KHẢO sát THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN III CAO n HEXANE của lá cây TRÔM (STERCULIA FOETIDA LINN)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN III CAO nHEXANE CỦA LÁ CÂY TRÔM (STERCULIA FOETIDA LINN) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 1.1 Mơ tả chi Trơm (Sterculia) “Trên giới, chi Sterculia có khoảng 200 lồi phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới.”[5] “Theo Phạm Hoàng Hộ [5], chi Sterculia Việt Nam có khoảng 25 lồi Sterculia alata, Sterculia bracteata, Sterculia hymenoealyx, Sterculia nobilis, Sterculia cochinchinensis, Sterculia stigmarota, Sterculia foetida, Sterculia gracilipes, Sterculia henryi, Sterculia hypoehrea, Sterculia hypostieta, Sterculia rubiginosa, Sterculia laneeolata, Sterculia lissophylla, Sterculia parviflora, Sterculia pexa, Sterculia pierrei, , Sterculia principis, Sterculia radicans, Sterculia scandens, Sterculia thorelii, Sterculia tonkinensis, Sterculia populifolia.” 1.1.1 Vị trí phân loại “Theo tài liệu Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam tác giả Võ Văn Chi [3] chi Sterculia thuộc: • • • • • Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Hành (Liliidae) Bộ: Cẩm Q (Malvales) Họ: Trơm (Sterculiaceae).” 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Trôm (Sterculia) “Cây gỗ hay bụi Lá có cuống có kèm, kép chẻ ngón, có thùy chân vịt hay nguyên Cụm hoa gồm chùm hay thùy, nách lá, tập hợp gần nhánh; hoa đực hay hoa lưỡng tính có bao hoa giống Đài hình hũ, hình ống dạng chng hình ống, có thùy, thường có màu Tràng khơng có Bầu khơng sinh sản gồm nỗn bị thui biến, rời; đính gốc đấu Lá nỗn 3, thường 5, dính nhau, vòi nhụy có rãnh, đầu nhụy dạng đĩa, có thùy hay thùy nhỏ; noãn tới nhiều nỗn Hoa lưỡng tính có cuống nhị thường ngắn hơn, mang đỉnh giãn thành vòng bao phấn không cuống, thường sinh sản bầu sinh sản Hoa đực có nhị tập hợp thành đầu đỉnh cột (cuống nhị); bao phấn ô, xếp 1-2 dãy, đỉnh cột, không cuống đầu tạo thành đỉnh cột nhị giãn lõm Quả gồm đại, trải thành vòng tròn, có cuống hay khơng, dạng màng hay hóa gỗ, mở trước sau chín LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang đường nứt bụng; hạt hay hơn, thường 4-5 hình trứng, có phơi nhũ nạc dính với mầm mơng.”[8] 1.1.3 Đặc điểm thực vật số lồi Trôm (Sterculia) 1.1.3.1 Cây Sterculia colorata “Cây cao 20m, rụng vào mùa khô; nhánh non, không lông Phiến đa dạng, gân từ đáy 3-7, không thùy đến năm thùy, không lông, cuống dài 7-18 cm, bẹ 1cm Chùm tụ tán hẹp, nhánh chưa lá, có lơng màu đỏ chói; có lơng mặt ngồi, dài cao 2cm; đài không lông Manh nang mỏng, dài 10cm, không lông; hột 1-2.” [3] Phân bố: Thế giới: Thái Lan, Campuchia, Philippin Việt Nam: Ninh Thuận, Khánh Hòa, Bình Thuận, Bà Rịa - Vũng Tàu, Đồng Nai [3] Cây 1.1.3.2 Hình 1-1: Thân, hoa Sterculia colorata Sterculia lychnophora “Cây lớn lên đến độ cao 25-30 mét hơn, nhiều sợi, vỏ dày, cành non có cạnh có lông màu Lá to dày, mọc so le tập trung đầu cành, xẻ thùy con, đơn nguyên trưởng thành, rộng 7-22cm, dài 15-40cm Hoa nhỏ mọc thành chùy đầu cành trước lá, chín màu đỏ, tự tách để phát tán học xa Hạt hình bầu dục thuôn, rộng 1,2 cm – 2,5cm, dài 2,5cm – 3,5 cm, màu đỏ nhạt, vỏ hạt nhăn nheo, dính gốc quả.” Phân bố: Việt Nam, Thái Lan, Malaysia, Lào, Campuchia, Indonesia, Trung Quốc LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang Hình 1-2: Thân Sterculia lychnophora 1.1.3.3 Cây Sterculia striata “Cây gỗ to, thân trơn láng, cao 8-15m, có đường kính đường kính 40cm, vỏ màu đen có Lá hình chân vịt có thùy, có hai thùy chồng lên Quả màu đỏ, mọc thành chùm, tự tách Phân bố: Paraguay, Nam Mỹ - Argentina, miền trung, đông bắc Brazil, Bolivia.”[10] 1.1.3.4 Cây Hình 1-3: Thân, Sterculia striata Sterculia villosa “Cây trung bình, rụng có vỏ trắng; chi nhánh Lá 30-45.5cm chiều, diềm cơ, lõm sâu 5-7 lát, sọc lót phía trên, thùy sáng, ngón; cánh hoa với Hạt 30-35cm, có nhiều nhánh, rải rác, rậm rạp Hoa nhỏ, hoa đực nhiều hoa Bạt 3.75-5cm, lan rộng, thuôn, rậm rạp Trái dài 4-8cm, cong, xanh tươi đỏ chín ” Phân bố: Bangladesh, Ấn độ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang Hình 1-4: Lá, hoa Sterculia villosa 1.2 Mô tả Trôm (Sterculia foetida L.) 1.2.1 Giới thiệu chung • • • • • Tên khoa học: Sterculia foetida Linn Bộ: Trôm (Malvales) Họ: Sterculiaceae Chi: Sterculia (chi Trơm) Lồi: Sterculia foetida Linn 1.2.2 Mơ tả thực vật Trôm (Sterculia foetida L.) “Cây gỗ lớn, rụng hàng năm, thân hình trụ thẳng, vỏ xám nhạt, nứt nhẹ, cao 2530 m, đường kính 60-80 cm Cành mập, thơ, có nhiều sẹo hình tim Lá kép chân vịt, có cuống dài, mọc so le; chét 5-9, mặt nhạt, mặt màu lục xám, hình mác, kèm dễ rụng Cụm hoa mọc ngọn, gồm chùm hẹp, nhẵn, thường xuất non, dài 15-20 cm, hoa tạp tính, màu đỏ có mùi thối, nên có tên trơm thối; đài hình ống, mặt đỏ có lơng; khơng có cánh hoa; hoa đực có cuống, nhị mở thành dạng chén đầu, bao phấn 15-20, hoa có bầu hình cầu họp nỗn, nỗn có 8-15 nỗn Quả gồm 1-5 đại chỗi ra, màu đỏ tím, có lơng, vỏ dày, mở giống mõ, hạt 10-15, màu đen nhẵn Trôm rụng vào tháng ba Mùa hoa tháng 2-3, mùa tháng 5-9.”t[3] Hình 1-5: Thân, lá, hoa Trơm LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang Hình 1-6: Hạt, mủ Trơm tươi mủ Trôm khô 1.2.3 Phân bố “Việt Nam: Trôm phân bố tự nhiên tỉnh Tây Nguyên như: Kon Tum, Gia Lai, Đắk Lắk, Lâm Đồng tỉnh miền dun hải Nam Trung Bộ: Khánh Hòa, Bình Thuận, Ninh Thuận Ở Ninh Thuận, Trôm phân bố nhiều nơi, đặc biệt nhiều vùng rừng ven biển thuộc xã Phước Dinh, huyện Ninh Phước Trôm trồng nhiều thành phố lớn Hà Nội, thành phố Hồ Chí Minh, Vũng Tàu, Bn Mê Thuột để làm cảnh bóng mát cơng viên, đường phố Thế giới: Trôm phân bố nước thuộc châu Âu, Châu Phi châu Á như: Úc, Ấn Độ , Bangladesh, Indonesia, Kenya, Pakistan, Sri Lanka, Myanmar, Malaysia, Thái Lan , Philippines, Somalia, Tanzania, Lào, Campuchia, Philippin,Trung Quốc, ” [3] 1.2.4 Công dụng “Trên Trôm nhựa mủ, vỏ cây, lá, hạt gỗ thành phần người sử dụng với nhiều mục đích khác Theo y học cổ truyền, mủ Trơm xem thuốc nhuận tràng, dùng điều trị chứng táo bón Mủ Trơm có tác dụng điều hòa đường huyết, ổn định huyết áp, mát gan giải độc, giúp mau lành vết thương, hỗ trợ điều trị xơ gan, kiết lị mụn nhọt Chính Việt Nam mủ Trôm trở thành loại nước giải khát ưa chuộng hai địa phương tiếng với sản phẩm huyện Tuy Phong, tỉnh Bình Thuận Phan Rang, tỉnh Ninh Thuận Ngồi giới sử dụng mủ Trơm làm polime quan trọng phẫu thuật thẩm mĩ mắt [4] LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang Hạt Trơm có thành phần chứa nhiều protein chất béo sử dụng làm dầu ăn dầu thắp sáng Những chiết xuất từ hạt Trôm dùng làm nguyên liệu tổng hợp nên phân tử nano Ag dùng làm thuốc chống muỗi vectơ kháng tế bào ung thư HeLa Ấn Độ [5] Vỏ thân non Trôm dùng chữa thấp khớp Nước sắc để chữa vết thương mưng mủ Chiết xuất từ Trôm sử dụng làm chất kháng khuẩn, kháng nấm kháng sinh Philippin [6] Ở Nhật Bản, Ấn Độ tinh dầu chiết xuất từ hạt Trôm sử dụng làm nguyên liệu tổng hợp sản phẩm chăm sóc da [7] Nghiên cứu nhóm nhà hóa học Trung Quốc chứng minh Trôm chứa thành phần flavonoid glycoside phenylpropanoid glucose ester có tác động đến thần kinh trung ương, điều trị chứng khó ngủ, ngủ [8] Lá Trơm chứng minh chứa thành phần có tác dụng giảm đường huyết, kháng lậu kháng viêm gan nhóm nhà hóa học Ấn Độ [9] Ở Việt Nam, Trôm người dân sắc nước rửa chỗ phát ban, lỡ loét, bệnh da, bệnh tóc da đầu, bong gân, vết đứt, vết cắn, vết thương khác [10] Tuy nhiên chưa có cơng trình nghiên cứu khoa học thành phần hóa học hợp chất Trơm dược tính chúng Vì việc nghiên cứu thêm cần thiết, nhằm làm sáng tỏ vai trò việc chữa bệnh mà dân gian sử dụng, góp phần củng cố phát triển thuốc y học cố truyền từ Trôm cách thuyết phục nhất.” 1.3 Thành phần hóa học 1.3.1 Cây Trôm (Sterculia foetida Linn) 1.3.1.1 Vỏ Trôm “Năm 1981, Anjaneyulu A.S.R cộng [11] cô lập từ vỏ Sterculia foetida L thu mẫu New Delhi, Ấn Độ hợp chất, gồm dẫn xuất quercetin có dược tính kháng oxi hóa trị nấm [21] quercetin 3,7,3’,4’-tetramethyl ether (1) quercetin 5,7,3’,4’-tetramethyl ether (2), hợp chất steroid β-sitosterol (3), β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside (4), hợp chất triterpene taraxerol (5), lupeol (6), lupenone (7), hợp chất ancohol gồm n-octacosanol (8) n-hexacosanol (9).” LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang Quercetin 3,7,3’,4’-tetramethyl ether (1) β-Sitosterol (3) Taraxerol (5) Quercetin 5,7,3’,4’-tetramethyl ether (2) β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside (4) Lupeol (6) Lupenone (7) HO-(CH2)28-CH3 n-Octacosanol (8) HO-(CH2)26-CH3 n-Hexacosanol (9) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 1.3.1.2 Rễ Trôm “Năm 1991, Dubey H cộng [12] cô lập từ rễ Trôm thu mẫu New Delhi hợp chất bao gồm flavonol có hoạt tính chống co giật giảm suy nhược thần kinh trung ương [13] quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (10) anthocyanin leucoanthocyanidin-3-O-α-L-rhamnopyranoside (11).”t Quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (10) Leucoanthocyanidin-3-O-α-L-rhamnopyranoside (11) 1.3.1.3 Lá Trôm “Năm 2006, Shi G.Z.và cộng [13] cô lập từ cao ethanol Trơm thu mẫu Bắc Kinh hợp chất, có hoạt tính điều trị bệnh rối loạn nhịp tim chữa bệnh lậu [13] Ba hợp chất cô lập gồm hợp chất flavonoid 6-hydroxyluteolin 6-O-β-Dglucuronide (12), hợp chất anthocyanin cyanidin 3-O-glucoside (13) procyanidinβ-D-glucuronide (14).” “Năm 2009, Xia P cộng [13], [14] trường cao đẳng Y Tế Cộng Đồng Bắc Kinh nghiên cứu cô lập từ Trôm thu mẫu Bắc Kinh 23 hợp chất bao gồm 15 hợp chất flavone có hoạt tính lợi tiểu, hỗ trợ thần kinh làm thuốc chống côn trùng apigenin (15), apigenin 7-O-β-D-glucuronide 6"-ethyl ester (16), isoscutellarein 8-O-β-D- LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 10 glucopyranoside (17), luteolin (18), luteolin 7-O-β-D-glucoside (19), luteolin 7-O-β-Dglucuronide (20), luteolin 7-O-β-D-glucuronide 6"-methyl ester (21), luteolin 7-O-β-Dglucuronide 6"-ethyl ester (22), luteolin 3'-methyl ether (chrysoeriol) (23), chrysoeriol 7O-β-D-glucuronide (24), 8-hydroxyluteolin 8-O-β-D-glucuronide (hypolaetin 8-O-βglucuronide) (25), hypolaetin 8-O-β-D-glucuronide 6''-methyl ester (26), hypolaetin 8-Oβ-D-glucuronide 6"-ethyl ester (27), hypolaetin 3'-methyl ether 8-O-β-D-glucuronide 6''methyl ester (28), hypolaetin 4'-methyl ether 3'-O-β-D-glucoside (29), hợp chất flavonol quercetin (30), hợp chất phenolic gồm p-hydroxy benzoic acid (31), 3,4- dihydroxy benzoic acid (32), hợp chất phenylpropanoid p- hydroxy coumaric acid (33), transferulic acid-β-glucoside (34), hợp chất coumarin scopoletin 7-O-β-D- glucoside (35), hợp chất steroid gồm β-sitosterol (3), 5α,6β-dihydroxy daucosterol (36) Năm 2009, Xia P cộng [14] nghiên cứu thành phần hóa học Trôm thu mẫu Bắc Kinh, Trung Quốc cô lập hợp chất flavonoid bao gồm 5,7,8,3'tetrahydroxy-4'-methoxyflavone-8-O-β-D-glucoside (37), 5,7,8-trihydroxy-4'methoxyflavone 7-O- β -D-glucoside (38), quercetin 3-O- β -D-glucoside (39), apigenin6, 8-di-C- β -D-glucoside (40), puerarin (41), 5,7,8,3'-tetrahydroxy-4'-methoxyflavone (42), 5,7,8-trihydroxy-3',4'-dimethoxyflavone (43), 5,7,8-trihydroxy-4'-methoxyflavone (44) Năm 2010, Shamsundar S.G cộng [15] thuộc trường đại học Gulbarga, Ấn Độ cô lập từ cao ethanol Trôm thu mẫu vườn trồng khu vực Gulbarga, Karnataka, Ấn Độ hợp chất flavone từ trôm vào thời điểm 6hydroxyapigenin (scutellarein) (45) scutellarein 6-O-β-D-glucuronide (46).” 6-Hydroxyluteolin 6-O-β-D-glucuronide (12) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 19 Kaempferol-3-O-β-D- glucoside (62) Succinic acid (64) Daucosterol (66) Uracil (63) 2,4-Dihydroxy benzoic acid (65) Sucrose (67) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 20 STT R 68 H 69 n-Butyl-α-D-mannopyranoside (70) Tên Kaempferol 3-O-β-D-rutinoside OCH3 Isorhamnetin-3-O-β-D-rutinoside Adenosine (71) 1.3.2.2 Cây Sterculia striata “Năm 2010, Costa DA.và cộng sự[2] cô lập steroid: β-sitosterol (1), βsitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside (2), stigmasterol (72) triterpenes: lupeol (5), lupenone (6), betulinic acid (73), từ thân, S striata.” Betulinic acid (72) Stigmasterol (73) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 21 1.3.2.3 Cây Sterculia villosa “Năm 2012, Hossain M.K cộng [11] cô lập từ thân Sterculia villosa chợp chất flavone: luteolin 3'-methyl ether (chrysoeriol) (28), chrysoeriol 7-O-β-Dglucoside (74), luteolin 4'-methyl ether (diosmetin) (75) diosmetin-7-O-β-D-glucoside (76).” Chrysoeriol 7-O-β-D-glucoside (74) Diosmetin (75) Diosmetin 7-O- β-D-glucoside (76) 1.3.2.4 Cây Sterculia colorata “Năm 2014 Rajasekharreddy P cộng [15] cô lập từ S.colorata hợp chất: luteolin (23),luteolin 7-O-β-D-glucuronide (25), 6-hydroxyluteolin (55), 6hydroxyluteolin 6-O-β-D-glucuronide (22), apigenin 8-O-β-glucoside (vitexin) (56) apigenin (35), apigenin 7-O-β-D-glucuronide (57), 6-hydroxyapigenin (scutellarein) (53).” 1.4 Hoạt tính sinh học 1.4.1 Cây Trôm “Theo số nghiên cứu khoa học Trơm có hoạt tính sau : LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 22 Cao methanol Trôm với nồng độ 200 mg/kg 400 mg/kg có hoạt tính sinh học chống đái tháo đường hạ huyết áp [3] Dịch chiết ethanol 95% Trơm có hoạt tính sinh học kháng khuẩn (Escherichia coli,Staphylococcus aureus), kháng nấm, kháng độc tế bào [5] Theo nghiên cứu vào năm 2014, nhà hóa học Rajasekharreddy P, Pathipati UR chứng minh số chiết xuất từ hạt Trôm với nồng độ 25 đến 65 mg / L có hoạt tính chống muỗi vectơ kháng tế bào ung thư HeLa Ấn Độ [8] Hợp chất (2n-octylcycloprop-1-enyl)-octanoic acid chiết xuất từ hạt Trôm với liều lượng 0,2 mg/cm2 dùng làm thuốc diệt côn trùng Ấn Độ [9].” 1.4.2 Các chi Sterculia “Theo số nghiên cứu khoa học số loài thuộc chi Sterculia: Hai hợp chất cerebroside phân lập từ hạt hạt Sterculia lychnophora có hoạt tính bảo vệ thần kinh trung ương, chống tổn thương tế bào SH-SY5Y gây H2O2 [18] Từ vỏ, thân Sterculia striata cô lập số hợp chất có hoạt tính sinh học kháng oxi hóa [3] Cao ethanol vỏ Sterculia villosa có hoạt tính sinh học kháng viêm điều trị bệnh đái tháo đường [17].” LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 23 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu “Lá Trôm (Sterculia foetida L.) thu hái khu vườn trồng nông dân Trần Văn Thành thôn 3, xã Vũ Hòa, huyện Đức Linh, tỉnh Bình Thuận vào tháng 10 năm 2017 Cây sau thu hái định danh tiến sĩ Đặng Văn Sơn, viện sinh học nhiệt đới TPHCM.” 2.2 Nhiệm vụ - Thu mẫu, giám định tên khoa học Điều chế cao tổng vao phân đoạn Phân lập hợp chất phân đoạn III cao n-hexane Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 2.3 Nơi thực Phòng nghiên cứu hóa học hợp chất thiên nhiên (phòng 19, lầu 1) - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, số 01 Mạc Đĩnh Chi, phường Bến Nghé, quận 1, Tp Hồ Chí Minh 2.4 Thiết bị, dụng cụ hoá chất 2.4.1 Thiết bị, dụng cụ - Cột sắc ký đường kính từ 0,5- 5,5 cm Cân phân tích AND HR-200 Kẹp sắt dùng để treo cột, giá sắt Máy đánh siêu âm MCC Ultrasonic Cleaner Máy cô quay thu hồi dung môi áp suất thấp Eyela Một số dụng cụ thuỷ tinh bao gồm cột thủy tinh, cốc, bình sắc ký, phễu lọc, bình - quay, ống đong, ống nghiệm, lọ bi Giấy lọc Advantec Đèn UV bước sóng 254 - 365 nm Bếp hồng ngoại Midea MIR-B2017DD Máy sấy Panasonic Bể rửa siêu âm gia nhiệt Ống vi quản (Kapillaren) chấm mỏng, kẹp gắp mỏng LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 24 2.4.2 Hóa chất - Sắc kí lớp mỏng thực mỏng tráng sẵn DC- Alufolien F 254 - (Merck) dùng cho pha thường Hạt silicagel (Merck) pha thường cỡ hạt 0,04 – 0,06 mm Dung mơi hữu dùng cho q trình thí nghiệm gồm: n-hexane, ethyl acetat, - chloroform, methanol, ethanol, nước cất Thuốc thử hình vết chất hữu mỏng: H2SO4 10% 2.5 Phương pháp phân lập cách hợp chất 2.5.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) “Sắc ký lớp mỏng dựa vào tượng hấp thu Trong đó, pha động dung mơi hỗn hợp dung môi, di chuyển ngang qua pha tĩnh chất hấp thu trơ silicagel, aluminium oxide Pha tĩnh tráng thành lớp mỏng, đều, phủ lên bề mặt phẳng (tấm nhôm plastic) Sắc ký lớp mỏng thực mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715) Phát chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm 365 nm dùng thuốc thử H2SO4 10% phun lên mỏng, sấy khơ hơ nóng bếp điện từ từ đến màu.” 2.5.2 Sắc ký cột (CC) “Sắc ký cột phương pháp tách chất dựa vào độ phân cực chất Ở phương pháp này, pha tĩnh chất nhồi cột, silicagel, pha động dung môi Thứ tự khỏi cột: hợp chất có lực nhiều với pha động có xu hướng khỏi cột trước, hợp chất có lực nhiều với pha tĩnh bị giữ lại cột lâu sau [5] Sắc ký cột tiến hành cột thủy tinh, với chất nhồi cột silicagel pha thường với kích thước hạt 0,040-0,063 mm (240-430 mesh).” 2.6 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học “Để xác định cấu trúc hóa học hợp chất sử dụng kết hợp xác định thông số vật lý phương pháp phổ đại đồng thời kết hợp phân tích, tra cứu tài liệu tham khảo Phương pháp sử dụng là: Phổ cộng hưởng từ nhân (NMR) [4].” Phổ NMR đo máy Bruckker avance 500 MHz (Chất chuẩn nội TMS), Viện Hoá học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Các kỹ thuật phổ cộng hưởng từ hạt nhân sử dụng bao gồm: LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 25 - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều: 1H-NMR, 13C-NMR DEPT Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều: HSQC, HMBC Dung môi sử dụng dung môi CDCl3 Việc lựa chọn dung môi đo phụ thuộc vào chất mẫu, theo ngun tắc dung mơi phải hòa tan hồn toàn mẫu thử   LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 26 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM 3.1 Thu hái xử lí mẫu “Thu hái Trơm (Sterculia foetida L.) khu vườn trồng nông dân thơn 6, xã Vũ Hòa, huyện Đức Linh, tỉnh Bình Thuận vào tháng 10 năm 2017 Từ 30 kg tươi sau thu hái rửa sạch, phơi khơ tự nhiên khơng khí nhiệt độ phòng (khoảng 20oC-30oC), tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh nắng mặt trời khoảng thời gian 14 ngày, thu 12 kg mẫu Trơm khơ.” 3.2 Quy trình chiết cao “Bột Trơm khơ (12 kg) trích ethanol 96 theo phương pháp ngâm dầm nhiệt độ phòng phòng thí nghiệm khoa mơi trường Đại học Sài Gòn Cơ quay thu hồi dung mơi áp suất thấp, thu 1.83 kg cao ethanol thô Thực phương pháp chiết lỏng – lỏng cao ethanol thô với dung môi: hexane, chloroform ethyl acetate Đuổi dung môi phần dịch chiết, thu phân đoạn cao tương ứng: cao hexane (450 g), cao chloroform (650 g), cao ethyl acetate (30.1 g) dịch chiết lại Từ cao phân đoạn tiến hành cô lập hợp chất phương pháp sắc ký cột, sắc ký mỏng, sắc ký điều chế Quy trình điều chế loại cao từ Trơm (Sterculia foetida L.) trình bày cụ thể sơ đồ 1.” LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 27 Lá Trơm tươi Sterculia foetida L (30.0 kg) phương pháp phổ n sát cấu trúc bệmĐ Phơi khô, xay nhuyễn Bột Trôm khô (12.0 kg) * Ngâm dầm với ethanol * Lọc, cô quay, thu hồi dung môi Cao ethanol thô (1.83 kg) Bột Trôm khô (12.0 kg) * Chiết lỏng – lỏng với hexane Cao n-hexane (450.5 g) Dịch chiết lại * Chiết lỏng – lỏng với chloroform Cao chloroform (650 g) Dịch chiết lại * Chiết lỏng – lỏng với ethyl acetate * Lọc, cô quay, thu hồi dung môi Cao ethyl acetate (30.1 g) Dịch chiết lại Các hợp chất cô lập * SKC silica gel * SKLM điều chế LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 28 Khảo sát cấu trúc phương pháp phổ nghiệm Sơ đồ 1: Quy trình lập hợp chất Trôm (Sterculia foetida L.) 3.3 Phân lập hợp chất 3.3.1 Chuẩn bị sắc ký cột 3.3.1.1 Nhồi cột - Chọn cột phù hợp với lượng cao chuẩn bị, làm khơ cột Cho bơng gòn đáy cột, phía vòi nhỏ giọt, để silicagel khơng - chảy ngồi Cân lượng silicagel vừa đủ cho vào cốc thuỷ tinh với dung mơi phân cực, - trộn Đổ hỗn hợp silicagel dung môi vào cột Mở cột chạy để ổn định cột 3.3.1.2 Nạp cao vào cột - Làm khơ cao với silicagel thành hỗn hợp bột khô, mịn đồng Cho hỗn hợp vào cột chuẩn bị phễu thuỷ tinh Tiếp đó, cho từ từ dung mơi vào cột tiến hành phân lập 3.3.2 Phân lập hợp chất cao n-hexane Tiến hành sắc ký cột cao n-hexane với hệ dung môi n-hexane (H) : ethyl ecetat (EA) (100% H, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1, 100%Ea) Sau đó, dung dịch nhạt màu thay hệ ethyl acetat (EA) : methanol (Me) (10:1) Trong suốt trình chạy sắc ký cột, sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) giải ly hệ H:EA hay Clo:Me theo tỉ lệ thích hợp để kiểm tra thăm dò chất có cao thơ phân đoạn, gom phân đoạn có vết giống lại Từ cao n-hexane ban đầu phân phân đoạn là: H1 (56 g), H2 (40 g), H3 (60 g), H4 (70 g), H5(58 g), H6 (65 g), H7 (55 g)  Phân lập phân đoạn H3 (60 g) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 29 Từ phân đoạn H3, ta tiếp tục thực sắc ký cột để phân lập hợp chất với hệ dung môi n-hexane (H) : ethyl ecetat (EA) (10:1, 5:1, 3:1,1:1) Kiểm tra thăm dò vết sắc ký mỏng TLC giải ly hệ H:EA Ta gom phân đoạn có vết giống lại thu phân đoạn: H3-I, H3-II, H3-III Qua kiểm tra phân đoạn TLC, ta nhận thấy phân đoạn H3-II H3-III xuất vết đẹp, rõ ràng phân đoạn khác nên tiếp tục khảo sát phân đoạn H3-II H3-III  Phân lập phân đoạn H3-II Phân đoạn H3-II tiếp tục thực sắc ký cột với với hệ dung môi n-hexane (H) : ethyl ecetat (EA) (5:1, 3:1, 1:1, 1:2) Kiểm tra thăm dò vết sắc ký mỏng TLC giải ly hệ H:EA Ta gom phân đoạn có vết giống lại thu phân đoạn: H3-II.1, H3-II.2, H3-II.3, H3-II.4, H3-II.5 Qua kiểm tra phân đoạn TLC, ta nhận thấy phân đoạn H3-II.4 có vết đẹp, nên tiếp tục thực sắc ký cột thu mẫu LT02  Phân lập phân đoạn H3-III Phân đoạn H3-III tiếp tục thực sắc ký cột với với hệ dung môi n-hexane (H) : ethyl ecetat (EA) (3:1, 1:1, 1:2 ) Kiểm tra thăm dò vết sắc ký mỏng TLC giải ly hệ H:EA Ta gom phân đoạn có vết giống lại thu phân đoạn: H3-III.1, H3-III.2, H3-III.3, H3-III.4 Qua kiểm tra phân đoạn TLC, ta nhận thấy phân đoạn H3-III.3 có vết đẹp, nên tiếp tục thực sắc ký cột thu mẫu LT04 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 30 Cao n-hexane (450.5 g) SKC: H:Ea (100% H, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1, 100%Ea) Ea:Me (10:1) H:Ea (20:1) 100% H H:Ea (10:1) H:Ea (5:1) Ea:Me (10:1) 100% Ea H:Ea (1:1) H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 (56 g) (40 g) (60 g) (70 g) (58 g) (65 g) (55 g) SKC: H:Ea (10:1, 5:1, 3:1, 1:1) H3-II SKC: H:Ea (5:1, 3:1,1:1, 1:2) LT02 H3-III SKC: H:Ea (3:1, 1:1, 1:2) LT04 Sơ đồ 2: Qui trình cô lập hợp chất từ cao n-hexane LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 31 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận “Từ cao n-hexane Trôm, bắng phương pháp sắc ký cột với dung mơi có độ phân cực khác ta phân lập hai hợp chất.” 4.2 Kiến nghị “Trôm loại gần gũi với đời sống người dân Việt Nam dân gian thường dùng làm thuốc chữa số bệnh Tuy nhiên, chưa có nhiều nghiên cứu loại Tiềm chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học cần thiết giúp cho việc điều trị bệnh cao nên cần tiếp tục tiến hành phân lập phân đoạn khác cao ethyl acetate, cao choloform thực tiếp việc nghiên cứu với phận khác như: cành, rễ, thân, …” LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước [3].Võ Văn Chi (2002) Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học Hà Nội, tr 1083 [6].Phạm Hoàng Hộ (1999) Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, mục 2022 - 2047, tr 502- 506 [7].Võ Văn Chi (2007) Sách tra cứu cỏ Việt Nam Nhà xuất Giáo Dục, TPHCM ,tr 31- 36 [8].Võ Văn Chi (2004) Từ điển thực vật thông dụng, tập Nhà xuất khoa học kĩ thuật, tr 2340 Tài liệu nước [1].Ru-Feng Wang et.al (2003) Alkaloids from the seeds of Sterculia lychnophora Phytochemistry, 63, p.475-478 [2].Costa DA., Chaves MH., Silva WCS., Costi LS., (2010) Chemical constituents, total phenolics and antioxidant activity of Sterculia striata, St Hil et Naudin Acta Amazon, 40(1), p 207-12 [4].Hussain SS., Janarthan M., Anusha SK., Ranjani M (2014) Preclinical evaluation of anti-diabetic and anti-hyperlipidemic activity of methanoic extracts of Sterculia foetida leaves by using Wistar albino rats Indian Journal of Research in Pharmacy and Biotechnology, 2(6),p.1430 [5].Vital PG., Velasco Jr RN, Demigillo JM., Rivera WL (2010) Antimcrobial activity, cytotoxicity and phytochemical screening of Ficus septica Burm and Sterculia foetida L leaf extracts Journal of Medicinal Plants Research, 4(1), p 58-63 [9].Loenzi H.;Bacher, L ; Lacerda, M ; Sartori.S-Instituto Plantarum De Estudos Da Flora LTDA;Brazil (2000) Brazillan Fruits and Cultivated Exotics,p 47 [10].Loenzi H -Instituto Plantarum Brazillian.Volume 1.4 th Edition De Estudos Da Flora ;Brazil (2002) [11].Md.Kamal Hossain, Md Akhtaruzzaman Prodhan, A S M Ibnul Hasan Even, Helal Morshed and Md Monir Hossain (2012) Anti-inflammatory and antidiabetic activity of ethanolic extracts of Sterculia villosa Journal of Applied Pharmaceutical Science, 02 (08), p 96-100 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP GVHD: PGS.TS MAI ĐÌNH TRỊ Trang 33 [12].Anjaneyulu A.S.R., Murty V.S (1981) Two rare tetramethyl ethers of quercetin from Sterculia foetida Linn Indian Journal of Chemiscal Section B, 20(1), p.87-88 [13] Dubey H, Tiwari JS (1991) Flavonoids and other constituents of Sterculia genus Journal of Indian Chemical Soc, (68), p.426-427 [14].Kale SS., Darade V., Thakur HA (2009) Analysis of fixed oil from Sterculia foetida Linn International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2(11), p 290814 [15].Moshera M E., Alia Y.R., Mona El S K., Mona Mohamed M., Salwa Ali M., Nabiel Abdel Megied Saleh (2016) Phytochemistry, biological activities and economical uses of the genus Sterculia and the related general: A review Asian Pacific Journal of Tropical Disease, (16), p.61075-61077 [16].Akhtari Khatoon et al (2016) Studies on in vitro evalution of antibacterial and antioxidant activities of Sterculia foetida L bark International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 7(7), p.2990-2995 [17].Shamsundar SG, Paramjyothi S (2010) Preliminary pharmacognostical and phytochemical investigation on Sterculia foetida Linn seeds Africa Journal of Biotechnol, 9(13), p.1787-1789 [18].Rajasekharreddy P., Pathipati UR (2014) Biofabrication of Ag nanoparticles using Sterculia foetida L seed extract and their toxic potential against mosquito vectors and HeLa cancer cells.Materials Science and Engineering C , 39, p 203-212 [19].Rani PU., Rajasekharreddy P (2010) Insecticidal activity of (2n-octylcycloprop-1enyl)-octanoic acid (I) against three coleopteran stored product insects from Sterculia foetida(L.) Journal of Pest Science 83(3), p 273–279 [20].Ru-Feng Wang , Xiu-Wen Wu and Di Geng (2013) Two Cerebrosides isolated from the seeds of Sterculia lychnophora and their neuroprotective effect, Molecule, 18, p 1181-1187 ... nhỏ; no n tới nhiều no n Hoa lưỡng tính có cuống nhị thường ng n h n, mang đỉnh gi n thành vòng bao ph n khơng cuống, thường sinh s n bầu sinh s n Hoa đực có nhị tập hợp thành đầu đỉnh cột (cuống... Thu n, Ninh Thu n Ở Ninh Thu n, Trôm ph n bố nhiều n i, đặc biệt nhiều vùng rừng ven bi n thuộc xã Phước Dinh, huy n Ninh Phước Trôm trồng nhiều thành phố l n Hà N i, thành phố Hồ Chí Minh, Vũng... cao tổng vao ph n đo n Ph n lập hợp chất ph n đo n III cao n- hexane Xác định cấu trúc hợp chất ph n lập 2.3 N i thực Phòng nghi n cứu hóa học hợp chất thi n nhi n (phòng 19, lầu 1) - Vi n H n lâm