luận văn nghiên cứu trà thảo dược từ là đinh lăng

Mục tiêu của đề tài Tạo ra sản phẩm trà thảo dược đinh lăng có chất lượng tốt. Ý nghĩa khoa học của đề tài Xác định được một số thành phần hóa học có trong cây đinh lăng. Xác định được các thông số cơ bản của quá trình trích ly dịch chiết. Xây dựng quy trình sơ bộ sản xuất trà thảo dược đinh lăng Các số liệu trong đề tài nghiên cứu có thể làm tài liệu tham khảo cho những nghiên cứu tương tự. Từ kết quả nghiên cứu của đề tài cũng như những kiến nghị đề xuất trong đề tài sẽ là cơ sở để người nghiên cứu khác có thể phát triển ý tưởng, hình thành các đề tài nghiên cứu mới, góp phần bổ sung thêm kiến thức và kinh nghiệm. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài Đề tài sử dụng các loại thảo dược gần gũi trong dân gian, tương đối rẻ tiền, phù hợp với đề tài nghiên cứu của sinh viên. Đề xuất được quy trình tách chiết saponin từ cây đinh lăng. Tạo cơ sở ban đầu để nghiên cứu quy trình sản xuất trà thảo dược với quy mô công nghiệp để sản xuất thực phẩm chức năng.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÔNG Á KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM – SINH HỌC ******* NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT TRÀ THẢO DƯỢC TỪ LÁ ĐINH LĂNG GVHD: TS Nguyễn Phước Minh SVTH: Cao Thị Thảo Nguyễn Thị Trâm Phan Thị Cúc Liễu LỚP: 16TP45B KHÓA: 2016-2019 Đắk Lắk, năm 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÔNG Á KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM – SINH HỌC ******* NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT TRÀ THẢO DƯỢC TỪ LÁ ĐINH LĂNG GVHD: TS Nguyễn Phước Minh SVTH: Cao Thị Thảo Nguyễn Thị Trâm Phan Thị Cúc Liễu LỚP: 16TP45B KHÓA: 2016-2019 Đắk Lắk, năm 2019 LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp mơn học đánh dấu kết thúc trình học tập nghiên cứu sinh viên giảng đường Đại học, giúp cho sinh viên làm quen với công tác nghiên cứu, thiết kế thí nghiệm, tạo tiền đề cho nghiên cứu sau Khóa luận tốt nghiệp khơng giúp sinh viên tổng hợp lại tất kiến thức học, bên cạch giúp sinh viên tiếp thu kiến thức liên quan, để hồn thành khóa luận nhanh hơn, xác Đầu tiên chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy, cô trường đại học Đông Á, tạo cho chúng em môi trường học tập, để chúng em hiểu ngành học Xin cảm ơn cô, chú, anh, chị, em Viện vệ sinh dịch tễ Tây Nguyên, tạo điều kiện thuận lợi sở vật chất, để chúng em hoàn thành khóa luận Đặc biệt chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Nguyễn Phước Minh trực tiếp hướng dẫn đưa góp ý tận tình để chúng em thực đề tài cách tốt Qua chúng em xin bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình bạn bè quan tâm động viên, giúp đở chúng em suốt thời gian qua Mặc dù cố gắng thời gian nghiên cứu hạn chế, chưa có kinh nghiệm thực tế nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót trình thực Vì chúng em mong thầy đưa nhận xét, góp ý để đề tài hoàn thiện Lời cuối chúng em xin kính chúc q thầy sức khỏe ngày thành công nghiệp trồng người Sinh viên thực Cao Thị Thảo Nguyễn Thị Trâm Phan Thị Cúc Liễu i LỜI CAM ĐOAN Chúng em xin cam đoan viết, đề cập tới báo cáo khóa luận trung thực, xác, thơng tin trích dẫn báo cáo rõ nguồn Các số liệu, xử lý kết chúng em tự nghiên cứu, tự làm chưa cơng bố cơng trình khác Sinh viên thực Cao Thị Thảo Nguyễn Thị Trâm Phan Thị Cúc Liễu ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH xiv MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ ĐINH LĂNG 1.1.1 Nguồn gốc, giống loại – phân bố .3 Đinh lăng nhỏ hay có tên Gỏi cá, Nam dương lâm Thuộc họ ngũ gia bì (Ngũ gia bì (Araliaceae)), có tên khoa học Polyscias fruticosa (L.) Harms; tên đồng nghĩa: Panax fruticosus L., Nothopanax fruticosus (L.) Miq., Aralia fruticosa (L.) Bailey, Tieghemopanax fruticosus (L.) R Vig Giới: Thực vật ngành: Magnoliophyta Lớp: Magnoliopsida bộ: Cornales Họ: Araliaceae chi: Polyscias Loài: Polyscias fruticosa (L.) Harms.[43] Hình 1.1: Hình ảnh đinh lăng 1.1.2 Đặc điểm hình thái phát triển đinh lăng 1.2.2 Phân loại saponin .8 1.3 TỔNG QUAN VỀ TRÀ THẢO DƯỢC .9 1.3.1 Khái niệm trà thảo dược 1.3.2 Công dụng trà thảo dược 10 Bảng 1.2: Công dụng số loại thảo mộc [41] 11 1.3.3 Lịch sử trà thảo dược .11 1.3.4 Phân loại trà thảo dược 12 iii 1.3.4.1 Phân loại theo thành phần 12 1.3.4.2 Phân loại theo cách chế biến 12 Hình 1.2: Sơ đồ phân loại trà theo trạng thái sản phẩm .13 1.3.4.4 Phân loại theo trạng thái dược lý đông y 13 1.3.5 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 13 1.3.5.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 13 1.3.5.2 Tình hình nghiên cứu nước ta 14 1.4 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẤY 15 1.4.1 Khái niệm sấy .15 1.4.2 Phân loại.[29] 15 1.5 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP CHIẾT .17 1.5.1 Giới thiệu phương pháp chiết .17 1.5.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết [29] 18 1.5.2.1 Ảnh hưởng dung môi .18 1.5.2.2 Đặc điểm nguyên liệu 18 1.5.2.3 Nhiệt độ 19 1.5.2.4 Thời gian 19 1.5.2.5 Khuấy trộn 19 1.5.3 Một số phương pháp tách chiết [29] 19 1.5.3.1.Phương pháp chiết xuất gián đoạn 19 CHƯƠNG 22 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 22 2.2 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 22 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .22 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 iv 2.4.1 Thiết bị, dụng cụ hóa chất sử dụng .22 2.4.2 Phương pháp lấy mẫu 23 2.4.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 24 Hình 2.1: Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 24 2.4.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thành phần hóa học đinh lăng tươi 24 2.4.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát hàm lượng saponin đinh lăng tươi.25 2.4.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát xác định chế độ sấy đinh lăng .25 Hình.2.2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định phương pháp sấy đinh lăng tươi 26 2.4.3.4 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu xác định phương pháp chiết .26 2.4.3.5 Thí nghiêm 5: Nghiên cứu xác định dung mơi nồng độ chiết thích hợp 26 Hình 2.4: Sơ đồ bố trí thí nghiệm dung mơi nồng độ chiết thích hợp 27 2.4.3.6 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu xác định nhiệt độ chiết thích hợp .27 2.4.3.7 Thí nghiệm 7: Phân tích tiêu vi sinh bột sấy dịch chiết từ đinh lăng(Phụ lục 5B) .28 2.4.3.8 Thí nghiệm Phân tích tiêu kim loại nặng bột sấy từ đinh lăng(5A) 28 2.4.3.9 Thí nghiệm Thử nghiệm sử dụng bột sấy từ đinh lăng sản xuất trà hòa tan .28 2.5 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 28 2.5.1.Phương pháp phân tích số thành phần hóa học đinh lăng 28 2.5.1.1 Xác định độ ẩm .28 2.5.1.2 Xác định hàm lượng tro( yêu cầu 5,0%) 29 b: khối lượng nguyên liệu ban đầu .30 2.5.3 Phương pháp xử lí số liệu 30 v Bảng 3.1: Một số thành phần hóa học đinh lăng .31 3.2 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG SAPONIN CỦA LÁ ĐINH LĂNG 31 Bảng 3.2: Hàm lượng saponin phận rễ, thân, đinh lăng 32 3.3 KHẢO SÁT XÁC ĐỊNH CHẾ ĐỘ SẤY LÁ ĐINH LĂNG 32 Bảng 3.3: Ảnh hưởng phương pháp sấy nhiệt độ sấy tới nguyên liệu 33 Hình 3.1: Bột đinh lăng 34 3.4 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CHIẾT ĐẾN QUÁ TRÌNH TÁCH CHIẾT SAPONIN TỪ BỘT LÁ ĐINH LĂNG 34 Bảng 3.4: Kết khảo sát phương pháp chiết 34 3.5 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA DUNG MÔI VÀ NỒNG ĐỘ ĐẾN QUÁ TRÌNH TÁCH CHIẾT .35 Bảng 3.5: Kết khảo sát dung mơi nồng độ ảnh hưởng đến q trình tách chiết 35 3.6 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH THỜI GIAN CHIẾT THÍCH HỢP .35 Bảng 3.6: Kết khảo sát thời gian chiết đến trình tách chiết 36 3.7 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN KIM LOẠI NẶNG SẢN PHẨM BỘT TỪ LÁ ĐINH LĂNG .36 Bảng 3.7: Kết phân tích thành phần kim loại nặng .36 3.8 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH VI SINH CỦA SẢN PHẨM BỘT TỪ LÁ ĐINH LĂNG .37 Bảng 3.8: Kết phân tích vi sinh bột hòa tan 37 3.9 KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT TRÀ TỪ BỘT HÒA TAN TỪ LÁ ĐINH LĂNG .37 Bảng 3.9: Ảnh hưởng tỷ lệ đường Aspartame đến chất lượng cảm quan sản phẩm trà hòa tan 37 3.10 ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH SẢN XUẤT TRÀ THẢO DƯỢC TỪ LÁ ĐINH LĂNG .38 vi Hình.3.2: Quy trình sơ sản xuất trà hòa tan từ đinh lăng 39 CHƯƠNG 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 KẾT LUẬN 41 4.2 KIẾN NGHỊ .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 b: khối lượng nguyên liệu ban đầu Thang điểm đánh giá chất lượng trà hòa tan Màu sắc .6 Mùi Vị vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TCVN QCVN BYT HPLC Tiêu chuẩn Việt Nam Quy chuẩn Việt Nam Bộ y tế High Performance Liquid Chromatography Anova B.cereus E.coli LB OD R/L UV-VIS Anova Singgle Bacillus cereus Escherichia coli Lysogeny Broth Acid oleanolic Rắn/lỏng Ultraviolet-visible spectrophotometry viii MỘT SỐ HÌNH ẢNH XÉT NGHIỆM Hình 1: Sấy đối lưu đinh lăng Hình 2: Sấy chân khơng Hình 3: Sấy bột Hình 4: Sản phẩm sấy chân khơng sấy đối lưu Hình 5: Xét nghiệm chất chiết Hình 6: Xét nghiệm tro tổng Hình 7: Xét nghiệm saponin Hình 8: Dịch chiết saponin Hình 9: Màu sắc nước trà PHỤ LỤC CÁC TIÊU CHUẨN CỦA VIỆT NĂM A.TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 7604 : 2007 THỰC PHẨM – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG THỦY NGÂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ KHÔNG NGỌN LỬA Foods – Determination of mercury content by flameless atomic absorption spectrophotometric method Lời nói đầu TCVN 7604:2007 xây dựng sở AOAC 971.21 Mercury in Food, Flameless atomic absorption spectrophotometric method TCVN 7604:2007 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố THỰC PHẨM – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG THỦY NGÂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ KHÔNG NGỌN LỬA Foods – Determination of mercury content by flameless atomic absorption spectrophotometric method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp xác định hàm lượng thủy ngân thực phẩm phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử không lửa Nguyên tắc Thủy ngân tách khỏi phần mẫu thử phân hủy dạng thủy ngân phương pháp hóa lạnh, sau lượng thủy ngân xác định đo phổ hấp thụ nguyên tử không lửa Hàm lượng thủy ngân xác định theo phương pháp đường chuẩn Thuốc thử Trong q trình phân tích, sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích nước cất nước có chất lượng tương đương, trừ có qui định khác 3.1 Dung dịch khử Pha 50 ml axit sulfuric (3.5) với khoảng 300 ml nước Để nguội đến nhiệt độ phòng hòa tan 15g natri clorrua (3.6), 15 g hydroxylamin sunfat (3.7) 25 g thiếc clorua (3.8) Pha lỗng nước đến vạch bình định mức 500 ml (4.6) 3.2 Dung dịch pha loãng Cho 58 ml axit nitric (3.9) 67 ml axit sulfuric (3.5) bình định mức 000 ml (4.6) chứa sẵn khoảng từ 300 ml đến 500 ml nước Pha loãng nước đến vạch mức 3.3 Magiê peclorat [Mg(ClO4)2], chất hút ẩm đổ vào bình làm khơ (Hình 1) Thay cần CẢNH BÁO Cẩn thận trọng magiê peclorat nổ tiếp xúc với chất hữu 3.4 Dung dịch thủy ngân chuẩn 3.4.1 Dung dịch gốc, 000 μg/ml Hòa tan 0,1354 g thủy ngân clorua 100 ,0 ml nước 3.4.2 Dung dịch làm việc, μg/ml Pha loãng ml dung dịch gốc dung dịch H 2SO4 0,5 M (3.10) đến vạch mức 000 ml bình (4.6) Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng 3.5 Axit sulfuric (H2SO4), 98 % 3.6 Natri clorua (NaCl) 3.7 Hydroxylamin sunfat [(NH2OH)2H2SO4] 3.8 Thiếc clorua (SnCl2) 3.9 Axit nitric (HNO3), M 3.10 Axit sulfuric (H2SO4), M 3.11 Axit sulfuric (H2SO4), M 3.12 Natri molipdat [Na2MoO4], % 3.13 Axit pecloric (HClO4) Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường (có thể sử dụng loại thiết bị chuyên dụng để xác định thủy ngân) cụ thể sau: 4.1 Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử Đo bước sóng 253,7 nm, độ rộng khe đo 160 μm , cường độ dòng điện mA thang độ nhạy 2,5 có trang bị cuvet đo khí 4.2 Bơm màng Vật liệu màng phần bên với đầu phun tia làm chất dẻo loại acrylic Sử dụng ống Teflon chuẩn 16 cho tất chỗ kết nối 4.3 Thiết bị ngưng sinh hàn, có đầu nối nhám Làm kín thiết bị ngưng vòng Raschig đến chiều cao 100 mm, sau đổ lớp dày khoảng 20 mm hạt thủy tinh đường kính mm (4.8) lên phía vòng 4.4 Đầu nối nhám 4.5 Bình phân hủy, bình chịu nhiệt 250 ml có cổ nhám; 4.6 Bình định mức, 100 ml, 500 ml, 000 ml 4.7 Mảnh chống trào 4.8 Bi thủy tinh, đường kính mm Cách tiến hành 5.1 Phân hủy mẫu Cân khoảng 5,0 phần mẫu thử cho vào bình phân hủy (4.5), thêm 25 ml axit sulfuric M (3.11), 20 ml axit nitric M (3.9), 1ml dung dịch natri molipdat % (3.12) mảnh đến mảnh chống trào (4.7) Lắp sinh hàn (tuần hoàn nước) (4.3) đun nhẹ khoảng Ngắt nhiệt để yên vòng 15 phút Thêm 20 ml hỗn hợp dung dịch axit nitric (3.9) axit pecloric (3.13) theo tỷ lệ 1:1 qua sinh hàn (4.3) Tắt nước tuần hoàn qua sinh hàn đun sơi mạnh đến xuất khói trắng bình Tiếp tục đun 10 phút Để nguội, thêm cẩn thận 10 ml nước qua sinh hàn khuấy dung dịch bình Đun sơi tiếp dung dịch 10 phút Tắt bếp rửa sinh hàn lần, lần 15 ml nước Để nguội đến nhiệt độ phòng 5.2 Tiến hành đo Chuyển tồn mẫu phân hủy vào bình định mức 100 ml pha loãng nước đến vạch Chuyển 25,0 ml phần mẫu thử vào bình phân hủy (4.5) khác Dùng dung dịch pha loãng (3.2) để điều chỉnh thể tích đến 100 ml Chỉnh tốc độ đầu bơm đến khoảng lít khí/phút bơm màng (4.2) Lắp thiết bị Hình 1, trừ ống nối khí Chỉnh máy quang phổ “0” máy bơm hoạt động, thêm 20 ml dung dịch khử (3.1) để hòa tan phần mẫu thử Lắp ống nối khí thổi khí vào khoảng phút (Điều chỉnh thời gian thổi khí để thu hấp thụ tối đa) Ghi lại giá trị độ hấp thụ A, xả áp phần bơm mở lỗ thống bình lọc để hệ thống cân Chú giải bơm màng bình phân hủy, dung tích 250 ml ống dẫn khí ống Teflon chuẩn 16 cuvet đo khí 11,5 cm lỗ có khóa bình làm khơ, dung tích 125 ml Hình – Thiết bị phân tích quang phổ hấp thụ ngun tử khơng lửa 4.3 Dựng đường chuẩn Chuẩn bị mẫu trắng dựng đường chuẩn cách cho μg ; 0,2 μg ; 0,4 μg ; 0,6 μg ; 0,8 μg 1,0 μg thủy ngân vào dãy bình phân hủy Thêm vào bình 100 ml dung dịch pha loãng (3.2) Cuối cùng, thêm dung dịch khử (3.1) thực thao tác mẫu thử Dựng đường chuẩn Nếu hàm lượng thủy ngân nằm đường chuẩn lặp lại phép xác định với phần dung dịch thử nhỏ để đưa lượng thủy ngân vào phạm vi đường chuẩn Tính kết Hàm lượng thủy ngân, X, tính microgam gam, theo cơng thức sau: X= m1 m2 m1 khối lượng thủy ngân có mẫu, tính micro gam; m2 1/4 khối lượng phần mẫu thử ban đầu, tính gam Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ra: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; - chi tiết thao tác không qui định tiêu chuẩn này, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng đến kết quả; - kết thử nghiệm thu B TIÊU CHUẨN VIỆT NAM (TCVN 4884 : 2005 ISO 4833 : 2003) VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT TRÊN ĐĨA THẠCH - KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC Ở 30 oC Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of microorganisms - Colony count technique at 30 oC Lời giới thiệu Do tính đa dạng thực phẩm thức ăn chăn ni nên phương pháp khơng thích hợp đến chi tiết cho sản phẩm cụ thể Trong trường hợp này, sử dụng phương pháp khác đặc trưng cho sản phẩm, hồn tồn lý kỹ thuật Tuy nhiên, cần cố gắng áp dụng phương pháp Khi tiêu chuẩn sốt xét tiếp cần phải tính đến thơng tin liên quan đến phạm vi mà phương pháp đếm đĩa phải tuân theo nguyên nhân gây sai lệch so với phương pháp trường hợp sản phẩm cụ thể Việc hài hòa phương pháp thử khơng thực vài nhóm sản phẩm tồn tiêu chuẩn quốc tế và/hoặc tiêu chuẩn quốc gia mà không phù hợp với tiêu chuẩn Trong trường hợp có sẵn tiêu chuẩn quốc tế cho sản phẩm cần thử nghiệm phải tuân theo tiêu chuẩn Hy vọng tiêu chuẩn sốt xét, chúng phải sửa đổi để phù hợp với tiêu chuẩn này, cho cuối sai lệch với phương pháp đếm đĩa lý kỹ thuật thừa nhận VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT TRÊN ĐĨA THẠCH - KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC Ở 30 oC Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of microorganisms - Colony count technique at 30 oC Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp định lượng vi sinh vật đĩa thạch cách đếm khuẩn lạc phát triển môi trường đặc sau ủ điều kiện hiếu khí 30 °C Tiêu chuẩn áp dụng cho sản phẩm dùng cho người thức ăn chăn nuôi Khả áp dụng tiêu chuẩn bị hạn chế kiểm tra thực phẩm thức ăn chăn nuôi lên men Để kiểm tra thực phẩm thức ăn chăn ni lên men mơi trường và/hoặc điều kiện ủ khác thích hợp Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi TCVN 6507 (tất phần) (ISO 6887), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử dung dịch huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật TCVN 6404 : 1998 (ISO 7218 : 1996), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Nguyên tắc chung kiểm tra vi sinh vật TCVN 6253 (ISO 8261), Sữa sản phẩm sữa Chuẩn bị mẫu thử dung dịch pha loãng để kiểm tra vi sinh ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Hướng dẫn chuẩn bị tạo môi trường cấy - Phần 1: Các hướng dẫn chung đảm bảo chất lượng cho việc chuẩn bị môi trường cấy phòng thử nghiệm) Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 vi sinh vật (micro-organisms) vi khuẩn, nấm men nấm mốc hình thành khuẩn lạc đếm được, sinh điều kiện qui định tiêu chuẩn Nguyên tắc 4.1 Chuẩn bị hai đĩa rót sử dụng mơi trường cấy qui định lượng mẫu thử qui định, sản phẩm ban đầu dạng lỏng, dùng lượng huyền phù ban đầu qui định sản phẩm dạng khác Chuẩn bị cặp đĩa rót khác, điều kiện, sử dụng dung dịch pha loãng thập phân mẫu thử huyền phù ban đầu 4.2 Ủ điều kiện hiếu khí đĩa 30 °C 72 h 4.3 Tính số lượng vi sinh vật mililit gam mẫu từ số lượng khuẩn lạc thu đĩa chọn (xem điều 10) Mơi trường cấy dịch pha lỗng Đối với thực hành phòng thử nghiệm, xem TCVN 6404 (ISO 7218) ISO/TS 11133-1 5.1 Dịch pha loãng Xem phần tương ứng TCVN 6507 (ISO 6887) 5.2 Môi trường thạch để đếm đĩa (PCA) 5.2.1 Thành phần Pepton từ casein 5,0 g Cao nấm men 2,5 g Glucoza, dạng khan (C6H12O6) 1,0 g Thạch1) g đến 18 g Nước 000 ml 1) Tùy thuộc vào sức đông thạch Khi kiểm tra sản phẩm sữa, cho 1,0 g bột sữa gầy vào lít mơi trường cấy Bột sữa gầy khơng chứa chất gây ức chế 5.2.2 Chuẩn bị 5.2.2.1 Chuẩn bị từ mơi trường hồn chỉnh khơ loại thương mại Theo dẫn nhà sản xuất thêm bột sữa gầy (xem 5.2.1), cần Chỉnh pH cho sau khử trùng 7,0 ± 0,2 25 °C, cần 5.2.2.2 Chuẩn bị từ thành phần khơ Hòa tan thành phần nước, theo thứ tự sau: cao nấm men, pepton từ casein, glucoza bột sữa gầy, cần Đun nóng nước để hoà tan nhanh Thêm thạch đun đến sôi, khuấy tan hết thạch Chỉnh pH cho sau khử trùng 7,0 ± 0,2 25 °C, cần 5.2.2.3 Phân phối, khử trùng bảo quản Phân phối môi trường vào ống nghiệm (6.8), với lượng từ 12 ml đến 15 ml vào ống bình chai (6.8) có dung tích khơng q 500 ml Khử trùng 15 phút nồi hấp áp lực 121°C Nếu mơi trường sử dụng làm nguội nồi cách thủy (6.5) đến nhiệt độ từ 44 °C đến 47 oC trước sử dụng Nếu không dùng bảo quản nơi tối nhiệt độ oC ± oC không tháng điều kiện không làm thay đổi thành phần đặc tính Ngay trước kiểm tra vi sinh vật, để tránh chậm trễ rót mơi trường, nên làm tan chảy hồn tồn mơi trường để nguội nồi cách thủy (6.5) đến nhiệt độ từ 44 oC đến 47 °C trước sử dụng Để kiểm tra nhiệt độ thạch, nên đặt nhiệt kế vào dung dịch kiểm soát thạch 15 g /I đựng vật chứa riêng biệt giống hệt sử dụng cho môi trường Nhiệt độ dung dịch kiểm sốt cần qua bước đun nóng làm nguội giống môi trường 5.2.3 Kiểm tra tính mơi trường cấy đảm bảo chất lượng Để kiểm tra tính mơi trường, xem ISO/TS 11133-1 5.3 Môi trường phủ (xem 9.2.7, cần) 5.3.1 Thành phần Thạch 1) 12 g đến 18 g Nước 000 ml 1) Tùy thuộc vào sức đông thạch 3.2 Chuẩn bị Cho thạch vào nước đun đến sôi, thường xuyên khuấy tan hết thạch, dùng nước khoảng 30 phút Chỉnh pH cho sau khử trùng 7,0 ± 0,2 25 °C, cần 5.3.3 Phân phối, khử trùng bảo quản Phân phối vào ống nghiệm (6.8) bình chai (6.8) có dung tích thích hợp, ống ml Khử trùng 15 phút nồi hấp áp lực 121°C Nếu môi trường sử dụng làm nguội nồi cách thủy (6.5) đến nhiệt độ từ 44 oC đến 47oC trước sử dụng Nếu khơng dùng ngay, bảo quản nơi tối nhiệt độ °C ± °C không tháng điều kiện khơng làm thay đổi thành phần đặc tính Ngay trước kiểm tra vi sinh vật, để tránh chậm trễ rót mơi trường, nên làm tan chảy hồn tồn mơi trường để nguội nồi cách thủy (6.5) đến nhiệt độ từ 44 °C đến 47 °C trước sử dụng Thiết bị dụng cụ thủy tinh Có thể dùng dụng cụ thủy tinh sử dụng lần thay cho dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiều lần chúng có đặc tính thích hợp Sử dụng thiết bị phòng thử nghiệm vi sinh thơng thường cụ thể là: 6.1 Thiết bị để khử trùng khô (tủ sấy) để khử trùng ướt (nồi hấp áp lực) Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 6.2 Tủ ấm, có khả hoạt động 30 °C ± °C 6.3 Đĩa Petri, thủy tinh chất dẻo có đường kính từ 90 mm đến 100 mm 6.4 Pipet, có dung tích danh định ml 6.5 Nồi cách thủy, hoạt động 44 °C đến 47 °C 6.6 Thiết bị đếm kh̉n lạc, ví dụ: sử dụng chiếu sáng với phông tối, gắn với kính lúp có độ phóng đại thích hợp khoảng 1,5 x đếm học điện tử số 6.7 pH mét, có độ xác ± 0,1 đơn vị pH 25 °C 6.8 Ống nghiệm, bình chai có dung tích thích hợp khơng lớn 500 ml Lấy mẫu Điều quan trọng phòng thử nghiệm nhận mẫu đại diện không bị hư hỏng biến đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Xem tiêu chuẩn riêng lấy mẫu cho sản phẩm tương ứng Nếu chưa có tiêu chuẩn riêng bên liên quan tự thỏa thuận với vấn đề Chuẩn bị mẫu thử Việc chuẩn bị mẫu thử theo phần tương ứng TCVN 6507 (ISO 6887) TCVN 6263 (ISO 8261) tiêu chuẩn riêng tương ứng với sản phẩm Nếu chưa có tiêu chuẩn riêng bên liên quan tự thoả thuận với vấn đề Cách tiến hành 9.1 Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng Xem phần tương ứng TCVN 6507 (ISO 6887) tiêu chuẩn riêng liên quan đến sản phẩm 9.2 Cấy ủ 9.2.1 Lấy hai đĩa Petri vô trùng (6.3) Dùng pipet vô trùng (6.4) cho vào đĩa ml mẫu thử sản phẩm chất lỏng ml huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác (độ pha loãng 10-1) 9.2.2 Lấy hai đĩa Petri vô trùng (6.3) khác Dùng pipet vô trùng (6.4) cho vào đĩa ml dịch pha loãng 10-1 (nếu sản phẩm chất lỏng) ml dung dịch pha loãng 10 -2 (nếu sản phẩm dạng khác) 9.2.3 Lặp lại trình tự với dịch pha loãng tiếp theo, sử dụng pipet vô trùng dung dịch pha lỗng thập phân, cần 9.2.4 Nếu thích hợp có thể, chọn bước pha lỗng tới hạn (ít hai dung dịch pha lỗng thập phân liên tiếp) để cấy đĩa Petri cho thu số đếm từ 15 khuẩn lạc đến 300 khuẩn lạc đĩa petri 9.2.5 Rót vào đĩa Petri khoảng từ 12 ml đến 15 ml môi trường thạch đếm đĩa (5.2) 44 °C đến 47 °C Thời gian từ chuẩn bị xong huyền phù ban đầu (hoặc dung dịch pha loãng 10-1 sản phẩm chất lỏng) đến rót mơi trường (5.2) vào đĩa không vượt 45 phút 9.2.6 Trộn cẩn thận dịch cấy với môi trường cách xoay đĩa Petri hỗn hợp đông đặc lại cách đặt đĩa Petri bề mặt nằm ngang, mát 9.2.7 Sau đơng đặc hồn tồn nghi ngờ sản phẩm cần kiểm tra có chứa vi sinh vật mà khuẩn lạc chúng mọc lan khắp bề mặt mơi trường, rót khoảng ml mơi trường phủ (5.3) 44 °C đến 47 °C lên bề mặt môi trường cấy mẫu Để cho đông đặc mô tả 9.2.8 Lật ngược đĩa cấy mẫu đặt vào tủ ấm (6.2) 30 °C ± °C 72 h ± h Không xếp chồng cao sáu đĩa Các chồng đĩa cần tách khỏi cách xa thành tủ 9.3 Đếm khuẩn lạc 9.3.1 Sau giai đoạn ủ qui định (9.2.8), đếm khuẩn lạc đĩa (10.1) sử dụng dụng cụ đếm khuẩn lạc (6.6), cần Kiểm tra đĩa ánh sáng dịu Điều quan trọng khuẩn lạc phải đếm tránh đếm nhầm với hạt khơng hòa tan chất kết tủa đĩa Kiểm tra cẩn thận khuẩn lạc nghi ngờ, cần nên dùng kính lúp có độ khuyếch đại lớn để phân biệt khuẩn lạc với tạp chất lạ 9.3.2 Các khuẩn lạc mọc lan rộng coi khuẩn lạc đơn lẻ Nếu hợp phần tư đĩa mọc dày lan rộng, đếm khuẩn lạc phần đĩa lại tính số tương ứng cho đĩa Nếu phần tư đĩa bị mọc dầy lan rộng loại bỏ đĩa khơng đếm 10 Biểu thị kết 10.1 Phương pháp tính Xem phần sửa đổi ISO 7218 : 1996 10.2 Độ chụm 10.2.1 Yêu cầu chung Các liệu độ chụm đánh giá đĩa chứa nhiều 15 khuẩn lạc 300 khuẩn lạc Dữ liệu độ chụm phụ thuộc vào liên kết hệ vi sinh vật chất mẫu Các liệu thu từ nghiên cứu cộng tác (xem [1], [2] [3]) có giá trị sữa nguyên liệu sữa trùng Chúng dùng làm số ước tính cần xác định số khuẩn lạc có sản phẩm khác 10.2.2 Độ lặp lại Chệnh lệch tuyệt đối kết hai phép thử độc lập đơn lẻ, thu sử dụng cùng, phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, tính theo log10 vi sinh vật có lít (tương ứng với 1,8 thang danh định số vi sinh vật lít) khơng lớn giới hạn lặp lại r = 0,25 CHÚ THÍCH: Giới hạn lặp lại thu từ nghiên cứu cộng tác sữa nguyên liệu sữa tiệt trùng (xem [1], [2] [3]) sử dụng cho sản phẩm 10.2.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, tính theo log 10 vi sinh vật có lít (tương ứng với 2,8 thang danh định số vi sinh vật lít) khơng lớn giới hạn tái lập R = 0,45 CHÚ THÍCH Giới hạn tái lập thu từ nghiên cứu cộng tác sữa nguyên liệu sữa tiệt trùng (xem [1], [2] [3]) sử dụng cho sản phẩm 10.3 Giải thích kết thử nghiệm Trong ví dụ xem xét đến số liệu độ chụm trung bình, mức xác suất 95 % phân tích mẫu Trong thực tế thường sử dụng trung bình vài mẫu Các số tính số vi sinh vật lít a) Các điều kiện lặp lại Kết thứ nhất: 105 = 100 000 Chênh lệch kết thứ kết thứ hai không lớn 0,25 log 10 đơn vị Kết thứ hai: log 104,75 = 56 000 log 105,25 = 178 000 Chênh lệch kết thứ thứ hai chấp nhận kết thứ hai không thấp 56 000 không cao 178 000 b) Các điều kiện tái lập Các kết thu phòng thử nghiệm thứ (trung bình phép xác định kép): 105 = 100 000 Chênh lệch kết thứ thứ hai thu phòng thử nghiệm thứ hai khơng lớn 0,45 log10 đơn vị: Các kết thứ hai: log 104,55 = 36 000 log 105,45 = 280 000 Chênh lệch kết thu phòng thử nghiệm thứ thứ hai chấp nhận phòng thử nghiệm thứ hai thu kết không thấp 36 000 không cao 280 000 Phụ lục A cho thấy cách tính cách sử dụng sai lệch tới hạn (CD) để giải thích kết 10.4 Giới hạn tin cậy Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải rõ a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết quả: e) kết thử nghiệm thu Phụ lục A (tham khảo) Cách sử dụng sai lệch tới hạn (CD) để giải thích kết Trong ví dụ xem xét đến liệu độ chụm trung bình, mức xác suất 95 % phân tích mẫu Trong thực tế thường sử dụng trung bình vài mẫu Các số tính số vi sinh vật lít a) Các điều kiện tái lập Các kết thu phòng thử nghiệm thứ (trung bình phép xác định kép): 105 = 100 000 Chênh lệch kết kết thu phòng thử nghiệm thứ hai (trung bình n phép xác định: ví dụ n = 2) chấp nhận khơng vượt q sai lệch tới hạn (CD), theo log10 đơn vị: r giới hạn lặp lại; R giới hạn tái lập Chênh lệch kết thu phòng thử nghiệm thứ thứ hai chấp nhận phòng thử nghiệm thứ hai thu kết không thấp 10 4,59 = 39 000 không cao 105,41 = 257 000 b) So sánh với giới hạn (thử phía) Giới hạn: 105 = 100 000 Chênh lệch giới hạn kết phòng thử nghiệm (trung bình n phép xác định, ví dụ n = 2) so sánh với giới hạn sai lệch tới hạn (CDL): Các kết thử nghiệm đến 105,24 = 174 000 không không phù hợp với giới hạn THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] PITON, C., GRAPPIN, R A Model for statistical evaluation of precision parameters of microbiological methods: Application to dry rehydratable film methods and IDG reference methods for enumeration of total aerobic mesophilic flora and coliforms in raw milk J AOAC, 74, 1991, pp 92-103 [2] SCOTTER, S., ALDRIDGE, M BACK, J., WOOD, R Validation of European Community methods for microbiological and chemical analysis of raw and heat-treated milk J Assoc Publ Analyst., 29, 1993, pp -32 [3] DAHMS S., WEISS H Estimation of precision values for microbiological reference methods: Standardized pour plate technique Milchwiss., 53, 1988, pp 555-559 ... có đinh lăng Xác định thông số trình trích ly dịch chiết Xây dựng quy trình sơ sản xuất trà thảo dược đinh lăng Các số liệu đề tài nghiên cứu làm tài liệu tham khảo cho nghiên cứu tương tự Từ. .. ảnh đinh lăng Theo dân gian, Đinh lăng có hai loại chính: đinh lăng nếp đinh lăng tẻ - Đinh lăng tẻ: Là loại to, vỏ thân xù xì, màu xanh nhạt, củ nhỏ, rễ cứng, vỏ bì mỏng suất thấp - Đinh lăng. .. phẩm trà thảo dược sử dụng rộng rãi nước ta, nhiều loại nhập với giá thành cao Nhận thấy lợi ích trà thảo dược tác dụng đinh lăng sức khỏe người, tiến hành nghiên cứu đề tài “Bước đầu nghiên cứu