Nghiên cứu thành phần hoá học và một số tác dụng sinh học của cây sói rừng ( sarcandra glabra ( thunb ) nakai họ hoa sói chloranthaceae)

B ộ YTẾ Bộ GIÁO DỰC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI • • • • đ ỗ THỊ OANH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ MỘT Số TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA • • • CÂY SĨI RỪNG {Sarcandra glabra (Thunb.) Nakai Họ Hoa sói - Chloranthaceae) LUẬN VĂN THẠC sĩ • • CHUYÊN NGÀNH: MÃ SỐ Dược HỌC • • Dược LIỆU - Dược cổ TRUYỀN : 60.73.10 Người hướng dẫn: GS.TS Phạm Thanh Kỳ Th.s Nguyễn Thị Bích Hằng TRƯỜNG ĐH DƯỢC HÀ NỘỈ T H Ư VIỆN! Ngày^a tháng “năm 20.JẢ SốĐ KCk HÀ NỘI 2010 r d b l S Lời cảm ơn Sau thời gian nô lực nghiên cứu thực đề tài, thời điếm hoàn thành luận văn lúc xỉn phép bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến người hướng dẫn, dìu dắt giúp đỡ tơi suổt thời gian qua Trước hết, với lòng kỉnh trọng biết ơn sâu sắc, tói xỉn gửi lời cảm on chân thành tới Nhà Giáo Nhân Dân GS.TS PHẠM THANH KỲ người thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình giúp đỡ tơi suốt trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn Th.s Nguyễn Thị Bích Hằng - Phòng Quản lý khoa học tận tĩnh hướng dẫn, giúp đỡ động viên ừ-ong suốt trĩnh làm luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại học trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ môn Dược liệu, Bộ môn Dược cồ truyền dạy dỗ, tạo điều kiện cho học tập, nghiên cứu hoàn thành luận vãn Tôi xin cảm ơn BGĐ Bệnh viện YH CT T W tạo điều kiện cho tiếp tục học tập hoàn thành luận văn Và đặc biệt xin gửi lời cảm ơn đến TS.Nguyễn Thị Minh Tăm, Nguyên Trưởng Khoa Dược - B V YH C T T W động viên giúp đỡ học tập công tác Tôi xỉn cảm ơn TS Phan Văn Kiệm Viện hóa học hợp chất thiên nhiên, xỉn cảm ơn PGS.TS Nguyễn Trọng Thông, Th.s Phạm Thị Vân Anh - Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y H Nội giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Cuối tơi xin bày tỏ ng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ kỉnh yêu, người thân gia đình, bạn bè bên cạnh động viên chăm lo cho sổng nghiệp Xỉn chân thành cảm ơn! Hà nôi, thảng năm 2010 ĐỖ THỊ OANH DANH MỤC CÁC CHỮ VIÉT TẮT ALT Alanin amino transferase AST Aspartat amino transferase 13C N M R Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 'H N M R Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy 2D-NMR Phổ cộng hưỏmg từ hạt nhân hai chiều Two-Dimensional NMR CCI4 Tetra carbon clorua DC Dịch chiết DMSO Dimethylsulfoxide DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer ESI-MS Electrospray Ionisation-Mass Spectrometry EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence IR Phổ hồng ngoại Infrared Spectroscopy Me Nhóm metyl MS Pho khoi lượng (Mass Spectroscopy) MDA Malondialdehyd NC Nghiên cứu NOESY Nuclear Overhauser Enhancement Spectroscopy PAR Paracetamol SG Sarcandra glabra SKC Sắc ký cột Column Chromatography SR Sói rừng TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TPCN Thực phẩm chức TT Thuốc thử (ppm) Độ dịch chuyển hóa học (parts per milion) ttc Thể trọng chuột M ỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐÈ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN B ố CỦA CÂY SÓI RỪNG 1.1.1.Đặc điểm thực vật Sói rừng (Sarcandra glabra ( Thunb.) Nakai 1.1.2.Sự phân bố Sói rừng .2 1.2.THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÂY SÓI RỪ N G 1.3.TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CẦY SÓI RỪNG 1.4.CÔNG D Ụ N G 1.5.VÀI NÉT VÈ CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CẨU TRÚC HỢP CHẤT HỮU C .9 1.5.1 Phổ hồng ngoại (Infrared spectroscopy) 1.5.2 Phổ khối lượng ( Mass Spectroscopy) .10 1.5.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, N M R ) 11 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PH Á P 15 2.1 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN c ứ u .15 2.2 ĐỘNG VẬT THÍ NGHIỆM 15 2.3 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ DÙNG TRONG NGHIÊN c ứ u 16 2.3.1 Hóa chất: .16 2.3.2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu .16 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C Ú tJ 16 2.4.1 Nghiên cứu thành phần hóa h ọ c 16 2.4.2 Nghiên cứu tác dụng sinh h ọ c 17 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CÚtJ 19 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN cửu VỀ THÀNH PHẦN HĨA HỌC 19 3.1.1 Định tính nhóm chất phản ứng hóa học 19 3.1.2 Chiết xuất chất dược liệu Sói Rừng 26 3.1.3 Phân lập hợp chất 27 3.1.4 Nhận dạng hợp chất phân lập 29 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN cứu VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC .39 3.2.1 Kết thử độc tính cấp 39 3.2.2 Tác dụng chống viêm cấp 41 3.2.3 Tác dụng bảo vệ gan 42 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 56 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ket định tính nhóm chất dược liệu Sói Rừng Bảng 3.2 Kết định lượng cắn phân đoạn Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR SR Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR SRl Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR SR2 Bảng 3.6 Số chuột chết lô nghiên cứu Bảng 3.7 Tác dụng cao lỏng Sói rừng lên thể tích dịch rỉ viêm Bảng 3.8 Tác dụng cao lỏng Sói rừng lên hàm lưọng protein dịch rỉ viêm Bảng 3.9 Tác dụng cao lỏng Sói rừng lên số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm Bảng 3.10 Anh hưởng cao lỏng Sói rừng lên trọng lượng gan chuột bị gây độc paracetamol Bảng 3.11 Ảnh hưởng cao lỏng Sói rừng lên hoạt độ AST huyết chuột bị gây độc paracetamol Bảng 3.12 Ảnh hưởng cao lỏng Sói rừng lên hoạt độ ALT huyết bị gây độc paracetamol Bảng 3.13 Anh hưởng cao lỏng Sói rừng lên hàm lưọng MDA gan chuột nhắt bị gây độc paracetamol DANH MỤC HÌNH • Hình 1.1 Flamasol Hình 1.2 Hồng thấp linh Hình 1.3 Tiêu khiết Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất phân lập chất từ Sói rừng Hình 3.1 Sơ đồ phân lập hợp chất từ Sói rừng Hình 3.2 Cấu trúc hóa học SR (1) 8Ị3,9a-dihydroxylindan-4(5),7(l 1)dien-8 a , -olide (la) Hình 3.3 Các tương tác HMBC SR Hình 3.4 Cấu hình khơng gian tương tác NOESY SR Hình 3.5 Cấu trúc hóa học SRl (2), lị3,4|3,7p,l 1-tetrahydroxyeudesmane (2a) (-)-7aH-eudesm ane-l p ,4 a,l 1-triol (2b) Hình 3.6 Các tương tác HMBC SRl Hình 3.7 Cấu hình khơng gian tương tác NOESY SRl Hình 3.8 Cấu trúc hóa học SR2 sarcaglaboside G Hình 3.9 Các tương tác HMBC SR2 ĐẶT VẤN ĐÈ Việt nam quốc gia nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, có thảm thực vật phong phú đa dạng có nguồn tài nguyên thuốc dồi Nhân dân ta tích luỹ nhiều kinh nghiệm, tri thức quý báu phòng chữa bệnh cỏ Sói rừng mọc hoang vùng núi đất, bìa rừng ven đồi ẩm nhiều nơi như: Lạng sơn, Bắc thái, Hồ bình Cây trồng để lấy hoa ướp trà Hiện Trung quốc Sói rừng dùng chữa: ung thư tuỵ, dày, trực tràng, gan, cuống họng dân gian dùng rễ ngâm rượu uống chữa ngực đau tức, giã đắp chữa rắn cắn, sắc uống trị ho lao .[7],[8],[9],[14],[15] Tuy Việt nam công trình nghiên cứu Sói rừng chưa đầy đủ, luận văn ứiực đề tài: “Nghiên cứu thành phần hoá học số tác dụng sinh học Sói rừng Sarcandra glabra ( Thunb.) Nakai., họ Hoa sói - Chloranthaceae.” với mục tiêu sau: thành phần hoá học: - Định tính nhóm chất hữu có - Chiết xuất phân lập sổ chất - N hận dạng chất p h â n lập tác dụng sinh học: - Thử độc tính cấp - Thử tác dụng chống viêm cấp tác dụng bảo vệ gan CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỤC VẬT VÀ PHÂN BÓ CỦA CÂY SÓI RỪNG 1.1.1 Đặc điểm thực vật Sói rừng {Sarcandra glabra ( Thunb.) Nakai Cây nhỏ cao - 2m, nhánh tròn, khơng lơng Lá mọc đối, có phiến dài xoan bầu dục, dài - 18cm, rộng - 7cm, đầu nhọn, mép có nhọn, gân phụ cặp, cuống ngắn - mm Bơng kép, nhánh, nhánh ngắn, hoa nhỏ màu trắng, khơng cuống, nhị l.[8][9] Quả nhỏ, chín có màu đỏ gạch, mọng, gần tròn Hoa tháng - , tháng X 4mm.[10] - 9.[10][14][17] 1.1.2 Sự phân bố Sói rừng Theo Võ Văn Chi [8 ] Sói rừng phân bố nhiều nước: Trung Quốc, Triều Tiên, Nhật Bản, Ấn Độ, Việt Nam Malaixia Cây mọc hoang trồng để ưóp trà làm thuốc Việt Nam, mọc hoang vùng núi đất, bìa rừng ven đồi ẩm nhiều nơi: Lạng sơn, Thái Ngun, Hồ Bình, Hà Tây đến Kontum, Lâm Đồng Thu hái toàn vào mùa hạ, thu, dùng tươi hay phơi khô râm Rễ thu hái quanh năm, rửa cắt đoạn, phơi râm, dùng tươi 1.2 THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÂY SĨI RỪNG Theo Võ Văn Chi [8 ] Sói rừng có: tinh dầu, este, đường, phenol, flavon, cyanogen N) N3 í-» I-* M H-* K* jMhJỉ-*» ‘ O o o o o o o o o o ^ i> \ D J u > > v £ > io v o v o jc D o o o o a o o < x ) c » o o c o c x > 'J - « j '^ i - « j * j'0 'J - - j* o > J ỡ (- o U3 CO ôJ > U1 ằCJ^0MOU?CD 0^U1^L0^ớ ^- - O^>00- J Ui ^)I ^O^Í >00• J0^C^Ui U>^>^-•O\ £) CD•^I Ơ^U’ ■C>■U>^)^ ‘ OV£^ N) M ho N) a\ a\ CTt ơ\ ỠÌ ỮÍ Ư1 Ữ1 Í-* u> 00 cri CO cr, VD Zj ơ\ CO a\ o 0J CjJ Uỉ •0 00 00 UI ưl 00 >c^ >1^ o N> IXI ro M N) M NJ ISi ÍO N> N> M K> to N) N) K) N) to N> fo Ní to ro NJ NJ Ư1 Ul Ữ1 ỮI Cj (jJ OJ N) ro ro ro Í-* H* M »-■ M -o Ỡ\ a\ ơ\ ơ> ơ\ ơ> ơ> ơ\ >-* ro \D U!k o CO -o m a\ Ư1 >-* cn cn Ul cn ũ> Cj ỉo o CO (-• cn ro cn 00 CP NJ u» o O' Ln ữí õ o o ƯÍ ỠÌ h-» K) tri o U) o \£>\D >£k o ữ> co ữ? u» ■o Õj 00 JS u> U) vo y£> o ơ\ M »-• CD o cn Ln M NJ NJ •Ck 00 CD ơ^ -J' CO ơ\ K) N) N> tv) Ư1 Ư1 cn tn ữ> cn Ữ1 Ữ1 UI co Ư1 0!» to N) cCk K-* 00 o> ũ> o m N) M N) M N> NJ M NJ N> fO K> N:' Ư1 Lõ ư» ŨJ M o 00 cn ũ> o \D u NJ o o 00 O) 0 VO M 0^ Ư1 ưi Ư1 ư* Ư1 Ư1 Ư1 ơ> cr» m m «o «o *o Zj co \D 0 H* H-* h-* ỮI OD 03 CO ữ> ib o o o 1-** rõ UI {.ư o ro 00 NJ •u cn oo ro M o LO 00 N) •ỉk KDo\ o ick Ữ1 ơ\ M k) Oữ ơ> k) OJ 05 õi U3 ù> cr» ơ> vo ro N) vo H* tn ís) •o u> LU ơ> fO N) CJ h-* J!k o Ư1 ũ) ư» 0» ư> LO •u -J •c^k Ln Ư1 u» •J ro •u «o fo NÌ N) CJ Ck tỉ^ ro ro ơ> •sj o -J J M w u> ơ> co u> ơ\ 00 Ll U) M NJ M KJ ư» tn UI N) 1^ M M ư5 00 \ U3 00 \ 00 ^ ^ớ) -J -ôJ co 09 co o fsj k> Ữ1 U) Xk tn tvj a> >Ck N) N3 fO N) UI Ư1 Xw o ưa U3 N.) I-* KO 00 Ư1 UI ro 00 ^1 CO o? CO CD ư> ưí VÊJ CJ o o m o co a> 03 ôJ o> \ cn 0J Ln o co ) UlcyớôJoo O M U ) ^ J ^ J ^ ( J ' U ^ c n ^ U J J ^ > c ^ wo ^ »- ^ J s ■coMơ^ ư^ ^oc^ oư>ơ^ 4^^ £>» - *• - J ư^ư^ Mơ^ ( J J ưl ơ^ i »cbooCJ Omco4 s »ư^ M^ p• J U1Mơ^ o^M- ‘ ^IJ^ J^•-Jl.-*^D»X>U>C0V00J■^C0a0OK‘ Mơ^C0(^^JMJk^i5^-iM0JLJ•OU^U1U^lXi^DCDƯ'U^Ơ^MO'XlMO*fi•00(^M^ O '3 0 o o o o o c > o u > o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o N) o o C O o 173.016 o 151.705 150.796 itk o 123.172 2 94S ro o 104.592 o o I s 79.728 78.140 77.944 75.325 73.194 71.792 67.198 62.874 49.554 49.385 49.212 49.043 48.874 48.701 48.532 42.127 30.156 '’ 79 - 2?! 294 22.349 22.045 12.633 8.398 C O o o M o Si t- w s: t, mw wd w *0t; >5 z n a in 'H 'TJ ■Z n ^ o G TJ N o i- Mw^ o o N o ^ n i N>UI N) a fv>'O a to wn ơ> fO0> o ỜÍ1 s d>rr i p 59 w Hạ ^ o n w h - H - c n w s Q O M S w M O o c i a s K- i KJ ^ 1-* ox rc-o w i Ỡ ti n I o o COo o h- o \o U) o (^ o v c o o oovaoow - i-> Uì O' z mn ■zo rt> o o ac u> _ o h-t^-ọo^ OOvOOOOOi* ooovoO O V O O O i k \ OMCOODU^ Mrr ^ )->'g ơạ M-0» »-• Ị ã cn*D < Í-* o n N )(i c ừ» • w oi o o « « o o - OOVOCDLJA tnocjuJOOt-*f->3 OOCDOO^OONJtJO^I^(S)ơ»D i I—iO »-*rr Vi o 33 n Q D I p M w n Ỡ S R -M e O D -C l3 C P D CD o C\J ^ ^ r- r-t o> m (SJ m CO r - r ' r~- r~ rr CVJ ƠI ỡi r—t r* rn rH r* r~ 00 cr» f—Ỉ r> 00 r~ og Current Data Parair.eters NAME 11SR2 EXPNO PROCNO F2 - Acquisit ion Faramet20100318 Date_ 11.17 Time av500 INSTRUM Multinucl PROBHD mm zgpg30 PULPROG 65536 TD MeOD SOLVENT 256 NS DS 31446.541 I SWH 0.479836 I FIDRES 1.0420883 : AQ 8192 RG 15.900 ' DW 6.00 » DE 304.4 : TE 2.00000000 : D1 0.03000000 : dll 1.09999998 ; DELTA 0.00000000 ; MCRESt 0.01500000 : MCWRK « * » = = « » CHANNEL fl =“ =* HUCl 13C PI 10.50 PLl SFOl 125.7716224 I CPDPKG2 NUC2 p c p d :» PL2 PL12 PL13 SF02 I i 125 120 110 105 100 95 90 85 80 75 70 IH 88.00 • -3.00 14.68 • 22.00 500.1320005 F2 - Processing paramete 32768 SI 125.7576104 I SF EM WDW SSB 0 LB GB w Ww*w 115 CHANNEL f2 »«=*= waltzie ppm S R -M eO D -C C P D o 'ÍP ■«3' ƯÌ cr» n o o n eg Current Data Parameters NAME 11SR2 EXPNO PROCNO (N1 Cv] Csi CN F2 - Acqu isition Parameti 20100310 Date_ 11.17 Time avSOO INSTRUM mm Multinucl PROBHD zgpg30 PULPRO