Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống cây phúc bồn tử (rubus idaeus) bằng phương pháp nuôi cấy in vitro

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƯỜNG NGUYỄN THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY PHÚC BỒN TỬ (RUBUS IDAEUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NI CẤY IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Đà Nẵng - Năm 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƯỜNG NGUYỄN THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY PHÚC BỒN TỬ (RUBUS IDAEUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN VITRO Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Cán hướng dẫn: TS VÕ CHÂU TUẤN Đà Nẵng - Năm 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Thị Nhung LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Khoa Sinh – Môi trường, trường Đại học Sư phạm - Đại học Đà Nẵng, học hỏi nhiều kiến thức lý thuyết thực hành thí nghiệm ni cấy mơ tế bào thực vật Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Võ Châu Tuấn, người thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô khoa, bạn, nhóm nghiên cứu giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm, động viên tơi suốt q trình làm khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn ! Đà Nẵng, tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thị Nhung MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu số phương pháp nhân giống thực vật 1.2 Giới thiệu phương pháp nhân giống in vitro 1.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến đến trình nhân giống in vitro .4 1.2.1.1 Mẫu nuôi cấy .4 1.2.1.2 Vô trùng nuôi cấy .5 1.2.1.3 Môi trường nuôi cấy 1.2.1.4 Điều kiện nuôi cấy .10 1.2.2 Các giai đoạn nhân giống in vitro 10 1.2.2.1 Giai đoạn 1: Khử trùng mô nuôi cấy 10 1.2.2.2 Giai đoạn 2: Tái sinh mẫu nuôi cấy mô 10 1.2.2.3 Giai đoạn 3: Giai đoạn nhân nhanh 11 1.2.2.4 Giai đoạn 4: Tạo hoàn chỉnh 11 1.2.2.5 Giai đoạn 5: Đưa đất 11 1.2.3 Một số nghiên cứu nhân giống in vitro ăn quả, thuốc .11 1.3 Giới thiệu phúc bồn tử 12 1.3.1 Nguồn gốc vị trí phân loại 12 1.3.1.1 Nguồn gốc, phân bố 12 1.3.1.2 Vị trí phân loại 13 1.3.2 Đặc điểm sinh học, sinh thái 13 1.3.3 Công dụng giá trị sử dụng 14 1.3.4 Các nghiên cứu liên quan .16 1.3.4.1 Nghiên cứu nước 16 1.3.4.2 Nghiên cứu nước 17 1.3.5 Tình hình phát triển phúc bồn tử Việt Nam .17 1.3.5.1 Tình hình trồng phúc bồn tử Lâm Đồng - Việt Nam 17 1.3.5.2 Phương pháp nhân giống 17 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu .19 2.3.1 Phương pháp vô trùng mẫu vật 20 2.3.2 Phương pháp tái sinh chồi in vitro 20 2.3.3 Phương pháp nhân nhanh chồi in vitro .20 2.3.4 Phương pháp tái sinh rễ 21 2.3.5 Phương pháp đưa trồng vườn ươm .21 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 21 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Đánh giá hiệu khử trùng mẫu vật phúc bồn tử 22 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trường đến khả nhân nhanh chồì in vitro phúc bồn tử 24 3.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử 24 3.2.2 Ảnh hưởng Kin đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử 26 3.2.3 Ảnh hưởng BAP IBA đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử 27 3.2.4 Ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử 28 3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả tái sinh rễ in vitro phúc bôn tử .29 3.3.1 Ảnh hưởng hàm lượng khoáng đến khả tái sinh rễ in vitro phúc bồn tử 29 3.3.2 Ảnh hưởng IBA đến khả tái sinh rễ in vitro phúc bồn tử 30 3.4 Kết khảo sát điều phù hợp cho giai đoạn vườn ươm in vitro phúc bồn tử 31 3.4.1 Kết khảo sát giá thể tối ưu .31 3.4.2 Kết đánh giá ảnh hưởng tuổi in vitro đến khả sống giai đoạn vườn ươm 33 3.4.3 Đánh giá khả phát triển giai đoạn vườn ươm 34 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 Kết luận 36 Đề nghị 36 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 PHỤ LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT 2,4-D : Diclorophenoxyacetic acid AC : Active carbon (than hoạt tính) BAP : - benzyl amino purine CW : Coconut water (nước dừa) Cs : Cộng ĐHST : Điều hòa sinh trưởng IAA : β-indol-acetic acid IBA : Indole - butyric acid Kin : Kinetin MS : Murashige Skoog (1962) NAA : α-naphthalen acetic acid DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Nồng độ thời gian khử trùng số tác nhân vô trùng .5 Bảng 3.1: Hiệu khử trùng hạt phúc bồn tử 22 Bảng 3.2: Hiệu khử trùng đoạn thân có mắt phúc bồn tử .23 Bảng 3.3: Ảnh hưởng BAP nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử sau tuân nuôi cấy 24 Bảng 3.4: Ảnh hưởng Kin đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử sau tuần nuôi cấy 26 Bảng 3.5: Hiệu nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử kết hợp BAP IBA nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 27 Bảng 3.6: Ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử môi trường MS bổ sung 0,75mg/l BAP 0,2mg/l IBA sau tuần nuôi cấy 28 Bảng 3.7: Kết đánh giá ảnh hưởng hàm lượng khoáng đến khả rễ phúc bồn tử sau 20 ngày khảo sát 30 Bảng 3.8: Kết khảo sát ảnh hưởng IBA đến khả tái sinh rễ phúc bồn tử sau 20 ngày nuôi cấy mơi trường ¼ MS 31 Bảng 3.9: Khảo sát giá thể tối ưu trồng phúc bồn tử sau 15 ngày ươm trồng .32 Bảng 3.10: Đánh giá khả sinh trưởng phát triển phúc bồn tử điều kiện nhà lưới 35 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Cây phúc bồn tử tự nhiên 19 Hình 2.2: Sơ đồ quy trình nghiên cứu 20 Hình 3.1: Hạt phúc bồn tử ni mơi trường MS khơng chất kích thích khơng có tượng tái sinh chồi 22 Hình 3.2: Chồi phúc bồn tử tái sinh môi trường MS không chất kích thích sinh trưởng sau tháng ni cấy 24 Hình 3.3: Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi phúc bồn tử sau tuần nuôi cấy 25 Hình 3.4: Ảnh hưởng Kin đến khả tái sinh chồi phúc bồn tử sau tuần nuôi cấy 27 Hình 3.5: Hiệu nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử kết hợp BA IBA sau tuần nuôi cấy 28 Hình 3.6: Ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử sau tuần nuôi cấy môi trường MS bổ sung 0,75mg/l BAP + 0,2 mg/l IBA kết hợp nước dừa nồng độ khác 29 Hình 3.7: Rễ phúc bồn tử phát triển môi trường 1/4MS không chất kích thích sinh trưởng sau 20 ngày ni cấy 30 Hình 3.8: Phúc bồn tử ươm trồng loại giá thể khác .32 Hình 3.9: Cây phúc bồn tử phát triển giá thể CT4 (trái) CT1 (phải) sau 30 ngày 33 Hình 3.10: Phúc bồn tử rễ sau 15 ngày (A) 20 ngày (B) 34 Hình 3.11: Cây phúc bồn tử 15 ngày rễ thích nghi sinh trưởng sau 15 tháng ươm trồng 34 Hình 3.12: Cây phúc bồn tử phát triển điều kiện vườn ươm Đà Nẵng 35 Hình 3.13: Một số Phúc bồn tử có tượng phát sinh chồi từ gốc sau tháng sinh trưởng .35 Hình 3.4: Ảnh hưởng Kin đến khả tái sinh chồi phúc bồn tử sau tuần nuôi cấy A 0,25mg/l B 0,5mg/l B E 1,25mg/l Chú thích: C 0,75mg/l F 1,5mg/l D 1mg/l G 2mg/l : Thanh tỷ lệ 1cm 3.2.3 Ảnh hưởng BAP IBA đến khả nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử Ở nồng độ 0,75mg/l BAP cho kết khả nhân nhanh chồi cao Việc kết hợp auxin/cytokinin với tỷ lệ thấp phù hợp ghi nhận nâng cao khả nhân nhanh chồi số [36] Tiến hành kết hợp BAP với IBA nồng độ khác nhau, đánh giá hiệu nhân chồi Bảng 3.5: Hiệu nhân nhanh chồi in vitro phúc bồn tử kết hợp BAP IBA nồng độ khác sau tuần nuôi cấy BAP (mg/l) IBA (mg/l) Hệ số nhân chồi (chồi/mẫu) Chiều dài chồi (cm) 0,75 0,1 5,67a ± 0,88 2,03a ± 0,07 0,75 0,2 8,67b ± 0,88 2,3b ± 0,03 0,75 0,3 5,67a ± 0,33 1,96c ± 0,03 Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p