TUYỂN NON DÕNG VÔ TÍNH CAO SU (Hevea brasiliensis Muell. Arg.) KHÁNG BỆNH RỤNG LÁ CORYNESPORA (Corynespora Leaf Fall Disease)

Cây cao su (Hevea brasiliensis Muell. Arg.) là loại cây công nghiệp dài ngày có giá trị kinh tế cao, sản phẩm chính từ chúng là mủ. Mủ cao su đứng thứ 3 trong các mặt hàng xuất khẩu của nước ta sau lúa và cà phê, đóng góp không nhỏ vào nền kinh tế quốc gia. Cũng như nhiều loại cây trồng khác, cây cao su bị nhiều loại mầm bệnh tấn công, một trong những loại bệnh hại trên cây cao su được quan tâm là bệnh rụng lá Corynespora (CLFD) do nấm Corynespora cassiicola (Berk. and Curt.) Wei. gây ra. Bệnh xuất hiện đầu tiên trên cây cao su thực sinh tại Sierra Leone (Châu Phi) năm 1949, nhưng đến năm 1985 mới bùng phát thành đại dịch. Cho đến nay bệnh càng trở nên nghiêm trọng cả về mức độ, phạm vi gây bệnh và số lượng các dòng vô tính (dvt) cao su cao sản nhiễm bệnh ngàng càng tăng. Tuy nhiên, khi xây dựng chiến lược quản lý CLFD thì lại gặp những khó khăn do nấm C. cassiicola có khả năng gây bệnh quanh năm trên mọi tuổi lá và mọi giai đoạn sinh trưởng của cây; ngoài ra, nó còn gây bệnh trên cả cuống lá và chồi. Tác hại của bệnh rất lớn, cây thực sinh trong giai đoạn vườn ươm bị nhiễm bệnh làm cây chậm phát triển và không đạt được đường kính gốc ghép theo đúng thời điểm (Jacob, 2006). Trên vườn khai thác, trường hợp bệnh nghiêm trọng có thể làm cho cây bị chết và giảm sản lượng mủ từ 20 – 25%. (Nguồn: http://www.irrdb.com/IRRDB/Annual Report/Report2000.htm#Corynespora). Ở nước ta, CLFD được ghi nhận vào năm 1999, Cho đến nay bệnh chưa bùng phát thành đại dịch nhưng mức độ và phạm vi tác hại của bệnh đã gia tăng đáng kể. Nếu không có biện pháp quản lý và ngăn chặn kịp thời thì bệnh có thể bùng phát thành đại dịch sẽ gây thiệt lớn về kinh tế.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN NON DÕNG VƠ TÍNH CAO SU (Hevea brasiliensis Muell Arg.) KHÁNG BỆNH RỤNG LÁ CORYNESPORA (Corynespora Leaf Fall Disease) Ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: NGUYỄN NGỌC THANH TRANG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN NON DÕNG VƠ TÍNH CAO SU (Hevea brasiliensis Muell Arg.) KHÁNG BỆNH RỤNG LÁ CORYNESPORA (Corynespora Leaf Fall Disease) Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS TRẦN VĂN CẢNH NGUYỄN NGỌC THANH TRANG ThS PHAN THÀNH DŨNG TS PHAN PHƢỚC HIỀN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn: Ban Giám Hiệu trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ mơn Cơng Nghệ Sinh Học, tất Quý Thầy Cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học trường TS Trần Văn Cảnh, ThS Phan Thành Dũng TS Phan Phước Hiền hết lòng hướng dẫn, giúp đỡ suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam Ban Giám đốc Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam KS Vũ Thị Quỳnh Chi, KS Nguyễn Ngọc Mai ThS Nguyễn Thị Kim Linh giúp đỡ thời gian làm khóa luận tốt nghiệp Các cơ, chú, anh, chị Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật – Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian thực tập tốt nghiệp Các bạn bè thân yêu lớp DH03SH chia sẻ vui buồn thời gian học hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ thời gian thực tập Con xin cảm ơn bố mẹ sinh thành, nuôi dưỡng giáo dục Bố mẹ anh chị chỗ dựa vững tinh thần cho vượt qua khó khăn Tp Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng 08 năm 2007 NGUYỄN NGỌC THANH TRANG iii TÓM TẮT NGUYỄN NGỌC THANH TRANG, Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh “TUYỂN NON DÕNG VƠ TÍNH CAO SU (Hevea brasiliensis Muell Arg.) KHÁNG BỆNH RỤNG LÁ CORYNESPORA (Corynespora Leaf Fall Disease)” Thực từ 03/03/2007 đến 30/07/2007 Bộ mơn Bảo Vệ Thực Vật, Phịng Thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học, Phịng Thí nghiệm Trung Tâm Cơng Nghệ Cao Su – VNCCSVN Giáo viên hướng dẫn: TS Trần Văn Cảnh, ThS Phan Thành Dũng TS Phan Phƣớc Hiền Đối tượng nghiên cứu: Mẫu cao su (10 – 12 ngày tuổi) số dvt bị nhiễm CLFD mẫu hoàn toàn bệnh Nội dung nghiên cứu: Đánh giá tính kháng CLFD mẫu nguyên 60 dvt cao su cách lây bệnh nhân tạo; Khảo sát mối quan hệ hoạt tính peroxidase tính kháng CFLD số dvt cao su; Khảo sát mối quan hệ mật độ khí khổng tính mẫn cảm CLFD số dvt cao su Kết đạt được: Đánh giá tính kháng: + Là phương pháp tin cậy + 100% dvt nhiễm bệnh Corynespora mức độ mẫn cảm khác Trong đó, 15/60 dvt nhiễm nặng, 12/60 dvt nhiễm nặng, 22/60 dvt nhiễm trung bình 11/60 dvt nhiễm nhẹ Khảo sát hoạt tính POD: Dvt khác có hoạt tính POD khác nhau; Trên dvt, hoạt tính POD mẫu đối chứng thấp mẫu bệnh; Khơng có mối tương quan tuyến tính hoạt tính POD tính mẫn cảm với CLFD dvt  Khảo sát mật độ khí khổng: Dvt khác có số lượng khí khổng khác nhau; Dvt cao su có mật độ khí khổng nhiều dễ bị nhiễm bệnh iv SUMMARY NGUYEN NGOC THANH TRANG, Nong Lam University “SCREENING RUBBER CLONES (Hevea brasiliensis Muell Arg.) RESISTANT TO CORYNESPORA LEAF FALL DISEASE” The research was carried out from 03/03/2007 to 30/07/2007 at the laboratoy of Crop Protection Division, Molecular biology laboratory, laboratory of Experiment’s Rubber Technology Center – Rubber Research Institute of Vietnam (RRIV) Supervisors: PhD Tran Van Canh, Msc Phan Thanh Dung and PhD Phan Phuoc Hien Materials and Methods: + Corynespora disease rubber leaflets (10 – 12 days old) used for estimation of POD activity + Free – diseased leaflets (10 – 12 days old) used for artificial inoculation with Corynespora cassiicola and estimation of the number of stomas + 60 rubber clones were screened for resistance to Corynespora leaf fall disease using detached leaflets technique and droplets of spore suspension Results: + Screening rubber clones resistant to CLFD using detached leaflets technique is a reliable method + 100% clones investigated were infected to CLFD at various susceptible levels Among 60 clones, 15 clones are very severely infected; 12 clones are severely infected; 22 clones are moderately infected and 11 clones are lightly infected + POD activities and the number of stoma are different from various clones Generally, the more susceptible clones are, the more the number of stoma they have The more POD activities the clones have, the less they are susceptible to the disease But there is no linear correllation found between POD activity or the number of stoma and the disease severity v MỤC LỤC TÊN MỤC TRANG LỜI CẢM ƠN iii TÓM TẮT iv SUMMARY v MỤC LỤC vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT x DANH SÁCH BẢNG xi DANH SÁCH HÌNH xii DANH SÁCH BIỂU ĐỒ xiii Chƣơng 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 1.3 Giới hạn đề tài Chƣơng 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược cao su 2.1.1 Cây cao su tầm quan trọng 2.1.2 Tình hình bệnh hại cao su 2.2 Sơ lược nấm C cassiicola 2.2.1 Phân loại học 2.2.2 Đặc điểm hình thái 2.2.3 Đặc điểm sinh lý 2.2.4 Khả tồn 2.2.5 Khả phát tán 2.2.6 Con đường xâm nhập, phạm vi phân bố, phổ kí chủ khả gây bệnh nấm C cassiicola vi 2.3 Giới thiệu bệnh rụng Corynespora cao su 2.3.1 Lịch sử phát 2.3.2 Triệu chứng bệnh Corynespora cao su 10 2.3.2.1 Trên vườn ươm 10 2.3.2.2 Trên vườn khai thác 11 2.3.3 Khả hình thành nòi 12 2.3.4 Nghiên cứu nước phương pháp tuyển non dvt 13 2.4 Sơ lược enzyme 13 2.4.1 Định nghĩa 13 2.4.2 Tính đặc hiệu 13 2.4.3 Cơ chế tác động 14 2.4.4 Các nhân tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme 14 2.4.5 Một số phương pháp xác định hoạt tính enzyme 14 2.4.6 Sơ lược enzyme liên quan đến tính kháng bệnh thực vật 16 2.4.7 Một số nghiên cứu enzyme phòng vệ cao su 17 2.4.8 Peroxidase 17 2.4.8.1 Sơ lược peroxidase 17 2.4.8.2 Vai trò peroxidase cao su 18 2.5 Sơ lược khí khổng 18 2.5.1 Cấu tạo 18 2.5.2 Sự phân bố 19 2.5.3 Vai trò khí khổng thực vật 20 2.5.4 Chu kỳ đóng mở ngày đêm khí khổng 20 Chƣơng 3: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 21 3.1 Thời gian địa điểm tiến hành 21 3.1.1 Thời gian 21 3.1.2 Địa điểm 21 3.1.3 Đối tượng nghiên cứu 21 3.2 Phương pháp tiến hành 21 vii 3.2.1 Phương pháp lấy mẫu 21 3.2.2 Phương pháp phân lập nấm C cassiicola 22 3.2.2.1 Hoá chất dụng cụ 22 3.2.2.2 Phân lập mẫu nấm 22 3.2.2.3 Nhân số lượng bào tử 22 3.2.3 Phương pháp đánh giá tính kháng bệnh rụng Corynespora mẫu nguyên cách lây bệnh nhân tạo 23 3.2.3.1 Vật liệu dụng cụ 23 3.2.3.2 Phương pháp 23 3.2.3.3 Thời gian địa điểm thực 25 3.2.4 Phương pháp đo hoạt tính peroxidase (POD) từ số dvt 25 3.2.4.1 Mục đích 25 3.2.4.2 Vật liệu, dụng cụ hoá chất 25 3.2.4.3 Phương pháp 25 3.2.4.4 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 27 3.2.5 Phương pháp đếm số lượng khí khổng số dvt cao su 27 3.2.5.1 Mục đích 27 3.2.5.2 Hoá chất dụng cụ 27 3.2.5.3 Phương pháp 27 3.2.5.4 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 28 Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Tình hình bệnh rụng Corynespora Lai Khê 29 4.2 Kết phân lập 31 4.3 Kết đánh giá tính kháng bệnh rụng Corynespora cách lây bệnh nhân tạo mẫu nguyên 32 4.4 Kết thí nghiệm khảo sát mối quan hệ hoạt tính peroxidase tính kháng bệnh CFLD số dvt cao su 36 4.4.1 Kết khảo sát hoạt tính POD mẫu bệnh mẫu đối chứng 36 4.4.2 Kết khảo sát hoạt tính POD dvt 38 viii 4.5 Kết thí nghiệm khảo sát mối quan hệ mật độ khí khổng tính mẫn cảm CLFD số dvt cao su 40 Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Đề nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 50 ix DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT BVTV Bảo Vệ Thực Vật C cassiicola Corynespora cassiicola CLFD Corynespora Leaf Fall Disease CRD Completely Randomized Design Dvt Dòng vơ tính H brasiliensis Hevea brasiliensis NT Nghiệm thức PDA Potato Dextrose Agar POD Peroxidase PR proteins Pathogenesis Related Proteins PSA Potato Sucrose Agar UV Ultra Violet VNCCSVN Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam x 42 Qua Biểu đồ 4.3 cho thấy, dvt cao su có mật độ khí khổng nhiều dễ bị nhiễm bệnh 90.00 Số khí khổng Số khí khổng/thị trường vật kính X40 80.00 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 0.00 0.25 0.50 0.67 1.42 1.42 1.42 2.17 2.42 2.50 3.00 3.00 3.00 Mức nhiễm bệnh 12 dvt Biểu đồ 4.3: Mối quan hệ số lƣợng khí khổng tính mẫn cảm với CLFD 12 dvt cao su Từ kết cho thấy dịng vơ tính cao su có số lượng khí khổng nhiều dễ bị nhiễm bệnh dịng vơ tính cao su có số lượng khí khổng Kết hồn tồn phù hợp với giả thiết ban đầu đặt Kết luận: Dvt khác có mật độ khí khổng khác Dvt cao su có mật độ khí khổng nhiều dễ bị nhiễm bệnh 43 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Đánh giá tính kháng CLFD mẫu nguyên 60 dvt cao su cách lây bệnh nhân tạo Là phương pháp tin cậy 100% dvt nhiễm bệnh Corynespora mức độ mẫn cảm khác Trong đó, 15/60 dvt nhiễm nặng, 12/60 dvt nhiễm nặng, 22/60 dvt nhiễm trung bình, 11/60 dvt nhiễm nhẹ Hầu hết dvt bị nhiễm bệnh nặng có nguồn gốc di truyền từ dvt mẫn cảm Tuy nhiên, di truyền yếu tố cần định tính nhiễm bệnh dvt Thí nghiệm khảo sát mối quan hệ hoạt tính peroxidase tính kháng CFLD số dvt cao su Dvt khác có hoạt tính POD khác Trên dvt, hoạt tính POD mẫu đối chứng thấp mẫu bệnh Khơng có mối tương quan tuyến tính hoạt tính POD tính mẫn cảm với CLFD dvt Thí nghiệm khảo sát mối quan hệ mật độ khí khổng tính mẫn cảm CLFD số dvt cao su Dvt khác có mật độ khí khổng khác Dvt cao su có mật độ khí khổng nhiều dễ bị nhiễm bệnh 5.2 Đề nghị Mở rộng phương pháp thực phòng bệnh Corynespora với 44 dvt Tiếp tục đánh giá tính nhiễm bệnh dvt phương pháp in vivo (trong phòng) kết hợp với theo dõi vườn kiểm định bệnh thời gian dài để có kết luận chắn Nên kết hợp thêm việc khảo sát đặc tính sinh học nấm bệnh Thí nghiệm khảo sát mối quan hệ hoạt tính POD khả kháng bệnh CLFD bước đầu nghiên cứu nên có hạn chế định Để tăng thêm độ tin cậy nên tiếp tục khảo sát hoạt tính POD mẫu lây bệnh nhân tạo để kiểm sốt thời gian nhiễm bệnh, từ xác định hoạt tính POD xác hơn, đồng thời kết hợp với yếu tố khác liên quan đến khả kháng bệnh dvt cao su để có phương pháp quản lý bệnh chặt chẽ Đối với phương pháp khảo sát mối quan hệ mật độ khí khổng tính cảm nhiễm với bệnh Là phương pháp hồn tồn nên có hạn chế định, để tăng thêm độ tin cậy nên tiếp tục khảo sát nhiều dvt 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, 2006 Báo cáo công trình tuyển non dvt cao su kháng bệnh rụng Corynespora Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam Lê Ngọc Thông Huỳnh Tiến Dũng, 2003 Sinh học đại cương Tủ sách Đại học Nông Lâm 199 trang Nguyễn Đức Lượng, 2001 Công Nghệ Sinh Học Nhà xuất Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh 344 trang Nguyễn Ngọc Trì, 2005 Bài giảng Sinh lý Thực vật Tủ sách Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Trang 28 – 33 Nguyễn Thị Kim Linh, 2005 Đề cương thực hành môn Sinh lý thực vật Tủ sách Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Văn Bình, Vũ Đình Chính, Nguyễn Thế Cơn, Lê Song Dự, Đồn Thị Thanh Nhàn (chủ biên) Bùi Xuân Sửu, 1996 Giáo trình công nghiệp Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Văn Trương Trịnh Văn Thịnh, 1991 Từ điển Bách khoa Nông nghiệp Trung tâm quốc gia biên soạn từ điển Bách khoa Việt Nam Phạm Thị Lộc, 2002 Bài giảng Sinh học thực vật Tủ sách Trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Trang 12 – 14 Phạm Thị Trân Châu Phan Tuấn Nghĩa, 2006 Công nghệ sinh học Enzyme Ứng dụng Tập ba Nhà xuất Giáo Dục 195 trang 10 Phan Thành Dũng, 2000 Bệnh rụng Corynespora, đối tượng nguy hiểm lần cao su Việt Nam Kết hoạt động khoa học công nghệ năm 2000 Nhà xuất Nông Nghiệp Trang 135 – 149 11 Phan Thành Dũng, 2004 Kỹ thuật bảo vệ thực vật cao su Nhà xuất Nông nghiệp 124 trang 12 Phan Thành Dũng, 2006 Báo cáo kết cơng trình tuyển non dịng vơ tính cao su kháng bệnh rụng Corynespora Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam 46 13 Tổng Công Ty Cao su Việt nam, 2005 30 năm Tổng Công Ty Cao Su Việt nam NXB Giao Thông Vận Tải 14 Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998 Giáo trình Bệnh Cây Nơng Nghiệp Nhà xuất Nông nghiệp 295 trang Tài liệu tiếng nƣớc 15 Breton, F., d’ Auzac, J., Garcia, D., Sanier, C and Eschbach, J.m., 1996 Recent researches on Corynespora cassiicola/Hevea brasiliensis Interaction Proceeding of Workshop on Corynespora Leaf Fall Diseases of Hevea Rubber (Eds Asril Darussamin, Sowkirman Pawirosoemardjo, Basuki, Rasidin Azwar, Sadaruddin) Medan, Indonesia, 16 – 17 December 1996 Indonesia Rubber Reseach Institute pp 49 –78 16 Chatchamon Daengkanit and Wallie Suvachittanont., 2005 Peroxidase from Hevea brasiliensis (B.H.K) Mull Arg Leaves and its Applications Science Asia 31 : 55 – 63 17 Chee, K H., 1988 Studies on sporulation, pathogenicity and epidemiology of Corynespora Journal of Natural Rubber research 3(1): 21 – 29 18 Dung P.T., 1995 Studies on C cassiicola (Berk & Curt) Wei on rubber M Agr Sc Thesis, Universiti Pertanian Malaysia 19 Dung, P.T and Hoan, N.T., 2000 Current Status of Corynespora Leaf Fall in Vietnam IRRDB Workshop on Corynespora Leaf Fall Disease of rubber Kuala Lumpur, Malaysia and Medan, Indonesia, – 16 June 2000 International Rubber Research and Development Board 20 Dung, P.T., Pha, T.A and Son, M.V., 2006 Current Status of diseases on rubber tree and their control in Vietnam Preprints of Papers International Natural rubber Conference (Eds Mai Van Son, Nguyen Ngoc Bich, Tong Viet Thinh) Ho Chi Minh City, Vietnam, 13 – 14 November 2006 International Rubber Research and Development Board and Rubber Research Institute of Vietnam 21 Geiger J P., Rio B., Nandris D and Nicole M., 1989 Peroxidase production in tissues of the rubber tree following infection by root rot fungi Physiological and Molecular Plant Pathology 34: 241 – 256 47 22 Jacob K.C., 2006 Symptoms of Corynespora leaf disease on rubber (Hevea brasiliensis) Corynespora leaf disease of Hevea brasiliensis Strategies for management (Ed Jacob K.C.) Rubber Reseach Institute of India, Kottayam, Kerala, India pp 17 – 24 23 Jayasinghe, C.K., 2000 Corynespora Leaf Fall Disease of Lanka: Diversity of the pathogen and pathogenesis IRRDB Corynespora Leaf Fall Disease of rubber Kuala Lumpur, Medan, Indonesia, – 16 June 2000 International Rubber Development Board 24 Jinji P., Xin Z., Yangxian Q., Yixian X., Huiqiang Z and He Z., 2007 First record of Corynespora leaf fall disease of Hevea rubber tree in China Australian Plant Disease Notes 2(1): 35 – 36 25 Joseph A., 2006 Enzymes in host – pathogen interactions Corynespora leaf disease of Hevea brasiliensis Strategies for management (Ed C Kuruvilla Jacob) Rubber Reseach Institute of India, Kottayam, Kerala, India p 54 – 62 26 Miranda M.V., Magri M.L., Cabrera R.B., Fernández Lahore H.M and Cascone O., 2003 Optimisation of peroxidase adsorption on concanavalin A – Agarose Latin American Applied Research 33: 67–71 < http://www.scielo.org.ar/pdf/laar/v33n2/v33n2a01.pdf> 27 Mushrif S.K., 2006 Morphology, physiology and survival of Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei Corynespora leaf disease of Hevea brasiliensis Strategies for management (Ed C Kuruvilla Jacob) Rubber Reseach Institute of India, Kottayam, Kerala, India pp 26 – 31 28 Onesirosan, P.T., Arny, D.C and Durbin, R.D., (1974) Host specificity of Nigerian and North Amarican isolates of Corynespora cassiicola Phytopathology 64: 1364 –1367 29 Philip, S., Joseph, A., Kumar, A., Jacob, C.K and Kothandaraman, R., 2001 Detection of –1,3–glucanase isoforms against Corynespora Leaf Fall Diseases of Rubber (Hevea brasiliensis) Indian Journal of Natural Rubber Research 14 (1): – rubber in Sri Workshop on Malaysia and Research and 48 30 Putter J., 1974 Peroxidases Methods of enzymatic analysis (Ed Bergmeyer) Academic Press, New York p 685 31 Rajalakshmy, V.K and Kothandaraman, R., 1996 Current Status of Corynespora Leaf Fall in India the occurrence and management Prosiding of Workshop on Corynespora Leaf Fall Disease of Hevea Rubber (Eds Asril Darussamin, Sowkirman Pawirosoemardjo, Basuki, Rasidin Azwar and Sadaruddin) Medan, Indonesia, 16 – 17 December 1996 Indonesia Rubber Reseach Institute p 38 32 Sarma, Y.R and Nayudu, M.V., 1971 New host of Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei Current Sciences 74(2): 92 – 97 33 Spencer, J.A and Walters, H.J., 1969 Variation in certain isolates of Corynespora cassiicola Phytopathology 59: 58 – 60 34 Suresh Kumar, K.K and Kuruvilla Jacob, C., 2006 Post – infectional change of enzymes and proteins in Hevea brasiliensis and their role in resistance to Corynespora cassiicola Preprints of Papers International Natural rubber Conference (Eds Mai Van Son, Nguyen Ngoc Bich, Tong Viet Thinh) Ho Chi Minh City, Vietnam, 13 – 14 November 2006 International Rubber Research and Development Board and Rubber Research Institute of Vietnam Pp 440 – 449 35 Thankamony S and Shaji Philip., 2006 Enzyme and PR Proteins A Laboratory Manual for International Training on Strategies for Management of Corynespora Leaf Fall Disease of Hevea brasiliensis (Eds C Kuruvilla Jacob, P Srinivas, C Bindu Roy) Rubber Reseach Institute of India, Kottayam 686 009, India p 17 – 18 Tài liệu Internet 36 http://www.speciesfungorum.org/Names/genusrecord.asp?RecordID=7795 37 http://www.irrdb.com/IRRDB/AnnualReport/Report2000.htm#Corynespora 38 http://www.daff.gov.au/ data/assets/pdf_file/0009/146925/management_of _plant_pathogen_collections_vietnamese.pdf 39 http://www.agu.edu.vn/forum/viewtopic.php?id=1528 40 http://sps.k12.ar.us/massengale/images/clip0222.jpg 49 41 42 http://www.herbdatanz.com/stoma-r.gif http://home.earthlink.net/~dayvdanls/guardcell.gif 43 http://210.245.64.232/BaocaoNH/2007/T7/T7_Caosu.pdf 44 http://www.vninvest.com/wn/view/531/vni.aspx PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: Số liệu thô Mức độ nhiễm bệnh 60 dvt cao su sau 5, 10 ngày lây nhiễm STT DVT TB Phân hạng STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 LH 94/481 LH 94/342 LH 94/592 LH 97/542 PB 235 PB 260 LH 94/286 LH 97/697 LH 94/337 LH 94/501 LH 97/563 LH 91/999 LH 94/62 LH 98/1366 LH 94/475 LH 95/395 LH 97/267 LH 91/1119 LH 94/626 LH 95/115 LH 96/305 LH 94/374 LH 94/544 LH 95/113 LH 98/444 LH 97/165 LH 94/105 LH 94/267 LH 95/88 LH 91/489 0,25 0,42 0,50 0,50 0,58 0,58 0,67 0,67 0,75 0,83 0,83 1,33 1,33 1,33 1,42 1,42 1,42 1,58 1,58 1,58 1,58 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,75 1,75 1,75 1,75 Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Nhẹ Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Trung bình Ghi chú: Độ lệch chuẩn 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 DVT TB LH 96/133 LH 97/80 LH 97/647 LH 96/345 LH 91/579 LH 94/133 LH 96/115 LH 98/274 LH 91/1111 LH 97/196 LH 88/185 LH 96/128 LH 94/359 LH 95/206 LH 98/241 LH 94/612 LH95/345 LH 96/308 LH 97/646 LH 97/657 LH 95/174 LH 98/239 LH 97/117 LH 82/182 LH 95/109 LH 95/208 LH 98/807 LH 98/42 LH 98/377 LH 95//228 1,75 1,75 1,75 1,83 1,83 1,83 1,83 1,83 1,92 1,92 1,92 1,92 2,17 2,42 2,50 2,75 2,75 2,83 2,83 2,92 2,92 2,92 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00 = 0,8; Cấp bệnh trung bình: = 1,83 Phân hạng Trung bình Trung bình Trung bình Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng Rất nặng PHỤ LỤC 2: Phƣơng pháp pha chế số môi trƣờng  Môi trƣờng PDA (tổng hợp) – hãng sản xuất: Merck Pha 39 g môi trường PDA tổng hợp vào lít nước, dùng đũa thuỷ tinh khuấy đều, phân phối vào bình tam giác Sau đem hấp khử trùng 121ºC/15 phút Để nguội (khoảng 40 – 45ºC), phân vào đĩa petri vô trùng khoảng 10 ml  Môi trƣờng PSA Tự pha chế theo công thức của Chee (1988) Bảng: Thành phần môi trƣờng PSA Thành phần g/lít Khoai tây 100 Đường sucrose 10 Thạch agar 15 Nước cất Nước cất vừa đủ lít Khoai tây gọt vỏ, rửa sạch, cân đủ 100 gam, thái nhỏ hạt lựu, thêm 500 ml nước cất lần, đun sôi Lọc lấy nước Thêm 15 g agar bổ sung nước cất lần vào dung dịch lọc đạt 1.000 ml, đun sôi 30 phút, khuấy Chia môi trường vào bình tam giác (khoảng 250 ml/bình), đem hấp khử trùng 121ºC 15 phút Sau nhiệt độ mơi trường xuống khoảng 40 – 45ºC, rót vào đĩa petri vô trùng khoảng 10 ml PHỤ LỤC 3: Xử lý số liệu thống kê POD bệnh One-Way Analysis of Variance -Data: PODBENH.HTINHPOD Level codes: PODBENH.DVT Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 2453640.3 11 223058.21 3.811 0030 Within groups 1404573.3 24 58523.89 -Total (corrected) 3858213.6 35 missing value(s) have been excluded Table of means for PODBENH.HTINHPOD by PODBENH.DVT Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -LH94/286 897.33333 45.66667 139.67091 693.44951 1101.2172 LH94/481 317.66667 65.70726 139.67091 113.78284 521.5505 LH94/592 657.33333 124.48873 139.67091 453.44951 861.2172 LH94/475 273.33333 26.07894 139.67091 69.44951 477.2172 LH95/395 743.33333 342.85387 139.67091 539.44951 947.2172 LH97/267 197.33333 15.34420 139.67091 -6.55049 401.2172 LH94/359 827.33333 270.77071 139.67091 623.44951 1031.2172 LH95/206 233.33333 7.83865 139.67091 29.44951 437.2172 LH98/241 658.00000 120.50035 139.67091 454.11618 861.8838 LH98/377 179.33333 18.12304 139.67091 -24.55049 383.2172 LH98/42 668.66667 50.03443 139.67091 464.78284 872.5505 LH98/807 242.66667 54.77631 139.67091 38.78284 446.5505 -Total 36 491.30556 40.31952 40.31952 432.44936 550.1617 Multiple range analysis for PODBENH.HTINHPOD by PODBENH.DVT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -LH98/377 179.33333 X LH97/267 197.33333 X LH95/206 233.33333 X LH98/807 242.66667 X LH94/475 273.33333 XX LH94/481 317.66667 XX LH94/592 657.33333 XX LH98/241 658.00000 XX LH98/42 668.66667 XX LH95/395 743.33333 X LH94/359 827.33333 X LH94/286 897.33333 X -contrast difference limits LH94/286 - LH94/481 579.667 407.768 * LH94/286 - LH94/592 240.000 407.768 LH94/286 - LH94/475 624.000 407.768 * LH94/286 - LH95/395 154.000 407.768 LH94/286 - LH97/267 700.000 407.768 * LH94/286 - LH94/359 70.0000 407.768 LH94/286 - LH95/206 664.000 407.768 * LH94/286 - LH98/241 239.333 407.768 LH94/286 - LH98/377 718.000 407.768 * LH94/286 - LH98/42 228.667 407.768 LH94/286 - LH98/807 654.667 407.768 * LH94/481 - LH94/592 -339.667 407.768 LH94/481 - LH94/475 44.3333 407.768 LH94/481 - LH95/395 -425.667 407.768 * LH94/481 - LH97/267 120.333 407.768 LH94/481 - LH94/359 -509.667 407.768 * LH94/481 - LH95/206 84.3333 407.768 LH94/481 - LH98/241 -340.333 407.768 LH94/481 - LH98/377 138.333 407.768 LH94/481 - LH98/42 -351.000 407.768 LH94/481 - LH98/807 75.0000 407.768 LH94/592 - LH94/475 384.000 407.768 LH94/592 - LH95/395 -86.0000 407.768 LH94/592 - LH97/267 460.000 407.768 * LH94/592 - LH94/359 -170.000 407.768 LH94/592 - LH95/206 424.000 407.768 * LH94/592 - LH98/241 -0.66667 407.768 LH94/592 - LH98/377 478.000 407.768 * LH94/592 - LH98/42 -11.3333 407.768 LH94/592 - LH98/807 414.667 407.768 * LH94/475 - LH95/395 -470.000 407.768 * LH94/475 - LH97/267 76.0000 407.768 LH94/475 - LH94/359 -554.000 407.768 * LH94/475 - LH95/206 40.0000 407.768 LH94/475 - LH98/241 -384.667 407.768 LH94/475 - LH98/377 94.0000 407.768 LH94/475 - LH98/42 -395.333 407.768 LH94/475 - LH98/807 30.6667 407.768 * denotes a statistically significant difference Multiple range analysis for PODBENH.HTINHPOD by PODBENH.DVT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -LH95/395 - LH97/267 546.000 407.768 * LH95/395 - LH94/359 -84.0000 407.768 LH95/395 - LH95/206 510.000 407.768 * LH95/395 - LH98/241 85.3333 407.768 LH95/395 - LH98/377 564.000 407.768 * LH95/395 - LH98/42 74.6667 407.768 LH95/395 - LH98/807 500.667 407.768 * LH97/267 - LH94/359 -630.000 407.768 * LH97/267 - LH95/206 -36.0000 407.768 LH97/267 - LH98/241 -460.667 407.768 * LH97/267 - LH98/377 18.0000 407.768 LH97/267 - LH98/42 -471.333 407.768 * LH97/267 - LH98/807 -45.3333 407.768 LH94/359 - LH95/206 594.000 407.768 * LH94/359 - LH98/241 169.333 407.768 LH94/359 - LH98/377 648.000 407.768 * LH94/359 - LH98/42 158.667 407.768 LH94/359 - LH98/807 584.667 407.768 * LH95/206 - LH98/241 -424.667 407.768 * LH95/206 - LH98/377 54.0000 407.768 LH95/206 - LH98/42 -435.333 407.768 * LH95/206 - LH98/807 -9.33333 407.768 LH98/241 - LH98/377 478.667 407.768 * LH98/241 - LH98/42 -10.6667 407.768 LH98/241 - LH98/807 415.333 407.768 * LH98/377 - LH98/42 -489.333 407.768 * LH98/377 - LH98/807 -63.3333 407.768 LH98/42 - LH98/807 426.000 407.768 * -* denotes a statistically significant difference POD đối chứng One-Way Analysis of Variance -Data: PODDC.HTINHPODDC Level codes: PODDC.DVT Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 1799.5556 11 163.59596 2.544 0270 Within groups 1543.3333 24 64.30556 -Total (corrected) 3342.8889 35 missing value(s) have been excluded Table of means for PODDC.HTINHPODDC by PODDC.DVT -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -LH94/286 51.666667 5.3333333 4.6298148 44.908321 58.425013 LH94/481 54.333333 2.6034166 4.6298148 47.574987 61.091679 LH94/592 36.000000 1.0000000 4.6298148 29.241654 42.758346 LH94/475 38.666667 4.0551750 4.6298148 31.908321 45.425013 LH95/395 46.666667 2.7284509 4.6298148 39.908321 53.425013 LH97/267 41.000000 2.0816660 4.6298148 34.241654 47.758346 LH94/359 39.333333 2.6666667 4.6298148 32.574987 46.091679 LH95/206 48.000000 9.1651514 4.6298148 41.241654 54.758346 LH98/241 33.333333 5.8972687 4.6298148 26.574987 40.091679 LH98/377 39.333333 5.4569018 4.6298148 32.574987 46.091679 LH98/42 29.333333 3333333 4.6298148 22.574987 36.091679 LH98/807 41.000000 6.0827625 4.6298148 34.241654 47.758346 -Total 36 41.555556 1.3365124 1.3365124 39.604589 43.506522 Multiple range analysis for PODDC.HTINHPODDC by PODDC.DVT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -LH98/42 29.333333 X LH98/241 33.333333 XX LH94/592 36.000000 XXX LH94/475 38.666667 XXXX LH94/359 39.333333 XXXX LH98/377 39.333333 XXXX LH97/267 41.000000 XXXXX LH98/807 41.000000 XXXXX LH95/395 46.666667 XXXX LH95/206 48.000000 XXX LH94/286 51.666667 XX LH94/481 54.333333 X -contrast difference limits LH94/286 - LH94/481 -2.66667 13.5167 * denotes a statistically significant difference Số khí khổng One-Way Analysis of Variance -Data: KHIKHONG.SOKHIKHONG Level codes: KHIKHONG.DVT Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 1858.3056 11 168.93687 14.797 0000 Within groups 274.0000 24 11.41667 -Total (corrected) 2132.3056 35 missing value(s) have been excluded Table of means for KHIKHONG.SOKHIKHONG by KHIKHONG.DVT -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -LH94/286 58.333333 4.1766547 1.9507833 55.485688 61.180978 LH94/481 57.000000 5773503 1.9507833 54.152355 59.847645 LH94/592 58.000000 5773503 1.9507833 55.152355 60.847645 LH94/475 59.666667 3.8441875 1.9507833 56.819022 62.514312 LH95/395 59.333333 6666667 1.9507833 56.485688 62.180978 LH97/267 60.666667 8819171 1.9507833 57.819022 63.514312 LH94/359 67.666667 8819171 1.9507833 64.819022 70.514312 LH95/206 66.666667 8819171 1.9507833 63.819022 69.514312 LH98/241 66.333333 6666667 1.9507833 63.485688 69.180978 LH98/377 75.000000 2.0816660 1.9507833 72.152355 77.847645 LH98/42 78.333333 1.7638342 1.9507833 75.485688 81.180978 LH98/807 74.666667 1.4529663 1.9507833 71.819022 77.514312 -Total 36 65.138889 5631426 5631426 64.316845 65.960933 Multiple range analysis for KHIKHONG.SOKHIKHONG by KHIKHONG.DVT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -LH94/481 57.000000 X LH94/592 58.000000 X LH94/286 58.333333 X LH95/395 59.333333 X LH94/475 59.666667 X LH97/267 60.666667 XX LH98/241 66.333333 XX LH95/206 66.666667 X LH94/359 67.666667 X LH98/807 74.666667 X LH98/377 75.000000 X LH98/42 78.333333 X -* denotes a statistically significant difference ... SINH HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN NON DÕNG VƠ TÍNH CAO SU (Hevea brasiliensis Muell Arg.) KHÁNG BỆNH RỤNG LÁ CORYNESPORA (Corynespora Leaf Fall Disease) Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên... TRANG, Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh “TUYỂN NON DÕNG VƠ TÍNH CAO SU (Hevea brasiliensis Muell Arg.) KHÁNG BỆNH RỤNG LÁ CORYNESPORA (Corynespora Leaf Fall Disease)? ?? Thực từ 03/03/2007 đến 30/07/2007... Thực Vật – Viện Nghiên Cứu Cao Su Việt Nam, thực đề tài: ? ?Tuyển non dịng vơ tính cao su (Hevea brasiliensis Muell Arg.) kháng bệnh rụng Corynespora (Corynespora Leaf Fall Disease)? ?? 1.2 Mục đích yêu