Kỹ thuật pha thuốc nhuộm giemsa nhuộm tiêu máu tìm ký sinh trùng sốt rét CHUẨN BỊ PHƯƠNG TIỆN 1.1 Dụng cụ: - Ống đong loại 10ml, 20ml - Pipet nhỏ giọt - Đũa thuỷ tinh - Giá nhuộm, giá cắm, dụng cụ nhuộm - Đồng hồ 1.2 Hoá chất: - Thuốc nhuộm giemsa mẹ - Dung dịch đệm nước cất - Giấy thử pH,máy đo pH - Các dung dịch điều chỉnh pH : NaH2PO4 2%, KH2PO4 2% - Cồn tuyệt đối Cách pha dung dịch đệm (phosphat buffer solution): - KH2PO4: 0,7g - NaH2PO4: 1,0g Cân loại muối trên, loại vào cốc chứa 150ml nước cất, dùng đũa thuỷ tinh khuấy cho tan hết Đổ loại vào ống đong cho thêm nước cất cho đủ 1000ml Khuấy đều, kiểm tra điều chỉnh pH 7,2 Cách pha dung dịch giemsa nhuộm: Nhuộm thường quy: dung dịch giemsa 3- 4%: Pha 9,7 ml dung dịch đệm với 0,3ml giemsa mẹ, nhuộm để 30- 45 phút Nhuộm nhanh: dung dịch giemsa 10%: Pha 9ml dung dịch đệm với 1ml giemsa mẹ Khi nhuộm để 15- 20 phút QUY TRÌNH KỸ THUẬT - Cố định tiêu giọt đàn cách tay trái cầm tiêu nghiêng 30o, tay phải cầm pipet nhỏ 3- giọt cồn tuyệt đối lên phần đầu tiêu máu Dùng pipet gạt ngang cho cồn tràn phủ khắp diện tích máu, vừa gạt vừa nghiêng tiêu cho cồn chảy hết đuôi tiêu máu Cắm tiêu lên giá cho khô - Đối với tiêu giọt đặc dày bị bẩn, mốc phải dung giải cách nhỏ nước cất dung dịch giemsa 1% kín giọt máu, quan sát tới màu hồng máu trôi đi, để lại tiêu giọt máu màu vàng nhạt - Pha dung dịch giemsa, tính lượng giemsa cho vừa đủ để nhuộm - Xếp tiêu lên giá, nhỏ giọt dung dịch thuốc nhuộm phủ kín diện tích máu, để thời gian với quy định - Rửa tiêu vòi nước chảy nhẹ, khơng đổ thuốc nhuộm trước, khơng để nước xối trực tiếp vào giọt máu, để tiêu khơ tự nhiên( muốn khơ nhanh dùng quạt khơng dùng nhiệt độ) - Soi kính hiển vi vật kính 100x, trả lời kết ký sinh trùng sốt rét nhận xét tiêu nhuộm 3 LƯU Ý KHI RỬA TIÊU BẢN: - Không nên đổ thuốc nhuộm trước nhỏ nước rửa, thuốc nhuộm bám lại lên bề mặt lam máu - Tránh rửa tiêu giọt đặc vòi nước chảy làm bong giọt máu NHẬN XÉT TIÊU BẢN NHUỘM TỐT: Một tiêu nhuộm tốt xem kính hiển vi thấy sau: - Tiêu sạch, không cặn, không bụi, không bị trôi - Hồng cầu bắt màu xanh tím xanh da trời, có màu hồng nhạt Nếu có hồng cầu bị nhiễm KST sốt rét, thấy hững hạt sắc tố hạt đặc hiệu - Bạch cầu đơn nhân có màu xanh tím - Tế bào chất bạch cầu lympho có màu xanh lơ nhạt - Bạch cầu đa nhân trung tính có hạt to nhỏ khơng màu xanh lơ tới đỏ KST sốt rét có hình thể rõ ràng: nhân bắt màu đỏ sẫm đỏ tía, nguyên sinh chất màu xanh lơ, hạt sắc tố màu tím sẫm nâu đen ánh vàng BẢO QUẢN TIÊU BẢN: Tiêu muốn lưu lại lâu dài cần bảo quản tôt Khi soi xong phải lau dầu tiêu cách úp tiêu lên giấy thấm để loại bớt dầu, sau nhỏ 1-2giọt xylen lên phía giọt máu dùng vải mềm mỏng sạh lau nhẹ cho Tiêu để chỗ khơng có ánh sáng, tốt để hộp gỗ Giemsa nhuộm Nguyên tắc kết Reiter nhuộm nhuộm giống Tuy nhiên, pháp luật hạt nhân ký sinh trùng màu cấu trúc tốt cho thấy rõ ràng hơn, hạt tế bào chất trung tính tơ màu Đưa vào tài khoản theo chiều dài hai, nhuộm phức tạp Cụ thể để pha loãng dung dịch Giemsa thay đệm, theo Reiter nhuộm 10min thuốc nhuộm., Hoặc với Reiter nhuộm màu, sau pha lỗng Giemsa màu Giemsa nhuộm Giemsa (Giemsa) nhuộm Giemsa nhuộm thành phần eosin xanh Nguyên tắc kết Reiter nhuộm nhuộm giống Bạch cầu toan protein kiềm hạt, kết hợp với axit thuốc nhuộm eosin, nhuộm màu hồng, gọi bạch cầu toan vật chất, protein hạt nhân tế bào chất tế bào lympho có tính axit thuốc nhuộm màu xanh methylen kết hợp xanh thuốc nhuộm màu tím màu xanh chất basophilic; hạt trung hòa nhà nước đẳng điện eosin vẻ đẹp kết hợp với màu xanh, nhuộm màu hoa cà, gọi chất trung tính PH có số ảnh hưởng đến tế bào nhuộm màu Các tế bào thành phần khác protein, điện lưỡng tính dựa protein, tính phí với giải pháp VN được, mơi trường có tính axit việc tăng phí, dễ dàng để kết hợp eosin, màu đỏ, mơi trường phần ba năm tăng điện tích âm, dễ dàng để kết hợp vẻ đẹp màu xanh xanh, nhuộm màu xanh Vì vậy, nhuộm nhạy cảm với nồng độ ion hydro, nhuộm mảnh phong nha phải làm sạch, không ô nhiễm axit Xu công thức đặc biệt chất lỏng phải sử dụng methanol cao chất lượng, pha loãng với số đệm nhuộm, nước rửa phải gần trung tính, dẫn đến loạt tế bào phản ứng nhuộm màu bất thường, để xác định khó khăn, chí gây lỗi Chung điều hành kỹ thuật chuẩn bị xét nghiệm máu, nhuộm tế bào, kính hiển vi, chẩn đoán bệnh máu; nhuộm xấu Nguyên tắc kết nhuộm với Reiter nhuộm giống Nhưng điều pháp luật hạt nhân ký sinh trùng màu cấu trúc tốt cho rõ ràng hơn, hạt trung hòa tế bào chất màu người nghèo Đưa vào tài khoản theo chiều dài hai, nhuộm phức tạp Giải pháp Giemsa thay đệm pha loãng, thuốc nhuộm nhuộm Reiter 10 phút Đầu tiên với Reiter nhuộm nhuộm, sau pha lỗng Giemsa màu [1] Reiter nhuộm Reiter (Wright) nhuộm, thuốc nhuộm axit; eosin; thuốc nhuộm bản; xanh methylene, hấp phụ, PH tế bào màu; methanol, Jim (Giemsa) nhuộm sử dụng chất làm mềm mùa xn có chứa nhựa thơng Axit béo giàu vitamin, sử dụng để tăng tốc độ lưu thơng máu da, kích thích tiết tế bào khuôn mặt, cải thiện mơi trường sinh lý da, giảm thiệt hại khí hậu cho da (1) Reiter thuốc nhuộm thuốc nhuộm axit thuốc nhuộm eosin xanh methylene thành phần thuốc nhuộm composite Methylen thuốc nhuộm màu xanh tetramethyl thionine có o-quinone quinone loại hai cấu trúc Thường clorua, methylene chloride màu xanh, tức Dễ dàng bị oxy hóa thành màu xanh, hai, ba methyl thionine thuốc nhuộm thứ khác Màu xanh methylen thương mại oxy hóa phần để Azure Yihong thường muối natri Cụ thể eosin Iraq trộn để tạo dung dịch keo lyophobic eosin xanh methylene mưa trung lập, tức Reiter thuốc nhuộm (2) tế bào nhuộm màu hấp phụ vật lý, mà mối quan hệ hóa học thành phần tế bào khác khác hóa học, mối quan hệ thuốc nhuộm khác không giống Như vậy, giải pháp thuốc nhuộm sau nhuộm máu bảng cùng, bạn thấy loạt màu sắc, chẳng hạn hemoglobin, hạt protein bạch cầu toan, axit thuốc nhuộm eosin kết quả, thuốc nhuộm màu hồng, gọi bạch cầu toan chất, protein hạt nhân tế bào chất tế bào lympho có tính axit thuốc nhuộm methylene kết hợp màu xanh xanh thuốc nhuộm màu tím màu xanh, gọi chất basophilic; hạt trung hòa trạng thái đẳng điện eosin màu xanh vẻ đẹp kết hợp, nhuộm màu hoa cà, gọi chất trung tính (3) tác động PH nhuộm tế bào Thành phần khác tế bào không protein, giải pháp điện lưỡng tính dựa protein với phụ trách PH có thể, mơi trường axit gia tăng phí, dễ dàng kết hợp với eosin, màu đỏ, môi trường ba thiên vị tiêu cực tăng phí, dễ dàng kết hợp với xanh methylene xanh, nhuộm màu xanh Vì vậy, tế bào nhuộm màu nhạy cảm với nồng độ ion hydro, nhuộm mảnh phải sạch, không ô nhiễm axit Xu công thức đặc biệt với giải pháp methanol có chất lượng cao phải pha loãng nhuộm đệm phải sử dụng, rửa nước tự nhiên gần trung tính, dẫn đến loạt tế bào bất thường nhuộm phản ứng, kết xác định khó khăn, chí gây lỗi Thuốc nhuộm kiềm tươi chuẩn bị phải lưu trữ nhiệt độ phòng 37 ℃ thời gian định, thuốc nhuộm trưởng thành, chủ yếu màu xanh chuyển thành xanh B trước sử dụng, thời gian lưu trữ, nhuộm hiệu Máy kế toán Gilliland khác sử dụng tỷ lệ hấp thụ thuốc nhuộm đặc biệt thông số kỹ thuật chất lượng Xu rA đo sau: Hãy Reiter nhuộm 15-25μl (xác định nồng độ thuốc nhuộm), thêm methanol 10ml pha loãng với methanol hợp rỗng ống gấp, bước sóng 650nm 25nm tương ứng màu Ra = a650/a525 Bởi nhà lãnh đạo Hoa Kỳ đội cho đỉnh hấp thụ màu xanh 650nm, Yihong hấp thụ đỉnh bước sóng 525nm; Đỉnh B xanh mà cho độ hấp thụ 650nm A khoảng nửa màu xanh methylen Vì vậy, nhuộm rA với gần 2, với trình oxy hóa xanh methylene xanh B, RA giảm tương ứng RA giảm đến 1,3 ± 0,1 sẵn sàng để sử dụng Reiter thuốc nhuộm trình lưu trữ, phải niêm phong để ngăn chặn bốc q trình oxy hóa methanol acid formic Một số người lập luận công thức cách thêm glycerin 30ml, để ngăn chặn bốc methanol, nhuộm đồng liên quan rõ ràng Methanol phải tinh khiết, methanol, acetone nội dung lớn, thuốc nhuộm axit, màu bạch cầu [1] Máu bôi nhọ Chuẩn bị xét nghiệm máu nhuộm màu kính hiển vi lam máu phương pháp tế bào máu, ứng dụng lâm sàng rộng, đặc biệt cho việc chẩn đoán bệnh máu khác có giá trị lớn, ứng dụng phân tích tế bào máu mở rộng , xét nghiệm máu quan sát kết phương pháp đơn giản để đánh giá máy Hơn 10 cao Trạm quan sát lĩnh vực xét nghiệm lam máu ước tính sơ số lượng tế bào bạch cầu tiểu cầu số tế bào theo thứ tự kết tài liệu tham khảo kiểm sốt chất lượng cơng cụ phân tích Nhưng tồn đọng chuẩn bị bơi nhọ người nghèo nhuộm, tế bào thường làm cho khó khăn để xác định, chí dẫn đến kết luận sai Ví dụ, tế bào máu chồng chéo lên phim thu nhỏ dày, phim máu mỏng tập trung vào phân bố không đồng tế bào bạch cầu cạnh; vết phản ứng có tính axit kiềm gây nhuộm tế bào bất thường Do đó, độ dày chuẩn bị phù hợp, phân phối, bôi nhọ kiểm tra tốt máu huyết màu cải cách quan trọng công nghệ Các cấu trúc bên tế bào quan sát cho tóc, xác định tế bào khác thay đổi bất thường máu dòng màu bơi nhọ phải nhạo báng Nhiều phương pháp nhuộm lam máu chủ yếu Roche nhuộm tiến hóa đến Reiter chung nhuộm [1] ... tạp Cụ thể để pha lỗng dung dịch Giemsa thay đệm, theo Reiter nhuộm 10min thuốc nhuộm. , Hoặc với Reiter nhuộm màu, sau pha lỗng Giemsa màu Giemsa nhuộm Giemsa (Giemsa) nhuộm Giemsa nhuộm thành... hai, nhuộm phức tạp Giải pháp Giemsa thay đệm pha loãng, thuốc nhuộm nhuộm Reiter 10 phút Đầu tiên với Reiter nhuộm nhuộm, sau pha lỗng Giemsa màu [1] Reiter nhuộm Reiter (Wright) nhuộm, thuốc nhuộm. .. RỬA TIÊU BẢN: - Không nên đổ thuốc nhuộm trước nhỏ nước rửa, thuốc nhuộm bám lại lên bề mặt lam máu - Tránh rửa tiêu giọt đặc vòi nước chảy làm bong giọt máu NHẬN XÉT TIÊU BẢN NHUỘM TỐT: Một tiêu