NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHẦN KHOÁNG, CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY TERPINEN4OL CỦA MÔ SẸO CÂY TRÀM TRÀ (Melaleuca alternifolia Cheel)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM  ĐỖ TIẾN VINH NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHẦN KHOÁNG, CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY TERPINEN-4-OL CỦA MƠ SẸO CÂY TRÀM TRÀ (Melaleuca alternifolia Cheel) LUẬN VĂN THẠC SĨ CƠNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh, Tháng 12/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM  ĐỖ TIẾN VINH NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHẦN KHOÁNG, CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY TERPINEN-4-OL CỦA MƠ SẸO CÂY TRÀM TRÀ (Melaleuca alternifolia Cheel) Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Mã số : 60.42.80 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN VĂN MINH Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2011 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHẦN KHOÁNG, CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY TERPINEN-4-OL CỦA MÔ SẸO CÂY TRÀM TRÀ (Melaleuca alternifolia Cheel) ĐỖ TIẾN VINH Hội đồng chấm luận văn: Chủ tịch: PGS.TS LÊ ĐÌNH ĐƠN Đại học Nơng Lâm TP.HCM Thư ký: TS PHẠM ĐỨC TỒN Đại học Nơng Lâm TP.HCM Phản biện 1: PGS.TS DƯƠNG TẤN NHỰT Phân viện Sinh Học Tây Nguyên Phản biện 2: PGS.TS BÙI VĂN LỆ Đại học khoa học tự nhiên TP.HCM Ủy viên: TS BÙI MINH TRÍ Đại học Nông Lâm TP.HCM i LÝ LỊCH CÁ NHÂN Tôi tên Đỗ Tiến Vinh sinh ngày 18 tháng 12 năm 1986 xã Phú Cường huyện Định Quán tỉnh Đồng Nai Con ông Đỗ Ngọc Diêu bà Phan Thị Nhiều Từ năm 2001 đến năm 2004 theo học tốt nghiệp trung học phổ thông trường trung học phổ thông Điểu Cải, huyện Định Quán, tỉnh Đồng Nai Từ tháng năm 2004 đến tháng năm 2008 theo học tốt nghiệp đại học chuyên ngành Công nghệ Sinh học hệ quy trường đại học Văn Lang, Thành phố Hồ Chí Minh Từ tháng đến tháng năm 2009 ôn tập thi đầu vào cao học chuyên ngành Công nghệ Sinh học trường đại học Nơng Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh Từ tháng năm 2009 đến theo học cao học chuyên ngành Công nghệ Sinh học trường đại học Nơng Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh Tình trạng gia đình: Độc thân Địa liên lạc: 104/A ấp Tam Bung, xã Phú Cường, huyện Định Quán, tỉnh Đồng Nai Điện thoại: 0989.844.778 Email: tienvinhvn_do@yahoo.com ii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Đỗ Tiến Vinh iii LỜI CẢM ƠN Trong hai năm học tập nghiên cứu đề tài tốt nghiệp cao học giúp thu nhận nhiều kiến thức, kinh nghiệm chuyên môn lẫn sống đến hôm hồn thành khóa học tơi xin gửi lời tri ân đến: Ban giám hiệu trường đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, thầy trưởng mơn thầy cô môn Công nghệ Sinh học, truyền đạt cho kiến thức quý báo suốt thời gian học trường Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Trần Văn Minh Thầy tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài tốt nghiệp PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng, TS Vũ Văn Độ, Cô Bùi Thị Tường Thu, cô Đỗ Thị Tuyến hỗ trợ suốt thời gian thực đề tài Viện Sinh học Nhiệt đới Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi thiết bị, dụng cụ, địa điểm cho thực đề tài Con xin cảm ơn ba mẹ nuôi khôn lớn cho học tới ngày hôm Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới ThS Nguyễn Trung Hậu, anh chị phịng Cơng nghệ Tế bào Thực vật Viện Sinh học Nhiệt đới tất bạn Những người quan tâm, ủng hộ chia sẻ với tơi khó khăn trình thực đề tài tốt nghiệp Học viên thực Đỗ Tiến Vinh iv TÓM TẮT Đề tài “Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần khoáng, chất cảm ứng đến khả sinh trưởng tích lũy terpinen-4-ol mô sẹo Tràm Trà (Melaleuca alternifolia Cheel)” thực Phịng Thí Nghiệm Trọng Điểm Phía Nam Về Cơng nghệ Tế bào Thực vật Viện Sinh học Nhiệt đới Thành phố Hồ Chí Minh, từ tháng năm 2010 đến tháng năm 2011 Mục tiêu đề tài xác định yếu tố ảnh hưởng tới q trình ni cấy khả tích tũy terpinen-4-ol mơ sẹo Tràm Trà Thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên Kết q trình nghiên cứu cho thấy: Khảo sát ni cấy mô sẹo bốn loại môi trường MS - LV - WPM - B5 có bổ sung đường sucrose (10 - 20 - 30 g/l); BA, NAA, 2,4-D (0,5 - 1,0 - 2,0 - 4,0 mg/l); B1, glycine (5 - 10 - 15 mg/l); nước dừa (5 - 10 - 15%); peptone (0,5 - 1,0 2,0 g/l) Đã xác định Tràm Trà phận tạo mô sẹo tốt mơi trường MS có bổ sung 2,4-D (4 mg/l), BA (0,5 mg/l), glycine (10 mg/l), B1 (5 mg/l), đường sucrose (20 g/l) (tỷ lệ tạo mô sẹo 97,22%) Khi giảm nồng độ 2,4-D xuống (1 mg/l), khơng có BA bổ sung thêm nước dừa (15%) vào mơi trường giúp dạng mơ sẹo có màu trắng sữa, mềm phát triển tốt (hệ số tăng sinh 19,34 lần) Thời điểm cấy chuyền tốt 25 ngày sau cấy Số lần cấy chuyền (từ F1 - F5); cường độ chiếu sáng (0 - 500 - 1000 - 2000 3000 lux); yeast extract, chitosan, casein hydrolysate (50 - 100 - 150 - 200 mg/l) có ảnh hưởng tới khả tăng sinh tích lũy hoạt chất mô sẹo Kết cho thấy khả tổng hợp terpinen-4-ol mô sẹo trì tốt ba lần cấy chuyền đầu tiên, từ lần cấy chuyền thứ tư khả tổng hợp hoạt chất giảm Nhân sinh khối mô sẹo diễn điều kiện tối tốt nhất, mô sẹo chiếu sáng với cường độ 2000 lux, 12 giờ/ngày tổng hợp terpinen-4-ol tốt (0,0218%) Việc bổ sung yeast extract, chitosan, casein hydrolysate có tác dụng làm tăng hàm lượng terpinen-4-ol Trong đó, nồng độ yeast extract 150 mg/l cho kết v tốt (0,0256%) Mô sẹo Tràm Trà nuôi cấy môi trường lỏng lắc với tốc độ 100 vòng/phút tạo dịch huyền phù tốt với lượng mẫu ban đầu 1,5 g 50 ml mơi trường có khả tổng hợp terpinen-4-ol cao 1,3 lần so với mô sẹo nuôi cấy môi trường thạch vi ABSTRACT The thesis “Studying the influences of the minerals, elicitors on cell growth and terpinen-4-ol accumulation of Melaleuca alternifolia Cheel callus” was carried out at Southern Key Laboratory for Plant Cell Technology, Institute for Tropical Biology from 9/2010 to 9/2011 The aim of thesis is determination of factors influencing on growth of callus and terpinen-4-ol accumulation in Melaleuca alternifolia Cheel callus The experiment was designed in completely randomized design The results of study showed that: In examination of callus cultures on four media (MS, LV, WPM, B5) supplemented with sucrose (10 - 20 - 30 g/l); phytohormones (BA, NAA, 2,4-D) with different levels (0,5 - 1,0 - 2,0 - 4,0 mg/l); B1, glycine (5 - 10 - 15 mg/l); coconut water (5 - 10 - 15%); peptone (0,5 - 1,0 - 2,0 g/l) Melaleuca alternifolia Cheel leaves was a best explant for callus induction on MS medium supplemented with 2,4-D (4 mg/l), BA (0,5 mg/l), glycine (10 mg/l), B1 (5 mg/l), sucrose (20 g/l) (rate of callus induction is 97,22%) White fragile callus grew best on medium supplemented with decreased 2,4-D concentration (1 mg/l), coconut water (15%) without BA (growth rate: 19,34 times) The best subculture time is day 25 for optimal growth of callus Cell generation (F1 - F5); light intensity (0 - 500 - 1000 - 2000 - 3000 lux); yeast extract, chitosan, casein hydrolysate (50 - 100 - 150 - 200 mg/l) also influenced on growth and terpinen-4-ol accumulation of callus The results indicated that terpinen-4-ol biosynthesis of callus was stably maintained in thrice of first subcultures and decreased in 4th subculture Proliferation of callus biomass in dark condition was best, callus was lighted with intensity of 2000 lux in 12 h/day enhancing highest terpinen-4-ol content in callus (0,0218%) The supplement of yeast extract, chitosan, casein hydrolysate promoted terpinen-4-ol content in callus and the content of yeast extract (150 mg/l) showed the best result (0,0256%) The vii suitable weight of callus for establishment of suspension cultures was 1,5 g per 50 ml liquid medium and shaked with speed 100 round/min for finest suspension The biosynthesis of terpinen-4-ol of cell suspension in liquid medium was 1,3 times higher than that of callus in solid medium viii  Chiều cao chồi đốt cắt A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 2.904 0.726 9.512 0.0019 Within 10 0.763 0.076 Total 14 3.667 Coefficient of Variation = 6.83% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 10.950 3.650 0.31 0.16 3.00 12.780 4.260 0.23 0.16 3.00 14.450 4.817 0.17 0.16 3.00 11.270 3.757 0.31 0.16 3.00 11.250 3.750 0.33 0.16 -Total 15.00 60.700 4.047 0.51 0.13 Within 0.28 Least Significant Difference Test LSD value = 0.7134 at alpha = 0.010 &k2S Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 3.650 4.260 4.817 3.757 3.750 B AB A B B Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 4.817 4.260 3.757 3.750 3.650 A AB B B B Thí nghiệm 4: khảo sát ảnh hưởng IBA, NAA lên khả tạo rễ Tràm Trà invitro  Tỷ lệ tạo rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 13662.300 1707.787 4109.796 0.0000 Within 18 7.480 0.416 Total 26 13669.779 Coefficient of Variation = 4.20% 92 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.37 3.00 0.000 0.000 0.00 0.37 3.00 0.000 0.000 0.00 0.37 3.00 112.620 37.540 1.00 0.37 3.00 181.270 60.423 1.39 0.37 3.00 0.000 0.000 0.00 0.37 3.00 0.000 0.000 0.00 0.37 3.00 0.000 0.000 0.00 0.37 3.00 120.530 40.177 0.90 0.37 -Total 27.00 414.420 15.349 22.93 4.41 Within 0.64 Least Significant Difference Test LSD value = 1.516 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean  = = = = = = = = = 0.0000 0.0000 0.0000 37.54 60.42 0.0000 0.0000 0.0000 40.18 D D D C A D D D B Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = = 60.42 40.18 37.54 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 A B C D D D D D D Số rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 16.557 2.070 874.492 0.0000 Within 18 0.043 0.002 Total 26 16.600 Coefficient of Variation = 9.28% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 3.460 1.153 0.10 0.03 3.00 6.530 2.177 0.07 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 4.160 1.387 0.08 03 -Total 27.00 14.150 0.524 0.80 0.15 Within 0.05 93 Least Significant Difference Test LSD value = 0.1051 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean  = = = = = = = = = 0.0000 0.0000 0.0000 1.153 2.177 0.0000 0.0000 0.0000 1.387 D D D C A D D D B Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = = 2.177 1.387 1.153 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 A B C D D D D D D Chiều dài rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 47.177 5.897 2012.930 0.0000 Within 18 0.053 0.003 Total 26 47.230 Coefficient of Variation = 6.09% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 5.030 1.677 0.09 0.03 3.00 8.940 2.980 0.11 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 0.000 0.000 0.00 0.03 3.00 10.010 3.337 0.09 0.03 -Total 27.00 23.980 0.888 1.35 0.26 Within 0.05 Least Significant Difference Test LSD value = 0.1287 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = = 0.0000 0.0000 0.0000 1.677 2.980 0.0000 0.0000 0.0000 3.337 D D D C B D D D A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 94 = = = = = = = = = 3.337 2.980 1.677 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 A B C D D D D D D Thí nghiệm 5: khảo sát mơi trường khống nuôi cấy tạo mô sẹo  Tỷ lệ tạo mô sẹo A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 15 18626.949 1241.797 214.541 0.0000 Within 32 185.221 5.788 Total 47 18812.169 Coefficient of Variation = 4.89% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 214.733 71.578 1.67 1.39 3.00 229.134 76.378 0.50 39 3.00 244.633 81.544 1.68 1.39 3.00 234.933 78.311 4.38 1.39 3.00 144.000 48.000 0.70 1.39 3.00 164.800 54.933 1.67 1.39 3.00 184.633 61.544 1.68 1.39 3.00 185.133 61.711 1.67 1.39 3.00 72.366 24.122 1.37 1.39 10 3.00 90.900 30.300 3.37 1.39 11 3.00 92.167 30.722 4.46 1.39 12 3.00 67.933 22.644 2.38 1.39 13 3.00 95.533 31.844 1.69 1.39 14 3.00 115.667 38.556 1.71 1.39 15 3.00 120.600 40.200 3.35 1.39 16 3.00 104.700 34.900 1.68 1.39 -Total 48.00 2361.865 49.206 20.01 2.89 Within 2.41 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 5.375 s_ = 1.388 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 71.58 B Mean = 81.54 A Mean = 76.38 AB Mean = 78.31 A Mean = 81.54 A Mean = 76.38 AB Mean = 78.31 A Mean = 71.58 B Mean = 48.00 E Mean = 61.71 C Mean = 54.93 D Mean = 61.54 C Mean = 61.54 C Mean = 54.93 D Mean = 61.71 C Mean = 48.00 E Mean = 24.12 H Mean 15 = 40.20 F Mean 10 = 30.30 G Mean 14 = 38.56 F Mean 11 = 30.72 G Mean 16 = 34.90 FG Mean 12 = 22.64 H Mean 13 = 31.84 G Mean 13 = 31.84 G Mean 11 = 30.72 G Mean 14 = 38.56 F Mean 10 = 30.30 G Mean 15 = 40.20 F Mean = 24.12 H Mean 16 = 34.90 FG Mean 12 = 22.64 H 95  Tỷ lệ tạo mô sẹo thân A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 15 8611.181 574.079 171.202 0.0000 Within 32 107.303 3.353 Total 47 8718.484 Coefficient of Variation = 4.05% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 125.000 41.667 1.67 1.06 3.00 226.100 75.367 1.78 1.06 3.00 185.933 61.978 1.75 1.06 3.00 125.833 41.944 1.73 1.06 3.00 108.800 36.267 2.76 1.06 3.00 175.000 58.333 1.67 1.06 3.00 185.000 61.667 1.67 1.06 3.00 179.300 59.767 0.40 1.06 3.00 75.700 25.233 1.72 1.06 10 3.00 95.000 31.667 1.67 1.06 11 3.00 104.600 34.867 1.68 1.06 12 3.00 120.300 40.100 3.34 1.06 13 3.00 104.200 34.733 1.73 1.06 14 3.00 110.134 36.711 0.08 1.06 15 3.00 125.000 41.667 1.67 1.06 16 3.00 125.433 41.811 1.69 1.06 -Total 48.00 2171.333 45.236 13.62 1.97 Within 1.83 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 4.094 s_ = 1.057 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 41.67 C Mean = 75.37 A Mean = 75.37 A Mean = 61.98 B Mean = 61.98 B Mean = 61.67 B Mean = 41.94 C Mean = 59.77 B Mean = 36.27 DE Mean = 58.33 B Mean = 58.33 B Mean = 41.94 C Mean = 61.67 B Mean 16 = 41.81 C Mean = 59.77 B Mean = 41.67 C Mean = 25.23 G Mean 15 = 41.67 C Mean 10 = 31.67 F Mean 12 = 40.10 CD Mean 11 = 34.87 EF Mean 14 = 36.71 DE Mean 12 = 40.10 CD Mean = 36.27 DE Mean 13 = 34.73 EF Mean 11 = 34.87 EF Mean 14 = 36.71 DE Mean 13 = 34.73 EF Mean 15 = 41.67 C Mean 10 = 31.67 F Mean 16 = 41.81 C Mean = 25.23 G 96 Thí nghiệm 6: nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến q trình tạo mơ sẹo Tràm Trà  Tỷ lệ tạo mô sẹo A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 20 49290.603 2464.530 1824.130 0.0000 Within 42 56.745 1.351 Total 62 49347.348 Coefficient of Variation = 2.17% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.67 3.00 0.000 0.000 0.00 0.67 3.00 0.000 0.000 0.00 0.67 3.00 111.300 37.100 0.85 0.67 3.00 93.850 31.283 1.25 0.67 3.00 191.250 63.750 1.25 0.67 3.00 210.500 70.167 2.02 0.67 3.00 232.500 77.500 0.50 0.67 3.00 237.450 79.150 0.85 0.67 10 3.00 225.000 75.000 0.50 0.67 11 3.00 228.750 76.250 1.25 0.67 12 3.00 247.500 82.500 0.50 0.67 13 3.00 290.000 96.667 0.63 0.67 14 3.00 206.250 68.750 1.25 0.67 15 3.00 225.000 75.000 1.32 0.67 16 3.00 217.500 72.500 0.75 0.67 17 3.00 168.750 56.250 2.25 0.67 18 3.00 142.500 47.500 2.00 0.67 19 3.00 127.500 42.500 0.50 0.67 20 3.00 116.250 38.750 1.25 0.67 21 3.00 105.000 35.000 1.50 0.67 -Total 63.00 3376.850 53.601 28.21 3.55 Within 1.16 97 Least Significant Difference Test LSD value = 2.561 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 0.0000 O Mean Mean = 0.0000 O Mean Mean = 0.0000 O Mean Mean = 37.10 LM Mean Mean = 31.28 N Mean Mean = 63.75 H Mean Mean = 70.17 FG Mean Mean = 77.50 CD Mean Mean = 79.15 C Mean Mean 10 = 75.00 DE Mean Mean 11 = 76.25 D Mean Mean 12 = 82.50 B Mean Mean 13 = 96.67 A Mean Mean 14 = 68.75 G Mean Mean 15 = 75.00 DE Mean Mean 16 = 72.50 EF Mean Mean 17 = 56.25 I Mean Mean 18 = 47.50 J Mean Mean 19 = 42.50 K Mean Mean 20 = 38.75 L Mean Mean 21 = 35.00 M Mean 13 12 11 15 10 16 14 17 18 19 20 21 Ranked Order = 96.67 A = 82.50 B = 79.15 C = 77.50 CD = 76.25 D = 75.00 DE = 75.00 DE = 72.50 EF = 70.17 FG = 68.75 G = 63.75 H = 56.25 I = 47.50 J = 42.50 K = 38.75 L = 37.10 LM = 35.00 M = 31.28 N = 0.0000 O = 0.0000 O = 0.0000 O Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hưởng B1 Glycine đến q trình tạo mơ sẹo A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 15 574.871 38.325 15.263 0.0000 Within 32 80.352 2.511 Total 47 655.224 Coefficient of Variation = 1.79% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 255.000 85.000 1.67 0.91 3.00 260.000 86.667 3.33 0.91 3.00 279.999 93.333 1.73 0.91 3.00 270.000 90.000 1.33 0.91 3.00 261.001 87.000 1.53 0.91 3.00 265.000 88.333 1.67 0.91 3.00 255.000 85.000 1.67 0.91 3.00 270.334 90.111 1.50 0.91 3.00 291.667 97.222 0.51 0.91 10 3.00 267.168 89.056 1.51 0.91 11 3.00 265.000 88.333 1.67 0.91 12 3.00 275.000 91.667 1.67 0.91 13 3.00 248.999 83.000 0.58 0.91 14 3.00 271.000 90.333 0.88 0.91 15 3.00 262.334 87.445 1.07 0.91 16 3.00 255.000 85.000 1.00 0.91 -Total 48.00 4252.502 88.594 3.73 0.54 98 Within Least Significant Difference Test LSD value = 3.543 at alpha = 0.010 &k2S Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 = = = = = = = = = = = = = = = = 85.00 86.67 93.33 90.00 87.00 88.33 85.00 90.11 97.22 89.06 88.33 91.67 83.00 90.33 87.44 85.00 FG EF B BCDE DEF CDEF FG BCDE A CDE CDEF BC G BCD DEF FG Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 12 14 10 11 15 16 13 = = = = = = = = = = = = = = = = 97.22 93.33 91.67 90.33 90.11 90.00 89.06 88.33 88.33 87.44 87.00 86.67 85.00 85.00 85.00 83.00 1.58 A B BC BCD BCDE BCDE CDE CDEF CDEF DEF DEF EF FG FG FG G Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA; NAA; IBA đến q trình nhân sinh khối mơ sẹo Tràm Trà A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 21 634.951 30.236 196.731 0.0000 Within 44 6.762 0.154 Total 65 641.713 Coefficient of Variation = 4.95% 99 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 5.970 1.990 0.10 0.23 3.00 16.630 5.543 0.12 0.23 3.00 18.700 6.233 0.09 0.23 3.00 21.350 7.117 0.61 0.23 3.00 16.150 5.383 0.09 0.23 3.00 19.990 6.663 0.16 0.23 3.00 20.920 6.973 0.20 0.23 3.00 38.900 12.967 0.38 0.23 3.00 51.190 17.063 0.72 0.23 10 3.00 39.090 13.030 0.87 0.23 11 3.00 18.670 6.223 0.09 0.23 12 3.00 25.280 8.427 0.49 0.23 13 3.00 19.870 6.623 0.20 0.23 14 3.00 23.380 7.793 0.25 0.23 15 3.00 25.280 8.427 0.29 0.23 16 3.00 29.720 9.907 0.60 0.23 17 3.00 17.520 5.840 0.07 0.23 18 3.00 23.970 7.990 0.55 0.23 19 3.00 20.060 6.687 0.18 0.23 20 3.00 28.050 9.350 0.42 0.23 21 3.00 16.380 5.460 0.34 0.23 22 3.00 25.320 8.440 0.21 0.23 -Total 66.00 522.390 7.915 3.14 0.39 Within 0.39 Least Significant Difference Test LSD value = 0.8627 at alpha = 0.010 &k2S Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 1.990 5.543 6.233 7.117 5.383 6.663 6.973 12.97 17.06 13.03 6.223 8.427 6.623 7.793 8.427 9.907 5.840 7.990 6.687 9.350 5.460 8.440 J I GHI Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean EF I FGH EFG B A B GHI D FGH DE D C HI D FGH C I D 100 10 16 20 22 12 15 18 14 19 13 11 17 21 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 17.06 13.03 12.97 9.907 9.350 8.440 8.427 8.427 7.990 7.793 7.117 6.973 6.687 6.663 6.623 6.233 6.223 5.840 5.543 5.460 5.383 1.990 A B B C C D D D D DE EF EFG FGH FGH FGH GHI GHI HI I I I J Thí nghiệm 9: Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần hữu đến q trình nhân sinh khối mơ sẹo Tràm Trà A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 21 987.138 47.007 871.693 0.0000 Within 44 2.373 0.054 Total 65 989.510 Coefficient of Variation = 2.04% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 10.656 3.552 0.10 0.13 3.00 38.164 12.721 0.14 0.13 3.00 50.608 16.869 0.54 0.13 3.00 45.540 15.180 0.37 0.13 3.00 25.248 8.416 0.07 0.13 3.00 28.770 9.590 0.08 0.13 3.00 31.264 10.421 0.13 0.13 3.00 20.738 6.913 0.11 0.13 3.00 19.866 6.622 0.08 0.13 10 3.00 19.798 6.599 0.07 0.13 11 3.00 32.898 10.966 0.08 0.13 12 3.00 40.332 13.444 0.05 0.13 13 3.00 47.524 15.841 0.15 0.13 14 3.00 43.598 14.533 0.05 0.13 15 3.00 52.172 17.391 0.19 0.13 16 3.00 58.017 19.339 0.66 0.13 17 3.00 33.172 11.057 0.14 0.13 18 3.00 34.064 11.355 0.07 0.13 19 3.00 31.116 10.372 0.22 0.13 20 3.00 28.836 9.612 0.10 0.13 21 3.00 28.274 9.425 0.07 0.13 22 3.00 30.826 10.275 0.31 0.13 -Total 66.00 751.481 11.386 3.90 0.48 Within 0.23 Least Significant Difference Test LSD value = 0.5108 at alpha = 0.010 101 Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original Order = 3.552 N = 12.72 H = 16.87 C = 15.18 E = 8.416 L = 9.590 K = 10.42 J = 6.913 M = 6.622 M 10 = 6.599 M 11 = 10.97 I 12 = 13.44 G 13 = 15.84 D 14 = 14.53 F 15 = 17.39 B 16 = 19.34 A 17 = 11.06 I 18 = 11.35 I 19 = 10.37 J 20 = 9.612 K 21 = 9.425 K 22 = 10.28 J Ranked Order Mean 16 = Mean 15 = Mean = Mean 13 = Mean = Mean 14 = Mean 12 = Mean = Mean 18 = Mean 17 = Mean 11 = Mean = Mean 19 = Mean 22 = Mean 20 = Mean = Mean 21 = Mean = Mean = Mean = Mean 10 = Mean = 19.34 17.39 16.87 15.84 15.18 14.53 13.44 12.72 11.35 11.06 10.97 10.42 10.37 10.28 9.612 9.590 9.425 8.416 6.913 6.622 6.599 3.552 A B C D E F G H I I I J J J K K K L M M M N Thí nghiệm 12: Nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng đến nhân sinh khối hàm lượng Terpinen-4-ol mô sẹo Tràm Trà A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 42.034 10.509 22.837 0.0001 Within 10 4.602 0.460 Total 14 46.636 Coefficient of Variation = 3.73% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 55.001 18.334 0.66 0.39 3.00 59.009 19.670 0.76 0.39 3.00 60.792 20.264 0.76 0.39 3.00 51.259 17.086 0.60 0.39 3.00 47.050 15.683 0.59 0.39 -Total 15.00 273.111 18.207 1.83 0.47 Within 0.68 Least Significant Difference Test LSD value = 1.755 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 18.33 BC Mean = 20.26 Mean = 19.67 AB Mean = 19.67 Mean = 20.26 A Mean = 18.33 Mean = 17.09 CD Mean = 17.09 Mean = 15.68 D Mean = 15.68 102 A AB BC CD D Thí nghiệm 13: Nghiên cứu ảnh hưởng chất bổ trợ đến trình nhân sinh khối hàm lượng Terpinen-4-ol mô sẹo Tràm Trà A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 41.182 3.432 6.205 0.0001 Within 26 14.380 0.553 Total 38 55.562 Coefficient of Variation = 4.30% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 56.080 18.693 0.43 0.43 3.00 49.584 16.528 1.12 0.43 3.00 54.816 18.272 0.70 0.43 3.00 54.288 18.096 0.54 0.43 3.00 52.992 17.664 0.97 0.43 3.00 52.371 17.457 0.86 0.43 3.00 54.912 18.304 0.65 0.43 3.00 54.240 18.080 0.62 0.43 3.00 51.456 17.152 1.03 0.43 10 3.00 45.936 15.312 0.45 0.43 11 3.00 51.504 17.168 0.52 0.43 12 3.00 48.720 16.240 0.39 0.43 13 3.00 46.944 15.648 0.90 0.43 -Total 39.00 673.843 17.278 1.21 0.19 Within 0.74 Least Significant Difference Test LSD value = 1.687 at alpha = 0.010 &k2S Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 = = = = = = = = = = = = = 18.69 16.53 18.27 18.10 17.66 17.46 18.30 18.08 17.15 15.31 17.17 16.24 15.65 A BCDE A AB ABC ABC A AB ABCD E ABCD CDE DE Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 103 11 12 13 10 = = = = = = = = = = = = = 18.69 18.30 18.27 18.10 18.08 17.66 17.46 17.17 17.15 16.53 16.24 15.65 15.31 A A A AB AB ABC ABC ABCD ABCD BCDE CDE DE E Thí nghiệm 14: Nghiên cứu ảnh hưởng trạng thái mơi trường đến q trình nhân sinh khối mô sẹo A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 105.551 26.388 1408.100 0.0000 Within 10 0.187 0.019 Total 14 105.739 Coefficient of Variation = 1.68% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 10.290 3.430 0.12 0.08 3.00 23.040 7.680 0.13 0.08 3.00 34.410 11.470 0.13 0.08 3.00 27.660 9.220 0.16 0.08 3.00 26.610 8.870 0.14 0.08 -Total 15.00 122.010 8.134 2.75 0.71 Within 0.14 Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.3567 s_ = 0.07958 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 3.430 7.680 11.47 9.220 8.870 D C A B B Mean Mean Mean Mean Mean 104 = = = = = 11.47 9.220 8.870 7.680 3.430 A B B C D Phụ lục 2: Thành phần mơi trường khống MS - LV - WPM - B5 Môi trường Nguyên tố MS LV WPM Đa lượng (g/l) Vi lượng (mg/l) Vitamine & aminoacid (mg/l) Fe EDTA (g/l) B5 CaCl2.2H2O - 0,022 0,0725 0,15 CaCl2 0,334 - - - Ca( NO3)2.4H2O - - 0,556 - KNO3 1,9 1,9 - 2,5 K2SO4 - - 0,99 - (NH4)2SO4 - - - 0,134 KH2PO4 0,17 0,340 0,17 - NaH2PO4.2H2O - - - 0,15 MgSO4.7H2O 0,37 0,185 0,37 0,25 NH4NO3 1,65 1,65 0,4 - CoCl2.6H2O 0,025 0,125 0,025 0,025 CuSO4.5H2O 0,025 0,5 0,025 0,025 H3BO3 6,20 31 6,20 KI 0,83 4,15 0,83 0,75 MnSO4.H2O 22,3 27,7 22,3 10 Na2MoO4.H2O 0,25 1,25 0,25 0,25 ZnSO4.H2O 8,60 43 8,60 Glycine 2,00 2,00 2,00 2,00 Myo-Inositol 100 100 100 100 Nicotinic acid 0,50 0,50 0,50 0,50 Pyridoxine HCl 0,50 0,50 0,50 0,50 Thiamine-HCl 0,10 0,10 0,10 0,10 NaEDTA 0,0373 0,0373 0,0373 0,0373 FeSO4.7H2O 0,0278 0,0278 0,0278 0,0278 105 Phụ lục 3: Hàm lượng terpinen-4-ol mẫu mô sẹo khô TN 11 12 13 14 NT F1 F2 F3 F4 F5 Tối 500lux 1000lux 2000lux 3000lux ĐC YE50 YE100 YE150 YE200 CA50 CA100 CA150 CA200 CHI50 CHI100 CHI150 CHI200 Agar Lỏng Hàm lượng terpinen-4-ol chạy máy (%) 0,133 0,136 0,225 0,110 0,162 0,148 0,109 0,127 0,198 0,117 0,105 0,111 0,138 0,320 0,121 0,157 0,149 0,153 0,094 0,116 0,148 0,154 0,116 0,121 0,142 106 Hàm lượng terpinen-4-ol khối lượng khô (%) 0,0186 0,0177 0,0180 0,0165 0,0154 0,0178 0,0185 0,0197 0,0218 0,0205 0,0163 0,0194 0,0228 0,0256 0,0188 0,0181 0,0224 0,0207 0,0179 0,0186 0,0215 0,0185 0,0157 0,0188 0,0241 ... Minh Tháng 12/2011 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHẦN KHOÁNG, CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY TERPINEN-4-OL CỦA MÔ SẸO CÂY TRÀM TRÀ (Melaleuca alternifolia Cheel) ĐỖ TIẾN VINH... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM  ĐỖ TIẾN VINH NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHẦN KHOÁNG, CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY TERPINEN-4-OL CỦA MƠ SẸO CÂY TRÀM TRÀ... cong sinh trưởng mô sẹo Tràm Trà 32 Thí nghiệm 10: Khảo sát đường cong sinh trưởng mô sẹo Tràm Trà 32 2.3.5 Nghiên cứu yếu tố tác động đến khả tổng hợp terpinen-4-ol mô sẹo Tràm Trà