Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của loài adenosma sp mọc ở kontum

LỜI CẢM ƠN Trong trình thực đề tài, nhận nhiều quan tâm bảo tận tình, giúp đỡ kiến thức, tinh thần sở vật chất thầy giáo, giáo, gia đình bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới: Ts Nguyễn Thị Bích Thu – Viện Dược liệu TSKH Nguyễn Minh Khởi – Viện Dược liệu Là người cô, người thầy định hướng, hướng dẫn, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn: Ts Đỗ Thị Hà – Phòng Hóa Thực vật – Viện Dược liệu hướng dẫn bảo nhiệt tình, ln góp ý giúp đỡ tơi, đưa ý kiến quý báu để hoàn thiện đề tài Các cán bộ, nhân viên phòng Hóa thực vật phòng Hóa phân tích tiêu chuẩn – Viện Dược liệu nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Các thầy giáo, giáo, cán kỹ thuật viên môn Dược liệu thầy cô giáo, cán bộ, nhân viên Trường Đại học Dược Hà nội tạo điều kiện tốt để tơi hồn thiện đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn vơ hạn tới gia đình bạn bè ln quan tâm, động viên, tạo điều kiện thuận lợi cho nhiều suốt thời gian vừa qua Xin chân thành cảm ơn Hà nội, ngày 27/09/2011 DS Nguyễn Thị Ngọc Thùy Style Definition: TOC 1: Font: Bold, Do not check spelling or grammar, Justified, Line spacing: Multiple 1.3 li, Tab stops: 6.1", Right,Leader: … MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại chi Adenosma R Br 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Adenosma R Br 1.3 Đặc điểm thực vật phân bố số loài chi Adenosma R.Br Việt Nam 1.3.1 Adenosma caeruleum R.Br Adenosma glutinosum (L.) Druce 1.3.2 Adenosma indiana (Lour.) Merr Adenosma capitatum Benth .5 1.3.3 Adenosma bracteosum Bonati 1.3.4 Adenosma annamensis Yam 1.3.5 Adenosma hirsuta (Miq.) Kurz 1.3.6 Adenosma javanica (Bl.) Kds 1.3.7 Adenosma microcephala Hook F 1.4 Một số kết nghiên cứu thành phần hóa học số lồi thuộc chi Adenosma R Br có Việt Nam 1.4.1 Adenosma caeruleum R.Br 1.4.2 Adenosma capitatum Benth 10 1.4.3 Adenosma bracteosum Bonati 11 1.5 Một số nghiên cứu tác dụng cơng dụng số lồi thuộc chi Adenosma R Br có Việt Nam 12 1.5.1 Adenosma caeruleum R.Br 12 1.5.2 Adenosma capitatum Benth 13 1.5.3 Adenosma bracteosum Bonati 14 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 17 2.2.1 Hóa chất 17 2.2.2 Thiết bị 17 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Nghiên cứu thực vật 18 2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 18 2.3.3 Thăm dò số tác dụng sinh học 20 2.3.3.1 Tác dụng ức chế tế bào ung thƣ 20 2.3.3.2 Tác dụng hoạt hóa eNOS AMPK 20 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 22 3.1 Nghiên cứu thực vật 22 3.1.1 Thẩm định tên khoa học 22 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu 22 3.1.2.1 Vi phẫu thân 22 3.1.2.2 Bột dƣợc liệu 22 3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 24 3.2.1 Đính tính sơ nhóm chất hữu 24 3.2.2 Định lƣợng tinh dầu dƣợc liệu 30 3.2.3 Phân tích thành phần tinh dầu 30 3.2.4 Định lƣợng polyphenol 30 3.2.5 Sơ xác định dấu vân tay hóa học dƣợc liệu 31 3.2.6 Phân lập nhận dạng số chất 34 3.2.6.1 Chiết tách phân lập số chất 34 3.2.6.3 Nhận dạng hợp chất phân lập đƣợc 36 3.3 Thăm dò số tác dụng sinh học 39 3.3.1 Tác dụng ức chế tế bào ung thƣ 39 3.3.2 Tác dụng hoạt hóa eNOS AMPK 42 CHƢƠNG BÀN LUẬN 43 4.1 Về thực vật 43 4.2 Về hóa học 43 4.3 Về tác dụng sinh học 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Formatted: Justified, Line spacing: Multiple 1.3 li Formatted: 1, Left, Line spacing: single, Ta stops: Not at 0.79" DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT A.: Adenosma AMPK: AMP-activated protein kinase CHCl3: Cloroform dd: Dung dịch DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer eNOS: Endothelial NO synthase EtOH: Ethanol EtOAc: Ethylacetat H2O: Nƣớc HUVEC: Human umbilical vein endothelial IR: Infrared refrence (Phổ hồng ngoại) MS: Mass spectrum (Phổ khối lƣợng) MeOH: Methanol n-BuOH: n-Buthanol NMR: Nuclear magnetic resonance spectrometry (Phổ cộng hƣởng từ Formatted: Justified hạt nhân) Pƣ: Phản ứng SKC: Sắc ký cột TT: Thuốc thử UV: Ulva violete (Tử ngoại) Proton nuclear magnetic resonance spectrometry (Phổ cộng hƣởng H-NMR: Formatted: Condensed by 0.2 pt từ proton) 13 C-NMR: Carbon (13) nuclear magnetic resonance spectrometry (Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon 13) Formatted: 1, Left, Line spacing: single, Ta stops: Not at 0.79" DANH MỤC BẢNG BIỂU Tên bảng STT Bảng 1.1 So sánh thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi Bảng 3.1 Kết định tính sơ nhóm chất hữu có lồi Adenosma hirsuta (Miq.) Kurz Bảng 3.2 Kết thử tác dụng tế bào ung thƣ loài Adenosma hirsuta (Miq.) Kurz dòng tế bào Trang 15 28 41 Formatted: 1, Left, Line spacing: single, Ta stops: Not at 0.79" DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình Hình 1.1 Sơ đồ cơng thức hóa học chất phân lập đƣợc từ A.caeruleum Hình 1.2 Sơ đồ cơng thức hóa học chất phân lập từ A capitatum Trang 11 Hình 3.1 Ảnh Adenosma hirsuta (Miq.) Kurz 23 Hình 3.2 Ảnh dƣợc liệu A.hirsuta 23 Hình 3.3 Ảnh vi phẫu thân lồi Adenosma hirsuta 23 Hình 3.4 Ảnh đặc điểm bột loài Adenosma hirsuta 23 Hình 3.5 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng pha thƣờng dịch chiết Hình 3.6 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng pha đảo dịch chiết Hình 3.7 Sơ đồ chiết phân lập chất từ Adenosma hirsuta 33 33 35 10 Hình 3.8 Cấu trúc hóa học F1 37 11 Hình 3.9 Cấu trúc hóa học F2 39 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc khả sống 12 sót dòng tế bào ung thƣ nồng độ cao chiết methanol A hirsuta 41 ĐẶT VẤN ĐỀ Formatted: 1, Indent: First line: 0" Formatted Chi Adenosma R Brown (gồm số loài thân thảo, thƣờng sống Formatted: Expanded by 0.2 pt năm) phân bố chủ yếu v ng nhiệt đới châu Á với tổng số khoảng 15 loài nƣớc ta, chi Adenosma có khoảng 78 lồi phân bố rải rác số nơi Trong số có lồi đƣợc tiến hành nghiên cứu nhiều: Adenosma Formatted: Font: Italic, Expanded by 0.2 pt caeruleum R Br., Adenosma capitatum Benth Adenosma bracteosum Formatted: Expanded by 0.2 pt Bonati Một số loài thuộc chi đƣợc sử dụng dân gian để chữa Formatted: Font: Not Italic, Expanded by pt bệnh vàng da, bệnh đƣờng mật, bệnh phụ nữ sau sinh đẻ nhƣ Formatted: Expanded by 0.2 pt Formatted: Font: Italic, Expanded by 0.2 pt Nhân Nhân trần (Adenosma caeruleum R.Br.) Bồ Bồ bồ (Adenosma Formatted: Expanded by 0.2 pt capitatum Benth.) Các nghiên cứu thành phần hóa học từ trƣớc đến Formatted: Expanded by 0.2 pt Formatted: Font: Italic, Expanded by 0.2 pt tập trung hai loài A caeruleum A capitatum Nghiên cứu thành phần hóa học lồi A caeruleum cho thấy có mặt monoterpen peroxid, betulinic acid, arbutin, aucubin,  -sitosterol, stigmasterol, and campesterol Gần đây, nhóm tác giả ngƣời Ý Việt nam cơng bố nhóm chất phân lập đƣợc từ nhân trần A caeruleum, bao gồm: phenylpropanoid (crenatosid, verbascosid, cistanosid F, campneosid I, and campneosid II), flavonoid glycosid (apigenin 7-O-β-D- glucuronopyranosid and apigenin 7-O-β-D-glucopyranosid), iridoid (adenosmosid) Năm 1997, tác giả thuộc Viện hóa phân lập đƣợc số flavonoid từ loài A captitatum, chúng bao gồm quercetin, artemetin, chrysoplenetin Tác dụng dƣợc lý loài thuộc chi Adenosma R Br chƣa thấy nghiên cứu nhiều, trừ số nghiên cứu tác dụng dƣợc lý dịch chiết A caeruleum đƣợc Lê T ng Châu cộng công bố năm 1975 tác dụng thông mật, tăng tiết mật, chống viêm, kháng khuẩn Những Formatted: Font: Italic, Expanded by 0.2 pt Formatted: Expanded by 0.2 pt Formatted: Font: Italic, Expanded by 0.2 pt Formatted: Expanded by 0.2 pt năm gần Viện dƣợc liệu có sản phẩm Abivina với có mặt Nhân trần, Bồ bồ công thức d ng làm thuốc chống viêm gan Loài Adenosma sp thu hái Kontum thuộc họ Hoa mõm sói chó Formatted: Font: Not Italic (Scrophulariaceae) loài đƣợc phát với số lƣợng lớn, mọc hoang dã Kontum Dựa đặc điểm nhận dạng hình thái thực vật học, lồi có số đặc điểm khác với lồi đƣợc đề cập tài liệu dƣợc liệu Việt Nam Theo tìm hiểu nhóm tác giả cho thấy chƣa có cơng trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi Adenosma sp thu hái Kontum Do đƣợc tiến hành nghiên cứu góp phần bổ sung thêm chi Adenosma R Br thành ngun liệu làm thuốc Chính vây, chúng tơi Formatted: Font: Italic Formatted: Font: Italic tiến hành thực đề tài: “ Góp phần nNghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học loài Adenosma sp mọc Kontum” với mục tiêu chính: - Xác định tên khoa học loài Adenosma sp mọc Kontumđặc điểm vi học - Nghiên cứu thành phần hóa học lồi - Nghiên cứuBƣớc đầu thăm dò số Adenosma sp tác dụng sinh học loài Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0" CHƢƠNG 1.I: TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại chi Adenosma R Br 1.1 Theo hệ thống phân loại thực vật Jakhtajan, chi Adenosma R Br Có vị trí Formatted: 1, Indent: First line: 0" Formatted: Font: Italic Formatted: Font: Not Italic Formatted: Font: Italic Formatted: 2, Left, Line spacing: single, No bullets or numbering, Tab stops: Not at 2.49 phân loại nhƣ sau [1], [2]: Giới Thực vật (Plantae) Phân giới Formatted: English (U.S.) Thực vật bậc cao (Kormobionta) Ngọc lan (Magnoliophyta) Ngành Lớp Ngọc lan (Magnoliophyta) Phân lớp Bộ Bạc hà (Lamiidae) Hoa mõm chó (Scrophulariales) Họ Chi Hoa mõm chó (Scrophulariaceae) Adenosma 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Adenosma R Br Formatted: 2, Left, Line spacing: single, Ta stops: Not at 2.49" PHỤ LỤC PHỤ LỤC KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ GC/MS CỦA LOÀI A.hirsuta PHỤ LỤC SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ GC/MS CỦA LỒI A.capitatum PHỤ LỤC PHỔ CỦA HỢP CHẤT F1 PHỤ LỤC PHỔ CỦA HỢP CHẤT F2 49 PHỤ LỤC KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC 49 49 PHỤ LỤC SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ GC/MS CỦA LOÀI A.hirsuta 49 49 PHỤ LỤC SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ CỦA LỒI A capitatum 49 49 PHỤ LỤC PHỔ CỦA HỢP CHẤT F1 49 49 49 49 PHỤ LỤC PHỔ CỦA HỢP CHẤT F2 49 Formatted: Left: 0.59", Right: 0.59", Top: 0.98", Bottom: 0.39", Width: 11.69", Height: 8.27" 50 Formatted: Normal, Centered, Space Before: pt, After: pt, No bullets or numbering, Tab stops: 0.79", Left 50 - 50 ... Góp phần nNghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học loài Adenosma sp mọc Kontum với mục tiêu chính: - Xác định tên khoa học loài Adenosma sp mọc Kontum ặc điểm vi học - Nghiên cứu thành. .. bracteosum) Bồ Bồ bồ (Adenosma capitatum) có nghiên cứu thành phần hóa học, lồi lại chƣa tìm thấy tài liệu cơng bố thành phần hóa học Nhƣ vậy, tTừ nghiên cứu nƣớc thành phần hóa học lồi cho thấy hợp... vật học, lồi có số đặc điểm khác với loài đƣợc đề cập tài liệu dƣợc liệu Việt Nam Theo tìm hiểu nhóm tác giả cho thấy chƣa có cơng trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học loài