Nghiên cứu mức độ nhiễm 2 loài Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus và aflatoxin trên vị thuốc khiếm thực (Semen Euryales)

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN QUỲNH ANH NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ NHIỄM LOÀI ASPERGILLUS FLAVUS, ASPERGILLUS PARASITICUS VÀ AFLATOXIN TRÊN VỊ THUỐC KHIẾM THỰC (SEMEN EURYALES) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN QUỲNH ANH MÃ SINH VIÊN: 1401040 NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ NHIỄM LOÀI ASPERGILLUS FLAVUS, ASPERGILLUS PARASITICUS VÀ AFLATOXIN TRÊN VỊ THUỐC KHIẾM THỰC (SEMEN EURYALES) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Trần Trịnh Công TS Nguyễn Quỳnh Lê Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh & Sinh học Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lòng kính trọng chân thành biết ơn sâu sắc đến người thầy TS Trần Trịnh Công – Giảng viên Bộ môn Vi sinh Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy định hướng, ln sát sao, tận tình bảo tạo điều kiện để tơi thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Quỳnh Lê động viên hỗ trợ nhiều nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, cô giáo, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Vi sinh Sinh học tồn thể thầy giáo trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy nhiệt huyết yêu nghề truyền cho kiến thức cảm hứng suốt thời gian học tập mái trường Dược thân yêu Cũng xin chân thành cảm ơn người bạn tuyệt vời tôi, tơi khơng thể hết hành trình đại học cách thuận lợi tốt đẹp, thiếu người bạn tuyệt vời đồng hành bên cạnh Lời cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến bố mẹ, người thân tơi, ln chỗ dựa vững cho bước sống, không so sánh với tình u thương mà họ dành cho Hà Nội, ngày 18 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Trần Quỳnh Anh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Một vài nét chi Aspergillus 1.1.1 Aspergillus flavus 1.1.1.1 Đặc điểm hình thái A.flavus 1.1.1.2 Điều kiện sinh trưởng sinh bào tử A flavus .4 1.1.2 Aspergillus parasiticus 1.1.2.1 Đặc điểm hình thái A parasiticus 1.1.2.2 Điều kiện sinh trưởng sinh bào tử A parasiticus 1.2 Độc tố afaloxin .7 1.2.1 Vài nét giới thiệu aflatoxin .7 1.2.2 Ảnh hưởng aflatoxin đến sức khỏe người 1.2.3 Phương pháp phân tích aflatoxin 10 1.3 Tình hình nghiên cứu nấm mốc mycotoxin thảo dược nước 11 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nấm mốc mycotoxin thảo dược nước .11 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nấm mốc mycotoxin thảo dược nước .13 1.4 Phương pháp phân lập phân loại nấm mốc 14 1.4.1 Phương pháp đặt trực tiếp 15 1.4.2 Phương pháp pha loãng .15 1.4.3 Phương pháp phân loại 15 1.5 Tổng quan Khiếm thực 16 1.5.1 Một vài nét vị thuốc Khiếm thực 16 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nấm mốc aflatoxin Khiếm thực nước 17 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng, trang thiết bị nghiên cứu 18 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.2 Môi trường phân lập xác định nấm mốc 18 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu 19 2.3.2 Phương pháp xác định hàm ẩm dược liệu 20 2.3.3 Phương pháp phân lập nấm mốc: 20 2.3.4 Phương pháp phân loại nấm mốc: .20 2.3.5 Các số đánh giá mức độ nhiễm nấm 21 2.3.6 Phương pháp phân tích aflatoxin HPLC vị thuốc Khiếm thực 21 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Hàm ẩm mẫu khiếm thực nghiên cứu 24 3.2 Mức độ nhiễm loài Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus vị thuốc khiếm thực 24 3.3 Mức độ nhiễm aflatoxin mẫu khiếm thực nghiên cứu 32 3.3.1 Kết kiểm tra độ thích hợp hệ thống 32 3.3.2 Kết nghiên cứu khoảng nồng độ tuyến tính aflatoxin 32 3.3.3 Kết xác định hàm lượng aflatoxin mẫu khiếm thực 33 BÀN LUẬN 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37 Kết luận 37 Đề xuất .37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADM (AFPA) : Aspergillus Differentiation Medium Base AOAC : Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức (Association of Official Analytical Chemist) A flavus : Aspergillus flavus A fumigatus : Aspergillus fumigatus A niger : Aspergillus niger A paraciticus : Aspergillus paraciticus A penicillioides: Aspergillus penicillioides A terreus : Aspergillus terreus A ustus : Aspergillus ustus DĐVN IV : Dược điển Việt Nam IV DGM : Dichloran Glycerol Medium Base FQ : Tần suất xuất loài (Isolation Frequency) HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) IARC : Cơ quan nghiên cứu Ung thư quốc tế (International Agency for Research) LÔ : Lãn Ông MEA : Malt Extra Agar PDA : Potato Dextrose Agar RD : Mật độ loài (Relative Fungal Density) TLC : Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TRC : Toronto Research Chemicals DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Đặc điểm hình thái nấm A flavus A parasiticus Bảng 1.2 Con đường bệnh aflatoxin người Bảng 2.1 Các aflatoxin chuẩn 21 Bảng 3.1 Hàm ẩm mẫu khiếm thực nghiên cứu 24 Bảng 3.2 Mức độ nhiễm loài A flavus, A parasiticus số loài chủ yếu khác từ 10 mẫu khiếm thực nghiên cứu 25 Bảng 3.3 Đặc điểm khuẩn lạc số loài chi Aspergillus phân lập từ mẫu khiếm thực nghiên cứu 26 Bảng 3.4 Đặc điểm vi học loài A flavus, A parasiticus số loài chủ yếu khác phân lập từ mẫu khiếm thực 27 Bảng 3.5 Nồng độ chuẩn aflatoxin 32 Bảng 3.6 Kết kiểm tra độ thích hợp hệ thống 32 Bảng 3.7 Kết biểu thị phụ thuộc diện tích pic (A) nồng độ aflatoxin (C) 32 Bảng 3.8 Kết định lượng aflatoxin mẫu khiếm thực thu từ hiệu thuốc đông dược 34 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cấu trúc sinh conidi chi Aspergillus Hình 1.2 Hình ảnh Aspergillus flavus Hình 1.3 Hình ảnh Aspergillus parasiticus Hình 1.4 Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus mọc đĩa môi trường Czapek phân lập từ mẫu hạt Hình 1.5 Cơng thức phân tử số loại aflatoxin Hình 1.6 Tác dụng gây ung thư aflatoxin B1 gan chuột 10 Hình 3.1 Lồi A flavus nhiễm vị thuốc khiếm thực 28 Hình 3.2 Lồi A parasiticus nhiễm vị thuốc khiếm thực 29 Hình 3.3 Lồi A niger nhiễm vị thuốc khiếm thực 30 Hình 3.4 Lồi A terreus nhiễm vị thuốc khiếm thực 31 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic nồng độ aflatoxin 33 (a) (b) (c) (d) (f) (e) Hình 3.2 Lồi A parasiticus nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A parasiticus nhiễm mẫu 32LƠ (mơi trường PDA); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài (Czapek Dox, 25oC, ngày nuôi); (d): Conidi cấu trúc sinh conidi tầng loài (e) (f): Mặt trước sau khuẩn lạc (ADM, 30oC, 48 giờ) 29 (a) (b) (c) (d) Hình 3.3 Lồi A niger nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A niger nhiễm mẫu 50LƠ (mơi trường phân lập PDA); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (25OC, ngày nuôi); (d): Conidi cấu trúc sinh conidi tầng loài 30 (a) (b) (c) (d) Hình 3.4 Lồi A terreus nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A terreus nhiễm mẫu 32LƠ (mơi trường phân lập DGM); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (25oC, ngày nuôi); (d): Conidi cấu trúc sinh conidi tầng loài 31 3.3 Mức độ nhiễm aflatoxin mẫu khiếm thực nghiên cứu Bảng 3.5 Nồng độ chuẩn aflatoxin G1 (μg/ml): 100 B1 (μg/ml): 100 G2 (μg/ml): 100 B2 (μg/ml): 100 3.3.1 Kết kiểm tra độ thích hợp hệ thống Bảng 3.6 Kết kiểm tra độ thích hợp hệ thống Aflatoxin G2 G1 B2 B1 5793400 94670 2161354 161592 5799218 92349 2162930 164403 5800645 93693 2162760 162977 5791241 92403 2158030 161329 5792660 92572 2157270 161244 5790441 92002 2161742 160272 RSD 0.1 1.1 0.1 0.9 Nhận xét: Với kết RSD dao động khoảng 0,1-1,1 (˂ 2%) cho thấy hệ thống ổn định, thích hợp cho việc phân tích độc tố aflatoxin 3.3.2 Kết nghiên cứu khoảng nồng độ tuyến tính aflatoxin Bảng 3.7 Kết biểu thị phụ thuộc diện tích pic (A) nồng độ aflatoxin (C) Aflatoxin G1 Aflatoxin G2 Aflatoxin B1 Aflatoxin B2 C (ng/ml) A C (ng/ml) A C (ng/ml) A C (ng/ml) A 1.6 6970 0.4 115330 1.6 12060 0.4 32231 3.2 13457 0.8 231571 3.2 26236 0.8 63416 6.4 26509 1.6 457384 6.4 50091 1.6 125339 12.8 54359 3.2 913846 12.8 102271 3.2 250812 25.6 110537 6.4 1893289 25.6 205359 6.4 515583 y =4326,4x– 551,3 y=296045x– 11907,5 y = 8037,2x – 525,9 y=80552,4x -2293,8 R2 = 0,9998 R2 = 0,9997 R2 = 0,9999 32 R2 = 0,9998 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic nồng độ aflatoxin Nhận xét: Kết khảo sát đường chuẩn cho thấy đường hồi qui có dạng đường thẳng nồng độ aflatoxin khoảng khảo sát có mối tương quan chặt chẽ với diện tích pic (R2 ≥ 0,9998) 3.3.3 Kết xác định hàm lượng aflatoxin mẫu khiếm thực 33 Bảng 3.8 Kết định lượng aflatoxin mẫu khiếm thực thu từ hiệu thuốc đông dược TT mẫu Hàm lượng aflatoxin dược liệu (ppb = ng/g) Toàn TT Mẫu G2 G1 B2 B1 36 LÔ 4,3 103,3 336,9 2.267,6 2.712,1 51A LÔ - 54,6 81,7 230,8 367,1 62 LÔ - 425,7 11,5 N/A 437,2 phần (Ghi N/A: không phát được; -: thấp giới hạn định lượng dưới) Nhận xét: Qua kết từ bảng 3.7 cho thấy: - Tất mẫu đem phân tích độc tố bị nhiễm aflatoxin toàn phần (B1+B2+G1+G2) dao động khoảng 437,2-2712,1 ppb (ng/g) mẫu có hàm lượng độc tố vượt quy định cho phép ngành Y tế ( Theo Dược điển Việt Nam V, giới hạn cho phép μg/kg ( ng/g) cho tổng lượng aflatoxin B1, B2, G1, G2 ) - Đối với aflatoxin B1, mẫu bị nhiễm độc tố có mẫu 62 LƠ khơng phát mẫu lại 36 LÔ 51A LÔ với hàm lượng aflatoxin B1 2267,6 ppb 230,8 ppb, kết vượt qui định cho phép với aflatoxin B1 theo Dược điển Việt Nam V (không μg/kg) Trong aflatoxin B1, B2, G1, G2, aflatoxin B1 G1 tạo với lượng cao aflatoxin B2 G2 - Trong mẫu bị nhiễm độc tố, mẫu 36 LÔ mẫu bị nhiễm nhiều loại aflatoxin mẫu có hàm lượng aflatoxin tồn phần cao - mẫu có tỷ lệ nhiễm loài nấm A flavus A parasiticus cao phát thấy hàm lượng độc tố cao 34 BÀN LUẬN Hàm ẩm dƣợc liệu Trong 10 mẫu nghiên cứu, có mẫu khiếm thực có hàm ẩm đạt yêu cầu DĐVN IV, mẫu không đạt yêu cầu Tuy nhiên, tất mẫu thảo dược khiếm thực nghiên cứu có hàm ẩm đạt không đạt yêu cầu DĐVN IV bị nhiễm nấm Sự khác biệt mức độ nhiễm nấm mẫu có hàm ẩm đạt không đạt yêu cầu Dược điển không thấy rõ (bảng 3.1 3.2.) Lý giải cho kết này, theo mẫu thảo dược thu thập ngẫu nhiên để nghiên cứu, nguồn gốc, xuất xứ, điều kiện thu hái, chế biến, làm khơ bảo quản khơng kiểm sốt Các mẫu thảo dược bị nhiễm nấm (ở ngồi đồng ruộng, trang trại, q trình thu hoạch, chế biến bảo quản) trước bán hiệu thuốc đơng dược Do vậy, để kiểm sốt nhiễm vi sinh vật nói chung, vi nấm nói riêng đánh giá ảnh hưởng hàm ẩm tới mức độ nhiễm nấm, thảo dược cần phải biết xuất xứ sản phẩm, giám sát q trình ni trồng, thu hái, chế biến (đặc biệt q trình làm khơ) chuyển, bn bán đến tận tay người tiêu dùng Mức độ nhiễm loài Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Từ kết phân lập, phân loại nấm từ 10 mẫu khiếm thực trình bày bảng 3.2 cho thấy: Tất 10 mẫu nghiên cứu bị nhiễm nấm mốc, với số chủng phân lập mẫu dao động từ 9-45 chủng Các mẫu vị thuốc khiếm thực bị nhiễm chủ yếu loài chi Aspergillus, đặc biệt loài A flavus & A parasiticus Đây loài chủ yếu sinh độc tố aflatoxin, độc tố gây ung thư người tổ chức nghiên cứu ung thư Quốc tế IARC (có trụ sở thành phố Lyon, Pháp) cơng bố Trong số này, điều đáng ý mẫu có số chủng phân lập cao (36LƠ) với 45 chủng mẫu có hàm ẩm đạt yêu cầu (12,8%); mẫu có hàm ẩm cao số mẫu có hàm ẩm khơng đạt u cầu (44A LƠ) với hàm ẩm 15,7% lại có số chủng phân lập thấp chủng (có chủng Aspergillus parasiticus khơng có Aspergillus flavus) Kết phù hợp với kết nghiên cứu Sinha cộng 2002 [41], Trần Trịnh Công cộng 2017 [6] 35 nghiên cứu mức độ nhiễm loài chi Aspergillus vị thuốc Đây loài nấm thường nhiễm sản phẩm có nguồn gốc thực vật q trình bảo quản sinh độc tố aflatoxin, đặc biệt với thành phần hóa học có nhiều carbohydrate (tinh bột), protein lipid vị thuốc khiếm thực Cụ thể hơn, tinh bột khiếm thực thành phần chất thích hợp cho phát triển nấm mốc, điều kiện thuận lợi cho nấm Aspergillus lây nhiễm phân lập nhiều vị thuốc Mức độ nhiễm aflatoxin mẫu vị thuốc nghiên cứu Ba mẫu phân lập nhiều chủng nấm nhất, đồng thời mẫu có tỷ lệ nhiễm lồi nấm A flavus & A parasiticus cao số 10 mẫu ( 36 LÔ, 51A LÔ, 62 LÔ) phát thấy hàm lượng độc tố cao Hàm lượng độc tố aflatoxin toàn phần mẫu vượt giới hạn cho phép aflatoxin toàn phần dược liệu quy định Dược điển Việt Nam V (≤ μg/kg với aflatoxin toàn phần) [1] Ngoài ra, aflatoxin B1 phát mẫu khiếm thực (36 LÔ 51A LÔ) với hàm lượng vượt giới hạn cho phép aflatoxin B dược liệu qui định Dược điển Việt Nam V (≤ μg/kg với aflatoxin B1) Mặc dù phát aflatoxin 2/3 mẫu đem phân tích hàm lượng aflatoxin vượt giới hạn cho phép gấp nhiều lần (gấp 1000 lần với mẫu 36 LƠ 100 lần với mẫu 51A LƠ) Mẫu lại (62 LƠ) khơng phát độc tố aflatoxin B1 chủng nấm nhiễm khơng có khả sinh độc tố aflatoxin B1 chưa gặp điều kiện thuận lợi cho phát triển hình thành aflatoxin Điều cho thấy, khả mắc ung thư số bệnh khác aflatoxin cao người sử dụng dược liệu Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Sinha cộng 2002 [41], cho thấy nhóm loài A flavus nhiễm mẫu khiếm thực nghiên cứu Kết cho thấy vị thuốc khiếm thực chất dễ bị nhiễm độc tố nguy hiểm 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Qua trình phân lập, phân loại chủng nấm xác định aflatoxin nhiễm 10 mẫu vị thuốc khiếm thực thu thập từ hiệu thuốc đông dược địa bàn Hà Nội, rút số kết luận sau: 1.1 Mức độ nhiễm loài A flavus A parasiticus - 10 mẫu vị thuốc khiếm thực, có hàm ẩm dao động từ 10,4-15,7% bị nhiễm nấm mốc với số chủng phân lập dao động từ 5-45 chủng/mẫu - Từ 10 mẫu khiếm thực nghiên cứu phân lập 104 chủng thuộc loài A flavus 22 chủng thuộc loài A parasiticus phương pháp đặt trực tiếp mơi trường PDA DGM - Lồi A flavus có mặt 7/10 mẫu khiếm thực nghiên cứu, với tỷ lệ chủng phân lập chiếm 58,1% (104/179) tổng số chủng phân lập loài thuộc chi Aspergillus gồm: A flavus, A parasiticus, A niger, A fumigatus, A.terreus A ustus - Loài A parasiticus phân lập từ 7/10 mẫu khiếm thực nghiên cứu, với tỷ lệ chủng phân lập chiếm 12,3% (22/179) tổng số chủng phân lập thuộc loài thuộc chi Aspergillus gồm: A flavus, A parasiticus, A niger, A fumigatus, A terreus A ustus 1.2 Mức độ nhiễm aflatoxin - Với mẫu vị thuốc khiếm thực đem phân tích độc tố, mẫu bị nhiễm aflatoxin toàn phần với hàm lượng dao động cao từ 437,2-2712,1 ppb (ng/g) vượt ppb - Trong mẫu bị nhiễm độc tố aflatoxin, có mẫu bị nhiễm aflatoxin B1 với hàm lượng 2267,6 ppb 230,8 ppb, kết vượt ppb Đề xuất 37 - Tiếp tục nghiên cứu mức độ nhiễm loài A flavus, A parasiticus độc tố aflatoxin vị thuốc khiếm thực với qui mô mẫu lớn - Mở rộng phạm vi nghiên cứu tới khu vực khác nước, đặc biệt khu vực đơng dân cư có khí hậu khác biệt (miền Trung miền Nam Việt Nam), để có đánh giá đầy đủ mức độ nhiễm loài nấm aflatoxin thảo dược khiếm thực - Cần triển khai nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc dược liệu khiếm thực cách đầy đủ tất giai đoạn: giai đoạn trước thu hái, giai đoạn thu hái giai đoạn chế biến, bảo quản để có biện pháp phòng tránh nhiễm nấm mốc cụ thể thích hợp - Nên có văn quy định cụ thể thức mức nhiễm độc tố aflatoxin thảo dược Hiện Việt Nam có qui định mức nhiễm tối đa cho phép aflatoxin (B1, aflatoxin toàn phần M1) lương thực thực phẩm [2], [3] Đối với thảo dược, DĐVN có quy định chưa cụ thể 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, tập 2, phụ lục 12, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 288-290 Bộ Y tế (2011), Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia giới hạn ô nhiễm độc tố vi nấm thực phẩm, Hà Nội Bộ Y tế (2007), Giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm, Hà Nội Trần Trịnh Công (2008), Phân lập nghiên cứu khả sinh độc tố số nấm mốc số vị thuốc đông dược Việt Nam, Đề tài NCKH cấp Bộ Y tế, Hà Nội Trần Trịnh Công (2003), Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc khả sinh aflatoxin nhóm Aspergillus flavus số vị thuốc đông dược lưu hành địa bàn Hà Nội, Tạp chí Dược học, Hà Nội Trần Trịnh Cơng, Bùi Thị Hạnh (2017), Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Fr.: Fr vị thuốc khiếm thực (Semen Euryales) lưu hành địa bàn Hà Nội, Tạp chí Dược học, Hà Nội Bùi Xuân Đồng, Nguyễn Huy Văn (2000), Vi nấm dùng công nghệ sinh học, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Bùi Thị Hạnh (2017), Nghiên cứu tính đa dạng lồi chi Aspergillus Fr.:Fr vị thuốc mã tiền (Semen Strychni) khiếm thực (Semen Euryales) lưu hành địa bàn Hà Nội, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Đàm Thu Hiền (2017), Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc hai vị thuốc Kha tử (Fructus Terminaliae) nhục đậu khấu (Semen Myristicae) lưu hành địa bàn Hà Nội, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 10 Nguyễn Thị Hồng (2015), Nghiên cứu khả kháng nấm mốc Aspergillus flavus DC213 lạc chế phẩm vi khuẩn đối kháng Pseudomonas putida 199B, Khóa luận tốt nghiệp Đại học, Trường Đại học nông lâm Huế, Huế 11 Nguyễn Phúc Sang (2018), Khảo sát độc tố aflatoxin & nấm mốc có đậu phộng bán chợ địa bàn Tp Hồ Chí Minh, Khóa luận tốt nghiệp Đại học, Trường Đại học Văn Lang, Tp Hồ Chí Minh 12 Lưu Thị Phương Thảo (2015), Nghiên cứu khả giảm hàm lượng độc tố aflatoxin từ nấm mốc vi khuẩn lactic nấm Trichoderma, Khóa luận tốt nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội 13 Phạm Như Trọng (2015), Phân lập nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus sinh độc tố từ hạt lạc, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Hà Nội Tiếng Anh 14 Al-Gabr H, Ye C, Zhang Y, Khan S, Lin H, Zheng T (2013), "Effects of carbon, nitrogen and pH on the growth of Aspergillus parasiticus and afla-toxins production in water.", Journal oof Environmental Biology, pp 353-358 15 Ashiq S et al (2014), "Natural occurrence of mycotoxins in medicinal plants: A review", Fungal genetics and biology 66, pp 1-10 16 Aziz N H et al (1998), "Contamination of some common medicinal plant samples and spices by fungi and their mycotoxins", Bot Bull Acad Sin., Vol 39, pp 279-285 17 Barnett H L and Hunter B B (1972), "Illustrated Genera of Imperfect Fungi", Burgess Publishing Company, Third Edition 18 Chen A J et al (2015), "Mycobiota and mycotoxins in traditional medicinal seeds from China", Toxins 7, pp 3858-3875 19 Cho S Y et al (2009), "Co-contamination of aflatoxins with ochratoxin A and zearalenone in Thuja orientalis semen", Toxicol Res, Vol 5(3), pp 125-131 20 Das S., Der P., et al (2006), "The effect of Euryale ferox (Makhana), an herb of aquatic origin, on myocardial ischemic reperfusion injury", Mol Cell Biochem, Vol 289(1-2), pp 55-63 21 Didwania N and Joshi M (2013), "Mycotoxins: A critical review on occurrence and significance", Int Pharm Pharm Sci, Vol 5(3), pp.1014-1019 22 Gautam A K and Bhadauria R (2012), "Characterization of Aspergillus species associated with commercially stored triphala powder", African J Biotech., Vol 11(104), pp 16814-16823 23 Gautam A.K et al (2016), "Mycotoxins: the silent killers inside herbal drugs A critical review of the literature", Bio bulletin, Vol 2(1), pp 26-39 24 Godfrey S., Kitya David, et al (2013), "Review of the Biological and Health Effects of Aflatoxins on Body Organs and Body Systems", Aflatoxins - Recent Advances and Future Prospects 25 Gonzalez H H L et al (1999), "Relationship between Fusarium and Alternaria alternate contamination and deoxynivalenol occurrence on Argentinian durum", Mycopathologia, Vol 144, pp 97-102 26 Gourama Hassan, Bullerman Lloyd B (1995), "Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus: Aflatoxigenic Fungi of Concern in Foods and Feeds: A Review", Journal of Food Protection, Vol 58(12), pp 1395-1404 27 Hedayati M.T, Pasqualotto A.C, Warn P.A, Bowyer P and Denning D.W (2007), "Aspergillus flavus: human pathogen, allergen and mycotoxin producer", Microbiology 28 James G.C., Natalie S (1996), "A Laboratory Manual ", The Benjamin/ Cummings Publishing Company, pp 199-213 29 Jitendra Kumar, Satish Kumar, Ashok Kumar, Manish Kumar, Sanoj Kumar, Singh and Umesh (2017), "Study of physico-chemical and engineering properties of makhana (Euryale ferox) for the development of makhana popping machine", International Journal of Science, Environment and Technology, Vol 30 Lee et al (2014), "Incidence and level of aflatoxins contamination in medicinal plants in Korea", Mycobiology, Vol 42(4), pp 339-345 31 Mahajan S et al (2014), "Isolation and identification of fungal contamination in stored medicinal plants", American journal of pharmacology and pharmacotherapeutics, Vol 1(2), pp 52-58 32 Pitt J.I and Hocking A.D (2009), Fungi and Food Spoilage, Academic Press 33 Pitt J.I and Hocking A.D (1999), Fungi and food spoilage (2nd ed.), Md.: Aspen Publications, Gaithersburg 34 Raper K.B and Fennell D.I (1965), Genus Aspergillus, Baltimo, Williams and Wilkins, USA 35 Richardson M D and Warnock D W (2012), Fungal infection: Diagnosis and Management, Fourth Edition, Wiley-Blackwell, pp 25-36 36 Rizzo I., Vedoya G., et al (2004), "Assessment of toxigenic fungi on Argentinean medicinal herbs", Microbiol Research, Vol 159(2), pp 113-20 37 Salari et al (2012), "Assessment of the microbiological quality and mycotoxin contamination of Iranian red pepper spice", J Agr Sci Tech, Vol 14, pp 15111521 38 Samson R.A., et al.(1995), Introduction to food-borne fungi, Fourth edition, CBS press 39 Santos L et al (2013), Mycotoxin in medical/aromatic herbs – a review, Boletín Latinoamericano y del Caribe de plants medicales y aromáticas, Vol 12(2), pp 119-142 40 Saori Amaike, Nancy P Keller (2011), "Aspergillus flavus", Annual Review of Phytopathology, Vol 49(1), pp 107-133 41 Sauer D B and Burroughs R (1986), "Disinfection of seed surfaces with sodium hypochlorite", Phytopathology Vol 76, pp 745-749 42 Sharma S et al (2013), "Investigation on the mycoflora and mycotoxin contamination of dried medicinal leaves of Azadirachta indica A Juss., and Justicia adhatoda Linn., from Jammu and Kashmir state (India)", International Journal of advanced research, Vol 1(4), pp 131-138 43 Sinha B.K et al (2002), "Mycotoxins, mycotoxigenic fungi and the biochemical changes in makhana (Euryale ferox Salisb) puffs of North Bihar”", Journal of food science and technologry (Mysore), Vol 39(1), pp 38-41 44 Walsh T.J., et al (2008), "Treatment of aspergillosis: clinical practice guidelines of the infectous diseases society of America", Clin Infect Dis., Vol 46, pp 327-360 45 Zheng et al (2017), "An investigation of fungal contamination on the surface of medicinal herbs in China", Chin Med 12:2, pp 1-8 ... họ dành cho Hà Nội, ngày 18 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Trần Quỳnh Anh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN ... thực hiện, không yêu cầu trang thiết bị đắt tiền chi phí thấp, tốn nhiều thời gian cơng sức [21], [30], [32], [36] Định danh phương pháp sinh học phân tử: Hiện việc định danh nấm phương pháp giải... Density) TLC : Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TRC : Toronto Research Chemicals DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Đặc điểm hình thái nấm A flavus A parasiticus Bảng 1.2 Con đường bệnh