Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống hoa phong lữ pelargonium zonale l bằng kĩ thuật nuôi cấy invitro

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG *** NGUYỄN THỊ PHƯƠNG TRANG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA PHONG LỮ (PELARGONIUM ZONALE L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÀ NẴNG - Năm 2014 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG *** NGUYỄN THỊ PHƯƠNG TRANG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA PHONG LỮ (PELARGONIUM ZONALE L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO Ngành: SƯ PHẠM SINH HỌC Người hướng dẫn: ThS VÕ CHÂU TUẤN ĐÀ NẴNG - Năm 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Thị Phương Trang LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực khố luận tốt nghiệp này, tơi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Công nghệ Sinh học, Khoa Sinh – Môi trường, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến NCS Ths Võ Châu Tuấn – thầy giáo tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình tơi thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ths Bùi Thị Thơ, Ths Nguyễn Thị Duy Nhất, người giúp đỡ nhiều việc trau dồi kiến thức kĩ thực hành thí nghiệm suốt q trình tơi thực đề tài khố luận Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn gia đình, bạn bè ln động viên, khích lệ tơi vật chất lẫn tinh thần để tơi đạt kết tốt Đà Nẵng, tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Thị Phương Trang MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU .1 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược hoa tình hình sản xuất hoa .3 1.1.1 Sơ lược hoa 1.1.2 Tình hình sản xuất hoa 1.2 Nghiên cứu nhân giống in vitro loài hoa 1.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng nhân giống in vitro 1.2.1.1 Nguồn mẫu vật nuôi cấy 1.2.1.2 Điều kiện khử trùng 1.2.1.3 Môi trường nuôi cấy 1.2.1.4 Điều kiện nuôi cấy 1.2.1.5 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật .8 1.2.2 Những thành tựu nghiên cứu nhân giống loài hoa kỹ thuật in vitro 1.2.2.1 Các nghiên cứu giới .9 1.2.2.2 Các nghiên cứu nước .11 1.3 Giới thiệu phong lữ 13 1.3.1 Phân bố .13 1.3.2 Đặc điểm hình thái .13 1.3.3 Thành phần hóa học 14 1.3.4 Giá trị sử dụng 14 1.3.5 Các nghiên cứu nhân giống hoa phong lữ 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu .18 2.2.1 Phương pháp vô trùng mẫu vật 19 2.2.2 Phương pháp nảy mầm hạt in vitro 19 2.2.3 Phương pháp tạo protocorm .19 2.2.4 Phương pháp nhân nhanh protocorm 19 2.2.5 Nhân nhanh chồi từ protocorm 20 2.2.6 Phương pháp tạo rễ in vitro - hình thành hồn chỉnh 20 2.2.7 Xử lí thống kê 20 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Đánh giá hiệu khử trùng mẫu 21 3.2 Ảnh hưởng BA KIN đến khả nảy mầm hạt phong lữ 22 3.3 Ảnh hưởng BA đến khả hình thành protocorm từ nguồn mẫu vật phong lữ 24 3.4 Ảnh hưởng BA, KIN đến khả nhân protocorm phong lữ .27 3.5 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi in vitro phong lữ 28 3.5.1 Ảnh hưởng BA, KIN riêng rẽ đến khả nhân nhanh chồi in vitro phong lữ 28 3.5.2 Ảnh hưởng BA KIN phối hợp đến khả nhân nhanh chồi in vitro phong lữ 31 3.5.3 Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh chồi in vitro phong lữ 32 3.6 Ảnh hưởng IBA, NAA đến khả hình thành rễ in vitro phong lữ .34 3.7 Quy trình nhân giống phong lữ từ hạt kỹ thuật nuôi cấy in vitro .37 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : diclorophenoxyacetic acid AC : active carbon (than hoạt tính) BA : 6-benzyl adenine BAP : 6-benzylaminopurine B5 : Gamborg (1968) cs : cộng CW : coconut water (nước dừa) ĐHST : điều hòa sinh trưởng IAA : indole 3-acetic acid IBA : indole 3-butyric acid I&Y : Ichihashi & Yamashita KC : Knudson C (1965) KIN : kinetin L : lít MS : Murashige Skoog (1962) NAA : α-naphthalen acetic acid MKC : Modified Knudson ‘C’ RE : Robert Ernst (1979) SH : Schenk Hildebrandt (1972) TDZ : thidiazuron (N-phenyl-N’-1,2,3-thidiazol-5-ylurea) V & W : Vacin Went (1949) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 Tên bảng Hiệu khử trùng mẫu Ảnh hưởng BA KIN đến khả nảy mầm hạt hoa phong lữ Ảnh hưởng BA đến khả hình thành protocorm phong lữ sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng BA, KIN đến khả nhân protocorm phong lữ sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng BA, KIN đến khả nhân chồi in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy 3.6 3.7 3.8 Ảnh hưởng BA KIN đến khả nhân nhanh chồi in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh chồi in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng IBA, NAA đến khả hình thành rễ in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy Trang 21 22 25 27 29 31 33 35 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang 2.1 Cây phong lữ tự nhiên 18 2.2 Hạt phong lữ 18 2.3 Sơ đồ thí nghiệm 18 Hạt phong lữ nảy mầm in vitro sau tuần nuôi cấy: (a) Hạt nảy mầm môi trường MS (b) Hạt nảy mầm môi trường MS bổ sung 0,5 mg/L 3.1 BA (c) Hạt nảy mầm môi trường MS bổ sung 0,5 mg/L 24 KIN (d) Hạt nảy mầm môi trường MS bổ sung 2,0 mg/L KIN Khả tạo protocorm từ nguồn mẫu vật sau tuần nuôi cấy: (a) Protocorm tạo thành môi trường MS bổ sung 1,0 mg/L BA 3.2 (b) Lá không phát sinh protocorm môi trường MS bổ sung 2,5mg/L BA 26 (c) Callus tạo thành từ cuống hóa đen mơi trường MS bổ sung 0,5 mg/L BA (d) Callus tạo thành từ hóa nâu mơi trường MS bổ sung 1,5 mg/L BA Protocorm nhân nhanh sau tuần nuôi cấy: 3.3 (a) Trên môi trường MS bổ sung 1,0 mg/L BA (b) Trên môi trường MS bổ sung 0,5 mg/L BA 28 Chồi in vitro phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung BA, KIN riêng rẽ: 3.4 (a) Trên môi trường MS bổ sung 2,0 mg/L BA (b) Trên môi trường MS bổ sung 4,0 mg/L KIN 30 (c) Trên môi trường MS bổ sung 2,5 mg/L KIN (d) Trên môi trường MS bổ sung 3,5 mg/L KIN 3.5 Chồi in vitro phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi cấy môi trường MS bổ sung mg/L BA mg/L KIN 32 Chồi in vitro phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi cấy 3.6 môi trường MS bổ sung mg/L BA 0,1 mg/L 34 IBA Chồi in vitro hình thành rễ sau tuần nuôi cấy: (a) Trên môi trường MS 3.7 (b) Trên môi trường MS bổ sung 1,0 mg/L IBA (c) Trên môi trường MS bổ sung 0,5 mg/L NAA 37 (d) Chồi khơng hình thành rễ mơi trường MS bổ sung 1,0 mg/L NAA 3.8 Sơ đồ quy trình nhân giống hoa phong lữ kỹ thuật nuôi cấy in vitro 38 34 Hình 3.6 Chồi in vitro phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung 1,0 mg/L BA 0,1 mg/L IBA 3.6 Ảnh hưởng IBA, NAA đến khả hình thành rễ in vitro phong lữ Chồi hình thành từ protocorm nuôi cấy môi trường MS bổ sung IBA (0,5 – 2,5 mg/L) NAA (0,5 – 2,5 mg/L) để khảo sát khả hình thành rễ in vitro tạo hoàn chỉnh Kết trình bày bảng 3.8 35 Bảng 3.8 Ảnh hưởng IBA, NAA đến khả hình thành rễ in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy Chất ĐHST (mg/L) Khả phát sinh rễ Tỉ lệ Số rễ/chồi Chiều dài rễ rễ (%) (rễ) (cm) a 100,0 5,4 3,8a IBA NAA - - 0,5 - 88,8 5,3a 1,1c 1,0 - 89,5 5,3a 1,1c 1,5 - 66,7 5,2a 1,0c 2,0 - 46,2 4,6b 0,5d 2,5 - 0,0 0,0d 0,0e - 0,5 30,8 4,3bc 1,5b - 1,0 0,0 0,0d 0,0e - 1,5 0,0 0,0d 0,0e - 2,0 0,0 0,0d 0,0e - 2,5 0,0 0,0d 0,0e Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê với p