Nghiên cứu dược liệu mức hoa trắng thu hái ở chí linh hải dương

BỘ G IÁ O D Ụ C VÀ Đ À O T Ạ O TRƯỜNG ĐẠI HỌC BỘ Y T Ế Dược HÀ NỘI PHÍ TÙNG LÂM NGHIÊN CỨU Dược LIỆU MỨC HOA TRANG THU HẢI Ở CHỈ LINH - HẢI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC s ĩ DƯỢC HỌC Chuyên ngành : Dược liệu - Dược cổ truyền Mã s ố : 60.73.10 OVV2S UịLidíb Người hướng dẫn khoa học : GS.TS PHẠM THANH KỲ HÀ NỘI - 2005 L Ờ I CẢM ƠN Trong trình thực đề tài nhận quan tâm giúp đỡ tận tình thầy giáo, anh chị mơn trường Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng cảm ơn Gs.Ts Phạm Thanh Kỳ trực tiếp hướng dẫn tận tình cho tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lời cảm ơn trân trọng tới: Pgs.Ts Chu Đình Kính - Viện hoá học - TTKHTN CNQG Pgs.Ts Cao Văn Thu - Bộ môn Vi sinh -Sinh học Trường Đại học Dược Hà Nội Ts Phùng Hồ Bình - Phòng đào tạo sau đại học Đã giúp đỡ đóng góp ý kiến q báu cho tơi thời gian thực đề tài Nhân dịp xin trân trọng cảm ơn thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên môn Dược liệu, mơn Dược học cổ truyền, ,Viện hố học, Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo sau đại học trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian thực luận văn Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2005 DS Phí Tùng Lâm MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.1 Vị trí phân loại chi Holarrhena 1.1.2 Đặc điểm chung họ Trúc đào 1.1.3 Số lượng phân bố chi Holarrhena 1.1.4 Đặc điểm thực vật loài H antidysenterica 1.2 Những nghiên cứu thành phần hoá học 1.3 Tác dụng dược lý công dụng PHẦN NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG 11 PHÁP NGHIÊN c ú u 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 11 2.2 Phương tiện nghiên cứu 11 2.2.1 Máy - thiết bị dùng nghiên cứu 11 2.2.2 Hoá chất 11 2.2.3 Chủng vi khuẩn kiểm định 12 2.3 Phương pháp nghiên cứu 12 2.3.1 Nghiên cứu thực vật 12 2.3.2 Nghiên cứu hoá học 12 2.3.3 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn 12 PHẦN THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 14 3.1 Nghiên cứu thực vật 14 3.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật kiểm định tên khoa học 14 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu 16 3.1.3 Đặc điểm vi phẫu bột 16 3.1.4 Đặc điểm vi phẫu vỏ thân 16 3.1.5 Đặc điểm vi phẫu bột vỏ thân 17 3.2 Nghiên cứu thành phần hoá học vỏ thân 21 3.2.1 Định tính phản ứng hố học vỏ thân 21 3.2.2 Định tính flavonoid alcaloid vỏ thân 29 SKLM 3.2.3 Chiết xuất flavonoid alcaloid toàn phần dược ỉiệu 32 3.2.4 Phân lập flavonoid alcaloid sắc ký cột 34 3.2.4.1 Phân lập flavonoid 34 3.2A.2 Phân lập alcaloid 36 3.2.5 Nhận dạng chất VMị, M2, KLV, KLV2 41 3.2.5.1 Nhận dạng chất VM) 41 3.2.5.2 Nhận dạng chất M2 43 3.2.5.3 Nhận dạng chất KLVị 46 3.2.5.4 Nhận dạng chất KLV2 50 3.3 Thử tác dụng kháng khuẩn: 54 3.3.1 Thử tác dụng kháng khuẩn alcaloid toàn phần 54 3.3.2 Thử tác dụng kháng khuẩn Conessin 57 PHẦN BÀN LUẬN VỀ KẾT QUẢ 59 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO trắng Hình 3.7: Sơ đồ chiết suất flavonoid tồn phần Mức 33 hoa trắng Hình 3.8: Sơ đồ chiết suất alcaloid toàn phần vỏ thân 34 Mức hoa trắng Hình 3.9: Ảnh sắc ký đổ flavonoid toàn phần Mức hoa 39 trắng hệ dung mơi III Hình 3.10: Ảnh sắc ký đổ VMị hệ dung môi khác 39 Hình 3.11: Ảnh sắc ký đồ M hệ dung mơi 39 Hình 3.12: Ảnh sắc ký đồ so sánh M với Quercetin chuẩn 39 Hình 3.13: Ảnh sắc ký đồ KLVj hệ dung mơi 40 Hình 3.14: Ảnh sắc ký đồ alcaloid tồn phần hệ 40 dung mơi III Hình 3.15 :Ảnh sắc ký đồ KLV hệ dung mơi 40 Hình 3.16 Hình cấu trúc phân tử VMj 42 Hình 3.17 Hình cấu trúc phân tử M2 45 Hình 3.18 Hình cấu trúc phân tử KLV, 49 Hình 3.19 Hình cấu trúc phân tử KLV2 53 C Á C C H Ữ V IẾ T T Ắ T V À K Ý H IỆ U I3c - n m r Carbon (13) Nuclear magnetic resonance Cs Cộng DEPT Distortionaless enhancement by polarization transfer Dd Dung dịch 'H-NMR Proton nuclear magnetic resonance HMBC Heteronuclear multiple bom correlation HMQC Heteronuclear multiple quantum correlation H Holarrhena IR Infrared LD 50 Lethal dose 50% MC Mẫu chứng MS Mass spectrometry M/z Số khối Nxb Nhà xuất SKLM Sắc ký lớp mỏng SK Sắc ký SKĐ Sắc ký đồ TT Thuốc thử uv Ultraviolet vđ Vừa đủ VK Vi khuẩn vsv Vi sinh vật L Ờ I CẢM ƠN Trong trình thực đề tài nhận quan tâm giúp đỡ tận tình thầy giáo, anh chị mơn trường Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin trân trọng cảm ơn Gs.Ts Phạm Thanh Kỳ trực tiếp hướng dẫn tận tình cho tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lời cảm ơn trân trọng tới: Pgs.Ts Chu Đình Kính - Viện hố học - TTKHTN CNQG Pgs.Ts Cao Văn Thu - Bộ môn Vi sinh -Sinh học Trường Đại học Dược Hà Nội Ts Phùng Hồ Bình - Phòng đào tạo sau đại học Đã giúp đỡ đóng góp ý kiến q báu cho tơi thời gian thực đề tài Nhân dịp xin trân trọng cảm ơn thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên môn Dược liệu, mơn Dược học cổ truyền, ,Viện hố học, Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo sau đại học trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian thực luận văn Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2005 DS Phí Tùng Lâm ĐẶT VÂN ĐỂ Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa có nguồn tài nguyên thực vật vô phong phú Theo số tài liệu nghiên cứu cho thấy: nước ta có khoảng 12 000 loài thuộc 2500 chi 300 họ Trải qua hàng nghìn năm tồn phát triển lồi người, ngồi việc sử dụng vơ vàn cỏ cho nhu cầu khác sống, nhân dân Việt Nam nhân dân nhiều nước khác giới tích luỹ, lưu truyền nhiều kinh nghiệm, tri thức quý báu phòng chữa bệnh cỏ Tuy nhiên việc sử dụng phần lớn dựa vào kinh nghiệm dân gian, mà chưa nghiên cứu kỹ để có sở khoa học việc sử dụng chúng Trcn giới nói chung Việt Nam nói ricng, xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc thảo mộc ngày tăng Người ta thống kê rằng: nước có cơng nghiệp phát triển 1/4 số thuốc thống kê đơn có chứa hoạt chất từ thảo mộc Hơn nữa, Việt Nam số nước Á Đông (Trung Quốc, Ấn Độ, Nhật Bản, Hàn Quốc .) có truyền thống phòng chữa bệnh theo Y học cổ truyền nên đòi hỏi cung cấp số lượng lớn dược liệu Cây Mức hoa trắng mọc hoang ven triền núi nhiều nơi nước la số nước Nam Á Từ lâu nhân dân dùng hạt vỏ thân chữa lỵ amip Để góp phần nâng cao giá trị sử dụng dược liệu này, thực đề tài: "Nghiên cứu dược liệu Mức hoa trắng thu hái Chí Linh - Hải Dưong" với nội dung sau: Về thực vật: + Mơ tả hình thái thực vật kiểm định tên khoa học + Xác định đặc điểm vi phẫu lá, vi phẫu vỏ thân + Xác định đặc điểm bột lá, bột vỏ thân Về thành phần hố học: + Định tính nhóm chất vỏ ihân + Chiết xuất phân lập chất dược liệu + Nhận dạng chất phân lập Về tác dụng sinh học: + Thử tác dụng kháng khuẩn P H Ầ N 1: T Ổ N G Q U A N 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN B ố 1.1.1 Vị trí phân loại chi Holarrhena [11],[19], [20] Theo hệ thống phân loại Takhtajan 1987: Chi Holarrhena thuộc họ Trúc đào (Apocynaceae), Long đởm (Gentianales), liên Long đởm (Gentiananae), phân lớp Hoa môi (Lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta), giới thực vật (Plantae) Giới thực vật (Plantae) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magroliopsida) Phân lớp Hoa môi (Lamiidae) Liên Long đởm (Gentiananae) Bộ Long đởm (Gentianales) Họ Trúc đào (Apocynaceae) Chi Holarrhena 1.1.2 Đặc điểm chung họ Trúc đào (Apocynaceae)[4], [7], [10], [13], [14],[24], [29] Họ Trúc đào có đặc điểm sau: + Cây gỗ, bụi hay dây leo thân gỗ, tồn thân có nhựa mủ, thường có hai vòng libe (có vòng libe quanh tuỷ) + Lá đơn, nguyên, thường mọc đối mọc vòng, mọc sole, khơng có kèm 210.10 559 m i n ) : T-DIP548.D KLV2 170 226.20 300 244.15 564 m/ z abund m/ z 267.25 102 15 147 268.15 253.25 69.15 444 15 70.15 460 5 15 71.25 2769 15 72.25 2991 15 4870 273.25 258.15 274.25 1759 259.15 275.25 419 15 902 276.25 15 277.15 262 25 T -DIP548-D m i n ) : m (4 KLV2 abund 191 415 340 1316 1165 4371 33904 6877 735 124 105 m/ z 279.15 25 283.15 284 25 285 25 286.25 287.15 289.25 290 25 296 25 297 25 abund 151 222 293 437 839 361 145 3216 684 592 423 m/ z 298.25 299.25 300.25 301.25 302.25 303 25 310.15 311.25 312.35 313.25 314.35 abund 460 891 285 241 333 167 412 618 617 1132 656 abund 114 161 11127 18256 5995 1028 199 121 198 329 135 m/ z 360.35 abund 170 197.10 i n 87 ( m/ z 315.25 316.25 317.25 324 45 325.35 327.25 328 329.35 330.35 331.25 332 35 abund 10826 2683 392 105 931 86656 23504 4231 1332 397 236 m/ z 333.35 339.45 341 35 342 343 35 344 35 345 35 355.25 357.25 358 35 359 35 m/ z abund H 00 o Ơ1 o 141.468 fo 119.845 o M o o 00 o < n o o to o o - f* w X ƯÌ w 03 CD ƯÌ o *3 M to X nj M o fD (A CO M HN) < _n vH -J *o ỂÚ -J U) H -J N>Qj 00 -J p o o w CD CD o ho ƯI L0 oo o o o 05 o o ƯI o o o o X a a a c SC Cfl tD 03 u N n> o i z z n t* Í pj Hi t— Is) ft N II II z U! w ■o Hi o to *-* w u»•Tk cr» t—* II £»o o OJ il u>o o o II II s a c ii ii sc td c/1 N CD ii o II M D Z C/J X a a a *-3 a o o o Pd H* I-* w P3 i o o M s: w ƯÌ o a t-* D sc je •p H* V 73 w < n w * w> z w H H M^D ^ G 5Ỡ z H- iJJ N> r* o CO B rt ► b w H a> < ỉ> J0 w V > o D a s Q ■s Hu Hrt Hs N>3 c o H* N rt o ^ cniQ p- tt (-*Ln p) UiTj < U) t—*M cn^Q c Ừ1 o PJ u>u>o o is) t—*3 o I— o (P rt (5 M w M 2S PỠX > o nj s o z M z o o tn g o o H* o N> u> o o COo o o o M o VDU) o o o h *cn (_no VOo o VD u> o o VDo o LO cn H* tn o o o V£>o o o CTi o •c*N>o o o u>o o M o o o o o Ư1 *-*to NJ UJ w o o COo o VOo o ơ\ o Is) V£>M ơ>o 0J SC 3: w (A u> w « K c c a> N N n> 0) tt> CD (D M w (Đ n> o o o o o o n o f Ề >5 H < ts>to l-'l L A M -K L V -D M S O -C C P D h* o L A M -K L V -D M S O -C C P D rì r- vo ro o 00 r- ^ rH LT) r- !— I 00 vo UI ưì Ui in CNJ in C iO •n 73 W O Z M H s CO M O O f < rò CO z -3 a CO H t-H *-3 a ■Tl U cu N) C JO z r * o to CD (t> t : » s c 33 o D c n o s: Ù3 c a3>rr U) U) o u> o o o o CD o o a c : CD CO N rt> o z m t- H H-* II X ii II i li m PC 'O o z 2 cn o o o o o ~ o 3.82 92 o 00 95 03£ ÕCDrơã^^rs} 5^*05wPI D 'M TiI to H CJ owR o*jặ o ụ _ ỊỊAỌỊlt OOOOS®®rt OJ ► -* o o o • o ► -» 0 • cnoo cn to*JH OOOU) O H I T 1Ư1 o o o o < n • Ơ V O N) o o o H-*• Oh-* o l i o o •o a> ooỊ o oo oo m o oo u• o H-*C Do (a (J u X d c ụ H s (t> (/) u o o o ro oo V r5 5O'O Ht? 0p»n«33 n ?t O DC I >o' zo o OS H *5 ro M t-3 Ó rco5Ộ wz? ỢH- o n H n w i n o H i w w o < w z •T? CD *-3ro T3D o 3CnND 2.40 0.22 2.15 2.65 4 2.01 0.15 1.92.2.54 5 2.00 0.11 1.81 2.12 8 1.91 0.13 1.49 1.98 0.89 0.13 0.79 1.09 10 5.51 0.03 5.34.5.41 12 1.25 0.30 0.92 1.77 13 1.44 0.10 1.32 1.89 14 1.36 0.05 1.26 1.66 1.97 0.32 1.84 2.22 15 16 1.66 0.21 1.55 1.95 17 1.22 20 1.08 .1.48 18] [18