NGHIÊN cứu đặc điểm lâm SÀNG, cận lâm SÀNG THEO căn NGUYÊN VI KHUẨN gây VIÊM PHỔI ở TRẺ EM dưới 5 TUỔI tại BỆNH VIỆN NHI THÁI BÌNH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI  ĐẶNG THỊ THÙY DƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG THEO CĂN NGUYÊN VI KHUẨN GÂY VIÊM PHỔI Ở TRẺ EM DƯỚI TUỔI TẠI BỆNH VIỆN NHI THÁI BÌNH ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Hà Nội - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI  ĐẶNG THỊ THÙY DƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG THEO CĂN NGUYÊN VI KHUẨN GÂY VIÊM PHỔI Ở TRẺ DƯỚI TUỔI TẠI BỆNH VIỆN NHI THÁI BÌNH Chuyên ngành: Nhi khoa Mã số: 60720135 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Yến TS Phí Đức Long Hà Nội - 2017 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BC BVNTB CRP H influenza K pneumonia KS M catarrhalis M pneumonia P.aeruginosa RLLN S mitis S Pneumoniae S.aureus SDD SHH UNICEF Bạch cầu Bệnh viện Nhi Thái Bình C- reactive protein Haemophilus influenzae Klebsiella pneumonia Kháng sinh Moraxella catarrhalis Mycoplasma pneumonia Pseudomonas aeruginosa Rút lõm lồng ngực Streptococcus mitis Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aureus Suy dinh dưỡng Suy hô hấp United Nations Children's Fund VK VP WHO (Quỹ Nhi đồng Liên Hiệp Quốc) Vi khuẩn Viêm phổi World Health Organzation (Tổ chức Y tế Thế giới) MỤC LỤ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN .3 1.1 Đặc điểm máy hô hấp .3 1.1.1 Sự phát triển hệ hô hấp giai đoạn trước sau sinh 1.1.2 Đặc điểm giải phẫu 1.1.3 Đặc điếm sinh lý .5 1.2 Cơ chế bảo vệ máy hô hấp 1.3 Định nghĩa VP trẻ em 1.4 Viêm phổi trẻ em vi khuẩn .7 1.4.1 Cơ cấu chung loài VK gây VP trẻ em [12]: .7 1.4.2 Các chủng VK chủ yếu gây VP trẻ em 1.4.3 Cơ chế bệnh sinh VP VK 11 1.4.4 Chẩn đoán viêm phổi vi khuẩn 13 1.4.5 Điều trị VP 14 1.5 Một số nghiên cứu gần VP VK tính đề kháng KS 15 1.5.1 Các nghiên cứu giới 15 1.5.2 Nghiên cứu Việt Nam .16 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân 19 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân .20 2.2 Phương pháp nghiên cứu .20 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .20 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu: thuận tiện .20 2.3 Thông số nghiên cứu 21 2.3.1 Đặc điểm dịch tễ chung 21 2.3.2 VK tính kháng KS 22 2.3.3 Một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng theo nguyên vi khuẩn gây VP .22 2.4 Tiêu chuẩn đánh giá 22 2.4.1 Lâm sàng .22 2.4.2 Cận lâm sàng 23 2.5 Thu thập xử lý số liệu .24 2.5.1 Thu thập số liệu .24 2.5.2 Xử lý số liệu 24 2.6 Đạo đức nghiên cứu 24 Chương 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đặc điểm chung 26 3.1.1 Phân bố bệnh nhân theo nhóm tuổi .26 3.1.2 Phân bố bệnh nhân theo giới 26 3.2 VK tính kháng KS 27 3.2.1 Tỷ lệ dương tính vi khuẩn gây bệnh .27 3.2.2 Phân bố chủng VK gây bệnh 27 3.2.3 KS đồ VK gây bệnh thường gặp 28 3.3 Nhận xét số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng theo nguyên VK gây VP 31 3.3.1 VK gây bệnh theo nhóm tuổi 31 3.3.2 VK gây bệnh theo giới 31 3.3.3 Tỷ lệ VK theo tiền sử dùng KS trước vào viện .32 3.3.4 Triệu chứng toàn thân theo VK gây bệnh thường gặp 32 3.3.5 Triệu chứng thực thể theo VK gây bệnh thường gặp 33 3.3.6 Tổn thương Xquang theo VK gây bệnh thường gặp .33 3.3.7 Tình trạng viêm theo VK gây bệnh .34 3.3.8 Mức độ viêm phổi theo VK gây bệnh 34 3.3.9 Liên quan VK gây bệnh thời gian nằm viện 34 Chương 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN .35 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 36 DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Y DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Phân bố bệnh nhân theo nhóm tuổi .26 Bảng 3.2 Phân bố chủng VK gây bệnh 27 Bảng 3.3 KS đồ VK Streptococcus pneumonia .28 Bảng 3.4 KS đồ VK Streptococcus mitis .28 Bảng 3.5 KS đồ VK Staphylococcus aureus 29 Bảng 3.6 KS đồ VK Haemophilus influenza 29 Bảng 3.7 KS đồ VK Moraxella catarrhalis 30 Bảng 3.8 KS đồ VK Klebsiella pneumonia 30 Bảng 3.9 VK gây bệnh theo nhóm tuổi 31 Bảng 3.10 Vi khuẩn theo giới .31 Bảng 3.11 Tỷ lệ VK theo tiền sử dùng KS trước vào viện 32 Bảng 3.12 Triệu chứng toàn thân theo VK gây bệnh thường… 32 Bảng 3.13 Triệu chứng thực thể theo VK gây bệnh thường gặp 33 Bảng 3.14 Tổn thương Xquang theo VK gây bệnh thường gặp 33 Bảng 3.15 Tình trạng viêm theo VK gây bệnh .34 Bảng 3.16 Mức độ viêm phổi theo VK gây bệnh 34 Bảng 3.17 Liên quan VK gây bệnh thời gian nằm viện 34 DANH MỤC HÌNH Biểu đồ 3.1 Phân bố bệnh nhân theo giới .26 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ dương tính vi khuẩn gây bệnh 27 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm phổi (VP) bệnh lý thường gặp trẻ em Đặc biệt trẻ nhỏ Bệnh có tỷ lệ mắc nguyên nhân tử vong hàng đầu cho trẻ em Việt Nam toàn giới Theo số liệu Tổ chức Y tế giới (WHO), năm 2015 có 922.000 trẻ tử vong VP Tức là, 35 giây lại có trẻ tử vong [1] Ở Việt Nam, theo thống kê UNICEF năm 2012 tỷ lệ tử vong trẻ em tuổi giảm đáng kể, từ 51 trẻ 1000 ca đẻ sống năm 1990 xuống 23 1000 ca năm 2010 Tuy nhiên, VP nguyên nhân gây tử vong trẻ em, chiếm 12% tổng số tử vong chung tuổi [2] chiếm 75% tử vong bệnh hô hấp [3] Như thách thức lớn nhà lâm sàng nhi khoa Căn nguyên VP trẻ em đa dạng phong phú, bao gồm: virus, vi khuẩn (VK), nấm, ký sinh trùng, tác nhân hóa học hay dị ứng miễn dịch… Hiện nước ta có nhiều nghiên cứu nguyên VK gây VP trẻ em Tuy nhiên nguyên thay đổi theo thời gian, địa dư [4], [5], [6],[7] Hiện việc sử dụng thuốc kháng sinh (KS) rộng rãi không dẫn đến tình trạng kháng KS ngày tăng cao làm xuất nhiều VK kháng thuốc, siêu kháng thuốc với mức độ tốc độ báo động Gánh nặng kháng thuốc ngày tăng chi phí điều trị tăng, ngày điều trị kéo dài, ảnh hưởng đến sức khỏe người bệnh, cộng đồng, phát triển chung xã hội Và tương lai người phải đối mặt với khơng có thuốc để điều trị hiệu bệnh truyền nhiễm khơng có biện pháp can thiệp phù hợp [8] Bệnh viện Nhi Thái Bình bệnh viện tuyến tỉnh có nhiệm vụ khám điều trị chuyên khoa nhi toàn tỉnh vùng lân cận Đối tượng đến khám điều trị Bệnh viện trẻ em 16 tuổi đó, trẻ em tuổi (đối tượng khám chữa bệnh miễn phí theo quy định Nhà nước) chiếm khoảng 90% tổng số bệnh nhi Số bệnh nhân bị viêm phổi điều trị nội trú Bệnh viện năm 2012 2.993 trẻ em, chiếm tỷ lệ 18,75% số bệnh nhân điều trị nội trú Trước đây, việc điều trị VP chủ yếu dựa vào kinh nghiệm bệnh phẩm phải gửi nơi khác để tìm VK Từ cuối năm 2016 bệnh viện Nhi Thái Bình bệnh viện Nhi Trung Ương chuyển giao kỹ thuật nuôi cấy định danh VK gây VP, làm KS đồ Từ đến nay, chưa có nghiên cứu tính kháng kháng sinh vi khuẩn gây viêm phổi Do đó, chúng tơi thực đề tài: “Nghiên cứu đặc diểm lâm sàng, cận lâm sàng theo nguyên vi khuẩn gây viêm phổi trẻ tuổi bệnh viện Nhi Thái Bình” với mục tiêu: Xác định nguyên vi khuẩn gây viêm phổi trẻ tuổi mức độ đề kháng kháng sinh khoa sơ sinh khoa hơ hấp bệnh viện Nhi Thái Bình Nhận xét số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng theo nguyên vi khuẩn Từ kết thu có kiến nghị với bệnh viện để góp phần nâng cao hiệu điều trị sử dụng thuốc phù hợp điều trị VP trẻ em 28 Tang P., Shi W., Zeng H.-L.et al (2016) [Prevalence of Moraxella catarrhalis in the nasopharyngeal specimen from 1 082 hospitalized children with respiratory infection and the drug resistance of the isolates] Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi Chin J Contemp Pediatr, 18(8), 707–712 29 Đào Minh Tuấn cs (2013) Nghiên cứu nguyên gây viêm phổi tính kháng kháng sinh vi khuẩn gây viêm phổi trẻ em từ tháng đến 15 tuổi khoa hô hấp bệnh viện Nhi Trung Ương 2013 Tạp chí y học Việt Nam Tháng 10, 2, 14–20 30 Lê Xuân Ngọc, Lê Công Dần (2013) Một số đặc điểm vi khuẩn dịch tỵ hầu trẻ em viêm phế quản phổi tuổi tai khoa điều tri tự nguyện c bệnh viện Nhi Trung Ương năm 2012 Tạp chí y học thực hành 874, 31 Nguyễn Văn Bàng (2009) Đánh giá kháng kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập từ trẻ em viêm phổi điều tri khoa Nhi bệnh viện Bạch Mai Tạp Chí Nhi Khoa Tập 2, số 3, tr.55-60 32 Đặng Đức Anh, Trần Văn Nam cs (2008) Tỷ lệ mắc bệnh phế cầu trẻ em tuổi nhập viện thành phố Hải Phòng Đề Tài Nghiên Cứu Cấp Bộ- Viện Vệ Sinh Dịch Tễ Trung Ương, tr.30-41 33 WHO (2004) Management of pneumonia in community settings 34 Harris M., Clark J., Coote N et al (2011) British Thoracic Society guidelines for the management of community acquired pneumonia in children: update 2011 Thorax, 66(Suppl 2), ii1-ii23 35 Nguyễn Công Khanh (2008), Huyết học lâm sàng nhi khoa, NXB Y học, tr.203 BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Mã bệnh án Mã lưu trữ ĐT Hành 1.1 Họ tên BN 1.2 Tuổi □< tháng □ từ tháng đến < 12 tháng □ từ 12 tháng đến ≤ 60 tháng 1.3 Giới □ Nam □ Nữ 1.4 Địa chỉ: 1.5 Ngày vào viện…/…./… 1.6 Ngày viện…./…./… 1.7 Số ngày nằm viện… 1.8 Kết điều trị □ Khỏi □ Đỡ □ Tử vong Tiền sử dùng KS trước vào viện Có□ Không□ Đánh giá lâm sàng 3.1 Phân loại suy dinh dưỡng SDD□ SDD nặng□ 3.2 Triệu chứng tồn thân Sốt Có□ Khơng□ Ho Có□ Khơng□ □ Chuyển viện □ Xin Khó thở Có□ Khơng□ Bú Có□ Khơng□ Nơn Có□ Khơng□ Tiêu chảy Có□ Khơng□ 3.3 Triệu chứng thực thể Thở nhanh Có□ Khơng□ RLLN Có□ Khơng□ Khò khè Có□ Khơng□ Ran phổi Có□ Khơng□ Tím Có□ Khơng□ 3.4 Phân loại VP □ VP □ VP nặng □ VP nặng 3.5 Tổn thương Xquang phổi Tổn thương mô kẽ Có□ Khơng□ Tổn thương tập trung Có□ Khơng□ Đậm rốn phổi Có□ Khơng□ Mờ lan tỏa Có□ Khơng□ 3.6 Xét nghiệm BC, CRP BC… CRP… Xét nghiệm VK 4.1 Cấy dịch tỵ hầu dương tính với: □S.pneumoniae □ S.aureus □ S.mitis □ H influenzae □M.catarrhalis □K.pneumoniae □… 4.2 Kết KS đồ STT 10 11 12 13 Tên KS Amoxicillin/A.clavulanic Ampicillin/Sulbactam Ceftazidime Cefotaxime Ceftriaxone Cefepime Imipenem Meropenem Gentamycine Amikacine Levofloxacin Ciprofloxacin Trimethoprime/Sulfamethoxazole Ngày làm bệnh án PHỤ LỤC Nhạy(S) Trung gian Kháng( (I) R) QUY TRÌNH CẤY DỊCH TỴ HẦU DỊCH HÚT-RỬA KHÍ, PHẾ QUẢN QTXN.VS.007.V1.0 Mục đích Mơ tả quy trình cấy dịch tỵ hầu, dịch hút rửa khí phế quản tìm tác nhân vi khuẩn, nấm gây bệnh Phạm vi áp dụng Khoa xét nghiệm Bộ phận vi sinh – Bệnh viện nhi Thái Bình Trách Nhiệm Nhân viên phòng xét nghiệm tn thủ theo quy trình soạn thảo trường hợp có kết bất thường, nhân viên phòng xét nghiệm phải báo cáo cho người định để kiểm tra trả kết Định nghĩa, thuật ngữ từ viết tắt TM: Thạch máu CHO: Thạch chocolate ID ( Identification): Định danh AST ( Antibiotic Susceptibility testing) Kháng sinh đồ Nguyên lý Vùng tỵ hầu có nhiều vi sinh vật sống bình thường bệnh nhân có viêm đường hơ hấp dưới, theo phản xạ ho vi khuẩn bắn lên dính vào vùng tỵ hầu dịch rửa khí phế quản dễ bị nhiễm tạp khuẩn vùng hầu họng lấy bệnh phẩm Sử dụng phương pháp cấy bán định lượng xác định nguyên gây nhiễm trùng đường hô hấp Trang thiết bị cần thiết 6.1 Thiết bị - Tủ ấm thường, tủ âm CO2 - Kính hiển vi 6.2 Vật tư/vật liệu * Dụng cụ: - Que cấy - Tăm mềm đàn hồi tube nhựa vơ trùng có nắp - Giá đựng ống nghiệm, lam kính, đèn cồn… * Mơi trường, sinh phẩm: - Môi trường nuôi cấy: TM, CHO - Bộ thuốc nhuộm Gram * Loại mẫu sử dụng - Đờm: Bệnh nhân xúc miệng nước vơ trùng/nước muối sinh lý.sau bệnh nhân ho để lấy đờm vào lọ vô trùng - Dịch tăm tỵ hầu: Dùng que tăm mềm đàn hồi đưa qua đường mũi vào sâu đoạn nửa độ dài từ cánh mũi tới dái tai bên, xoay tròn từ từ rút tăm Cho tăm bệnh phẩm vào tube vô trùng chuyển khoa xét nghiệm không 30 phút từ lấy bệnh phẩm - Dịch hút tỵ hầu: ống thông mềm gắn vào bơm tiêm vô trùng đưa qua đường mũi sâu đoạn nửa độ dài từ cánh mũi tới dái tai bên, bơm vào 1-2ml NaCl 0.9% vô trùng sau rút dịch cho vào lọ vơ trùng - Dịch hút khí quản: Hút 1-2ml dịch nội quản cho vào lọ vô trùng - Dịch rửa phế quản: Dùng nước muối sinh lý vô trùng bơm rửa phế quản sau hút dịch rửa cho vào lọ vơ trùng - Mẫu bệnh phẩm chuyển tới khoa xét nghiệm vòng kể từ lấy mẫu Kiểm tra chất lượng - Kiểm tra chất lượng môi trường,sinh phẩm,hóa chất: thạch, thẻ định danh, thẻ kháng sinh đồ, khoanh kháng sinh…theo quy trình kiểm tra chất lượng thạch, thẻ định danh, thẻ kháng sinh đồ, khoanh kháng sinh - Chỉ sử dụng loại môi trường kiểm tra chất lượng - Bộ thuốc nhuộm gram hạn sử dụng An tồn - Áp dụng phương pháp an toàn chung xử lý mẫu thực xét nghiệm - Coi mẫu nguồn nhiễm, phân loại rác thải xử lý theo quy định Nội dung thực 9.1 Chuẩn bị Chuẩn bị tất sinh phẩm, hóa chất, trang thiết bị nêu 9.2 Các bước thực Phụ lục 01: sơ đồ cấy dịch tỵ hầu,dịch hút-rửa khí phế quản 9.2.1 Nhuộm Gram - Dùng que cấy vô trùng lấy dịch từ vùng nhày/mủ để nhuộm gram theo quy trình nhuộm Gram ( QTXN.VS.024.V1.0) đánh giá mẫu bệnh phẩm - Quan sát vật kính 10 ( ×100) Nếu có 25 tế bào bạch cầu 10 tế bào biểu mô mẫu đáng tin cậy 9.2.2 Nuôi cấy Ghi mã số bệnh phẩm, tên khoa phòng bệnh nhân đĩa thạch CHO TM * Cấy bệnh phẩm - Cấy phân vùng kiểu góc phần tư đĩa thạch CHO TM; - Nhỏ vài giọt bệnh phẩm lên mặt thạch dùng tăm chứa bệnh phẩm lăn lên mặt thạch với đường kính khoảng 2cm Dùng que cấy vơ trùng cấy qua vùng có bệnh phẩm tạo góc phần tư thứ ( lưu ý đường cấy sau không chùm lên đường cấy trước; - Khi cấy hết góc phần tư thứ quay đĩa thạch để cấy góc phần tư thứ Khoảng đường cấy góc phần tư thứ cắt ngang đường cấy góc phần tư thứ nhất, đường cấy lại khơng cắt góc phần tư thứ nhất; - Thực tiếp với góc phần tư thứ thứ * Ủ ấm Để đĩa CHO TM cấy tủ ấm 35 – 370C/5% CO2 /18-24h * Đọc kết nuôi cấy - Đọc kết nuôi cấy sau 18-24h Tiêu chuẩn Đánh giá Mọc góc phần tư thứ nhất, mọc < 10 khuẩn lạc góc phần tư 1+ thứ Mọc góc phần tư thứ 2, mọc < 10 khuẩn lạc góc phần tư thứ 2+ Mọc góc phần tư thứ 3, mọc < 10 khuẩn lạc góc phần tư thứ 3+ Mọc góc phần tư thứ 4+ - Xác định vi khuẩn gây bệnh dựa vào kết nuôi cấy bán định lượng Loại vi khuẩn Số lượng Quyết định S pyogenes P aeruginosa Nocardia Cryotococcus neoformans Aspegillus, Mucor S pneumoniae H influenzae M catarrhalis N mennigitidis S aureus Enterobacteriaceae Các vi khuẩn không lên men đường: S.maltophilia,cinetobacter,B.cepacia Corynebacterium candida spp Liên cầu nhóm B, C, G Bất kì ID AST Mức độ ( 1+) với khuẩn lạc Mức độ (2+) trở lên chiếm chủ yếu so với vi khuẩn cư trú bình thường ID AST Mức độ(2+) trở lên ID AST - Vi khuẩn thường trú như: staphylococcus coagulase negative, liên cầu viridans, Neiseria không gây bệnh, Enterococci, diphtheroids, Haemophilus ( trừ H.influenza) , moraxella ( trừ M.catarrhalis), vi khuẩn kỵ khí, nấm số lượng - Khi xác định nấm, vi khuẩn gây bệnh định danh theo quy trình định danh máy Vitek 2(QTXN.VS.022.V1.0), làm kháng sinh đồ theo quy trình làm kháng sinh đồ máy Vitek 2(QTXN.VS.023.V1.0) Đặt thêm kháng sinh đồ theo quy trình làm kháng sinh đồ phương pháp Kirbybauer(QTXN.VS.021.V1.0) cần Chú ý: Đĩa thạch ủ tiếp đến 48 trường hợp sau: môi trường nuôi cấy chưa có vi khuẩn mọc khuẩn lạc mọc nhỏ( yếu) 10 Diễn giải báo cáo kết - Nếu sau ngày khơng có vi khuẩn mọc: Trả lời “ Âm Tính” - Nếu sau ngày có vi khuẩn thường trú mọc : trả lời “ khơng có vi khuẩn gây bệnh” - Nếu có vi khuẩn gây bệnh: Trả lời tên vi khuẩn kháng sinh đồ - Nếu yêu cầu tìm nấm : cấy thạch sabouraud để nhiệt độ phòng để ngày theo dõi hàng ngày 11 Lưu ý ( cảnh báo) - Khơng có 12 Lưu trữ hồ sơ - Ghi thông tin bệnh nhân kết vào sổ lưu - Điền đầy đủ thông tin vào biểu mẫu 13 Các tài liệu liên quan Tên tài liệu Mã tài liệu Quy trình nhuộm Gram QTXN.VS.024.V1.0 Quy trình định danh máy Vitek QTXN.VS.022.V1.0 Quy trình làm kháng sinh đồ máy Vitek QTXN.VS.023.V1.0 Quy trình làm kháng sinh đồ theo phương pháp QTXN.VS.021.V1.0 kirby- bauer 14 Tài liệu tham khảo - Nguyễn Vũ Trung ctv (2014 ), Xét nghiệm đờm,dịch hút khí quản qua mũi, dịch hút phế quản qua nội soi tìm vi khuẩn gây bệnh, Vi sinh – Ký sinh trùng lâm sàng, Nhà xuất y học, Hà Nội, tập 2, tr 16-24 - Phạm Hùng Vân (2006 ) Đờm,dịch hút đờm qua mũi, dịch hút rửa phế quản qua nội soi cấy đờm, bệnh phẩm chứa đờm Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng, Nhà xuất y học, Hà nội, tr 67-77 Lynne S.Garcia (2007) Lower respiratory tract Cultures, Clinical Microbiology Procedures Handbook, ASM press, USA, part 3.11.2 PHỤ LỤC QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VÀ LÀM KHÁNG SINH ĐỒ BẰNG MÁY VITEK QTKT.VS.021.V1.0 Mục đích Mơ tả quy trình định danh làm kháng sinh đồ cho vi khuẩn, nấm men máy định danh tự động VITEK 2 Phạm vi áp dụng Khoa xét nghiệm – Bệnh Viện Nhi Thái Bình Trách nhiệm Nhân viên phòng xét nghiệm tn thủ theo quy trình soạn thảo trường hợp có kết bất thường, nhân viên phòng xét nghiệm phải báo cáo cho người định để kiểm tra trả kết Định nghĩa ,thuật ngữ từ viết tắt - ID : Identification - AST : Antibiotic Susceptibility Testing - ESBL : Extended-spectrum beta-lactamases - Thẻ định danh: + GN: Thẻ định danh cho trực khuẩn Gram âm lên men không lên men đường + GP: thẻ định danh cho vi khuẩn Gram dương + NH: Thẻ định danh cho Neisseria, Haemophilus vi khuẩn Gram âm khó mọc khác + YST: Thẻ định danh nấm men + CBC: Thẻ định danh cho Corynebacterium spp + BCL: Thẻ định danh cho trực khuẩn Gram dương có bào tử + Thẻ kháng sinh đồ + AST-YS07: Thẻ kháng sinh đồ cho nấm men + AST-N204: Thẻ kháng sinh đồ cho vi khuẩn Gram âm, có ESBL khơng có colistin + AST-N240: Thẻ kháng sinh đồ cho vi khuẩn Gram âm, khơng có ESBL có colistin + AST-GP67: Thẻ kháng sinh đồ cho tụ cầu, liên cầu đường ruột + AST-P576: Thẻ kháng sinh đồ cho phế cầu + AST-ST01: Thẻ kháng sinh đồ cho phế cầu, liên cầu tan huyết β α + AST-XN06 AST-GN69: Hai thẻ tạo thành cặp có kháng sinh bổ trợ có tygecycline - QC (Quality control): Kiểm tra chất lượng Nguyên lý quy trình - Nguyên lý định danh: dùng phương pháp đo màu để nhận biết tính chất sinh vật hóa học vi sinh vật thông qua thay đổi màu giếng mơi trường có sẵn thẻ - Nguyên lý kháng sinh đồ máy: dựa vào đường cong phát triển vi khuẩn với nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) khác so sánh với liệu data base để xác định MIC vi khuẩn/nấm Trang thiết bị cần thiết 6.1 Thiết bị - Hệ thống máy định danh VITEK - Máy đo độ đục chuẩn DensiChek VITEX - Tủ ấm thường - Tủ ấm CO2 - Kính hiển vi 6.2 Vật tư/vật liệu Dụng cụ: - Pipet 145µl 280µl - Tube plastic vơ trùng cho máy định danh 12cm × 0.75cm - Que cấy nhựa dùng lần - Que cấy vô trùng - Găng tay, giấy thấm… - Giá đựng ống nghiệm, lam kính, đèn cồn… * Mơi trường, sinh phẩm: - Nước muối vô trùng nồng độ 0.45% - Thẻ định danh loại: GN, GP,NH, YST, CBC, BCL - Thẻ kháng sinh đồ loại: AST-N204, AST-N240, AST-GP67, ASTP576, AST-ST01, AST-YS07, AST-GN73, AST-XN06, AST-GN69 - Bộ nhuộm Gram * Loại mẫu sử dụng - Khuẩn lạc cần định danh làm kháng sinh đồ Kiểm tra chất lượng - Kiểm tra chất lượng mơi trường,sinh phẩm,hóa chất: thạch, chai cấy máu, thẻ định danh, thẻ kháng sinh đồ, khoanh kháng sinh…theo quy trình kiểm tra chất lượng thạch, thẻ định danh, thẻ kháng sinh đồ, khoanh kháng sinh - Chỉ dùng loại mơi trường,sinh phẩm,hóa chất đạt chất lượng - Bộ thuốc nhuộm gram hạn sử dụng An toàn - Áp dụng phương pháp an toàn chung xử lý mẫu thực xét nghiệm - Coi mẫu nguồn nhiễm, phân loại rác thải xử lý theo quy định Nội dung thực 9.1 Chuẩn bị - Chuẩn bị tất sinh phẩm, hóa chất, trang thiết bị nêu 9.2 Các bước thực 9.2.1 Mẫu bệnh phẩm khuẩn lạc vi khuẩn/nấm qua đêm( số vi khuẩn khó mọc để 48 -72 giờ) xác định sơ bộ: - Hình thể vi khuẩn: cầu khuẩn, trực khuẩn, cầu trực khuẩn… - Tính chất bắt màu Gram: Gram dương, Gram âm - Màu sắc khuẩn lạc môi trường nuôi cấy: xanh, vàng, kem, sinh sắc tố đen… - Tính chất khác khuẩn lạc: tan hut/khơng tan huyết, lan/không lan môi trường nuôi cấy, khuẩn lạc lõm, nhày, bong… - Các tính chất khác: có bào tử/khơng có bào tử 9.2.2 Chọn thẻ định danh kháng sinh đồ * Tổng hợp thông tin tính chất vi khuẩn, khuẩn lạc vi khuẩn, tính chất mơi trường ni cấy để xác định loại thẻ cho định danh kháng sinh đồ ta chọn sau: Tính chất vi khuẩn Cầu khuẩn Gram dương Cầu khuẩn Gram dương Cầu khuẩn Gram dương Cầu khuẩn Gram dương Trực khuẩn Gram âm/ cầu trực khuẩn Gram âm Trực khuẩn Gram âm/ cầu trực khuẩn Gram âm Tính chất khuẩn lạc Chọn thẻ Khuẩn lạc có sắc tố vàng, tan huyết β thạch máu Catalase âm tính, khuẩn lạc màu kem/trắng, khơng tan huyết/tan huyết thạch máu Khuẩn lạc lõm nhày, tan huyết α thạch máu Tan huyết α/tan huyết β thạch máu GP cho định danh ASTGP67 cho kháng sinh đồ GP cho định danh ASTGP67 cho kháng sinh đồ GP cho định danh thẻ AST-GP576/AST-GPST01 cho kháng sinh đồ GP cho định danh thẻ AST-GPST01 cho kháng sinh đồ GN cho định danh thẻ GN240/GN204/GN73 cho kháng sinh đồ Mọc thạch máu, chocolate, và/ uriselect4, và/ Xylose lysine deoxycholate agar, và/ Macconkey agar Không mọc/mọc yếu NH cho định danh thạch máu mọc kháng sinh đồ làm theo môi trường chocolate, phương pháp Kirby-Bauer khuẩn lạc màu xám/không màu 9.2.3 Ghi thông tin cho cassette - Điền thông tin theo yêu cầu vào thông tin cassette ( BM.01/QTKT.VS.021.V1.0): số cassette, ngày làm xét nghiệm, tên người làm, mã bệnh phẩm, loại thẻ ID AST cho mẫu xét nghiệm… 9.2.4 Chuẩn bị thẻ xét nghiệm Lấy thẻ xét nghiệm ID AST theo yêu cầu ghi thông tin cassette để nhiệt độ phòng khoảng 30 phút trước làm xét nghiệm 9.2.5 Lấy tube vô trùng ( không chạm tay vào miệng tube) - Mỗi bệnh phẩm bao gồm tube ID tube AST - Ghi thông tin tube: mã bệnh phẩm ID/AST 9.2.6 Dùng dispenser hút 3ml nước muối vô trùng 0.45% vào tube - Đầu tiên chuẩn độ đục cho máy chuẩn máy theo hướng dẫn sử dụng máy DENSICHEK PLUS ( TT.01/QTKT.VS.021.V1.0) - Sau chuẩn độ đục “0” cho nước muối sinh lý vô trùng 9.2.7 Tạo huyền dịch vi khuẩn cho tube định danh Sử dụng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc xác định cần định danh và/kháng sinh đồ, nghiền khuẩn lạc lấy lên thành tube ID, trộn đo độ dụcđể đạt độ đục theo quy định cho loại tác nhân: + 0.5 – 0.63 McFarland : vi khuẩn Gram âm vi khuẩn Gram dương + 1.8 – 2.2 McFarland : Nấm men + 3.3 McFarland : vi khuẩn kỵ khí/ Nesseria/ Haemophilus + Lần lượt tạo tube huyền dịch cho tất vi khuẩn cần định danh, tube tương ứng loại khuẩn lạc Lưu ý: với tác nhân định danh không cần tạo huyền dịch cho tube kháng sinh đồ 9.2.8 Tạo huyền dịch vi khuẩn cho tube kháng sinh đồ Tùy thuộc loại vi khuẩn Gram âm hay Gram dương mà sử dụng pipet 145µl hay 280µl - Vi khuẩn Gram dương: chuyển 280 µl huyền dịch từ tube ID sang tube AST - Vi khuẩn Gram âm: chuyển 145 µl huyền dịch từ tube ID sang tube AST 9.2.9 Chuyển tube huyền dịch vi khuẩn cần ID AST vào cassette theo thứ tự thông tin cassette ( BM.01/QTKT.VS.021.V1.0) 9.2.10 Đặt cassette vào buồng hút máy theo hướng dẫn sử dụng máy định danh làm kháng sinh đồ tự động vitek compact (TT.02/QTKT.VS.021.V1.0) 9.2.11 Nhập liệu vào máy tính theo hướng dẫn sử dụng máy định danh làm kháng sinh đồ tự động vitek compact 9.2.12 Nhập thông tin bệnh nhân theo hướng dẫn sử dụng máy định danh làm kháng sinh đồ tự động vitek compact 10 Diễn giải báo cáo kết Sau kết ID AST máy hồn tất , kiểm tra thơng tin định danh kháng sinh đồ xem có phù hợp hay không phù hợp - Nếu phù hợp: trả kết định danh kháng sinh đồ , nhiên trường hợp sau khơng có dấu hiệu cảnh báo đặt lại kháng sinh đồ Etest để kiểm tra lại trước trả kết kháng sinh đồ + Tụ cầu, liên cầu kháng vancomycin + TRực khuẩn Gram âm kháng colistin họ vi khuẩn đường ruột, Acinetobacter spp, Pseudomonas aeruginosa…(trừ số vi kháng tự nhiên) + Độ phù hợp thấp/ không phù hợp: + Xem xét lại chủng vi khuẩn/nấm định danh và/kháng sinh đồ + Hoặc xác định thêm thử nghiệm khác trước trả kết 11 Lưu ý ( cảnh báo) - Các loại thẻ ID AST cần để nhiệt độ phòng khơng q 30 phút tiến hành thử nghiệm - Huyền dịch vi khuẩn/nấm sau pha không để 30 phút 12 Lưu trữ hồ sơ - Ghi thông tin bệnh nhân kết vào sổ lưu - Điền đầy đủ thông tin vào biểu mẫu 13 Các tài liệu liên quan Tên tài liệu Mã tài liệu Thông tin cassette BM.01/QTKT.VS.021.V1.0 Hướng dẫn sử dụng máy TT.01/QTKT.VS.021.V1.0 DENSICHEK PLUS Hướng dẫn sử dụng máy định TT.02/QTKT.VS.021.V1.0 danh làm kháng sinh đồ tự động Vitek compact 14 Tài liệu tham khảo Hướng dẫn kỹ thuật định danh máy VITEK BioMerieux bao gồm: + VITEK System Product Information, EN 41097 + VITEK Technology Software User manual + VITEK compact Instrument User manual ... thực đề tài: Nghiên cứu đặc diểm lâm sàng, cận lâm sàng theo nguyên vi khuẩn gây vi m phổi trẻ tuổi bệnh vi n Nhi Thái Bình với mục tiêu: Xác định nguyên vi khuẩn gây vi m phổi trẻ tuổi mức độ... THỊ THÙY DƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG THEO CĂN NGUYÊN VI KHUẨN GÂY VI M PHỔI Ở TRẺ DƯỚI TUỔI TẠI BỆNH VI N NHI THÁI BÌNH Chuyên ngành: Nhi khoa Mã số: 607201 35 ĐỀ CƯƠNG LUẬN... VK gây bệnh - Phân bố chủng VK gây bệnh - KS đồ VK gây bệnh thường gặp 2.3.3 Một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng theo nguyên vi khuẩn gây VP - VK gây bệnh theo nhóm tuổi - VK gây bệnh theo