Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình trích ly tinh dầu củ gừng (zingiber officinale roscoe), xác định thành phần hóa học và khảo sát một số hoạt tính sinh học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN Q TRÌNH TRÍCH LY TINH DẦU CỦ GỪNG (Zingiber oficinale Roscoe), XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC Ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Chun ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS Trịnh Thị Lan Anh Sinh viên thực : Phạm Thị Thủy MSSV: 14111000666 Lớp: 14DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2018 Đồ án tốt nghiệp CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Đồ án tốt nghiệp cơng trình khoa học riêng hướng dẫn TS Trịnh Thị Lan Anh Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình khác TP.HCM, ngày 20 tháng 07 năm 2018 Sinh viên thực Phạm Thị Thủy Phạm Thị Thủy i Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tốt nghiệp trước hết em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến toàn thể Quý Thầy, Cô Viện Khoa học Ứng dụng HUTECH, trường Đại học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh giảng dạy trang bị cho em kiến thức bản, tạo điều kiện thuận lợi để em có hội tiếp cận với mơi trường làm việc thực tế qua thời gian học tập đầy ý nghĩa Đồng thời nhà trường tạo cho em có hội làm việc, cho em bước đời sống thực tế để áp dụng kiến thức mà thầy cô giảng dạy Qua đề tài tốt nghiệp em nhận nhiều điều mẻ bổ ích để giúp ích cho cơng việc sau thân Đặc biệt, em xin gởi đến Trịnh Thị Lan Anh, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em hoàn thành đề tài đồ án tốt nghiệp lời cảm ơn sâu sắc Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Ban Lãnh Đạo, phòng ban Viện Khoa học Ứng dụng, tạo điều kiện thuận lợi cho em tìm hiểu thực tiễn suốt trình làm đề tài phòng thí nghiệm Xin chân thành cảm ơn thầy, cô, anh, chị làm việc khoa Công nghệ sinh học nhiệt tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức chuyên môn, hướng dẫn cho em cách làm việc, ghi công việc rõ ràng cụ thể để thuận lợi cho việc làm việc nhóm báo cáo cơng việc Vì kiến thức thân hạn chế, q trình làm, hồn thiện đề tài em khơng tránh khỏi sai sót, kính mong nhận ý kiến đóng góp từ thầy, cơ, anh, chị Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn Trường Đại Học Công Nghệ TP.HCM, tạo điều kiện giúp em có hội học tập nâng cao kĩ thân Chúc Trường Đại Học Công Nghệ TP.HCM phát triển ngày trở thành nơi tin cậy nhiều sinh viên TP.HCM, ngày 20 tháng 07 năm 2018 Sinh viên thực Phạm Thị Thủy Phạm Thị Thủy ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Phạm Thị Thủy CTCT : Công thức cấu tạo DMSO : Dimethyl sulfoxyde ĐC : Đối chứng E.Coli : Escherichia coli GC : Gas chromatography MS : Mass spectrometry NA : Nutrient Agar NB : Nutrient Broth NXB : Nhà xuất RNA : Ribonucleic Acid SAS : Statistical Analysis Systems TB : Trung bình TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TCVS : Tiêu chuẩn vi sinh TN : Thí nghiệm DPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl CFU : colony-forming unit iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Một số loại củ thuộc họ gừng Hình 1.2 Một số sản phẩn trà gừng đóng gói giới Hình 1.3 Hệ thống chƣng cất lơi nƣớc Hình 1.4 Máy ép tinh dầu Hình 1.5 Hệ thống chƣng cất nƣớc dƣới hỗ trợ vi sóng Hình 1.6 Hệ thống chƣng cất lơi nƣớc Hình 1.7 Những vị trí vi khuẩn bị tác động hợp chất thực vật Hình 1.8 Cấu trúc morphine Hình 1.9 Quinine trích ly từ Cinchona officinalis Hình 1.10 Sơ đồ phân loại saponin (Nguyễn Tấn Thịnh, 2013) Hình 1.11 Staphyllococcus aureus Hình 1.12 Vi khuẩn E.coli Hình 1.13 Vi khuẩn Shigella Hình 1.14 Cấu trúc DPPH (1,1 diphenyl-2-picrylhydrazyl) Hình 1.15 Phản ứng gốc tự DPPH Hình 2.1 Củ gừng (Zingiber officinale Roscoe) Hình 2.4 Nguyên liệu củ gừng (Zingiber officinale Roscoe) dùng để thu nhận tinh dầu Hình 2.5 Nguyên liệu gừng tƣơi sau đƣợc xay ƣớt Hình 2.6 Kích thƣớc nguyên liệu: A Cắt lát; B Cắt sợi; C Xay nhuyễn Hình 2.7 A ) Củ Gừng Việt Nam (trồng Long An); B) Củ Gừng mua Chợ lớn TP HCM Hình 2.8 Gừng nguyên củ đƣợc sau ngày sấy nhiệt độ 45 ± 5oC Hình 2.9 Quy trình đánh giá hoạt lực kháng khuẩn tinh dầu gừng Hình 2.10 Quy trình đánh giá hoạt tính chống oxy hóa tinh dầu gừng Hình 3.1 Đồ thị ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Phạm Thị Thủy iv Đồ án tốt nghiệp Hình 3.2 Đồ thị thể ảnh hƣởng nồng độ muối NaCl đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lơi nƣớc Hình 3.3 Đồ thị thể ảnh hƣởng độ tuổi đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Hình 3.4 Đồ thị thể hàm lƣợng tinh dầu theo nguồn nguyên liệu Hình 3.5 Sự biến thiên hàm lƣợng tinh dầu gừng sau chƣng cất lôi nƣớc vơi thời gian ngâm Hình 3.6 Tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lơi nƣớc Hình 3.7 Kết kháng E.coli O157 tinh dầu gừng mẫu đối chứng dƣơng nồng độ: nguyên chất, 10-1, 10-2 Hình 3.8 Kết kháng Staphylococcus aureus mẫu đối chứng dƣơng nồng độ tinh dầu khác nhau: nguyên chất, 10-1, 10-2 Hình 3.10 Kết kháng Shigella boydii mẫu đối chứng dƣơng nồng độ tinh dầu khác nhau: nguyên chất, 10-1, 10-2 Hình 3.11 Đồ thị độ tƣơng quan nồng độ dung dịch với phần trăm bắt gốc tự tinh dầu gừng Hình 3.12 Phản ứng DPPH với tinh dầu gừng Phản ứng hoạt tính chống oxy hóa: 1) Đối chứng âm DPPH, 2) Đối chứng dƣơng: vitamin C, 3) Tinh dầu mg/ml DPPH, 4) Tinh dầu 0,75 mg/ml DPPH, 5) Tinh dầu 0,5 mg/ml DPPH, 6) Tinh dầu 0,25 mg/ml DPPH, 7) Tinh dầu 0,1 mg/ml DPPH Phạm Thị Thủy v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ muối NaCl đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.3 Ảnh hƣởng tuổi nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.4 Ảnh hƣởng xuất xứ nguồn nguyên liệu (Gừng thu mua từ Chợ lớn TP HCM Gừng Long An) đến hàm lƣợng tinh dầu thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.5 Ảnh hƣởng thời gian ngâm mẫu thời gian chiết đến hàm lƣợng tinh dầu củ gừng phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.6 Ảnh hƣởng việc sấy nguyên liệu đến lƣợng tinh dầu thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.7 Kết định lƣợng tinh dầu gừng Bảng 3.8 Kết xác định tỷ trọng tinh dầu gừng Bảng 3.9 Kết xác định độ hòa tan tinh dầu gừng ethanol Bảng 3.10 Các số hóa học tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.11 Kết phân tích hàm lƣợng tƣơng đối hợp chất mẫu tinh dầu gừng phƣơng pháp GC-MS Bảng 3.12 Kết kháng Escherichia coli O157 tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.13 Kết qủa kháng Staphylococcus aureus tinh dầu gừng thu đƣợc bằng phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bàng 3.14 Kết kháng Shigella boydii tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Bảng 3.15 Kết đo OD mẫu thử DPPH giá trị phần trăm bắt gốc tự Phạm Thị Thủy vi Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC Cam đoan i Lời cảm ơn ii Danh mục chữ viết tắt iii Mở đầu Chương 1: tổng quan tài liệu 1.1 Giới thiệu gừng 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Khái quát họ gừng 1.1.3 Sơ lược chi Gừng (Zingiber) 1.1.4 Nguồn gốc củ gừng 15 1.1.5 Đặc điểm thực vật 15 1.1.6 Thành phần hóa học 15 1.1.7 Công dụng gừng 17 1.2 Giới thiệu tinh dầu 25 1.2.1 Khái niệm tinh dầu 25 1.2.2 Phân bố tinh dầu thiên nhiên 26 1.2.3Q trình tích luỹ tinh dầu 26 1.2.4 Tính chất vật lý tinh dầu 27 1.2.5 Tính chất hóa học tinh dầu 28 1.2.6 Ảnh hưởng nhân tố khác đến thành phần tính chất tinh dầu gừng 28 1.2.7 Ứng dụng tinh dầu gừng 29 1.2.8 Nguyên tắc sản xuất tinh dầu từ nguyên liệu thiên nhiên 30 1.2.9 Nguyên tắc trích ly tinh dầu 30 1.2.10 Các phương pháp trích ly tinh dầu 30 1.3 Giới thiệu phương pháp chưng cất lôi nước 35 1.4 Khả kháng khuẩn chế kháng khuẩn hợp chất kháng khuẩn có nguồn gốc thực vật 37 1.4.1 Khái niệm 37 1.4.2 Các chế kháng khuẩn 37 Phạm Thị Thủy i Đồ án tốt nghiệp 1.4.3 Một số nhóm hợp chất alkaloid thực vật 38 1.5 Giới thiệu chủng vi khuẩn gây bệnh 44 1.5.1 Staphyllococcus aureus 44 1.5.2 Escherichia coli (E.coli) 46 1.5.3 Shigella 47 1.6 Hoạt tính kháng oxy hóa 51 1.6.1 Khái niệm gốc tự 51 1.6.2 Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa 52 Chương 2: vật liệu phương pháp 56 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đề tài 56 2.2 Vật liệu 56 2.3 Phương pháp nghiên cứu 58 2.3.1 Tiến hành trích ly tinh dầu khảo sát yếu tố ảnh hưởng 60 2.3.2 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 62 2.3.3 Xác định số hóa học vật lý tinh dầu gừng 65 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt lực kháng khuẩn 70 2.3.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống oxy DPPH 72 2.4 Thống kê xử lý số liệu 74 Chương 3: kết thảo luận 75 3.1 Ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng tinh dầu gừng thu biện pháp chưng cất lôi nước 75 3.1.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu (cắt lát, cắt sợi, xay nhuyễn) đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước 75 3.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát nồng độ muối NaCl đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước 76 3.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát tính ảnh hưởng tuổi nguyên liệu (củ non, củ bánh tẻ, củ già) đến hàm lượng tinh dầu củ gừng thu băng phương pháp chưng cât lôi nước 78 Phạm Thị Thủy ii Đồ án tốt nghiệp 3.1.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nguồn nguyên (thu mua từ chợ siêu thị) liệu đến hàm lượng tinh dầu thu hồi 80 3.1.5 Khảo sát ảnh hưởng thời gian ngâm thời gian chưng đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 81 3.1.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát lượng tinh dầu sau sấy nguyên liệu gừng phương pháp chưng cất lôi nước 83 3.2 Xác định số vật lý hóa học tinh dầu gừng 85 3.2.1 Đánh giá cảm quan 85 3.2.2 Định lượng tinh dầu gừng 85 3.2.3 Các số hóa học tinh dầu gừng 87 3.3 Kết xác định thành phần hóa học tinh dầu gừng 88 3.4 Thử hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu gưng hu phương pháp chưng cất lôi nước 90 3.4.1 Hoạt tính kháng Escherichia coli tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 90 3.4.2 Hoạt tính kháng Staphylococcus aureus tinh dầu gừng thu bằng phương pháp chưng cất lôi nước 93 3.4.3 Hoạt tính kháng Shigella boydii tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 95 3.5 Thử hoạt tính chống oxy hóa tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 97 Chương 4: kết luận kiến nghị 101 4.1 Kết luận 101 4.2 Kiến nghị 102 Tài liệu tham khảo 103 Phụ lục Phụ lục 1: Thành phần chất môi trường cách pha số dung dịch thử Phụ lục 2: Xử lý thống kê ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Phụ lục 3: Xử lý thông kê kết mức độ kháng khuẩn tinh dầu gừng nhóm vi sinh vật thị Phạm Thị Thủy iii Đồ án tốt nghiệp dầu gừng kháng mạnh vi khuẩn Shigella boydii kháng yêu vi khuẩn Staphylococcus aureus Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cho thấy tinh dầu gừng có khả chống oxy hóa tương đối cao, kết IC50 thu 273µg/ml 4.2 Kiến nghị Vì điều kiện thời gian, chí phí khơng cho phép nên đề tài xây dựng quy trình trích ly tinh dầu với điều kiện thích hợp thử hoạt tính kháng khuẩn hoạt tính chống oxy hóa Vì có điều kiện cần tiếp tục nghiên cứu tinh dầu gừng ứng dụng vào sản xuất để tăng nguồn lợi cho người nông dân nước nhà - Cần khảo sát thêm vùng cung cấp nguyên liệu - Cần khảo sát thêm thiêt bị trích ly tinh dầu gừng để đạt hiệu cao - Khảo sát khả kháng tế bào ung thư - Khảo sát việc ứng dụng tinh dầu gừng vào dược phẩm mỹ phẩm thực phẩm - Cần nghiên cứu theo hướng mở rộng để xác định thành phần chất có thân rễ hoa gừng loại họ với gừng Từ so sánh thành phần chất có tác dụng dược lý có hàm lượng cao để tiếp tục nghiên cứu hoạt tính sinh học phục vụ cho y học Phạm Thị Thủy 102 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Tống Thị Ngọc Ánh Nguyễn Văn Kiên, trường đại học Cần Thơ (2011) “Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chưng cất tinh dầu gừng” Tạp chí khoa học 19b:62-69 [2] Nguyễn Quốc Bình (2009) Tuyển tập báo cáo Hội nghị Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ 3, 22/10/2009 - Viên ST&TNSV - Viện KH&CN Việt Nam [3] Nguyễn Thanh Huệ, Nguyễn Thị Bích Tuyển, Nguyễn Tấn Hồng Sơn, Trịnh Minh Khang Năm (2012) Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu gừng (Zingiber officinale Roscoe.) tinh dầu tiêu (Piper nigrum L.), trang 139-143 [4] Hồ Thị Nguyệt Linh Lê Văn Mười nghiên cứu công bố “Khảo sát thành phần hóa hoc tinh dầu củ gừng (Zingiber officinale Roscoe) trồng thành phố Bạc Liêu”, Tạp chí khoa học số 17, tháng năm 2015, trang 16-19 [5] Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốcViệt Nam Nhà Xuất Y học, trang 366-369 [6] Nguyễn Ngọc Hạnh 2002 Tách chiết cô lập hợp chất tự nhiên Giáo trình Cao học, Trường Đại học Cần Thơ [7] Phan Quốc Kinh (2007) Giáo trình Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học Nhà Xuất Giáo dục Việt Nam [8] Võ Thị Bạch Huệ, Đặng, Văn Hoài, Phan, Văn Hồ Nam (2010) So sánh thành phần tinh dầu gừng dại gừng trâu thuộc chi Zingiber, họ Gừng (Gingiberaceae) phương pháp GC-MS” Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 14 1, tr 16-21 [9] Lê Thị Tú Anh “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi mít đen artocarpus nigrifolius c.y.wu”, Hà Nội, 2012 [10] Huỳnh Kim Diệu (2012) Sự chủng tính kháng khuẩn gừng (Zingiber officinale Roscoe) nghệ (Curcuma longa L.) Đại học Cần Thơ Phạm Thị Thủy 103 Đồ án tốt nghiệp [11] Nguyễn Thị Hằng, Nguyễn Thị Thanh Tâm, Mai Hữu Phương (2016) Khả bắt gốc tự DPPH lực khử nam sâm bò Cần Giờ, TP Hồ Chí Minh Tạp chí khoa học Đại học Sư Phạm TP HCM, số 12(90) [12] Nguyễn Thị Hà Duyên (2011) Nghiên cứu thành phần tinh dầu nhựa dầu gừng (gingiber officinale rosc.), họ gừng (zingiberaceae)” Luận văn tốt nghiệp Dược sĩ Trường Đại học Dược Hà Nội [13] Nguyễn Đức Vượng, Phạm Nam Giang, Dương Thị Mai, Đoàn Thị Việt Hà (2016) Nghiên sản xuất dầu gừng tinh dầu gừng từ củ gừng Tạp chí thơng tin khoa học cơng nghệ tỉnh Quảng Bình số 3:42-44 [14] Trịnh Đình Chính, Hồng Triệu Hùng, Nguyễn Thị Hồng Anh (2007) bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học Gừng dại (Zingiber cassumunar Roxb) tỉnh Kon Tum, tạp chí Dược liệu, tập 12, số 3+4:8991 [15] Tôn Nữ Minh Nguyệt (2010) Chất kháng khuẩn thực vật Trường đại học Bách khoa TP HCM [16] Nguyễn Kim Phi Phụng (2000) Các phương pháp nhận danh trích ly lập chất hữu Trường đại học Khoa học tự nhiên [17] Nguyễn Kim Phi Phụng (2001) Các phương pháp nhận danh trích ly lập chất hữu Trường đại học Khoa học tự nhiên [18] Lê Ngọc Thạch (2003) Tinh dầu NXB Đại học Quốc gia Tp.Hồ Chí Minh [19] Nguyễn Quốc Châu Thanh (2013) “Ly trích khảo sát thành phần hóa học tinh dầu xả chanh”, Đại học Cần Thơ [20] Nguyễn Tiến Thắng (2012) Công nghệ sản xuất sinh phẩm Bộ giáo dục đào tạo Trường đại học Công nghệ TP HCM [21] Trần Linh Phước (2010) Phương pháp phân tích Vi sinh vật nước, thực phẩm, mỹ phẩm” NXB Giáo dục Hà Nội [22] Tiêu chuẩn Việt Nam 189:1993 Tinh dầu phương pháp thử Năm ban hành 1993-09-07, 430/QĐ-TĐC Phạm Thị Thủy 104 Đồ án tốt nghiệp Tài liệu tiếng Anh [23] Stoilova, I., Krastanov, A., Stoyanova, A., Denev, P & Gargova, S (2007) Antioxidant activity of ginger extract (Zingiber officinale) J of Food Chem., 102, 764-770 [24] Wojciech Koch (2017) Application of Chromatographic and Spectroscopic Methods towards the Quality Assessment of Ginger (Zingiber officinale) Rhizomes from Ecological Plantations [25] Abdul A.B.H (2008) Anticancer activity of natural compound zerumbone extracted from Zingiber zerumbet in Human Hela cervical cancer cells International Journal of Pharmacology, 4; pp160-168 [26] Dung.N.X., Chinh.T.D., Piet A.Leclereq (1995), Chemical investigation of the acrial part of Zingiber zerumbet (L) Sm From Vietnam [27] Masuda.T., Jitoe.A., Kato.S., Nakatani.N (1991) Acetylated flavonol glycosides from Zingiber zerumbet Phytochemsitry, 30:2391-1392 [28] Hiserodt R.D., Franzblau S.G., Rosen R.T (1998) Isolation of 6-, 8-, and 10gingerol from ginger rhizome by HPLC and preliminary evaluation of inhibition of Mycobacterium a_ium and Mycobacterium tuberculosis, Journal of Agricultural and Food Chemistry 46, 2504-2508 [29] Masada Y, Inoue T, Hashimoto K, Fujioka M, Shiraki K (1973) Studies on the pungent principles of Ginger by GC-MS Vakugaki Zasshi, 93, 318-321 [30] Ali, B.H., Blunden, G., Tanira, M.O and Nemmar, A (2008) Some phytochemical, pharmacological and toxicological properties of ginger (Zingiber officinale Roscoe): A review of recent research” Food Chemistry and Toxicology [31] Ahmed Hassan El-ghorab (1010) A Comparative Study on Chemical Composition and Antioxidant Activity of Ginger (Zingiber officinale) and Cumin (Cuminum cyminum)” Food Chem 58: 8231-8237 Phạm Thị Thủy 105 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần chất môi trƣờng cách pha số dung dịch thử - Dung dịch chuẩn độ KOH 0,1 N Cân khoảng 0,56 g KOH rắn, hòa tan 100 ml ethanol 96o, ta dung dịch KOH cồn nồng độ khoảng 0,1 N - Mơi trường tăng sinh NB Cân xác g mơi trường Peptone, g mơi trường Beef extract (có thể thay g môi trường Meat extract), 15 g muối NaCl Hòa 23 g mơi trường Nutrient Broth 1000 ml nước cất vô trùng Đun sôi, khuấy khử trùng nồi hấp 121°C 15 phút PH cuối 7,0 ± 0,2 - Môi truờng cấy kháng khuẩn NA Cân xác g mơi trường Peptone, g mơi trường Beef extract (có thể thay g môi trường Meat extract), 15 g muối NaCl 15 g Agar Hòa 38 g môi trường Nutrient Agar 1000 ml nước cất vô trùng Đun sôi, khuấy khử trùng nồi hấp 121°C 15 phút, pH cuối 7,0 ± 0,2 Phụ lục 2: Xử lý thống kê ảnh hƣởng yếu tố đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Xử lý thống kê ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.08162600 0.04081300 275.14 F NT 0.08162600 0.04081300 275.14 F Model 0.05755440 0.01438860 3996.83 F NT 0.05755440 0.01438860 3996.83 F Model 0.13900289 0.06950144 7189.80 F NT 0.13900289 0.06950144 7189.80 F 0.00849761 0.00849761 13632.5 F NT 0.00849761 0.00849761 13632.5 F Model 0.01211373 0.00302843 14.93 0.0003 Error 10 0.00202800 0.00020280 Corrected Total 14 0.01414173 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.856595 2.704632 0.014241 0.526533 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F NT 0.01211373 0.00302843 14.93 0.0003 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.000203 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.0259 t Grouping Mean N NT A 0.72500 E3 B 0.67500 E2 B B 0.66667 E1 B B 0.65833 E4 C 0.650000 E0 Thí nghiệm 6: Ảnh hƣởng việc sấy nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Source Model Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.04454817 0.04454817 3818.41 F Phạm Thị Thủy DF Đồ án tốt nghiệp NT 0.04454817 0.04454817 3818.41 F Model 463.5245856 115.8811464 184897 F NT 463.5245856 115.8811464 184897 F Model 879.4911704 219.8727926 621227 F NT 879.4911704 219.8727926 621227 F Model 803.6184197 200.9046049 633.99 F NT 803.6184197 200.9046049 633.99 F 10434.02133 1304.25267 Infty F 2600.24365 2600.24365 Infty