15.17 XÁC ĐỊNH HIỆU GIÁ HUYẾT THANH KHÁNG DẠI Hiệu giá huyết kháng dại xác định dựa nguyên lý phản ứng trung hòa in vivo liều cố định virus dại thử thách với độ pha loãng khác huyết kháng dại Xác định hiệu giá virus thử thách Chủng virus dại thử thách dùng thử nghiệm xác định hiệu giá huyết kháng dại chủng CVS (Challenge virus strain), giữ dạng hỗn dịch 20% não, bảo quản -70 OC Làm tan băng nhanh ống đựng chủng virus dại thử thách vòi nước chảy Pha loãng bậc 10 với dung dịch huyết ngựa thường 2% (đã bất hoạt 30 phút 56 OC) để có nồng độ từ 2x10-2, 2x10-3 đến 2x10-9 Trong dãy ống nghiệm, cho vào ống: 0,5 ml hỗn dịch virus độ pha loãng, từ 2x10-4 đến 2x10-9 0,5 ml dung dịch huyết ngựa thường 20% Lắc ống, để yên 37 OC 90 phút Tiêm 0,03 ml vào não chuột nhắt, dùng chuột có trọng lượng 14-16 g/con cho độ pha Các ống chủng giữ nước đá suốt trình tiêm Theo dõi ghi chép số chuột bị chết từ ngày thứ đến ngày thứ 20 sau tiêm Tính LD50 theo Spearman - Kaber Xác định hiệu giá huyết kháng dại Pha loãng huyết kháng dại chuẩn quốc tế, huyết kháng dại thử nghiệm trung hoà với virut thử thách: Pha huyết kháng dại chuẩn quốc tế với nước muối sinh lý để có dung dịch huyết kháng dại chuẩn chứa 10 đơn vị quốc tế (IU)/ml Pha huyết kháng dại thử nghiệm với nước muối sinh lý để có dung dịch huyết kháng dại thử nghiệm chứa khoảng 10 IU/ml Pha loãng bậc hai dung dịch với dung dịch huyết ngựa thường 2% để có độ pha 1/5; 1/25; 1/125; 1/625 1/3125 Pha hỗn dịch virus thử thách biết hiệu giá để có 200 LD50/0,03ml Trong dãy ống nghiệm, cho vào ống : 0,5 ml huyết kháng dại độ pha loãng 0,5 ml hỗn dịch virus thử thách có chứa 200 LD50/0,03ml Lắc ống nghiệm để yên 37 0C 90 phút Giữ ống nước đá suốt trình tiêm Tiêm 0,03 ml vào não chuột nhắt, dùng chuột có trọng lượng 14-16g cho độ pha kháng huyết Theo dõi ghi chép số chuột bị chết từ ngày thứ đến ngày thứ 20 sau tiêm Xác định số LD50 chủng virus dại thử nghiệm (nhóm chứng): Từ hỗn dịch virus pha để trung hồ có chứa 200 LD 50/0,03 ml nêu trên, xem 10 để từ pha lỗng bậc 10 thành độ pha 10-1; 10-2 10-3 Trong dãy ống nghiệm, cho vào ống : 0,5 ml hỗn dịch virus từ độ pha 0,5 ml dung dịch huyết ngựa thường 20% Lắc ống nghiệm để yên 370C 90 phút Giữ ống nước đá Tiêm 0,03 ml vào não chuột nhắt, dùng chuột có trọng lượng 14-16g cho độ pha hỗn dịch virus dại Theo dõi ghi chép số chuột bị chết từ ngày thứ đến ngày thứ 20 sau tiêm Tính LD50 theo bảng Spearman - Kaber Tính kết Thử nghiệm có giá trị số LD 50 để trung hoà huyết kháng dại 100-300 LD 50 0,03 ml Tính ED50 huyết kháng dại theo phương pháp Spearman - Kaber Hiệu giá huyết kháng dại tính đơn vị quốc tế ml bằng: Anti log (ED50 HT chuẩn qt : ED50 HT thử nghiệm) x x N Trong đó: 2: Số IU có ml huyết kháng dại chuẩn quốc tế dùng thử nghiệm N: Số lần pha loãng huyết kháng dại thử nghiệm