Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học cây giảo cổ lam thu hái tại sa pa, tỉnh lào cai (gynostemma pentaphyllum (thunb ) makino cucurbitaceae

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM TUẤN ANH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CÂY GIẢO CỔ LAM THU HÁI TẠI SAPA, TỈNH LÀO CAI GYNOSTEMMA PENTAPHYLLUM (THUNB.) MAKINO CUCURBITACEAE LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành Mã số : Dược liệu - Dược cổ truyền : 60.73.10 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS PHẠM THANH KỲ Hà Nội - 2008 MỤC LỤC Trang Đặt vấn đề Chương I Tổng quan 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật phân bố chi Gynostemma 1.1.1 Vị trí phân loại chi Gynostemma .1 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Gynostemma 1.1.3 Đặc điểm thực vật phân bố số loài chi Gynostemma 1.2 Thành phần hóa học 1.2.1 Nghiên cứu saponin 1.2.2 Nghiên cứu flavonoid 1.2.3 Các thành phần khác 1.3 Tác dụng công dụng .7 1.3.1 Tác dụng dược lý .7 1.3.2 Công dụng 19 1.4 Những kết nghiên cứu Gynostemma pentaphyllum Việt Nam 20 1.4.1 Đặc điểm thực vật 20 1.4.2 Thành phần hóa học 21 1.4.3 Tác dụng sinh học 22 Chương II Nguyên liệu, phương tiện phương pháp nghiên cứu 24 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 24 2.2 Các phương tiện nghiên cứu .24 2.2.1 Máy thiết bị nghiên cứu 24 2.2.2 Hóa chất thí nghiệm 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Nghiên cứu hóa học 25 2.3.2 Nghiên cứu tác dụng sinh học 26 Chương III Thực nghiệm kết 30 3.1 Định tính nhóm chất thân Giảo cổ lam 30 3.1.1 Định tính flavonoid 30 3.1.2 Định tính alkaloid 31 3.1.3 Định tính saponin .31 3.1.4 Định tính glycosid tim .32 3.1.5 Định tính coumarin 33 3.1.6 Định tính tanin 34 3.1.7 Định tính anthranoid 35 3.1.8 Định tính chất béo, caroten, steroid 35 3.1.9 Định tính đường khử, acid hữu cơ, acid amin 36 3.1.10 Định tính polysaccharide 36 3.2 Quy trình chiết xuất nhóm chất thân Giảo cổ lam .39 3.3 Định lượng cắn phân đoạn .40 3.4 Định tính cắn phân đoạn .41 3.4.1 Định tính phản ứng hóa học 41 3.4.2 Định tính sắc ký lớp mỏng 41 3.5 Phân lập chất phân đoạn ethylacetat 43 3.5.1 Phân lập .43 3.5.2 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập 45 3.6 Nhận dạng chất phân lập .48 3.6.1 Nhận dạng chất V1 .48 3.6.2 Nhận dạng chất C3 .50 3.6.3 Nhận dạng P1 .53 3.6.4 Nhận dạng P2 .54 3.7 Nghiên cứu dụng hạ đường huyết 55 3.7.1 Khảo sát tác dụng hạ đường huyết hoạt chất chuột nhắt bình thường 55 3.7.2 Khảo sát tác dụng chế phẩm chuột đái tháo đường gây streptozocin 55 3.7.3 Khảo sat tác dụng bảo vệ tế bào bêta thuốc chuột tiêm Streptozocin 56 3.8 Nghiên cứu tác dụng hạ Cholesterol 57 Chương IV Bàn luận 59 4.1 Về thành phần hóa học 59 4.2 Về tác dụng sinh học 59 Chương V Kết luận đề nghị 61 5.1 Kết luận .61 5.1.1 Về thành phần hóa học 61 5.1.2 Về tác dụng sinh học 61 5.2 Đề nghị 62 Tài liệu tham khảo Phụ lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt As Viết đầy đủ Ánh sáng ADN Acid Deoxyribonucleic ARN Acid Ribonucleic HDL Hight – density lipoprotein IR Infra red LC Liquid chromatography LDL Low – density lipoprotein MS Mass spectroscopy NMR Nulear magnetic resonance PFC Plaque forming cells SRFC Specific rosette forming cells STZ Streptozotocin UV Ultra violet VLDL TAG Very low – density lipoprotein Triacylglycerol tt thể trọng ttc thể trọng chuột DANH MỤC CÁC BẢNG Danh mục bảng Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất Trang 38 thân Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum Cucurbitaceae) thu hái Sapa, Lào Cai Bảng 3.2 Kết định lượng phân đoạn 40 thân Giảo cổ lam Bảng 3.3 Kết định tính phân đoạn 41 Bảng 3.4 Kết định tính cắn ethylacetat sắc ký 42 lớp mỏng Bảng 3.5 Kiểm tra độ tinh khiết V1 C3 46 SKLM Bảng 3.6 Số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân chất V1 49 Bảng 3.7 Số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân chất C3 52 Bảng 3.8 Số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân chất P1 53 Bảng 3.9 Số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân chất P2 54 Bảng 3.10 Tác dụng SA TP lên đường huyết 55 chuột nhắt trắng bình thường, số liệu biểu diễn M ± SE (ml/kg) với n = cho nhóm Bảng 3.11 Tác dụng SA TP lên đường huyết 55 chuột nhắt trắng gây đái tháo đường Streptozocin liều 150 mg/kg Số liệu biểu diễn M ± SE (ml/kg) với n = 10 cho nhóm ** p < 0,01 so với đường huyết trước (lúc 120 giờ) Bảng 3.12 Tác dụng SA TP lên khả gây đái 56 tháo đường Streptozocin liều 150 mg/kg chuột nhắt trắng Số liệu biểu diễn M ± SE (ml/kg) với n = cho nhóm * p < 0,05; *** p < 0,001 so với đường huyết nhóm chứng điều kiện Bảng 3.13 Nồng độ Cholesterol huyết thỏ 58 trước sau gây tăng (mg %) Bảng 3.14 Tác dụng hạ Cholesterol mẫu TP với liều 500 mg/kg/ngày so với lô chứng 58 DANH MỤC CÁC HÌNH Danh mục hình Trang Hình 2.1 Giảo cổ lam Sapa 24 Hình 2.2 Giảo cổ lam thu làm tiêu 24 Hình 3.1 Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết nhóm chất thân Giảo cổ lam Hình 3.2 Sắc ký đồ cắn phân đoạn ethylacetat Hình 3.3 Sắc ký đồ V1 hệ dung môi I, II, 39 43 46 III Hình 3.4 Sắc ký đồ C3 hệ dung mơi I, II, III Hình 3.5 Ảnh chụp sắc ký đồ V1, C3 so với cắn phân đoạn ethylacetat 46 47 Hình 3.6 Sắc ký đồ chiều chất P1 47 Hình 3.7 Sắc ký đồ chiều chất P2 47 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong xã hội ngày nay, xu hướng chăm sóc bảo vệ sức khỏe người sản phẩm từ thiên nhiên ngày gia tăng Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới có thảm thực vật phong phú đa dạng Nhân dân ta biết sử dụng cỏ làm thuốc phòng điều trị bệnh từ lâu đời Song cỏ nhiều bí ẩn, việc sử dụng chúng phần lớn theo kinh nghiệm dân gian theo y học cổ truyền; nhiều thuốc, thuốc chưa nghiên cứu nghiên cứu chưa đầy đủ kỹ lưỡng Vì vấn đề nghiên cứu cỏ làm thuốc nhiều nhà khoa học quan tâm Giảo cổ lam gọi Cổ yếm, Thất diệp đởm, Ngũ diệp sâm nhân dân ta dùng làm thuốc từ lâu; nhà khoa học Nhật Bản, Trung Quốc quan tâm nghiên cứu đưa vào sử dụng rộng rãi năm gần Tìm hiểu chất lượng tác dụng trội dược liệu Giảo cổ lam Việt Nam, GS TS Phạm Thanh Kỳ cộng thực nhiều đề tài nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học, thử độc tính số tác dụng sinh học mẫu thu tỉnh Cao Bằng thu nhiều kết quan trọng Để tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng sinh học dược liệu Giảo cổ lam Việt Nam thực đề tài: “Nghiên cứu thành phần hoá học số tác dụng sinh học Giảo cổ lam thu hái Sapa tỉnh Lào Cai” với hai mục tiêu:  Nghiên cứu thành phần hoá học Giảo cổ lam  Thử số tác dụng sinh học Giảo cổ lam CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 VỊ TRÍ PHÂN LOẠI, ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN BỐ CHI GYNOSTEMMA 1.1.1 Vị trí phân loại chi Gynostemma Theo tài liệu Thực vật dược phân loại thực vật [2]; Cây cỏ Việt Nam [10] Giảo cổ lam thuộc chi Gynostemma, chi nằm họ bầu bí - Cucurbitaceae Vị trí chi Gynostemma hệ thống phân loại thực vật tóm tắt sau: Ngành Ngọc lan Magnoliophyta Lớp Ngọc lan Magnoliopsida Phân lớp Sổ Dilleniidae Liên Hoa tím Violanae Bộ Bí Cucurbitales Họ Bầu bí Cucurbitaceae Chi Gynostemma Giảo cổ lam có tên khoa học Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino, Cucurbitaceae Cây có nhiều tên gọi như: Cổ yếm, Thư tràng [10], Thất diệp đởm, Tiểu khổ dược (Nhật Bản), Giảo cổ lam (Trung Quốc), Cam trà man, Công la oa đổ, Biển địa sinh căn, Giao dịch [14] 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Gynostemma Cây thảo, mảnh, thân leo, sống lâu năm Lá kép, đơn, khía cưa Tua chẻ đơi, đơi có tua đơn Cụm hoa khác gốc, dạng chùy mảnh, dài, hoa đực Hoa nhỏ, màu trắng lục nhạt, có bắc con; cuống hoa có đốt Đài hoa hình bánh xe, chia thùy, ngắn Tràng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thị Ánh (2007) Nghiên cứu chiết xuất bào chế viên Giảo cổ lam, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Thực vật (2004), Thực vật Dược phân loại thực vật, Trường Đại học Dược Hà Nội Vũ Đức Cảnh (1999), Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino Cucurbitaceae, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, tập 2, 308, 309 Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, tập 2, 1322, 1323 Lê Văn Cường (1998), Góp phần nghiên cứu Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino, Cucurbitaceae, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Tiến Dẫn (1999), Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Thất diệp đởm, Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học – Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Thị Thanh Duyên (2000), Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Thất diệp đởm, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1980), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, NXB Y học, 243 – 289, 327 – 347 10 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, I, 563, 575 11 Phạm Thanh Hương (2003), Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Giảo cổ lam, khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội 12 Phạm Thanh Kỳ chủ biên(2006), Thực tập Dược liệu phần hóa học, Trung tâm thơng tin thư viện trường Đại học Dược Hà Nội in 13 Phạm Thanh Kỳ, Phan Thị Phi Phi, Phan Thị Thu Anh (2007), Nghiên cứu tác dụng tăng đáp ứng miễn dịch dược liệu Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum (Thumb.) Makino, Tạp chí thơng tin Y Dược số 14 Phan Lê (2002), Cây thuốc phòng trị bệnh ung thư, NXB Thuận Hóa, tập 2, 573 – 574 15 Ngơ Văn Thu (2006), Bài giảng Dược liệu tập I, Trung tâm thông tin thư viện trường Đại học Dược Hà Nội in, 126 – 142, 159 – 289 Tiếng Anh 16 Ankang Pharmaceutical Institution of Beijing Medical University Promotional material, 1999 17 Arbain D, Cannon JR, Afriastini Kartawinata K, Djamal R, Bustari A, Dharma A, Rosmawaty Rivai H, Zaherman Basir D, Sjafar M, Sjaiful Nawfa R & Kosela S (1989) Survey of some West Sumatran plants for alkaloids, Econ Bot 43(1): 73–78 18 Arichi S, Takemoto T & Uchida Y (1985a) Saponins of Gynostemma pentaphyllum as neoplasm inhibitors, Patent-Japan Kokai Tokkyo Koho-60 105, 627 19 Arichi S, Takemoto T & Uchida Y (1985b) Prevention of glucocorticoid side effects by saponins of Gynostemma pentaphyllum, Patent-Japan Kokai Tokkyo Koho-60 105, 625 20 Arichi S, Takemoto T & Uchida Y (1985c) Saponins of Gynostemma pentaphyllum as tonics, Patent-Japan Kokai Tokkyo Koho-60 105, 626 21 Attawish A, Chivapat S, Phadungpat S, Bansiddhi J, Techad-amrongsin Y, Mitrijit O, Chaorai B & Chavalittumrong P (2004) Chronic toxicity of Gynostemma pentaphyllum, Fitoterapia 75: 539–551 22 Blumert M & Liu JL (1999) Jiaogulan China’s ‘‘Immortality’’ Herb, Torchlight Publishing Inc., Badger, USA 23 Chang S, Kuang P, Zhang JT, Chen YY & Ru CM (1988) Memory facilitation induced by Gynostemma pentaphyllum and gypenoside ll (Ginsenoside Rb1) in mice, Acta Chin Pharmacol 4(6): 358–361 24 Chen JC, Chung JG & Chen LD (1999) Gypenoside induces apoptosis in human Hep3B and HA22T tumour cells, Cytobios 100: 37–48 25 Chen JC, Tsai CC, Chen LD, Chen HH & Wang WC (2000) Therapeutic effect of gypenoside on chronic liver injury and fibrosis induced by CCl4 in rats, Am J Chin Med 28(2): 175–185 26 Chen WC, Hau DM, Chen KT, Wang MI & Lin IH (1996) Protective effects of Gynostemma pentaphyllum in gamma-irradiated mice, Am J Chin Med 24(1): 83–92 27 Cheng JG, (1990) Investigation of the plant Jiaogulan and its analogous herb, Wulianmei Zhong Cao Yao 21(9): 424 28 China Pharmaceutical University (1996) In: Yan Y-Q (ed.) Encyclopedia of Chinese Herbs Vol 2, 1st ed (pp 1878–1882), China Medicine, Science and Technology Publisher, China 29 Chiu TH, Chen JC & Chung JG (2003) N-acetyltransferase is involved in gypenosides-induced N-acetylation of 2-amino-fluorene and DNA adduct formation in human cervix epidermoid carcinoma cells (Ca Ski) In Vivo 17(3): 281–288 30 Circosta C, De Pasquale R & Occhiuto F (2005) Cardiovascular effects of the aqueous extract of Gynostemma pentaphyllum Makino, Phytomedicine 12: 638–643 31 Cui JF, Eneroth P, Bruhn JG, Arihara S & Yoshikawa K (1998) Alkaline cleavage of gypenosides and characterization of dammaranetype aglycones by gas chromatography–mass spectrometry, Phytochem Anal 9(3): 128–133 32 Cui JF, Eneroth P & Bruhn JG (1999) Gynostemma pentaphyllum: identification of major sapogenins and differentiation from Panax species, Eur J Pharmaceut Sci 8: 187–191 33 Deng S, Li X, Chen B, Deng F & Zhou X (1994) Analysis of amino acids, vitamins, and chemical elements in Gynostemma pentaphyllum (Thunb) Makino, Hunan Yike Daxue Xuebao (Bulletin of Hunan Medical University) 19(6): 487–490 34 Fang ZP & Zeng XY (1989) Isolation and identification of flavonoids and organic acid from Gynostemma pentaphyllum Makino, Zhongguo Zhongyao Zazhi 14(11): 676–678 35 Guo WY & Wang WX (1993) Cultivation and utilisation of Gynostemma pentaphyllum, Publishing House of Electronics, Science and Technology University, pp 1–261 36 Han MQ, Liu JX & Gao H (1995) Effects of 24 Chinese medicinal herbs on nucleic acid, protein and cell cycle of human lung adenocarcinoma cell, Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi 15(3): 147– 149 37 Harbone JB, Mabry TJ, Mabry Helga The Flavonoids: Advances in Research since 1986, Chapman and Hall, London 38 Hou J, Liu S,Ma Z, Lang X, Wang J, Wang J & Liang Z (1991) Effects of Gynostemma pentaphyllum on the immunological function of cancer patients, J Traditional Chin Med 11(1): 47–52 39 Hu LH, Chen ZL & Xie YY (1996) New triterpenoid saponins from Gynostemma pentaphyllum, J Nat Prod 59(12): 1143–1145 40 Hu LH, Chen ZL & Xie YY (1997) Dammarane-type glycosides from Gynostemma pentaphyllum, Phytochemistry 44(4): 667–670 41 Jang YJ, Kim JK, Lee MS, Ham IH, Whang WK, Kim KH & Kim HJ (2001) Hypoglycemic and hypolipidemic effects of crude saponin 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 fractions from Panax ginseng and Gynostemma pentaphyllum, Yakhak Hoechi 45(5): 545–556 Jian Su New Medical College (1986) The Dictionary of Chinese Medicine (Zhong Yao Da Ci Dian), Shanghai Science and Technology Press, Shanghai, China Jork H, Funk W, Fischer W & Wimmer H (1990) Thin-Layer Chromatography Reagent and Detection Methods Volume 1a, Physical and Chemical Detection Methods: Fundamentals, Reagents I (pp 412) VCH Verlagsgesellschaft mbH, Weinheim, Germany Kimura Y, Okuda H, Arichi S & Takemoto T (1983) Effects of crude saponins of Gynostemma pentaphyllum on lipid metabolism, Shoyakugaku Zasshi 37: 272–275 Kuwahara M, Kawanishi F, Komiya T & Oshio H (1989) Dammarane saponins of Gynostemma pentaphyllum Makino and isolation of malonylginsenosides-Rb1, -Rd, and malonylgypenoside V., Chem Pharmaceut Bull 37(1): 135–139 La Cour B, Molgaard P & Yi Z (1995) Traditional Chinese medicine in treatment of hyperlipidaemia, J Ethnopharmacol 46(2): 125–129 Li SZ (1985) Ben Chao Gangu Mu Compendium of Materia Medica vol (pp 1326), People’s Health Publisher, Beijing, China 1326 Liang SX & Sun HW (2002) Determination of six nutritional elements in Chinese herbal medicines by graphite furnace atomic absorption spectrometry, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi 22(5): 847–849 Lin CC, Huang PC & Lin JM (2000) Antioxidant and hepatoprotective effects of Anoectochilus formosanus and Gynostemma pentaphyllum, Am J Chin Med 28(1): 87–96 Lin JM, Lin CC, Chiu HF, Yang JJ & Lee SG (1993) Evaluation of the anti-inflammatory and liver-protective effects of Anoectochilus formosanus, Ganoderma lucidum and Gynostemma pentaphyllum in rats, Am J Chin Med 21(1): 59–69 Liu JD, Wang S, Lau HT, Yang LP & Nang GZ (1994) Effects of saponins from Chinese medicinal herbs on immune functions of lymphocytes in the elderly, Chin J Pharmacol (Zhongguo Yaoxue Zazhi) 29(12): 717–721 Liu X, Ye W, Mo Z, Yu B, Zhao S, Wu H, Che C, Jiang R, Mak TCW & Hsaio WLW (2004) Five new ocotillone-type saponins from Gynostemma pentaphyllum, J Nat Prod 67: 1147–1151 Ma YC, Zhu J, Benkrima L, Luo M, Sun LH, Sain S, Kont K & PlautCarcasson YJ (1995) A comparative evaluation of ginsenosides in 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 commercial ginseng products and tissue culture samples using HPLC, J Herbs, Spices, Med Plants 3(4): 41–50 Mackay M, Wei JX & Chen YG (1991) Structure of a new dammaranetype triterpene from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino, Acta Crystallogr Sec C: Crystal Struct Commun C47: 790–793 Marino A, Elbert GM & Cataldo A (1989) Sterols from Gynostemma pentaphyllum, Bolletino della Societa Italiana di Biologia Sperimentale 65(4): 317–319 Megalli S & Roufogalis BD (2005) Cholesterol lowering for healthy hearts: a herbal approach, Aust J Pharm 86: 326–330 Megalli S, Aktan F, Davies NM & Roufogalis BD (2005) Phytopreventative anti-hyperlipidemic effects of Gynostemma pentaphyllum in rats, J Pharm Pharmaceut Sci 8(3): 507–515 Mo YY, Luo SQ, Dong JP & Yang Y (1997) The new progress of the anti-cancer function researches of Gynostemma pentaphyllum, Northwestern J Pharmacol (Xi Bei Yao Xue Za Zhi) 12(4): 177–178 NagaiM, IzawaK,Nagumo S, SakuraiN& Inoue T (1981) Two glycosides of a novel dammarane alcohol from Gynostemma pentaphyllum, Chem Pharmaceut Bull 29: 779–783 Nippon Shoji Co., Ltd (1985) Gypenosides, Patent-Japan Kokai Tokkyo Koho-58, 208, 34: 10 pp Chemical Abstract 14: 206696y Nippon Shoji Co., Ltd and Takemoto T (1983) Saponins from Gynostemma pentaphyllum, Jpn Kokai Tokkyo Koho, JKXXAF JP 58057398 A2 19830405 Showa CAN 99:76853 AN 1983: 476853 Norberg A, Hoa NK, Liepinsh E, Van Phan D, Thuan ND, Jornvall H, Sillard R & Ostenson CG (2004) A novel insulin-releasing substance, phanoside, from the plant Gynostemma pentaphyllum, J Biol Chem 279(40): 41361–41367 Oshio H, Kuwahara M & Komiya T (1987) Ginsenoside – Rd, Takeda Chemical Industries Ltd Patent-Brit UK Pat-2, 179, 042 Piacente S, Pizza C, De Tommasi N & De Simone F (1995) New dammarane-type glycosides from Gynostemma pentaphyllum, J Nat Prod 58(4): 512–519 Purmova J & Opletal L (1995) Phytotherapeutic aspects of diseases of the cardiovascular system Saponins and possibilities of their use in prevention and therapy, Ceska Slov Farm 44(5): 246–251 Qian H, Fu S, Jiang G, Wang L, Fu X, Ye M & Zhao S (1995) Protective effect of Jiaogulan on cellular immunity of the patients with 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 primary lung cancer treated by radiotherapy plus chemotherapy, Acta Acad Med Shanghai 22(5): 363–366 Qian XW (2001) Repairing function of Gynostemma pentaphyllum on damaged DNA induced by potassium aluminium sulfate or cyclophosphamide, Zhongguo Gonggong Weisheng 17(11): 1009– 1010 Qin Z, Zhao L, Bi S & You L (1992) Saponin constituents and resource of Gynostemma pentaphyllum, Tianran Chanwu Yanjiu Yu Kaifa 4(1): 83–98 Qi G, Zhang L & Li C (1996) Influence of gypenoside on serum lipoprotein and atherosclerosis in hyperlipidemia animals, Zhongguo Zhongyao Zazhi 21: 562–564 Qi G, Zhang L, Xie WL, Chen XY & Li JS (2000) Protective effect of gypenosides on DNA and RNA of rat neurons in cerebral ischemiareperfusion injury, Acta Pharmacol Sin 21(12): 1193–1196 Razmovski-Naumovski V, Duke RK, Turner P & Duke CC (2005b) (20S), 2a; 3b; 12b- Trihydroxydammar-24-ene 20-O-b-Dglucopyranoside (Gynosaponin TN1) as the 2,5-methanol solvate, Acta Crystallogr Sec E 61(5): o1239–o1241 Rujjanawate C, Kanjanapothi D & Amornlerdpison D (2004) The antigastric ulcer effect of Gynostemma pentaphyllum Makino, Phytomedicine 11(5): 431–435 Song CZ (1996) Practical Chinese Herbal Preparations Handbook, People’s Army Medical Press, Beijing, China Takagi J, Imada T, Kikuchi T, Saito Y & Inada Y (1985) A new platelet aggregation factor from Gynostemma pentaphyllum Makino, Chem Pharmaceut Bull 33(12): 5568–5571 Takemoto T & Nippon Shoji Co., Ltd (1984a) Gynosaponin E extraction from Gynostemma pentaphyllum, Jpn Kokai Tokkyo Koho, JKXXAF JP 59080698 A2 19840510 Showa JP 83–170424 19830914, CAN 101: 235568, AN 1984: 635568 Takemoto T & Nippon Shoji Co., Ltd (1984b) Gynosaponins G, K, and progynosaponin A2 extraction from Gynostemma pentaphyllum, Japan Kokai Tokkyo Koho, JKXXAF JP 59080697 A2 19840510 Showa JP 83-170423 19830914, CAN 101: 216398, AN 1984: 616398 Takemoto T & Nippon Shoji Co., Ltd (1984c) Gynosaponins extraction from Gynostemma pentaphyllum, Japan Kokai Tokkyo Koho, JKXXAF JP 59080696 A2 19840510 Showa JP 83-170422 19830914, CAN 101: 216399, AN 1984: 616399 78 Takemoto T & Nippon Shoji Co., Ltd (1984d) Gynosaponins M, N, and O extraction from Gynostemma pentaphyllum, Japan Kokai Tokkyo Koho JKXXAF JP 59080699 A2 19840510 Showa JP 83-170425 19830914, CAN 101: 235567, AN 1984: 635567 79 Takemoto T, Arichi S, Arihara S, Nakajima T, Okuhira M & Uchida Y (1981) Gynosaponins and drug preparations containing these compounds, Ger Offen DE 80-3042117 19801107 CAN 96: 24789 AN 1982: 24789 80 Takemoto T, Arichi S, Arihara S, Nakajima T, Okuhira M & Yoshihiro U (1982) Gynosaponins, their use and a process for preparing the same, Patent 4339422, SN: 205377, INTL: A01N 031/00, US: 424/182 81 Takemoto T, Arihara S, Nakajima T & Okuhira M (1983a) Studies on the constituents of Gynostemma pentaphyllum MAKINO I Structures of Gypenoside I-XIV, Yakugaku Zasshi 103(2): 173–185 82 Takemoto T & Odashima T (1983) Antitumor saponins from Gynostemma pentaphyllum Rhoto Pharmaceuticals, Ltd Japan Kokai Tokkyo Koho, JKXXAF JP 58059921 A2 19830409 Showa JP 81157925 19811002 CAN 99: 47915 AN 1983: 447915 83 Tan H, Liu ZL & Liu MJ (1993) Antithrombotic effect of Gynostemma pentaphyllum, Chung-Kuo Chung His i Chieh Ho Tsa Chih (Chin J Integr Traditional Western Med.) 13(5): 278–280 84 Tanner MA, Bu X, Steimle JA & Myers PR (1999) The direct release of nitric oxide by gypenosides derived from the herb Gynostemma pentaphyllum, Nitric Oxide 3(5): 359–365 85 Wang BQ (1994) Research on the Quality of Chinese Preparative Medicines and Reference Substances, China Medical and Phamaceutical Science and Technology Press, Beijing, China 86 Wang J & Li X (1997) Leaves and stems of Panax quinquefolium L (I) Isolation and identification of eleven triterpenoid saponins, Zhongguo Yaowu Huaxue Zazhi 7(2): 130–132 87 Wang J, Lu Z, Chi J, Wang W, Su M, Kou W, Yu P, Yu J, Chen L, Zhu JS & Chang J (1997b) Multicenter clinical trial of the serum lipidlowering effects of a Monascus purpureus (red yeast) rice preparation from traditional Chinese medicine, Curr Ther Res 58(12): 964–978 88 Wang M, Wu Y & Chen T (1997a) Extract of gynosaponin by column chromatography, Guizhou Gongye Daxue Xuebao 26(3): 60–63 89 Wang QG, Hu SL, He LY, Jiang CE, Lei YN & Lin YS (1997c) Inhibitory effect of Gynostemma pentaphyllum against ischemia 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 reperfusion damage of hippocampal structure in rat, Zhongguo Bingli Shengli Zazhi 13(5): 513–516 Wang YQ (1988) Antitumor effect of gypenoside, Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi 8: 286–262 Wang YG & Bai RR (1994) Effects of gypenosides (GP) on mutagenesis induced by cyclophosphamide (CP) in mice, Zhongguo Yaolixue Tongbao 10(6): 457–459 Wang ZY & Qui P (1992) Protective effect of gypenosides on acute incomplete cerebral ischemia in rabbits, Zhongguo Yaolixue Yu Dulixue Zazhi 6(3): 204–206 Wang QY, Guo QS, Sun JY, Zhang SD & Li YH (2004) Studies on sex identification and variation of endogenous hormones in female and male plants of Gynostemma pentaphyllum, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 29(9): 837–840 Wu J, Qui P, Liu J,Mu Q & Xin D (1990) Effects of gypenosides on platelet aggregation release and cAMP level in rabbits, Zhongguo Yaolixue Yu Dulixue Zazhi 4(1): 54–57 Wu QJ (1957) Zi Wu Ming Shi Tu Kau Textual Investigation of Herbal Plant, 2Shang Wu Publishing House, China 559 Wu YG (ed.) (1998) Dictionary of Chinese Materia Medica Vol 2, 1st ed, Shanghai Science and Technological Publishing House, Shanghai, China, 1088 pp Xie PS & Yan YZ (1987) HPTLC fingerprint identification of commercial ginseng drugs-reinvestigation of HPTLC of ginsenosides, J High Resolu Chromatogr Chromatogr Commun 10(11): 607–613 Xu S, Xiang H & Zhou J (1994) Pharmacological effect of gypenosides, J Sun Yatsen Univ 6(Suppl.): 64–68 Xu S, Yao L & Wang Y (1994a) Prepararation of Gulanpenisong capsules and tablets containing Gynostemma pentaphyllum saponin and prednisone, Ankang Medicinal Plant Development Institute Patent-Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu-1,088,783 Xu S, Yao L & Wang Y (1994b) Pharmaceutical tablets containing dexamethasone and Gynostemma pentaphyllum saponins, PatentFaming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu-1,089,139 Yoshikawa K, Arihara S, Matsuura K & Miyase T (1991) Dammarane saponins from Gymnema sylvestre, Phytochemistry 31(1): 237–241 Yu C (1993) Therapeutic effect of tablet gypenosides on 32 patients with hyperlipaemia, Hu Dei Zhong Yi Za Zhi 15(3): 21 103 Zhang C, Yang X & Xu L (1990) Immunomodulatory action of the total saponin of Gynostemma pentaphylla, Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi 10(2): 69–70, 96–98 104 Zhang L, Wu GL, Chen XY & Qi G (2002) Protective effect of gypenosides on cerebral cortex and hippocampus in vascular dementia rat, Zhongcaoyao 33(4): 330–331 105 Zhang QB, Ma JJ, Chao ZX & Lin ZB (1999) Therapeutic role and its mechanism of gypenosides on delayed healing of experimental gastric ulcer induced by NCTC11637 strain HP in rats, Chin Pharmacol Bull 15(3): 225–228 106 Zhang Z, Xie SJ, Huang SP & Zhang Q (1993) Analysis of medicinal and nutritional components in Gynostemma pentaphyllum, Shanxi Daxue Xuebao Ziran Kexueban 16(3): 307–310 107 Zhao C, Chen H & Zou S (1994) Pharmaceutical granules containing Gynostemma pentaphyllum saponins for cardiovascular or cerebrovascular disease, Patent-Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu 1, 089, 140 108 Zhao Z, Xing L, Ma Z & Ren HI (1995) Modified method for the extraction of total saponins from Gynostemma pentaphyllum, Zhongcaoyao 26(11): 580–581 109 Zheng J & He W (2000) Separation and identification of 2a; 3b; 12b,20(S)- tetrahydroxydammar-24-ene-3-O-b-sop-horoside-20-O-brutinoside from saponins of Gynostemma pentaphyllum (Thumb.) Marko, Guangdong Yaoxueyuan Xuebao 16(3): 203–204 110 Zheng Z, Dong ZH & She J (1998) Modern Study of Traditional Chinese Medicine, 4Xue Yuan Press, Beijing, China 3519 111 Zhou H (1988) The saponin constituents and pharmacology of Gynostemma pentaphyllum, Mak Yaoxue Tongbao 23(12): 720–724 112 Zhou Z, Wang Y & Zhou Y (1996a) The effect of Gynostemma pentaphyllum mak (GP) on carcinogenesis of the golden hamster cheek pouch induced by DMBA, Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi 31(5): 267–270 113 Zhou ZT, Zhang SL, Li WG & Jin ZG (1996b) Observation of the effectiveness of compound Gynostemma pentaphyllum Mak in golden hamster cheek pouch’s premalignancy, Shanghai Kou Qiang Yi Xue 5(2): 74–76 114 Zhou Z, Wang Y, Zhou Y & Zhang S (1998) Effect of Gynostemma pentaphyllum Mak on carcinomatous conversions of golden hamster cheek pouches induced by dimethylbenzanthracene: a histological study, Chin Med J 111(9): 847–850 115 Zhou Z, Tang G & Zhong W (2000) Experimental study on the influence of Gynostemma pentaphyllam Mak upon point mutation of Ha-ras oncogene in blocking leukoplakia from canceration, Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi 35(2): 91–94 116 Zhu S, Fang C, Zhu S, Peng F, Zhang L & Fan C (2001) Inhibitory effects of Gynostemma pentaphyllum on the UV induction of bacteriophage lambda in lysogenic Escherichia coli, Curr Microbiol 43(4): 299–301 Tiếng Pháp 117 M H Lecomte (1907 – 1912), Flore général de L’Indo-chine, Paris Masson et Cie, Editeurs, II, 1079 – 1081 Tiếng Trung Quốc 主编。分析化学手册（第二版）第七分册 核磁共振波普分析。化学工业出版社。北京，2002：820 118 于德泉,杨峻山 PHỤ LỤC PHỤ LỤC I: CÁC PHỔ CỦA V1 PHỤ LỤC II: CÁC PHỔ CỦA C3 PHỤ LỤC III: CÁC PHỔ CỦA P1 PHỤ LỤC IV: CÁC PHỔ CỦA P2 PHỤ LỤC I: CÁC PHỔ CỦA V1 1.1 Phổ tử ngoại 1.2 Phổ hồng ngoại 1.3 Phổ mô 13C-NMR 1H-NMR 1.4 Phổ khối 1.5 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân PHỤ LỤC II: CÁC PHỔ CỦA C3 2.1 Phổ tử ngoại 2.2 Phổ hồng ngoại 2.3 Phổ mô 13C-NMR 1H-NMR 2.4 Phổ khối 2.5 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân PHỤ LỤC III: CÁC PHỔ CỦA P1 3.1 Phổ mô 13C-NMR 1H-NMR 3.2 Phổ khối 3.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân PHỤ LỤC IV: CÁC PHỔ CỦA P2 4.1 Phổ mô 13C-NMR 1H-NMR 4.2 Phổ khối 4.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ... cứu thành phần hoá học số tác dụng sinh học Giảo cổ lam thu hái Sapa tỉnh Lào Cai với hai mục tiêu:  Nghiên cứu thành phần hoá học Giảo cổ lam  Thử số tác dụng sinh học Giảo cổ lam CHƯƠNG... tính số tác dụng sinh học mẫu thu tỉnh Cao Bằng thu nhiều kết quan trọng Để tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng sinh học dược liệu Giảo cổ lam Việt Nam thực đề tài: Nghiên cứu thành. .. pentaphyllum [17] 1.3 TÁC DỤNG VÀ CÔNG DỤNG 1.3.1 Tác dụng dược lý Các đặc tính dược lý G pentaphyllum hầu hết thu c saponin, thành phần trở thành mục tiêu nghiên cứu nhà nghiên cứu dược học Trung Quốc