Ứng dụng kĩ thuật hóa mô miễn dịch trong chẩn đoán, phân loại ung thư vú và định hướng điều trị

HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XIX Báo cáo khoa học Ứng dụng kĩ thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đoán, phân loại ung thư vú định hướng điều trị Nguyễn Thị Giang An, Trần Thị Tuyển, Phạm Thị Như Quỳnh, Lê Thị Ánh Tuyết, Trần Đức Hùng, Nguyễn Quang Trung I Đặt vấn đề  Là loại thường gặp phu nữ  Diễn biến phức tạp  Đa dạng hình thái, cấu trúc, đặc điểm lâm sàng, sinh học phân tử  Lựa chọn phác đồ điều trị khó khăn Hố mơ miễn dịch  Ra đời năm 1941, sở nguyên lý miễn dịch  Ứng dụng y sinh, đặc biệt chẩn đoán giải phẫu bệnh Mục đích  Xác định tính chất quần thể tế bào  Xác định tác nhân gây bệnh  Lựa chọn phác đồ điều trị “Ứng dụng kĩ thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đoán, phân loại ung thư vú định hướng điều trị” Mục tiêu nghiên cứu Sử dụng marker phân tử ER, PR, HER2/Neu nhằm chẩn đoán, phân loại định hướng điều trị cho bệnh nhân UTBMTV II Đối tượng phương pháp nghiên cứu Khối nến lưu trữ 75 bệnh nhân Mô bệnh học thường quy Hố mơ miễn dịch Nhuộm Hematoxylin Eosin Đánh giá kết HMMD Phân loại mô học Độ mô học WHO 2003 Scraff Blom Richardson Elston & Ellis (1991) ER,PR HER 2/Neu Thang điểm Allred Theo tiêu chuẩn Dako Xử lý số liệu SPSS 16.0 ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ NHUỘM HMMD * Đối với ER, PR: Sử dụng thang điểm Reammel & Schicketanz cải biên: Tổng điểm = PP + IS; Dương tính: tổng điểm > Tỷ lệ bắt màu (PP) Mức độ Điểm Cường độ bắt màu (IS) 80% không Yếu Vừa Mạnh ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ NHUỘM HMMD Đối với Her2: Tính điểm theo tiêu chuẩn Allfred (hình mẫu Dako) ‘0’ (negative) ‘2+’ (màu yếu, TB + >10%) ‘1+’ (10%) Mẫu nến Tẩy paraffin 3 µm Ủ qua đêm bể xylen 39oC – 40oC phút/bể Phủ KT 1, 60p Bể cồn Nước cất lần 70o,90o,100o phút/bể H2O2, 3%, 10p Bộc lộ KN pH=6, 90oC-95oC,20 phút bể TBS phút/bể bể TBS phút/bể Nước cất phút Phủ KT 2, 30p dd màu DAB, 10p Her 2/Neu, PR, ER Nước cất phút Gắn lamen bể xylen bể Cồn Nước cất phút Nước chảy 5p Hematoxylin III Kết nghiên cứu 3.1 Tuổi mắc bệnh Nhóm tuổi Số bệnh nhân ER(+) (n=29) PR(+) (n=50) HER2(+) (n=24) - 30-39 40-49 50-59 60-69 11 (14,5%) 19 (25,3%) 30 (40%) (12%) 70-79 80-89 (6,6%) (1,3%) SL 12 2 Tỷ lệ 17,2 24,1 41,4 6,9 6,9 3,4 SL 14 20 Tỷ lệ 14,0 28,0 40,0 10,0 6,0 2,0 SL 9 2 r p 0,02 0,989 0,05 0,658 -0,08 0,473 Tỷ lệ 8,3 37,5 37,5 8,3 8,3 0,0 Độ tuổi 50-59 chiếm tỷ lệ cao nhất(40%) Tiếp đến độ tuổi 40 - 49 (25,5%) Tuổi mắc bệnh trung bình: 51,9 + 11,9 Tuổi tương quan thuận với ER, PR tương quan nghịch với HER2/Neu chưa có ý nghĩa thống kê ( p > 0,05) 3.2 Kích thước, vị trí tình trạng di hạch Đặc điểm Vị trí u (n=75) Di hạch (n=75) P n Tỷ lệ Phải 35 46,7 Trái 40 53,3 Không di 31 37,9 < hạch 11 24,1 > hạch 25 31,0 Không rõ TT 6,9 0,13 0,03 3.2 Kích thước, vị trí tình trạng di hạch ER (+) Đặc điểm Kíchthước khối u (n=75) n Tỷ lệ T < 2cm 14 2cm < T < 3cm PR (+) HER2 (+) SL Tỷ lệ SL Tỷ lệ SL Tỷ lệ 18,67 21,4 19,1 18,2 19 25,33 32,1 14 29,8 13,6 3cm < T < 4cm 26 34,67 25,0 17 36,2 12 54,5 4cm < T < 5cm 10 13,33 14,3 8,5 13,6 T > 5cm 1,33 0,0 2,1 0,0 Không rõ TT 6,67 7,1 4,3 0,0 3.3 Phân loại phân độ mô bệnh học Tổng Đặc điểm Biệt hóa rõ (Độ I) Độ mơ học Biệt hóa vừa (Độ II) (55 TH thể Biệt hóa (Độ III) ống xâm nhập) n Tỷ lệ 15 27,3 40 72,7 0 ER (+) SL Tỷ lệ 33,3 17 42,5 0 PR (+) HER2 (+) SL Tỷ lệ SL Tỷ lệ 60,0 20,0 30 75,0 14 35,0 0 0 r 0,083 0,147 0,145 P 0,545 0,284 0,292 3.4 Biểu marker phân tử Đặc điểm SL Dương tính Âm tính PR (+) ER (+) HER2 (+) Tỷ lệ SL Tỷ lệ SL Tỷ lệ Dương tính 1(+) 17 22,7 20 26,7 18 24,0 Dương tính 2(+) 9,3 12 16 9,3 Dương tính 3(+) 6,7 18 24 17 22,7 Tổng 29 38,7 50 66,7 42 56,0 46 61,3 25 33,3 33 44 - ER, PR (1+, 2+, 3+) xem dương tính Tỷ lệ ER (+), PR (+) 38,7% 66,7%) - HER2/Neu ( 2+, 3+) xem dương tính HER2/Neu (+) chiếm 32% - Sự biểu đồng thời marker sở phân chia UTV thành nhóm khác nhằm định hướng điều trị 3.5 Phân nhóm ung thư biểu mơ tuyến vú Các marker Nhóm ER/PR (+) HER-2(+) Nhóm ER/PR(+), Tỷ lệ (1A):ER+/PR+,HER2+ 12,0 (1B): ER-/PR+,HER2+ 12,0 (1C): ER+/PR-,HER2+ 0,0 (2A): ER+/PR+,HER2- 18 24,0 Tổng số r r (Her2, ER) = 24 % (2B): ER-/PR+,HER2- 14 18,7 (2C): ER+/PR-,HER2- 2,7 Nhóm ER/PR (-), HER2 (+) 8,0 8% Nhóm ER /PR(-), HER2 (-) 17 22,7 22,7 HER2 (-) - SL 45,3 % -0,016 r (PR, ER) = 0,445 ** r (PR, HER2)= 0,121 p 0,889 0,000 0,300 ER, PR có mối tương quan thuận vừa với ( 0,25 < r < 0,5; p < 0,05) HER 2/Neu tương quan nghịch với ER, tương quan thuận với PR, khơng có ý nghĩa thống kê ( p> 0,05) A 2221 Thể ống nhỏ ( H.E x40) PR (-) ( HMMD x40) HER2 (2+) ( HMMD x40) ER (1+) ( HMMD x40) A 2038 Thể ống xâm nhập Độ I (H.E x 20) HER2(-)(HMMD x 40) Trứng cá (H.E x 40) PR (3+) (HMMD x 40) Mặt sàng (H.E x 40) ER (-) (HMMD x 40) A 3414.Thể ống xâm nhập Độ II (H.E x 40) ER (-) (HMMD x 20) HER2/Neu (3+) (HMMD x 20) PR (2+)(H.E x 20) A 4045 Thể nhày (H.E x 40) PR (3+) (HMMD x 40) HER2/Neu (1+) (HMMD x 40) ER (3+) (HMMD x 40) IV Kết luận - Độ tuổi mắc UTV phổ biến 50-59 (40 %) Tuổi mắc bệnh trung bình 51,9 + 11,9 - Tổn thương vú trái cao vú phải Khối u có kích thước 2-5 cm chủ yếu (73,3%) có h di hạch cao - ER (+), PR (+), HER2 chiếm tỷ lệ : 38,7%; 66,7% 32,0% - Dựa vào marker phân tử, UTBMTV chia thành phân nhóm: ER/PR(+)HER2(-); ER/PR(-)HER2(+) ; ER/PR(+) HER2(+) ; ER/PR(-)HER2- chiếm tỷ lệ 45,3%; 22,7%; 24%; 8% - Các phân nhóm có khác biệt độ tuổi biểu hiện, kích thước khối u, loại mơ học độ mô học , sở cho tiên lượng diễn tiến điều trị UTV XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN !!! A 4616 Thể nội ống (H.E x 40) A 4354 Thể trứng cá(H.E x 40) A 4616 Thể ống XN (H.E x 40) A 4616 Thể nhày (H.E x 40) A 4354 Thể ống nhỏ (H.E x 40) A 4616 Thể nhú(H.E x 40) - Độ I, II có tỷ lệ 27,3%; 72,5% - Thể ống xâm nhập có tỉ lệ cao nhất(73,3%) - Chưa thể mối tương quan loại - Thể ống nhỏ thấp (14,7%) - Các thể khác gặp TH ( chiếm 1,3%) mô bệnh học, độ mô học với ER, PR HER2 ( < r < 0,25; p > 0,05) * Về kích thước khối u: - Khối u có kích thước từ 2- cm chiếm tỉ lệ cao ( 73,33 %) Trong u có kích thước từ 3< T < cm chủ yếu (34,67%) * Về vị trí tổn thương: - Vú trái chiếm tỷ lệ 53,3 % Vú phải thấp hơn, chiếm 46,7 % - Tổn thương vú trái gặp nhiều vú phải * Về tình trạng di hạch nách : - Tỷ lệ di hạch nách chiếm 55,1% Trong di hạch hạch có tỷ lệ cao (31,0%) - Chưa thấy mối tương quan thước khối u, tình trạng di hạch nách với thụ thể nội tiết HER2/Neu ( < r < 0,25; p > 0,05) 3.2 Kích thước, vị trí tình trạng di hạch ER (+) n Tỷ lệ T < 2cm 14 2cm < T < 3cm Đặc điểm PR (+) HER2 (+) SL Tỷ lệ SL Tỷ lệ SL Tỷ lệ 18,67 21,4 19,1 18,2 19 25,33 32,1 14 29,8 13,6 3cm < T < 4cm 26 34,67 25,0 17 36,2 12 54,5 4cm < T < 5cm 10 13,33 14,3 8,5 13,6 T > 5cm 1,33 0,0 2,1 0,0 Không rõ TT 6,67 7,1 4,3 0,0 Vị trí u Phải 35 46,7 12 41,4 25 50 14 58,3 (n=75) Trái 40 53,3 17 58,6 41,7 31 37,9 11 44 50 29,3 10 Không di 25 22 29,2 < hạch 11 24,1 16 10,7 12,5 > hạch 25 31,0 30 15 20 12 50,0 Không rõ TT 6,9 10 6,7 8,3 Kíchthước khối u (n=75) Di hạch (n=75) P 0,869 0,412 0,049 * Nhóm 1: ER/PR(+)HER2(+) (Luminal B): chiếm 24% - Biểu đồng thời thụ thể nội tiết HER2/Neu - Phác đồ điều trị phức tạp * Nhóm 2: ER/PR(+)HER2(-) (Luminal A): chiếm tỷ lệ cao (45,3%) - Có xu hướng biểu nội tiết, không biểu gen HER2/Neu - Tỷ lệ phân bào thấp, tỷ lệ tái phát thấp - Điều trị kháng nội tiết cắt bỏ nguồn estrogen * Nhóm 3: ER/PR(-)HER2(+) (Kiểu hình HER2): chiếm 8% - Chỉ biểu gen HER2/Neu - Có đáp ứng điều trị tiên lượng xấu * Nhóm 4: ER/PR(-)HER2(-) (Basal-like): chiếm 22,7% - Khơng có biểu nội tiết gen HER2/Neu - Cần xét nghiệm thêm với marker phát cytokeratin (CK5/6, CK7 ) để phát biểu gen BRCA Nếu âm tính xem tuyến u vú bình thường ... thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đốn, phân loại ung thư vú định hướng điều trị Mục tiêu nghiên cứu Sử dụng marker phân tử ER, PR, HER2/Neu nhằm chẩn đoán, phân loại định hướng điều trị cho bệnh nhân... lý miễn dịch  Ứng dụng y sinh, đặc biệt chẩn đốn giải phẫu bệnh Mục đích  Xác định tính chất quần thể tế bào  Xác định tác nhân gây bệnh  Lựa chọn phác đồ điều trị Ứng dụng kĩ thuật hóa. .. HER2/Neu (+) chiếm 32% - Sự biểu đồng thời marker sở phân chia UTV thành nhóm khác nhằm định hướng điều trị 3.5 Phân nhóm ung thư biểu mơ tuyến vú Các marker Nhóm ER/PR (+) HER-2(+) Nhóm ER/PR(+),