Nghiên cứu bảo chế vi cầu gen tamicin sử dụng trong thuốc nhỏ mắt

B ộ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO • • B ộ Y TẾ • • TRƯỜNG ĐẠI • HỌC • D ược • HÀ NỘI • HỒNG THỊ HƯƠNG GIANG NGHIÊN Cứ u BÀO Ch ế v i Cầ U GENTAMICIN SỬ DỤNG TRONG THUỐC NHỎ MẮT LUẬN • VĂN THẠC • s ĩ DƯỢC • HỌC • CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ Dược PHẨM VÀ BÀO CHẾ MÃ SỐ: 607301 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NguyễnVăn Long trường đh hà n ộ i HÀ NỘI 2010 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: PGS TS Nguyễn Văn Long Người thầy tận tình hướng dẫn, hết lòng giúp đỡ tơi q trình thực luận văn Tơi xỉn chân thành cảm ơn môn Bào chế, môn Vi sinh —Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội, phòng Vi sinh - viện Kiêm nghiệm nhiệt tình giúp đỡ tơi trình thực luận văn Nhãn đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành đổi với thầy cô cản kỹ thuật viên môn Bào chế tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình làm thực nghiệm môn Tôi xin chân thành cảm ơn ban giám hiệu nhà trường, phòng đào tạo sau đại học phòng ban liên quan tạo điều kiện giúp đỡ tơi trình học tập thực luận văn Cuối xin ghi nhớ cảm om gia đình, bạn bè, đồng nghiệp quan tâm, động viên, ủng hộ tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày 31 tháng 10 năm 2010 Học viên Hoàng Thị Hương Giang MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN Đề • CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương vi cầu phương pháp bào chế vi cầu .2 1.1.1 Khái niệm 1.2 Ưu, nhược điểm vi cầu 1.1.3 ứ ng dụng vi c ầ u 1.1.4 Các phương pháp bào chế vi c ầ u 1.2 Đại cương thuốc nhỏ m ắ t 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Thành phần thuốc nhỏ mắt 10 1.2.3 Sinh khả dụng số biện pháp làm tăng sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt 11 1.3 Vài nét gentamicin 13 1.3.1 Nguồn gốc cấu trúc hóa học 13 1.3.2 Tính chất lý hóa 14 1.3.3 Độ ổn định gentamicin 14 1.3.4 Tương tác, tương kỵ 15 1.3.5 Các dạng bào chế thường gặp gentam icin 15 1.3.6 Các phương pháp phân tích gentam icin 15 1.4 Một số cơng trình nghiên cứu bào chế gentamicin nước nước .19 CHƯƠNG 2: ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 24 2.1 Đối tượng nghiên c ứ u 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Phương pháp bào chế 26 2.2.2 Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lư ợ n g .30 2.2.3 Phương pháp đánh giá độ ổn định chế p h ẩm 34 CHƯƠNG 3: Kế T QUẢ NGHIÊN cứu 36 3.1 Kết nghiên cứu định lượng gentamicin sulfat vi cầu 36 3.1.1 Xác định khoảng pH thời gian thích hợp cho phản ứng tạo phức 36 3.1.2 Tỷ lệ gentamicin o-phthaldialdehyd .37 3.1.3 Đường chuẩn biểu thị tương quan nồng độ mật độ quang dung dịch gentamicin .37 3.2 Bào chế đánh giá số đặc tính vi cầu .38 3.2.1 Bào chế vi cầu .38 3.2.2 Đánh giá số đặc tính vi cầu 40 3.3 Bào chế hỗn dịch thuốc nhỏ mắt từ vi cầu gentamicin nghiên cứu độ ổn định chế phẩm 48 3.3.1 Bào chế hỗn dịch nhỏ m 48 3.3.2 Kết nghiên cứu sơ ảnh hưởng tỷ lệ polyme đến hình thức pH hỗn dịch thuốc nhỏ m ắ t 51 3.3.3 Anh hưởng chất chống oxy hóa đến độ ổn định chế phẩm 52 3.3.4 Anh hưởng chất sát khuẩn đến độ ổn định chế phẩm 55 3.3.5 Anh hưởng bao bì đựng thuốc đến độ ổn định chế phẩm 56 CHƯƠNG BÀN LUẬN 60 4.1 v ề xây dựng công thức bào chế vi cầu gentamicin 60 4.1.1 v ề phương pháp bào c h ế 60 4.1.2 Anh hưởng yếu tố công thức 62 4.2 v ề ứng dụng vi cầu gentamcin vào hỗn dịch thuốc nhỏ mắt bước đầu nghiên cứu độ ổn định chế phẩm 64 4.2.1 Anh hưởng tỷ lệ chất chống oxy h ó a 64 4.2.2 Ảnh hưởng chất sát khuẩn 64 4.2.3 Ảnh hưởng bao bì 65 4.2.4 Ảnh hưởng nhiệt độ, ánh sáng đến độ ổn định hỗn dịch thuốc nhỏ mắt gentamcin 0,3% .65 KẾT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO NHỮNG KÝ HIỆU VIẾT TẮT CT : Công thức DĐVN III : Dược điển Việt Nam DMC : Dicloromethan Eud : Eudragit HPLC : High performance liquid chromatography III (sắc ký lỏng hiệu cao) HPMC : Hydroxy propyl methyl cellulose GM : Gentamicin sulfat LH : Lão hóa N/D/N : Nước/Dầu/Nước PE : Polyethylen PHT : o-phthaldialdehyd PVA : Alcol polyvinic USP : The United States Pharmacopoeia (Dược điển Mỹ) Vđ : Vừa đủ TTTT : Thủy tinh trung tính DANH MỤC CÁC BẢNG BIÊU Trang Bảng 2.1 Nguyên liệu hóa chất dùng nghiên cứụ 24 Bảng 3.1 Tương quan mật độ quang nồng độ dung dịch gentamicin 37 Bảng 3.2 Thành phần vi c ầ u 40 Bảng 3.3 Hiệu suất chế tạo vi c ầ u 41 Bảng 3.4 Hàm lượng gentamicin vi cầu 43 Bảng 3.5 Hiệu suất vi cầu h ó a 44 Bảng 3.6 Phần trăm gentamicin giải phóng từ mẫu vi c ầ u 45 Bảng 3.7 Anh hưởng tỷ lệ polyme tới độ nhớt hỗn dịch 49 Bảng 3.8 Công thức hỗn dịch thuốc nhỏ m ắ t 50 Bảng 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ polyme đến hình thức pH hỗn dịch thuốc nhỏ mắt 51 Bảng 3.10 Anh hưởng chất chống oxy hóa đến hình thức pH hỗn dịch thuốc nhỏ mắt 53 Bảng 3.11 Anh hưởng chất chống oxy hóa đến thay đổi hàm lượng gentamicin chế phẩm .54 Bảng 3.12 Ảnh hưởng chất sát khuẩn đến hình thức pH hỗn dịch nhỏ m ắ t 56 Bảng 3.13 Anh hưởng chất sát khuẩn đến thay đổi hàm lượng gentamicin chế phẩm .56 Bảng 3.14 Anh hưởng bao bì đến hình thức pH hỗn dịch thuốc nhỏ mắt gentamicin 57 Bảng 3.15 Ảnh hưởng bao bì đến thay đổi hàm lượng gentamicin sulfat chế phẩm 58 DANH MUC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ bào chế vi cầu gentamicin 27 Hình 2.2 Sơ đồ bào chế hồn dịch thuốc nhỏ mắt chứa vi cầu gentam icin 29 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang nồng độ dung dịch gentamicin 38 Hình 3.2 Hình ảnh chụp SEM CT9 .42 Hình 3.3 Hình ảnh chụp SEM CT 42 Hình 3.4 Hình ảnh chụp SEM CT2 .42 Hình 3.5 Hình ảnh chụp SEM CT11 42 Hình 3.6 Hình ảnh chụp SEM CT3 42 Hình 3.7 Hình ảnh chụp SEM CT4 42 Hình 3.8 Đồ thị giải phóng gentamicin từ vi cầu Eudragit 46 Hình 3.9 Đồ thị giải phóng gentamicin từ vi cầu PVA 47 Hình 3.10 Đồ thị giải phóng gentamicin từ vi cầu Aerosil 48 Hình 3.11 Biểu đồ so sánh hàm lượng gentamicin sulfat lại hỗn dịch thuốc nhỏ mắt 55 Hình 3.12 Biểu đồ so sánh hàm lượng gentamicin sulfat lại hỗn dịch thuốc nhỏ mắt có khơng có chất sát khuẩn 57 Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hàm lượng gentamicin sulfat lại hồn dịch thuốc nhỏ mắt đựng loại bao bì khác n h au 58 ĐẶT VÂN ĐÊ Gentamicin kháng sinh phổ rộng thuộc nhóm aminoglycosid có tác dụng mạnh chủng vi khuẩn gram (+) gram (-), đặc biệt với p.aeruginosa, sử dụng nhiều giới nước Trong nhãn khoa, gentamicin thường dùng dạng dung dịch nhỏ mắt thuốc mỡ tra mắt 0,3% Tuy nhiên, dùng dạng dung dịch, nồng độ thuốc giảm nhanh thời gian lưu thuốc giác mạc ngắn Đẻ làm tăng thời gian lưu thuốc tăng sinh khả dụng thuốc, năm gần đây, số tác giả giới nghiên cứu bào chế vi cầu gentamicin với kích thước micromet dùng bán thành phẩm để bào chế thuốc nhỏ mắt Để góp phần nâng cao sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt có chứa hoạt chất gentamicin nhằm tăng hiệu điều trị phát triển kỹ thuật bào chế ngành công nghệ dược phẩm Việt Nam, tiến hành đề tài “Nghiên cứu bào chế vi cầu gentamicỉn sử dụng thuốc nhỏ mắt” với mục tiêu: Xây dựng công thức bào chế vi cầu gentamicin Xây dựng công thức bào chế hỗn dịch thuốc nhỏ mắt từ vi cầu gentamicin CHƯƠNG TỎNG QUAN 1.1 Đại cương vi cầu phương pháp bào chế vi cầu 1.1.1 Khái niêm • Vi cầu tiểu phân rắn, hình cầu gần hình cầu, có kích thước từ |im đến 1000 um, có cấu tạo khối đồng gồm dược chất chất mang, khơng có vỏ bao ngoài, giống cốt mang thuốc Chất mang dùng để chế tạo vi cầu thường sáp camauba, alcol cetylic, polyeste (acid polylactic, acid polyglicolic ), albumin polyme khác EudragitRS 100, EudragitRL 100, [2], [22], [26] 1.1.2 Ưu, nhược điểm vi cầu Vi cầu có số ưu nhược điểm sau: ❖ Ưu điểm - Vi cầu thường dùng để tiêm, cấy uống nhằm bảo vệ dược chất kéo dài tác dụng thuốc - Với kích thước nhỏ nên sau giải phóng khỏi dạng bào chế, vi cầu có khả phân tán tốt vào mơ, hạch (hạch bạch huyết, ), đường tiêu hóa, tránh tượng tập trung nồng độ cao vị trí Do giảm nguy kích ứng giảm tác dụng không mong muốn - Vi cầu có diện tích bề mặt tiếp xúc lớn, phân bố đồng nên làm tăng hấp thu, tăng sinh khả dụng thuốc - Có thể tránh tượng bùng liều gặp dạng thuốc tác dụng kéo dài gồm đơn vị bào chế [2 ], [26] local controlled delivery of gentamicin”, J Pharm Sci., 92, 11, p.21452151 57 D.Sensoy et al., (2009), “Bioadhesive sulfacetamid sodium microspheres: evaluation of their effectiveness in the treatment of bacterial keratitis caused by staphylococcus aureus and pseudomonas aeruginosa in a rabbit model”, Eur J Pharm Bio., 72, p.487-495 58 D.Singh et al., (2008), “Formulation optimization of gentamicin loaded Eudragit R SI00 microspheres using factorial design study”, Biol Pharm Bull., 31, 4, p 662-667 59 P.Sipos et al., (2005), “Influence of preparation conditions on the properties of Eudragit microsphers produced by a double emulsion method”, Drug Dev Res., 64, p.41-54 60 M.V.Solovskii et al., (2000), “Salt of the antibiotic gentamicin with caboxyl-contaning N-vinylpyrrolidone copolymers”, J Pharm Chemist., 34, 11, p.21-24 61 The United States Phamacopoeia, 30 62 A.Vaidya et al., (2009), “Metronidazol loaded pectin microspheres for colon targeting”, J Pharm Sci., inpress, p 1-8 63 A.F.Vydrin et al., (2003), “Component composition of gentamicin sulfat preparation”, Pharm Chem J., 37, 8, p.52-54 64 G.Wang et al., (2004), “Realease of cefazolin and gentamicin from biodegradable PLA/PGA beads”, Int J Pharm., 273, p.203-212 65 J.Wu et al., (2009), “Microspheres made by w/o/o emulsion method with reduced initial burst for long-term delivery of endostar, a novel recombinant human endostatin”, J Pharm Sci., 98, 6, p.2051-2058 66 Q.A.Xu et al., (1999), “Stability- Indicating HPLC methods for drug analysis”, Pharmaceutical Press, p 142-143 67 C.-Y.Yang et al., (2001), “Encapsulating aspirin into a surfactant-free ethyl cellulose microspheres using non-toxic solvents by emulsion solventevaporation technique”, J M ic ro e n c a p 18, 2, p.223-236 68 J.Y.Yoo et al., (2004), “Effect of lactide/glycolide monomers on realease behaviors of gentamicin sulfat-loaded PLGA discs”, Int J Pharm., 267, p 1-9 BẢNG DANH MỤC PHỤ LỤC • • • Phụ lục 1: Dự thảo tiêu chuẩn sở vi cầu gentamicin Phu luc 2: • • Dự thảo tiêu chuẩn sỏ’ hỗn dịch nhỏ mắt gentamicỉn 0,3% Phu luc 3: • • Một số hình ảnh kết định lượng kháng sinh hỗn dịch nhỏ mắt phương pháp vi sinh PHỤ LỤC D ự THẢO TIÊU CHUẨN c SỞ TRƯỜNG ĐH DƯƠC HÀ NÔI Vi cầu gentamicin Số TC: BÔ MÔN BÀO CHẾ 4,5% Có hiêu lưc từ: • • • • • l.YÊU CẦU KỸ THUẬT 1.1 Công thức pha chế: - Gentamicin sulfat 4,5 g - Tá dược 100 g vi cầu vđ 1.2 Nguyên liệu - Gentamicin sulfat Đạt tiêu chuẩn BP 2007 - Eudragit RS 100 Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Alcol polyvinic Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Aerosil Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Dicloromethan Tinh khiết hóa học 1.3 Chất lượng bán thành phẩm 1.3.1 Hình thức: Vi cầu có hình cầu gần cầu, màu trắng 1.3.2 Kích thước: 30 - 70 Ịim 1.3.3 Định tính: Phải thể phép thử định tính gentamicin 1.3.4 Định lượng: Hàm lượng gentamicin phải từ 90,0 đến 110,0% lượng ghi nhãn 1.3.5 Độ hòa tan: hàm lượng gentamicin giải phóng từ vi cầu sau giờ: 6575%, sau 75-85 % sau > 85% 1.3.6 Độ vô khuẩn ĩ Vi cầu phải đạt độ vô khuẩn để pha hỗn dịch nhỏ mắt PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 Hình thức: Soi kính hiển vi điện tử quét (SEM) đạt yêu cầu nêu 2.2 Kích thước: Đo kính hiển vi điện tử quét (SEM) đạt yêu cầu nêu 2.3 Đinh tính: Theo DĐVN III Phương pháp sắc kỷ lớp mỏng Bản mỏng: silicagel GF 254 Pha động : amonihydroxyd 13,5 M - cloroform - methanol (1 :1 :1), lắc đều, để tách lớp, lấy lóp Thuốc thử phun màu : dung dịch ninhydrin Dung dịch thử: Lấy lượng vi cầu tương đương với khoảng 500 mg gentamicin sulfat, hồ tan 100 ml dung mơi DCM Lắc siêu âm 30 phút, thêm 100 ml nước, khuấy, lắc, lọc lấy phần nước Dung dịch chuẩn : hoà tan 500 mg gentamicin chuẩn với 100 ml nước, lắc, lọc qua màng lọc 0,45 Chấm riêng biệt 10 ịú dung dịch thử dung dịch chuẩn lên mỏng Triển khai sắc ký bình sắc ký khơng bão hồ pha động khoảng 15 cm, để khơ ngồi khơng khí Phun dung dịch ninhydrin sấy mỏng 100°c phút Dung dịch thử phải có vết có vị trí, màu sắc, kích thước tương ứng với vết thu dung dịch đối chiếu 2.4 Định lượng Hàm lượng gentamicin sulfat mẫu vi cầu định lượng phương pháp đo quang Dung dịch thử: cân xác lượng vi cầu tương đương với mg gentamicin sulfat vào cốc có mỏ 50 ml, thêm xác 10 ml dicloromethan, khuấy siêu âm để phá vỡ vỏ Eudragit RS 100 vi cầu Tiếp tục thêm xác 10 ml nước cất khuấy siêu âm để gentamicin tan hoàn toàn vào pha nước Đe yên cho tách pha , gạn bỏ pha dầu, lấy pha nước Lấy xác ml dung dịch gentamicin vừa thu cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml dung dịch o-phthaldialdehyd 0,1% ml dung dịch isopropanol, cuối thêm dung dịch NaOH 0,1 M cho vừa đủ 10 ml Lắc đều, để 30-60 phút nhiệt độ phòng đem đo độ hấp thụ bước sóng 332 nm Dung dịch chuẩn: cân xác khoảng 20 mg gentamicin sulfat chuẩn vào bình định mức 50 ml, cho nước vừa đủ 50 ml Lắc để gentamicin sulfat tan hồn tồn Lấy xác ml dung dịch gentamicin cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml dung dịch o-phthaldialdehyd 0,1% ml dung dịch isopropanol, cuối thêm dung dịch NaOH 0,1 M cho vừa đủ 10 ml Lắc đều, để 30- 60 phút nhiệt độ phòng đem đo độ hấp thụ bước sóng 332 nm Kết tính dựa theo công thức: % gentamicin sulfat vi cầu = fx D,'mc xioo ( %) Dc.m, Dt Dc: mật độ quang dung dịch thử dung dịch chuẩn f: hệ số pha loãng mt mc: khối lượng vi cầu khối lượng gentamicin sulfat chuẩn (mg) 2.5 Khả giải phóng gentamicỉn từ vi cầu * Điều kiện hồ tan Môi trường: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4 (pha theo ƯSP 30) Thiết bị: cánh khuấy Tốc độ quay: 50 ± vòng/phút Nhiệt độ: 37°c ± 0,5°c Thời gian thử: * Tiến hành: Cân xác lượng vi cầu tương đương với 900 m gentamicin sulfat vào mơi trường hòa tan Cứ 30 phúưl lần, lấy 10 ml dung dịch, lọc qua giấy lọc, bỏ phần dịch lọc đầu Pha loãng (nếu cần) đến nồng độ thích hợp Sau lần lấy mẫu, bổ sung 10 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4 Lấy ml dung dịch hòa tan tiếp tục tiến hành ghi mục định lượng gentamicin sulfat vi cầu 2.6 Độ vô khuẩn: Thử theo DĐVN III, phụ lục 10.8, phương pháp cấy trực tiếp ĐĨNG GĨI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN - Thuốc đóng lọ PE, đậy kín - Nhãn ghi rõ ràng, quy chế - Bảo quản nơi khô mát, tránh ánh sáng, nhiệt độ 30°c - Hạn sử dụng PHỤ LỤC D ự THẢO TIÊU CHUẨN c SỞ TRƯỜNG ĐH DƯỢC HÀ NỘI Hỗn dịch nhỏ mắt Số TC: B ộ MƠN BÀO CHÉ gentamicỉn 0,3% Có hiêu Iưc từ: • • l.U CẦU KỸ THUẬT 1.1 Cơng thức pha chế: - Vi cầu gentamicin - Tá dược 6,7 g Vđ Tương đương 0,3 g gentamicin 100 ml 1.2 Nguyên liệu - Vi cầu gentamicin Đạt tiêu chuẩn sở - Alcol polyvinic Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Hydroxy propyl ethyl cellulose Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Benzalkonium clorid Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Natri metabisulfit Đạt tiêu chuẩn USP 30 - Dinatri edetat Tinh khiết hóa học - Kali dihydrophosphat Tinh khiết hóa học - Natri hydroxyd Tinh khiết hóa học 1.3 Chất lượng thành phẩm 1.3.1 Hình thức: Hỗn dịch màu trắng đục, lắc phân tán đồng 1.3.2 Thể tích: 5,0 - 5,5 ml 1.3.3 pH: 6,0 - 8,0 1.3.4 Định tính: Phải thể phép thử định tính gentamicin 1.3.5 Định lượng: Hàm lượng gentamicin phải từ 90,0 đến 110,0% lượng ghi nhãn 1.3.6 Độ vô khuẩn : Chế phẩm hỗn dịch thuốc nhỏ mắt phải đạt độ vô khuẩn PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 Hình thức: Bằng cảm quan, chế phẩm phải đạt yêu cầu nêu 2.2 Thể tích: Thử theo DĐVN III, Phụ lục 8.1 2.3 pH: Thử theo DĐVN III, Phụ lục 5.9 2.4 Đinh tính: Theo DĐVN III Phương pháp sắc kỷ lớp mỏng Bản mỏng: silicagel GF 254 Pha động : amonihydroxyd 13,5 M - cloroform - methanol (1 :1 :1), lắc đều, để tách lóp, lấy lóp Thuốc thử phun màu : dung dịch ninhydrin Dung dịch thử : Lấy lượng hỗn dịch tương đương với khoảng 500 mg gentamicin sulfat, ly tâm 4000 vòng/phút, gạn lấy phàn vi cầu, hồ tan 100 ml dung mơi DCM Lắc siêu âm 30 phút, thêm 100 ml nước, khuấy,lắc, lọc lấy phần nước Dung dịch chuẩn : hoà tan 500 mg gentamicin chuẩn với 100 ml nước, lắc, lọc qua màng lọc 0,45 Chấm riêng biệt 10 |il dung dịch thử dung dịch chuẩn lên mỏng Triển khai sắc ký bình sắc ký khơng bão hồ pha động khoảng 15 cm, để khơ ngồi khơng khí Phun dung dịch ninhydrin sấy mỏng 100°c phút Dung dịch thử phải có vết có vị trí, màu sắc, kích thước tương ứng với vết thu dung dịch đối chiếu 2.5 Định lượng 2.5.1 Thuốc thử : Theo DĐVNIII - Chủng thị: B pumilus ATCC 8241 Điều chế nhũ dị theo DĐVN III - Phụ lục 10.10 - Môi trường định lượng Pepton 6,0 g Casein pancreatic 4,0 g Cao thịt 1,5 g Cao men bia 3,0 g Glucose monohydrat 1,0 g Thạch 15,0 g Nước cất vừa đủ 1000 ml Điều chỉnh pH môi trường acid phosphoric 18 I hydroxyd 18 N pH môi trường sau tiệt khuẩn 7,9 ± 0,1 Dung dịch đệm phosphat pH 8,0 Dung dịch kali dihydrophosphat IM 50,0 ml Dung dịch natri hydroxyd IM 46,8 ml Nước cất vừa đủ 1000 ml Điều chỉnh pH dung dịch đệm acid phosphoric natri hydroxyd 18N pH dung dịch đệm sau tiệt khuẩn 2.5.2 Phương pháp thử Dung dịch thử: Lấy xác 30 ml hỗn dịch (tương ứng 100 IU gentamicin) cho vào ống nghiệm (dung tích 15 ml) ] vòng/phút 15 phút, thu phần nước vào bình địch mức 100 rr ống ml methanol lắc đều, lắc siêu âm 30 phút Thu hết các ống nghiệm vào bình định mức Thêm vừa đủ dung phosphat pH 8,0 đến vạch, lắc đều, thu dung dịch thử gổc c< khoảng IU/ml Tiếp tục pha loãng dung dịch thử gốc dung phosphat pH 8,0 để thu dung dịch thử làm việc có nồng ( 0,5; 0,25 (IƯ/ml) Dung dịch chuẩn: Cân lượng xác a mg ct gentamicin sulfat, pha vào nước cất để thu dung dịch chuẩn gố độ 100 IƯ/ml Từ dung dịch chuẩn gốc này, pha loãng dung phosphat pH 8,0 để thu dung dịch chuẩn làm việc có nồng 0,25 (IU/ml) Tiến hành định lượng theo phương pháp khuyếch tán thạ kết theo DĐVNIII - Phụ lục 10.10 2.6 Độ vô khuẩn : Thử theo DĐVN III, phụ lục 10.8, phương phá tiếp ĐĨNG GĨI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN - Thuốc đóng ml ỉọ PE, có ống nhỏ giọt, đậy kín - Nhãn ghi rõ ràng, quy chế - Bảo quản nơi khô mát, tránh ánh sáng, nhiệt độ - Hạn sử dụng 30°c - Chủng thị: B pumilus ATCC 8241 Điều chế nhũ dịch vi khuẩn theo DĐVN III - Phụ lục 10.10 - Môi trường định lượng Pepton 6,0 g Casein pancreatic 4,0 g Cao thịt 1,5 g Cao men bia 3,0 g Glucose monohydrat 1,0 g Thạch 15,0 g Nước cất vừa đủ 1000 ml Điều chỉnh pH môi trường acid phosphoric 18 N natri hydroxyd 18 N pH môi trường sau tiệt khuẩn 7,9 ±0,1 Dung dịch đệm phosphat pH 8,0 Dung dịch kali dihydrophosphat IM 50,0 ml Dung dịch natri hydroxyd IM 46,8 ml Nước cất vừa đủ 1000 ml Điều chỉnh pH dung dịch đệmbang acid phosphoric 18 N natri hydroxyd 18N pH dung dịch đệm sau tiệt khuẩn 8,0 ± 0,1 2.5.2 Phương pháp thử Dung dịch thử: Lấy xác 30 ml hỗn dịch (tương ứng với khoảng 100 IU gentamicin) cho vào ống nghiệm (dung tích 15 ml) ly tâm 4000 vòng/phút 15 phút, thu phần nước vào bình địch mức 100 ml, thêm vào ống ml methanol lắc đều, lắc siêu âm 30 phút Thu hết dịch ống nghiệm vào bình định mức Thêm vừa đủ dung dịch đệm phosphat pH 8,0 đến vạch, lắc đều, thu dung dịch thử gốc có nồng độ khoảng IƯ/ml Tiếp tục pha loãng dung dịch thử gốc bàng dung dịch đệm phosphat pH 8,0 để thu dung dịch thử làm việc có nồng độ khoảng 0,5; 0,25 (IU/ml) Dung dịch chuẩn: Cân lượng xác a mg chất chuẩn gentamicin sulfat, pha vào nước cất để thu dung dịch chuẩn gốc có nồng độ 100 IU/ml Từ dung dịch chuẩn gốc này, pha loãng dung dịch đệm phosphat pH 8,0 để thu dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ 1; 0,5; 0,25 (IU/ml) Tiến hành định lượng theo phương pháp khuyếch tán thạch tính kết theo DĐVN III - Phụ lục 10.10 2.6 Độ vô khuẩn : Thử theo DĐVN III, phụ lục 10.8, phương pháp cấy trực tiếp ĐÓNG GÓI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN - Thuốc đóng ml lọ PE, có ống nhỏ giọt, đậy kín - Nhãn ghi rõ ràng, quy chế - Bảo quản nơi khô mát, tránh ánh sáng, nhiệt độ - Hạn sử dụng 30°c PHỤ LỤC Một số hình ảnh kết định lượng kháng sinh hỗn dịch nhỏ mắt phương pháp vi sinh Hình ảnh định lượng vi sinh hỗn dịch bào chế theo CT17 (lọ PE) T H Ả N H P H A M L Ọ T H Ủ Y T IN H TH Ả N H PH Ả M L Ợ T H Í I Y T IN H Hình ảnh định lượng vi sinh hỗn dịch bào chế theo CT17 (lọ TTTT) ... gentamicỉn sử dụng thuốc nhỏ mắt với mục tiêu: Xây dựng công thức bào chế vi cầu gentamicin Xây dựng công thức bào chế hỗn dịch thuốc nhỏ mắt từ vi cầu gentamicin CHƯƠNG TỎNG QUAN 1.1 Đại cương vi cầu. .. Sinh khả dụng số biện pháp làm tăng sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt 1.2.3.1 Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt Nhìn chung, sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt thường thấp, khoảng 1- 3% liều thuốc nhỏ vào mắt thấm... giảm độc tính gentamicin [60] - Hoàng Thị Hương Giang với đề tài Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm gentamicin” bào chế thuốc tiêm gentamicin với công thức bào chế gồm thành phần: gentamicin sulfat,