Khảo sát chọn giống khoai tây kháng bệnh sương mai bằng chỉ thị phân tử DNA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÂM MAI TÙNG KHẢO SÁT CHỌN GIỐNG KHOAI TÂY KHÁNG BỆNH SƯƠNG MAI BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ DNA LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÂM MAI TÙNG KHẢO SÁT CHỌN GIỐNG KHOAI TÂY KHÁNG BỆNH SƯƠNG MAI BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ DNA CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ : 60.42.02.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN ĐỨC BÁCH HÀ NỘI, NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2015 Tác giả luận văn Lâm Mai Tùng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nơng nghiệp Page ii LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài tốt nghiệp cố gắng thân nhận nhiều quan tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, bạn bè người thân Trước tiên, xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo TS Nguyễn Đức Bách người định hướng nghiên cứu, tận tình bảo, giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập thực luận văn tốt nghiệp Tôi xin cám ơn chân thành PGS.TS Phan Hữu Tôn, ThS Tống Văn Hải, Bộ môn Sinh học phân tử Công nghệ Sinh học ứng dụng, Khoa Công nghệ Sinh học tạo điều kiện thuận lợi q trình tơi thực luận văn Bộ mơn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Thầy, Cô Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam người trực tiếp giảng dạy, trang bị kiến thức bổ ích suốt khoảng thời gian tơi học tập nghiên cứu Cuối cùng, với tất lòng kính trọng biết ơn vơ hạn, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè, người bên cạnh động viên giúp đỡ trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2015 Học viên Lâm Mai Tùng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC .iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu yêu cầu đề tài 2.1 Mục tiêu 2.2 Yêu cầu Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung khoai tây 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm thực vật học 1.1.4 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh khoai tây 1.1.5 Giá trị dinh dưỡng khoai tây 1.2 Tình hình sản xuất khoai tây giới 1.3 Tình hình sản xuất khoai tây Việt nam 10 1.4 Bệnh mốc sương khoai tây 11 1.4.1 Lịch sử phát 11 1.4.2 Phạm vi phân bố 12 1.4.3 Triệu chứng 12 1.4.4 13 Nguyên nhân gây bệnh 1.4.5 Điều kiện phát sinh phát triển 15 1.5 Chỉ thị phân tử ứng dụng 16 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 1.5.1 Khái niệm thị phân tử 16 1.5.2 Chỉ thị phân tử chọn tạo giống khoai tây kháng bệnh sương mai 21 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page Chương II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Vật liệu nghiên cứu 30 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 31 2.3 Nội dung nghiên cứu 31 2.4 Phương pháp nghiên cứu 31 2.4.1 Ngoài đồng ruộng 31 2.4.2 Phương pháp đánh giá số tiêu nông sinh học 32 2.4.3 Phương pháp PCR phát gen kháng sương mai R1 R3a 34 2.4.4 Phân lập mẫu bệnh sương mai khoai tây Phytophthora infestans 36 2.4.5 Đánh giá bệnh lây nhiễm nhân tạo 37 Chương III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Đặc điểm nông sinh học số mẫu giống khoai tây vụ đông xuân 38 3.1.1 Thời gian sinh trưởng qua giai đoạn 38 3.1.2 Đặc điểm thân 44 3.1.3 Đặc điểm 48 3.1.4 Đặc điểm hoa, mẫu giống khoai tây 52 3.1.5 Đặc điểm củ khoai tây 56 3.1.6 Năng suất yếu tố cấu thành suất 60 3.2 Đánh giá mức độ nhiễm bệnh đồng ruộng 63 3.2.1 Bệnh sương mai hay mốc sương 66 3.2.2 Bệnh đốm 67 3.2.3 Bệnh héo xanh 67 3.2.4 Bệnh héo vàng 67 3.2.5 Bệnh hại virut gây 68 3.2.6 Sâu xám 68 3.3 Kết PCR phát gen kháng sương mai R1 R3a 68 3.4 Phân lập nấm bệnh sương mai lây nhiễm đánh giá khả nhiễm 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 74 Kết luận 74 Đề nghị 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Năng suất protein lượng số lương thực Bảng 1.2 10 Năng suất khoai tây nước đứng đầu giới năm 2012- 2013 Bảng 2.1 Bảng mẫu giống nghiên cứu 30 Bảng 2.2 Các thị phân tử DNA sử dụng để phát gen R1, R3a kháng sương mai 36 Bảng 3.1 Thời gian sinh trưởng 41 Bảng 3.2 Đặc điểm thân mẫu giống 46 Bảng 3.3 Đặc điểm mẫu giống 49 Bảng 3.4 Đặc điểm hoa, mẫu giống khoai tây 54 Bảng 3.5 Đặc điểm củ khoai tây 56 Bảng 3.6 Năng suất yếu tố cấu thành suất 60 Bảng 3.7 Mức độ nhiễm số bệnh đồng ruộng 64 Bảng 3.8 Mức độ nhiễm số bệnh đồng ruộng 70 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình 1.2 Cây khoai tây Thành phần dinh dưỡng 100 gam củ khoai tây sau luộc nướng Hình 1.3 Bản đồ gen kháng đặc hiệu chủng bệnh mốc sương khoai tây 22 Hình 1.5 Bản đồ gen RB/Rpi-blb1 23 Hình 1.6 Bản đồ gen Rpi-blb2 25 Hình 3.1 Các dạng khoai tây 52 Hình 3.2 Các dạng thân khoai tây 52 Hình 3.3 Hoa khoai tây 55 Hình 3.4 Một số hình ảnh màu vỏ củ 59 Hinh 3.5 Điện di sản phẩm PCR phát gen kháng R1 69 Hình 3.6 Điện di sản phẩm PCR phát gen kháng R3a 69 Hình 3.7 Lây nhiễm đánh giá nhân tạo 73 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC VIẾT TẮT DNA Deoxyribo Nucleic Acid PCR Polymerase Chain Reaction CTAB Cetyl trimethyl Ammonium Bromide PCR Polymerase Chain Reaction EDTA Ethylendiamin Tetraacetic Acid ALP Amplicon length polymorphism AFLP Amplified fragment lenght polymorphism RAPD Random amplified polymorphic DNA RGA Resistance Gene Analog SSR Single sequence repeat, microsetellite SNPs Single nucleotide polymorphism SSCP Single strand confortmation polimophism STS Sequence Tagged site MRDHV Moderately repeat, dispersed and highly variable DNA, minisatelite Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii nắng, làm cho khoai tây không sinh trưởng phát triển bị nặng Trong 76 mẫu giống nghiên cứu có 51 mẫu giống khơng bị nhiễm bệnh mức điểm có 25 giống bị nhiễm nhẹ mức điểm Như mẫu giống khoai tây phần lớn có khả kháng tốt với bệnh sương mai điều kiện tự nhiên Để có kết luận xác cần phải lây nhiễm nhân tạo nhiều chủng nấm bệnh sương mai 3.2.2 Bệnh đốm Bệnh nấm Alternaria solani gây Trên xuất đốm nhỏ (đường kính 2-3mm) màu nâu đậm đến đen có vòng đồng tâm, đốm nhiều dần nhập với thành đốm lớn, chiếm diện tích lớn phiến lá, thân củ nhiễm bệnh, làm giảm suất từ 10-40% suất thực thu khoai tây Từ kết theo dõi nhận thấy mẫu giống theo dõi có 23 mẫu giống bị nhiễm bệnh mức độ nhẹ Bệnh xuất nhiều gây bệnh mức độ nhẹ không gây ảnh hưởng nhiều đến khả sinh trưởng suất mẫu giống 3.2.3 Bệnh héo xanh Bệnh vi khuẩn Pseudomonas solanacearum gây ra, làm héo đột ngột, bệnh thường hại nặng trưởng thành, củ mạnh Trên bị bệnh, xanh, héo cành tồn thân cây, làm giảm suất trầm trọng trí trắng khoai tây bước vào giai đoạn đâm tia củ nuôi củ Dựa vào kết theo dõi đồng ruộng nhận thấy bệnh héo xanh bệnh gây ảnh hưởng nhẹ đến tất mẫu giống khoai tây nghiên cứu Trong 76 giống nghiên cứu có 14 giống bị bênh mức độ nhẹ mức từ 5,0% đến 15,0% 3.2.4 Bệnh héo vàng Bệnh gây nấm Fusarium oxysporum, gây hại vị trí gốc thân, cổ rễ củ Ở gốc cây, vết bệnh màu nâu màu xám nhạt bao quanh gốc, gây tượng thối khô tóp lại, cắt ngang phần mơ bệnh thấy bó mạch có màu nâu xám, thường vết bệnh có bao phủ lớp nấm trắng thưa Điều kiện nhiệt độ từ 18 – 34 C, ẩm độ cao thích hợp cho nấm phát triển Kết bảng 4.7 nhận thấy có 24 giống bị nhiễm bệnh, nhiên mức độ nhẹ, không gây ảnh hưởng nhiều đến sinh trưởng, phát triển suất mẫu giống khoai tây nghiên cứu Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 67 3.2.5 Bệnh hại virut gây Các loại virus Y, virus A hỗn hợp loại virus Y A; gọi virus thường gây hại nặng cho Cây bị bệnh phát triển chậm, lùn; cong queo, hình thìa từ gốc lên, cứng giòn, mầu xanh đậm khơng đồng nhất; tồn màu vàng nhạt, có vết đen chết lá, thân cây.Các loại virus X, virus S virus M nguyên nhân gây bệnh virus dạng nhẹ Cây bị bệnh có biểu bị khảm, bị nhăn, phát triển chậm Dựa vào kết theo dõi đồng ruộng có 25 mẫu giống nhiễm bệnh virus Trong có 18 mẫu giống nhiễm bệnh nhẹ, mẫu giống nhiễm mức độ trung bình mẫu giống nhiễm bệnh nặng : PI473538 3.2.6 Sâu xám Sâu xám có tên khoa học Agrotis ipsilon, thuộc họ Ngài đêm (Noctuidae), Cánh vảy (Lepidoptera) Sâu xám lồi sâu đa thực, phá hại hàng loạt loại trồng như: ngô, đậu, lạc, cà chua loại họ bầu bí Các rau màu giai đoạn con, sâu thường phá hại nghiêm trọng, gây ruộng, làm giảm suất Do điều kiện thời tiết vụ đông xuân 2014-2015 không thuận lợi cho sâu xám phát triển nên ảnh hưởng sâu xám đến sinh trưởng phát triển mẫu giống không đáng kể 3.3 Kết PCR phát gen kháng sương mai R1 R3a Gen kháng bệnh sương mai R1 R3a hai gen nhà khoa học chứng minh kháng tốt cá chủng Phytophthora infestans châu Á có Việt Nam Để chọn giống khoai tây kháng chủng bệnh nấm sương mai trước hết phải có nguồn gen kháng, sau phải phân lập chủng bệnh nấm sương mai từ đánh giá để chọn gen kháng hữu hiệu phục vụ đắc lực vào trương trình chọn tạo giống khoai tây kháng bệnh ADN 76 mẫu giống khoai tây chiết tách sau sử dụng thị R1F/R (76-2sf2/76-2SR) để phát gen kháng R1 R3-1380 để phát gen kháng R3a Khi nhân đoạn thị liên kết với gen R1 kích thước đoạn nhân lên 1.400 bp (Ballvora, et al., 2002) nghĩa có gen khơng đoạn nhân lên nghĩa khơng có gen Trong 76 mẫu phát mẫu chứa gen R1 mẫu giống: PI133713, PI320311, PI230557, PI133619 PI558139 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 68 10 11 12 13 14 15 1400 bp Hinh 3.5 Điện di sản phẩm PCR phát gen kháng R1 Giếng 3, 5, 7, 10 đoạn thị nhân lên liên kết với gen kháng R1, giếng lại đoạn thị khơng nhân lên Đối với gen kháng R3a, nhân đoạn thị liên kết với gen kích thước đoạn nhân lên 1380 (Sakolova, et al., 2010) đồng nghĩa chứa gen Còn giống khơng chứa gen ADN khơng nhân lên Trong tổng số 76 mẫu giống phát mẫu giống chứa gen R3a mẫu giống: PI175419, PI473234, PI234013, PI47307, PI320342, PI338621, PI279278, hình 3.6 bảng 3.8 Như thị phân tử phát mẫu giống chứa gen kháng R1 mẫu giống chứa gen kháng R3a Những mẫu giống chứa gen R1 R3a cần đánh giá lây nhiễm nhân tạo xem có kháng chủng bệnh sương mai Việt Nam hay không Nếu giống chứa gen kháng tốt nguồn vật liệu khởi đầu vơ quý giá để tạo giống khoai tây kháng bệnh 10 11 12 13 14 15 1380 bp Hình 3.6 Điện di sản phẩm PCR phát gen kháng R3a Giếng 4, 5, 6, 8, 9, 10 11 có chứa đoạn thị nhân lên, giếng lại khơng có Học viện Nơng nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 69 Bảng 3.8 Mức độ nhiễm bệnh lây nhiễm nhân tạo T S T ê 1PI n 44 2PI G GC C e e h h 49 3PI 20 4PI 45 5PI 32 6PI 47 7PI 47 8PI 49 9PI 27 PI 16 PI 1 47 PI 27 PI 16 PI 47 PI 18 PI H 44 PI 27 PI 27 PI 47 PI 24 PI 21 PI 2 33 PI 28 PI 59 PI 55 PI H 24 PI 17 PI H 22 PI 33 PI 32 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 70 PI 31 PI 47 PI 3 47 PI H 27 PI 47 PI 24 PI 22 PI 47 PI 23 PI 49 PI 23 PI 28 PI H H 29 PI 4 23 PI 28 PI 58 PI 47 PI 13 PI 27 PI 28 PI 32 PI 13 PI H H H 32 PI 16 PI 5 31 PI 28 PI 27 PI 45 PI 23 PI 29 PI 33 PI 33 PI 32 H H Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 PI 32 PI H 28 PI 6 31 PI 45 PI 47 PI 47 PI 16 PI 21 PI 13 PI 17 PI 27 PI 47 PI H H 47 3.4 Phân lập nấm bệnh sương mai lây nhiễm đánh giá khả nhiễm Để phục vụ trình lây nhiễm nhân tạo thu thập phân lập bệnh sương mai Kết phân lập 02 mẫu bệnh đặt tên SM1 SM2 SM1 thu thập giống cà chua ST04 Bắc Giang, SM2 thu thập giống HT2 Hải Dương Tại thời điểm tiến hành thí nghiệm chúng tơi khơng thu thập mẫu nấm bệnh khoai tây nên bắt buộc phải sử mẫu bệnh sương mai cà chua Theo tác giả chủng nấm gây bệnh khoai tây chua nấm bệnh Phytophthora infestans gây nên Sử dụng Isolate lây nhiễm nhân tạo 76 mẫu giống phương pháp đĩa Mỗi giống đặt đĩa petri khay nhựa có dải lớp giấy thấm sau nhỏ bào tử với nồng độ 4.10 bào tử/ml Lây nhiễm xong khay nhựa chứa lây nhiễm ủ 18 C ngày sau đánh giá vết bệnh Diện tích vết bệnh < 1,0 cm kháng cao (HR) Diện tích vết bệnh từ 1,1-2,5 cm kháng R Diện tích vết bệnh 2,51-6,0 cm nhiễm vừa (M) Diện tích vết bệnh > 6,0 cm nhiễm nặng (S) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 72 Qua lây nhiễm nhân tạo nhận thấy tất mẫu giống chứa gen kháng R1 R3a kháng hoàn toàn isolate bệnh Điều khẳng định lại lần gen kháng R1 R3a kháng tốt chủng nấm gây bệnh châu nói chung Việt Nam nói riêng Một số giống khơng chứa gen kháng tốt như: PI 458395, PI 320315, PI 161172, PI160215, PI472759, PI186535, PI279276, PI275235, PI225673, PI473228, PI472823, PI498110, PI281112 có lẽ mẫu giống chúng chứa gen khác R1 R3a Qua lây nhiễm khẳng định isolate lây nhiễm isolate hoàn toàn khác phản ứng chúng mẫu giống khoai tây nghiên cứu khác Như lần khẳng định nấm bệnh gây bệnh sương mai cà chua khoai tây Trong nghiên cứu phân lập lây nhiễm isolate nên chưa đánh giá xác khả kháng gen R1 R3a Muốn chọn tạo giống kháng bệnh sương mai cần có chương trình nghiên cứu cụ thể Thứ phải thu thập, phân lập xác định số lượng phân bố chủng bệnh Thứ hai xác định gen kháng hữu hiệu chủng nấm có Thứ ba sử dụng gen kháng để lai chọn tạo giống Giống nhiễm Giống kháng Giống nhiễm Hình 3.7 Lây nhiễm đánh giá nhân tạo Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 73 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đã đánh giá đặc điểm nông sinh học 76 mẫu giống khoai tây nhận thấy chúng đa dạng phong phú Đa dạng kiểu sinh trưởng, đa dạng thân, hình dạng lá, hoa, củ, màu sắc củ Đây nguồn vật liệu vô quý để khai thác, lai tạo giống Ban đầu đánh giá suất yếu tố cấu thành suất mẫu giống, qua chọn lọc 18 giống có tiềm năng suất cao Đánh giá khả kháng, nhiễm bệnh đồng ruộng bệnh sương mai, đốm lá, bệnh héo xanh, bệnh héo vàng, bệnh ro virut gây ra, sâu xám Nhìn chung giống phần lớn kháng loại sâu bệnh nói - Ứng dụng thị phân tử ADN phát mẫu giống chứa gen R1 PI133713, PI320311, PI230557, PI133619 PI558139 mẫu giống chứa gen R3a PI175419, PI473234, PI234013, PI47307, PI320342, PI338621, PI279278 - Phân lập isolate nấm bệnh sương mai Bắc Giang Hải Dương ký hiệu SM1 SM2 Lây nhiễm isolate mẫu giống nghiên cứu nhận thấy tất mẫu giống chứa gen kháng R1 R3a kháng tốt với Isolate Ngồi chọn mẫu giống không chứa gen kháng kháng tốt với isolate này, có lẽ chúng chứa gen kháng khác Đề nghị - Vì mẫu giống khoai tây trồng từ hạt nên đạt suất thực thu chưa cao nên cần thu củ để giống, trồng lại vụ sau để có kết luận xác suất thực thu - Cần phải thu thập, phân lập xác định số lượng chủng bệnh sương mai miền Bắc Việt Nam từ sử dụng chúng để lây nhiễm nhân tạo để xác định gen kháng hữu hiệu bệnh - Sử dụng mẫu giống chứa gen kháng R1 R3a để lai tạo với giống chứa gen dựa vào đặc tính nở hoa từ tạo giống khoai tây F1 ưu lai hay giống khoai tây suất, kháng bệnh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hồ Hữu An (2005) Cây có củ kỹ thuật thâm canh khoai tây NXB Lao động xã hội PGS.TS Tạ Thu Cúc (2007) Giáo trình rau, Tr 141-169 Hà Viết Cường (2008) Bài giảng Miễn dịch học thực vật Đỗ Kim Chung(2003) Thị trường khoai tây Việt Nam NXB Văn hóa thơng tin Đường Hồng Dật (2005) Cây khoai tây kĩ thuật thâm canh tăng suất Nhà xuất Lao động xã hội Trương Văn Hộ , (1990) Những két nghiên cứu tiến kỹ thuật, NXB Hà Nội Mai Thạch Hoành ( 2003) Giống kỹ thuật thâm canh có củ Nhà xuất nơng nghiệp Tr 98-130 Vũ Triệu Mân, (1978) Bệnh virus hại khoai tây NXB khoa học kỹ thuật Hà Nội Vũ Triệu Mân, (1978) Một số nhận xét bệnh hại khoai tây, Báo cáo khoa học kỹ thuật NN1978, Trường ĐHHNN I Hà Nội NXB khoa học kỹ thuật 1986 Vũ Hướng Văn (2007), Khoai tây đâu thực phẩm http:// www.suckhoe360.com Trương Quang Vinh (2007), Phân tích đa hình ADN ứng dụng kĩ thuật ni cấy mơ thực vật vào việc nhân giống khoai tây củ bi bệnh, Luận văn thạc sĩ khoa học sinh học, Trường Đại học Sư phạm-Đại học Thái Nguyên Phan Hữu Tơn (2004) Giáo trình cơng nghệ sinh học chọn tạo giống trồng Nxb Nông nghiệp Nguyễn Quang Thạch, (1993) Một số biện pháp khắc phục thối hóa giống khoai tây sonalinum tuberosu mowr Đồng Bằng Bắc Bộ Luận án PTS KHNN trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Lý Anh, nguyễn Thị Phương Thảo (2005) Giáo trình cơng nghệ sinh học NXB Nông nghiệp Bộ NN PTNT (2011) chuẩn ngành QCVN 01-59 : 2011/BNNPTNT Tiếng anh Ballvora, A., Ercolano, M R., Weiss, J., Meksem, K., Bormann, C A., Oberhagemann, P., Salamini, F., and Gebhardt, C (2002) The R1 gene for potato resistance to late blight (Phytophthora infestans) belongs to the leu-cine zipper/NBS/LRR class of plant resistance genes Plant J 30:361-371 Berckx R (1967), Methodische untersuchungen uber den serologischen nachweis pflanzenpathogener viren mit dem bentonitflockungstest, den latex- text und dem bariumsulfat test, Phytopathologische Zeitschrift, 58, 1-17 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 75 Beukema,H.P and D.E VanderZaag.(1990), Introductionto potato production Pudoc Wageningen, 208 Bradshaw, J., Bryan, G., Lees, A., McLean, K., and Solomon-Blackburn, R (2006) Mapping the R10 and R11 genes for resistance to late blight (Phytophthora infestans) present in the potato (Solanum tuberosum) R- gene differentials of Black Theor Appl Genet 112:744-751 Collins, A., Milbourne, D., Ramsay, L., Meyer, R., Chatot-Balandras, C., Oberhagemann, P., de Jong, W., Gebhardt, C., Bonnel, E., and Waugh, R (1999) QTL for field resistance to late blight in potato are strongly correlated with maturity and vigour Mol Breed 5:387-398 DucreuxG.RossignolL.etM.(1989), Laprotectiondelapommedeterre”,Journeessd’informatin, Paris, pp.7–8 Ellis P., Stace-Smith R., Bowler G., Mackenzie D.J (1996), Production of monoclonal antibodies for detection and identification of strains of potato virus Y Plant Pathol, 18, 64-70 Ewing, E E., Simko, I., Smart, C D., Bonierbale, M W., Mizubuti, E S.G., May, G D., and Fry, W E (2000) Genetic mapping from field tests of qualitative and quantitative resistance to Phytophthora infestans in a population derived from Solanum tuberosum and Solanum berthaultii Mol Breed 6:25-36 Gebhardt, C., and Valkonen, J P (2001) Organization of genes controlling disease resistance in the potato genome Annu Rev Phytopathol 39:79-102 Gugerli P., Fries P (1983), Characterization of monoclonal antibodies to potato virus Y and their use for virus detection, J Gen Virol, 64, 24712477 Gardner, R G., and Panthee, D R (2010) ‘Plum Regal’ fresh-market plum tomato hybrid and its parents, NC 25P and NC 30P HortScience 45:824-825 Hein, I., Birch, P., Danan, S., Lefebvre, V., Achieng Odeny, D., Gebhardt, C., Trognitz, F., and Bryan, G (2009) Progress in mapping and cloning qualitative and quantitative resistance against Phytophthora infestans in potato and its wild relatives Potato Res 52:215-227 Hinrich J., Berger S., Shaw J.G.(1998): A hypersensitive response-like mechanism is involved in resistance of potato plants bearing the Rysto gene to the potyviruses potato virus Yand tobacco etch virus Journal of General Virology:167-176 Huang, S., Vleeshouwers, V G A A., Werij, J S., Hutten, R C B., van Eck, H J., Visser, R G F., and Jacobsen, E (2004) The R3 resistance to Phytophthora infestans in potato is conferred by two closely linked R genes with distinct specificities Mol Plant-Microbe Interact 17:428-435 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 76 Kerlan C (2008), Potato Viruses, @ 2008 Elsevier Ltd All rights reserved Macdec P (1963), "Tuber forming substances in the potato", The Growth of the potato, pp 121- 130 Li, G., Huang, S., Guo, X., Li, Y., Yang, Y., Guo, Z., Kuang, H., Rietman, H., Bergervoet, M., Vleeshouwers, V., van der Vossen, E A G., Qu, D., Visser, R., Jacobsen, E., and Vossen, J (2011) Cloning and characterization of R3b; Members of the R3 superfamily of late blight resistance genes show sequence and functional divergence Mol Plant-Microbe Interact Lokossou, A A., Rietman, H., Wang, M., Krenek, P., van der Schoot, H., Henken, B., Hoekstra, R., Vleeshouwers, V G A A., van der Vossen, E A G., Visser, R G F., Jacobsen, E., and Vosman, B 2010 Diversity, distribu- tion, and evolution of Solanum bulbocastanum late blight resistance genes Mol Plant-Microbe Interact 23:1206-1216 Naess, S K., Bradeen, J M., Wielgus, S M., Haberlach, G T., McGrath, J M., and Helgeson, J P (2001) Analysis of the introgression of Solanum bulbocastanum DNA into potato breeding lines Mol Genet Genom 265:694-704 Panthee, D R., and Chen, F (2010) Genomics of fungal disease resistance in tomato Curr Genom 11:30-39 Park, T H., Gros, J., Sikkema, A., Vleeshouwers, V G A A., Muskens, M., Allefs, S., Jacobsen, E., Visser, R G F., and van der Vossen, E A G 2005 The late blight resistance locus Rpi-blb3 from Solanum bulbocasta-num belongs to a major late blight R gene cluster on chromosome of po- tato Mol PlantMicrobe Interact 18:722-729 Salaman, R.N.(1949), Somenotesonthehistoryofcurl, p.118–128 Smilde, W D., Brigneti, G., Jagger, L., Perkins, S., and Jones, J D G 2005 Solanum mochiquense chromosome IX carries a novel late blight re- sistance gene Rpi-moc1 Theor Appl Genet 110:252-258 Simko, I., Costanzo, S., Ramanjulu, V., Christ, B J., and Haynes, K G (2006) Mapping polygenes for tuber resistance to late blight in a diploid So- lanum phureja × S stenotomum hybrid population Plant Breed 125:385-389 Śliwka, J., Jakuczun, H., Lebecka, R., Marczewski, W., Gebhardt, C., and ZimnochGuzowska, E (2007) Tagging QTLs for late blight resistance and plant maturity from diploid wild relatives in a cultivated potato (Solanum tuberosum) background Theor Appl Genet 115:101-112 Śliwka, J., Jakuczyn, H., Kaminski, P., and Zimnoch-Guzowska, E (2010) Markerassisted selection of diploid and tetraploid potatoes carrying Rpi- phu1, a major gene for resistance to Phytophthora infestans J Appl Genet 51:133140 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 77 Sokolova, E., A Pankin, M Beketova, M Kuznetsova, S Spiglazova, E Rogozina, I Yashina, and E Khavkin, 2011: SCAR markers of the R-genes and germplasm of wild Solanum species for breeding late blight-resistant potato cultivars Plant Genet Resour.9, 309—312 Song, J., Bradeen, J M., Naess, S K., Raasch, J A., Wielgus, S M., Haberlach, G T., Liu, J., Kuang, H., Austin-Phillips, S., Buell, C R., Hel- geson, J P., and Jiang, J (2003) Gene RB cloned from Solanum bulbocasta- num confers broad spectrum resistance to potato late blight Proc Natl Acad Sci USA 100:9128-9133 Umaerus, V., and Umaerus, M (1994) Inheritance of resistance to late blight In: Potato Genetics Van der Zaag, D.E (1976), “Potato production and utilization in the world”, Am J PotatoRes.19,pp.37 – 72 Van der Vossen, E A G., Gros, J., Sikkema, A., Muskens, M., Wouters, D., Wolters, P., Pereira, A., and Allefs, S (2005) The Rpi-blb2 gene from Solanum bulbocastanum is an Mi-1 gene homolog conferring broad-spectrum late blight resistance in potato Plant J 44:208-222 Van der Vossen, E., Sikkema, A., Hekkert, B.-t L., Cros, J., Stevens, P., Muskens, M., Wouters, D., Pereira, A., Stiekema, W J., and Allefs, S (2003) An ancient R gene from the wild potato species Solanum bulbocastanum confers broad-spectrum resistance to Phytophthora infestans in cultivated potato and tomato Plant J 36:867-882 Vleeshouwers, V., Raffaele, S., Vossen, J., Champouret, N., Oliva, R., Segretin, M E., Rietman, H., Cano, L M., Lokossou, A., and Kessel, G (2011) Understanding and exploiting late blight resistance in the age of effectors Annu Rev Phytopathol 49:507-531 Visker, M H P W., Heilersig, H J B., Kodde, L P., Van de Weg, W E., Voorrips, R E., Struik, P C., and Colon, L T 2005 Genetic linkage of QTLs for late blight resistance and foliage maturity type in six related po-tato progenies Euphytica 143:189-199 Vivianne G.A.A Vleeshouwers, Sylvain Raffaele, Jack H Vossen, Nicolas Champouret, Ricardo Oliva, Maria E Segretin, Hendrik Rietman, Liliana M Cano, Anoma Lokossou, Geert Kessel, Mathieu A Pel, and Sophien Kamoun: Understanding and Exploiting Late Blight Resistance in the Age of Effectors Annu Rev Phytopathol 2011 49:507–31 Wang, M., Allefs, S., van den Burg, R G., Vleeshouwers, V G A A., Van der Vossen, E A G., and Vosman, B (2008) Allele mining in Solanum: Conserved homologues of Rpi-blb1 are identified in Solanum stolo- niferum Theor Appl Genet 116:933-943 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 78 Wenzel et al (1979) Comparion of single cell culture derived Solanum tuberosum.L Plants and model of their application in breeding programs Walkey D.G.A., Webb M.J.W (1984), The use of a simple electron microscope serology procedure to observe relationships of seven potyviruses, Phytopathologische Zeitschrift, 110, 319-327 http://ec.europa.eu/agriculture/fruit-and-vegetables/product-reports/potatoes/expertgroup/potatoes-2012-12_en.pdf https://www.academia.edu/1497480/Plant_disease_resistance_genes_Current_status _and_future_directions http://faostat.fao.org/ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 79 ... tạo giống kháng bệnh sương mai tiến hành thực đề tài: Khảo sát chọn giống khoai tây kháng bệnh sương mai thị phân tử DNA Mục tiêu yêu cầu đề tài 2.1 Mục tiêu Đánh giá đặc điểm nông sinh học giống. .. giống khoai tây kháng bệnh sương mai Các thị phân tử DNA dựa PCR cho gen R1 R1F/R(76-2sf2/76-2SR)), gen R3a R3-1380 nhiều nhà chọn giống giới sử dụng để phát chọn lọc giống khoai tây kháng bệnh sương. .. NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÂM MAI TÙNG KHẢO SÁT CHỌN GIỐNG KHOAI TÂY KHÁNG BỆNH SƯƠNG MAI BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ DNA CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ : 60.42.02.01