân tích isoflavone 31 b) Khảo sát tỷ lệ thành phần pha động 32 c) Khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính 33 d) Phân tích định tính isoflavone 33 e) Phân tích định lượng isoflavone 33 2.4.3 Khảo sát độ lặp lại phép đo 34 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Kết khảo sát tỷ lệ thành phần pha động 36 3.2 Kết khảo sát mẫu hạt đậu nành có isoflavone theo thành phần pha động hệ 37 3.3 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính 40 3.3.1 Kết đo dãy dung dịch chuẩn STD1- STD5 40 3.3.2 Xây dựng đường chuẩn 41 3.4 Khảo sát độ lặp lại phép đo 44 3.5 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) 46 3.6 Kết định tính isoflavone mẫu dịch bã 47 3.7 Kết đo mẫu thực 49 3.7.1 Kết đo dịch hạt chiết cồn 80 49 3.7.2 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm 50 3.7.3 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc 50 3.7.4 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm 51 3.8 Tính tốn hàm lượng isoflavone có mẫu hạt đậu nành phương pháp đường chuẩn 52 3.8.1 Mẫu dịch hạt chiết cồn 80 52 3.8.2 Mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm 53 3.8.3 Mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc 54 3.8.4 Mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 HPLC DMSO PTFE AOAC CHD MeCN EtOH MeOH ACN STD SD RSD LOD LOQ DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1 Cây đậu nành (nguồn: tá Hình Hình ảnh hạt đậu nành ( Hình Hình ảnh giống đậu nàn Hình Cấu trúc hóa học iso Hình Cấu trúc hóa học cá Hình Cấu trúc hóa học - Glucozit Hình No- GMO Soy isoflavone Hình Calcium 600+ vitamin D Hình Active- Meno Hình 10 Sơ đồ thể Hình 11 Quá trình rửa g Hình 12 Sắc ký đồ c Hình 13 Ảnh hưởng Hình 14 Cách tính hệ số Hình 15 Các thiết bị tron Hình Hạt bột đậu nành khô Hình 2 Thiết bị khuấy thiết bị li tâm Hình Thiết bị lọc chân khơng thiết bị cô quay chân không Hình Máy lắc thiết bị sấy Hình Tủ lạnh thiết bị cất n Hình Thiết bị HPLC Hình Sơ đồ quy trình chiết lắ Hình Quy trình chiết isoflavo phòng thí nghiệm Hình Sắc ký đồ mẫu chuẩn isoflavone theo hệ 36 Hình Sắc ký đồ mẫu chuẩn isoflavone theo hệ 36 Hình 3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn isoflavone theo hệ 37 Hình Đồ thị biểu diễn thay đổi thành phần pha động theo hệ 37 Hình Sắc ký đồ mẫu cao hạt đậu nành 38 Hình Sắc ký đồ mẫu dịch hạt đậu nành chiết cồn 80% 38 Hình Sắc ký đồ mẫu hạt khơ 39 Hình Sắc ký đồ mẫu cao bã đậu nành 39 Hình Sắc ký đồ mẫu dịch bã đậu nành 40 Hình 10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ Daidzin 42 Hình 11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ Glycitin 42 Hình 12 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ genistin 43 Hình 13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ Daidzein 43 Hình 14 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ Glycitein 43 Hình 15 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ Genistein 44 Hình 16 Sắc ký đồ isoflavone mẫu dung dịch chuẩn 48 Hình 3.17 Sắc ký đồ isoflavone mẫu dịch chiết cồn 80 48 Hình 18 Sắc ký đồ mẫu dịch hạt chiết etanol 80 49 Hình 19 Sắc ký đồ mẫu hạt khô chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp siêu âm 50 Hình 20 Sắc ký đồ mẫu hạt khô chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp lắc 51 Hình 21 Sắc ký đồ mẫu hạt khô chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp lắc kết hợp siêu âm 52 = L O D Trong đó:  a hệ số góc phương trình hồi quy  SY/X độ lệch chuẩn mẫu  trắng, xác định theo hàm LINEST excel Kết LOD LOQ trình bày bảng 3.13 Daidzin Glycitin Nhận xét: Theo kết khảo sát nhận thấy độ lệch chuẩn tương đối Genistin chất nhỏ 1% Như vậy, hệ Daidzein thống sắc ký HPLC có độ lặp lại tốt, Glycitein quy trình phân tích ổn định áp dụng để phân tích mẫu thực Genistein 3.5 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát xem nồng độ thấp chất phân tích mà hệ thống phân tích cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu 3.6 Kết định tính isoflavone mẫu dịch bã  Mẫu dịch chiết cồn 80 : Mẫu xử lý chuẩn bị theo quy trình 2.4.2.5.1 để đo HPLC  Mẫu dung dịch chuẩn: Dung dịch chuẩn isoflavone pha Acetonitril  Giới hạn định lượng xem Điều kiện sắc ký:  Pha động : - Pha động B : Nước chứa 0,05 % acid phosphoric nồng độ thấp (xQ) chất phân - Pha động C : tích mà hệ thống phân tích định lượng Acetonitrile với tín hiệu phân tích (yQ) khác có  Pha tĩnh : octadecyl silane liên kết ý nghĩa định lượng với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu  Thể tích tiêm mẫu : 10µl với silicagel (ODS ; C18)  Tốc độ dòng pha động: 1,5ml/phút  Detector : UV bước sóng 260nm  Nhiệt độ buồng cột : 40 C Kết sắc ký đồ mẫu dung dịch chuẩn mẫu dịch chiết cồn 80 thể hình 3.16 3.17 47 Hình 16 Sắc ký đồ isoflavone mẫu dung dịch chuẩn Hình 3.17 Sắc ký đồ isoflavone mẫu dịch chiết cồn 80 Nhận xét: Dựa vào kết sắc ký đồ mẫu dung dịch chuẩn isoflavone mẫu dịch thử, định danh hợp chất isoflavone mẫu thử dựa vào thời gian lưu Kết cho thấy: thời gian lưu peak là: • daidzin (17 phút) • glycitin (19 phút) • genistin (24 phút) 48 3.7 Kết đo mẫu thực 3.7.1 Kết đo dịch hạt chiết cồn 80 0 o Kết đo dịch hạt chiết cồn 80 , tỉ lệ hạt khô/dung môi=20/1 60 C trình bày bảng 3.14 với mẫu chuẩn bị sau: 12,50g hạt khô xay mịn chiết cồn 80 , tỉ lệ hạt khô/ dung môi 20/1 o 60 C theo quy trình chiết khảo sát thu 60ml dịch chiết Lấy xác 4ml dịch chiết cho vào bình định mức 25ml, thêm vào 5ml Acteonitril Lắc 60 phút với tốc độ 140 vòng/ phút Sau đó, chuyển tồn dịch vào ống ly tâm, tráng bình 1ml nước cất cho vào ống ly tâm Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/ phút vòng phút Cuối cùng, chuyển dịch chiết vào bình định mức 10ml (bảo quản -18 C) Lọc qua màng PTFE 0,2 µm đo HPLC Hình 18 Sắc ký đồ mẫu dịch hạt chiết etanol 80 Bảng 14 Kết đo dịch hạt chiết cồn 80 0 3.7.2 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp siêu âm mục 2.4.2.5.1 thể bảng 3.15 hình 3.19 Hình 19 Sắc ký đồ mẫu hạt khơ chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp siêu âm Bảng 15 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm 3.7.3 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp lắc mục 2.4.2.5.1 thể bảng 3.16 hình 3.20 50 Hình 20 Sắc ký đồ mẫu hạt khơ chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp lắc Bảng 16 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc 3.7.4 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm Kết đo mẫu hạt khơ chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp siêu âm kết hợp lắc mục 2.4.2.5.1 thể bảng 3.17 hình 3.21 51 Hình 21 Sắc ký đồ mẫu hạt khơ chiết theo AOAC với quy trình xử lý mẫu phương pháp lắc kết hợp siêu âm Bảng 17 Kết đo mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm Nhận xét: Kết phân tích cho thấy có ảnh hưởng siêu âm đến kết isoflavone Mẫu xử lý phương pháp siêu âm kết hợp lắc cho kết hàm lượng isoflavone cao so với mẫu xử lý phương pháp lắc siêu âm 3.8 Tính tốn hàm lƣợng isoflavone có mẫu hạt đậu nành phƣơng pháp đƣờng chuẩn 3.8.1 Mẫu dịch hạt chiết cồn 80  Hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức: 52 (3.1) Trong đó:  CX nồng độ chất phân tích tính theo phương trình hồi quy (µg/ml)  V thể tích dịch chiết (ml) Trong trường hợp V= 60ml  F hệ số pha loãng Trong trường hợp F=10/4  mmẫukhô = 12,50g  Kết nồng độ hợp chất isoflavone ( tính tốn dựa theo phương trình đường chuẩn xây dựng mục 3.3.2, kết cụ thể cho bảng 3.18  Kết hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức 3.1, kết trình bày bảng 3.18 Bảng 18 Kết hàm lượng isoflavone có mẫu dịch hạt chiết etanol 80 Tổng hàm lượng isoflavone có mẫu dịch hạt chiết etanol 3.8.2 Mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm  Hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức: (3.2) Trong đó:  CX nồng độ chất phân tích tính theo phương trình đường chuẩn (µg/ml) 53  V thể tích dịch chiết (ml) Trong trường hợp V= 13.5ml  mhạt khô = 1g tương đương với mhạt ẩm = 1,0619g  Kết nồng độ hợp chất isoflavone ( tính tốn dựa theo phương trình đường chuẩn xây dựng mục 3.3.2, kết cụ thể cho bảng 3.19  Kết hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức 3.2, kết trình bày bảng 3.19 Bảng 19 Kết hàm lượng isoflavone có 1g mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm Tổng hàm lượng mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp siêu âm 3.8.3 Mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc  Hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức: (3.3) Trong đó:  CX nồng độ chất phân tích tính theo phương trình đường chuẩn (µg/ml)  V thể tích dịch chiết (ml) Trong trường hợp V= 13.5ml  mhạt khô = 1g tương đương với mhạt ẩm = 1,0619g 54  Kết nồng độ hợp chất isoflavone ( tính tốn dựa theo phương trình đường chuẩn xây dựng mục 3.3.2, kết cụ thể cho bảng 3.20  Kết hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức 3.3, kết trình bày bảng 3.20 Bảng 20 Kết hàm lượng isoflavone có 1g mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc Tổng hàm lượng mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc 3.8.4 Mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm  Hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức: (3.4) Trong đó:  CX nồng độ chất phân tích tính theo phương trình đường chuẩn (µg/ml)  V thể tích dịch chiết (ml) Trong trường hợp V= 13.5ml  mhạt khô = 1g tương đương với mhạt ẩm = 1,0619g  Kết nồng độ hợp chất isoflavone ( tính tốn dựa theo phương trình đường chuẩn xây dựng mục 3.3.2, kết cụ thể cho bảng 3.21 55  Kết hàm lượng isoflavone mẫu tính theo cơng thức 3.4, kết trình bày bảng 3.21 Bảng 21 Kết hàm lượng isoflavone có 1g mẫu hạt khơ chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm Tổng hàm lượng isoflavone 1g mẫu hạt khô chiết theo AOAC phương pháp lắc kết hợp siêu âm 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Kết đề tài “Bước đầu xác định sáu hợp chất isoflavone hạt đậu nành phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - HPLC” cho kết luận sau: Chọn điều kiện phù hợp để tách xác định đồng thời sáu hợp chất isoflavone daidzin, glycitin, genistin, daidzein, glycitein, genistein thiết bị sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) với detector UV/Vis Cột tách Thể tích vòng mẫu Bước sóng Pha tĩnh Thành phần pha động Tốc độ dòng Đề xuất quy trình chuẩn bị mẫu đo HPLC– chiết chất tối ưu Cân 1.0619g mẫu hạt ẩm (tương đương 1g mẫu khơ) cho vào bình tam giác 100ml, thêm vào 8.5ml Acetonitril Đem siêu âm vòng 10 phút Sau đó, lắc 60 phút với tốc độ 140 vòng/ phút nhiệt độ phòng Chuyển toàn dung dịch vào ống ly tâm dùng 5ml nước cất để tráng bình (nước tráng cho vào ống ly tâm) Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/ phút thời gian phút Cuối cùng, chuyển dịch chiết vào bình định mức 25ml (bảo quản -18 C) Lọc qua màng PTFE 0,2 µm đo HPLC Xác định LOD, LQD khoảng tuyến tính hợp chất isoflavone sau: 57 Hợp chất Daidzin 12,65660 Glycitin Genistin Daidzein Glycitein Genistein  Đề xuất Như vậy, với kết thu được, ta thấy phương pháp HPLC có độ nhạy cao, độ lặp lại tốt, thích hợp cho việc phân tích đồng thời sáu hợp chất isoflavone mẫu đậu nành Tôi hi vọng nghiên cứu góp phần vào việc ứng dụng phương pháp HPLC để xác định hợp chất isoflavone nói riêng hợp chất khác nói chung mẫu đậu nành mẫu hạt bã khác có chứa hợp chất isoflavone 58 0,86723 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1]“Comprasion of extraction solvents and techniques used for the assay of isoflavones from soybean” D.L Luthria et al./Food Chemistry 105 (2007) 325–33 [2] Báo cáo kết đề tài khoa học công nghệ “Bước đầu xác định hàm lượng daidzein, genistein 17 acid amin đậu tương sản phẩm chế biến”, 2007 [3] “Nghiên cứu số giải pháp nâng cao hiệu suất chuyển hóa isoflavone đậu tương từ dạng glycoside sang dạng aglycone”, Nguyễn Thị Việt Hà, 2012 [4] Bùi Xuân Vững, “Lý thuyết sắc kí lỏng hiệu cao, Khoa Hóa” - Trường Đại học Sư phạm, 2012 [5] Đỗ Thị Hoa Viên (2004) Quy trình chiết tách phytoestrogen từ đậu tương Báo cáo kết nghiên cứu Đề tài KC 04-17-2004 “Nghiên cứu giải pháp công nghệ sinh học sản xuất chế phẩm y sinh học đặc thù để bảo vệ sức khỏe nhân dân từ nguồn tài nguyên sinh vật Việt Nam”, 10-16 [6] Lena Jankowiak, Olivera Trifunovic, Remko M Room, Atze J van der Goot (2013), The potential of crude okara for isoflavone production [7] ”Determination of Total Soy Isoflavones in Dietary Supplements, Supplement Ingredients, and Soy Foods by High-Performance Liquid Chromatography with Ultraviolet Detection: Collaborative Study” Published in final edited form as: J AOAC Int 2008 ; 91(3): 489–500 [8] Lena Jankowiak, Olivera Trifunovic, Remko M Room, Atze J van der Goot (2013), The potential of crude okara for isoflavone production [9] “Solvent extraction selection in the determination of isoflavones in soy foods”, [10] Kaufman PB, Duke JA, Brielmann H, Boik J, Hoyt JE (1997) “A comparative survey of leguminous plants as sources of the isoflavones genistein and daidzein: Implications for human nutrition and health” J Altern Compl Med 3:7-12 59 ... 14CHP Tên đề tài Bước đầu xác định sáu hợp chất isoflavone có hạt đậu nành phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - HPLC Mục đích đề tài  Khảo sát điều kiện tối ưu để xác định sáu hợp chất isoflavone từ... dịch chiết phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao -HPLC  Khảo sát quy trình xử lý mẫu để xác định isoflavone phương pháp HPLC  Xác định sáu hợp chất isoflavone hạt đậu nành phương pháp HPLC Thời gian...  - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: BƯỚC ĐẦU XÁC ĐỊNH SÁU HỢP CHẤT ISOFLAVONE CÓ TRONG HẠT ĐẬU NÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO - HPLC Sinh viên thực Lớp Chuyên ngành Khóa