1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng một số chất phân lập được từ vỏ thân cây gạo

65 141 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 65
Dung lượng 1,47 MB

Nội dung

BỘ Y TẾ TRƯ ƯỜNG ĐẠI HỌC C DƯỢC C HÀ NỘ ỘI WY ZX LỤ ỤC TUẤ ẤN NGH HIÊN CỨU C XÂY Y DỰN NG PH HƯƠN NG P PHÁP P XÁC C ĐỊN NH HÀ ÀM LƯỢN L NG MỘT M SỐ Ố CHẤ ẤT PH HÂN LẬP L ĐƯỢ Đ ỢC TỪVỎ TH HÂN CÂY C G GẠO KHÓA LUẬN L TỐT T NG GHIỆP DƯỢC D SĨ HÀ H NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI WY ZX LỤC TUẤN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ VỎ THÂN CÂY GẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu DS Phạm Lê Minh Nơi thực hiện: Trung tâm kiểm nghiệm Dược phẩm Mỹ phẩm Hà Nội Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực đề tài “Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng số chất phân lập từ vỏ thân Gạo”, làm việc nghiêm túc, cố gắng, nỗ lực thân, tơi nhận nhiều khích lệ từ phía nhà trường, thày cơ, gia đình bè bạn Trước hết, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu – Trưởng Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất, người dành nhiều thời gian tâm huyết hướng dẫn nghiên cứu, giúp tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Thái An – Bộ môn Dược Liệu, người nhiệt tình hướng dẫn tơi q trình thực đề tài Đồng thời tơi xin gửi lời cảm ơn tới ThS Hồ Thị Thanh Huyền DS Phạm Lê Minh - Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất tồn thể cán Bộ mơn Hóa phân tích-Độc chất, cán Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm Mỹ phẩm Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn quý thày cô Trường Đại học Dược Hà nội, đặc biệt thày cô trực tiếp giảng dạy suốt thời gian học tập Trường Cuối cùng, tơi xin tỏ lòng biết ơn gia đình, bạn bè động viên mặt giúp đỡ tơi tận tình q trình học tập, nghiên cứu, động lực khơng nhỏ để tơi có kết ngày hôm Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà nội, tháng 05 năm 2013 Lục Tuấn Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ 1  1.1. TỔNG QUAN VỀ CÂY GẠO 2  1.1.1.  Đặc điểm thực vật 2  1.1.2.  Tính vị cơng Gạo 2  1.1.3.  Bộ phận dùng, thu hái chế biến 3  1.2. TÁC DỤNG DƯỢCVỎ THÂN CÂY GẠO 3  ™  Hoạt động antiangiogenic Lupeol 4  ™  Tác dụng hạ huyết áp 4  ™  Tác dụng chống viêm 4  ™  Tác dụng bảo vệ gan 4  ™  Tác dụng ức chế hình thành tế bào tĩnh mạch trung tâm rốn người ……………………………………………………………………………4  ™  Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm 5  1.3. CÔNG DỤNG CỦA VỎ THÂN CÂY GẠO 5  1.4. THÀNH PHẦN HÓA HỌC VỎ THÂN CÂY GẠO 5  1.4.1.  Cơng thức hố học, tính chất vật lý, tác dụng dượcsố chất phân lập từ vỏ thân Gạo 6  1.5. MÁY SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 12  1.5.1.  Khái niệm sắc ký lỏng hiệu cao 12  1.5.2.  Các thông số đặc trưng 13  1.5.3.  Hệ thống máy HPLC 15  1.5.4.  Các phương pháp định lượng kỹ thuật HPLC 16  1.5.5.  Tổng quan sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS) 17  CHƯƠNG II - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21  2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 21  2.2. THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 21  2.2.1 Hóa chất 21  2.2.2 Dụng cụ thiết bị 21  2.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22  2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22  2.4.1 Chuẩn bị mẫu thử 22  2.4.2.  Chuẩn bị chất đối chiếu 23  2.4.3.  Khảo sát tìm điều kiện sắc ký 23  2.4.4.  Thẩm định phương pháp phân tích 24  2.4.5.  Phương pháp xử lý số liệu 26  CHƯƠNG III - THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 27  3.1 HÀM ẨM VÀ HIỆU SUẤT CHIẾT CẮN TOÀN PHẦN 27  3.1.1 Hàm ẩm dược liệu: 27  3.1.2 Hiệu suất chiết 27  3.2 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ 27  3.3 XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT CỦA CÁC HỢP CHẤT NGHIÊN CỨU 30  3.4 ĐỊNH TÍNH CÁC HỢP CHẤT TRÊN SẮC KÝ ĐỒ 33  Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 3.5 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT TRONG VỎ THÂN CÂY GẠO BẰNG HPLC 36  3.5.1 Kiểm tra phù hợp hệ thống sắc ký: 36  3.5.2 Tính đặc hiệu 36  3.5.3 Độ lặp lại 37  3.5.4 Khoảng nồng độ tuyến tính 37  3.5.5 Độ 41  3.5.6 Giới hạn phát LOD giới hạn định lượng LOQ 41  3.6 ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT TRONG VỎ THÂN CÂY GẠO 42  3.7. BÀN LUẬN 42  3.7.1.  Về phương pháp xử lý mẫu 42  3.7.2.  Về khảo sát điều kiện sắc ký HPLC 43  3.7.3.  Về kết định lượng chất vỏ thân Gạo 43  3.7.4.  Về thẩm định phương pháp định lượng 43  KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45  KẾT LUẬN 45  ĐỀ XUẤT 46  TÀI LIỆU THAM KHÁO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT C: Nồng độ (µg/mL) ESI: Ion hóa phun điện tử (Electronspray ionization) EtOH: Ethanol HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao LC-MS:   Sắc ký lỏng ghép khối phổ (Liquid Chromatography – Mass Spectrometry) LOD: Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of Quatification) MeCN: Acetonitril MeOH: Methanol MS: Khối phổ (Mass Spectrometry) RSD: Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) S/N: Tín hiệu/nhiễu đường (Signal/Noise) SD: Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) STT: Số thứ tự S: Diện tích pic sắc ký (mAu.s) TP: Thành phần tR: Thời gian lưu UV-VIS: Tử ngoại khả kiến (Ultraviolet visible) Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Độ ẩm bột dược liệu 27  Bảng 3.2 Một số thông số thể phù hợp hệ HPLC lựa chọn 36  Bảng 3.3 Kết khảo sát độ lặp lại với chất phân tích 37  Bảng 3.4 Kết khảo sát tuyến tính với epicatechin .38  Bảng 3.5 Kết khảo sát tuyến tính với catechin 38  Bảng 3.6 Kết khảo sát tuyến tính với daucosterol 39  Bảng 3.7 Kết khảo sát tuyến tính với Lupeol 39  Bảng 3.8 Kết khảo sát tuyến tính với Stigmasterol 40  Bảng 3.9 Kết khảo sát tuyến tính với friedelin 40  Bàng 3.10 Tổng hợp kết khảo sát độ chất .41  Bảng 3.11 Kết khảo sát LOD LOQ (µg/mL) .41  Bảng 3.12 Kết xác định hàm lượng chất mẫu vỏ thân Gạo nghiên cứu 42  Bảng phụ lục Kết khảo sát độ chất vỏ thân Gạo DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hệ thống máy HPLC 15  Hình 1.2 đồ khối máy khối phổ 18  Hình 1.3 đồ tứ cực chập ba 19  Hình 3.3 Sắc ký đồ epicatechin phân lập từ vỏ thân Gạo 31  Hình 3.4 Sắc ký đồ catechin phân lập từ vỏ thân Gạo 31  Hình 3.5 Sắc ký đồ daucosterol phân lập từ vỏ thân Gạo 31  Hình 3.6 Sắc ký đồ lupeol phân lập từ vỏ thân Gạo 32  Hình 3.7 Sắc ký đồ stigmasterol phân lập từ vỏ thân Gạo 32  Hình 3.8 Sắc ký đồ friedelin phân lập từ vỏ thân Gạo 32  Hình 3.9 Phổ khối lượng ứng với pic epicatechin sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp chất đối chiếu 33  Hình 3.10 Phổ khối lượng ứng với pic catechin sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp chất đối chiếu 34  Hình 3.11 Phổ khối lượng ứng với pic daucosterol sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp chất đối chiếu 34  Hình 3.12 Phổ khối lượng ứng với pic lupeol sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp chất đối chiếu 34  Hình 3.13 Phổ khối lượng ứng với pic stigmasterol sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp chất đối chiếu 35  Hình 3.14 Phổ khối lượng ứng với pic friedelin sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp chất đối chiếu 35  Hình 3.15 Sắc ký đồ mẫu trắng (dung môi pha mẫu) 37 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Hình phụ lục Sắc ký đồ hỗn hợp mẫu thử - 41 Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy có tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ chất phân tích diện tích pic đáp ứng khoảng nồng độ khảo sát hợp chất nghiên cứu Kết sử dụng làm sở để lựa chọn nồng độ định lượng hợp chất nghiên cứu tương ứng 3.5.5 Độ Thêm lượng xác dung dịch chuẩn vào dung dịch thử, cho tổng nồng độ sau thêm nằm khoảng tuyến tính phương pháp Tiến hành phân tích kết sắc ký để khảo sát độ Kết tổng hợp bảng 3.10, chi tiết cho chất thể Phụ lục Bàng 3.10 Tổng hợp kết khảo sát độ chất Hợp chất Nồng độ thêm vào mẫu (μg/mL) Epicatechin Catechin Lupeol Friedelin Stigmasterol Daucosterol 7,34 3,04 7,17 4,27 1,92 1,36 Tỷ lệ thu hồi (%) Trung bình 99,20 99,21 100,88 99,77 100,61 101,42 min-max 97,44 - 99,84 96,58 - 101,26 99,82 - 101,74 95,33 - 102,68 99,07 - 102,43 99,97 - 102,19 Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy phương pháp phân tích lựa chọn cho tỷ lệ thu hồi cao, có độ tốt 3.5.6 Giới hạn phát LOD giới hạn định lượng LOQ Xác định LOD dựa vào tỷ lệ đáp ứng so với nhiễu đường (S/N) Việc xác định tỉ lệ S/N tiến hành cách so sánh đáp ứng mẫu trắng từ tính nồng độ tối thiểu chất phân tích phát Bảng 3.11 Kết khảo sát LOD LOQ (µg/mL) Epicatechin Catechin Daucosterol Lupeol Stigmasterol Friedelin LOD 0,5 0,5 0,34 0,61 0,32 0,8 LOQ 1,25 1,25 0,80 1,43 0,91 1,6 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi - 42 Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy phương pháp HPLC có độ nhạy cao, giới hạn định lượng LOQ thấp nồng độ định lượng nhiều lần Việc xác định LOQ chủ yếu giúp cho việc phân tích tạp chất 3.6 ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT TRONG VỎ THÂN CÂY GẠO Tiến hành cân xác khoảng 0,5000g cắn hòa tan định mức thành 25mL, lọc qua qua màng lọc Tiến hành sắc ký song song mẫu thử với mẫu hỗn hợp chất đối chiếu Tính kết theo phương pháp chuẩn hóa điểm Lượng cắn cân cho lần định lượng là: 0,5022g; 0,5032g 0,5034g Tính tốn lượng chất có mẫu thử qui tương đương với 0,5000g cắn Tính giá trị trung bình lần thử Từ lượng dược liệu hàm ẩm đem chiết tổng lượng cắn thu tính hàm lượng chất có 100g dược liệu khơ Kết định lượng thu có 100g vỏ thân Gạo trình bày bảng sau: Bảng 3.12 Kết xác định hàm lượng chất mẫu vỏ thân Gạo nghiên cứu Khối lượng hợp chất (mg) Hợp chất Epicatechin Catechin Daucosterol Lupeol Stigmasterol Friedelin Có cắn đem định lượng Lần 1,225 0,662 0,178 0,936 0,186 0,752 Lần 1,226 0,667 0,181 0,935 0,190 0,751 Lần 1,205 0,668 0,180 0,939 0,193 0,746 Tương đương 0,5g cắn Lần Lần Lần Tr.bình 1,219 0,659 0,177 0,932 0,185 0,749 1,218 0,663 0,179 0,929 0,189 0,746 1,197 0,664 0,179 0,933 0,192 0,741 1,211 0,662 0,178 0,931 0,189 0,746 Hàm lượng (mg/100g dl) 12,293 6,716 1,811 9,451 1,915 7,566 Cần làm thêm số lượng mẫu đủ lớn để có số liệu xác hàm lượng chấtvỏ thân Gạo 3.7 BÀN LUẬN 3.7.1 Về phương pháp xử lý mẫu Để định lượng chất Gạo đạt kết tốt, trước hết cần phải chiết kiệt hoạt chất làm dịch chiết Qua tham khảo tài liệu, chọn phương pháp ngâm lạnh với dung môi methanol Đây phương pháp dễ thực - 43 điều kiện phòng thí nghiệm, khơng đòi hỏi trang thiết bị đặc biệt mà lại cho hiệu suất cao 3.7.2 Về khảo sát điều kiện sắc ký HPLC Dựa nghiên cứu trước tài liệu công bố, kết hợp với điều kiện có sẵn tơi tiến hành khảo sát điều kiện sắc ký mô tả mục 3.2 xây dựng chương trình sắc ký máy sắc ký lỏng hiệu cao HP1100 Việc đánh giá thơng qua xác định tính phù hợp hệ thống sắc ký, khả tách pic khỏi chất khác, hình ảnh pic sắc ký đồ thời gian lưu Kết chất HPLC tách hồn tồn, pic cân đối, thời gian lưu khơng q dài Điều chứng tỏ, chương trình sắc ký sử dụng đề tài phù hợp để định lượng thành phần vỏ thân Gạo 3.7.3 Về kết định lượng chất vỏ thân Gạo Từ mẫu vỏ thân Gạo dùng nghiên cứu xác định hàm lượng chất nghiên cứu có 100g dược liệu sau: epicatechin 12,293mg; catechin 6,716mg; daucosterol 1,811mg; lupeol 9,451mg; stigmasterol 1,915mg friedelin 7,566mg Cần làm thêm số lượng mẫu đủ lớn để có số liệu xác hàm lượng chấtvỏ thân Gạo 3.7.4 Về thẩm định phương pháp định lượng Sau xây dựng quy trình phân tích, để áp dụng quy trình vào phân tích thực tế cách xác, cho kết tin cậy, cần thẩm định lại phương pháp theo quy định chung phân tích định lượng - Độ chọn lọc: Nhờ có phần mềm xử lý thô, ghi lại pic sắc ký pic chất thu sắc ký đồ tinh khiết Chứng tỏ phương pháp có độ chọn lọc cao - Khoảng nồng độ tuyến tính: Tiến hành khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính bảng 3.4 đến 3.9 cho thấy chất có đường hồi quy khoảng nồng độ khảo sát có đường thẳng, phương trình hồi quy có hệ số tương quan Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi - 44 >0,99 chứng tỏ tương quan tuyến tính nồng độ chất diện tích pic khoảng nồng độ khảo sát - Độ đúng, độ lặp lại phương pháp: Đều cho kết phù hợp với yêu cầu thực tế cần phân tích - Giới hạn định lượng: Với cách chuẩn bị dung dịch thử giới hạn định lượng (LOQ) giới hạn phát (LOD) trình bày bảng 3.11 mục 3.5.6 Như vậy, chương trình định lượng chất vỏ thân Gạo phương pháp HPLC mà tơi xây dựng hồn tồn đáng tin cậy Đồng thời phương pháp có ưu điểm đơn giản, nhanh chóng, dễ thực hiện, tiết kiệm thời gian chi phí kiểm nghiệm Hiện đa số Trung tâm kiểm nghiệm dược phẩm, mỹ phẩm đến sở sản xuất thuốc trang bị máy HPLC Vì vậy, kết nghiên cứu đề tài triển khai ứng dụng vào thực tế - 45 - KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Qua thời gian làm khóa luận tốt nghiệp, triển khai thực nghiệm thu kết sau: Đã xây dựng phương pháp cho phép định lượng đồng thời chất vỏ thân Gạo sắc ký lỏng hiệu cao với điều kiện sắc ký cụ thể sau: - Cột pha đảo Zorbax C18 column (250; 4,6mm; 5μm) kết hợp bảo vệ cột Phenomenex C18 (ODS, Octadecyl) (5μm, 3,0mm) 25oC - Tốc độ dòng: 0,7mL/phút - Thể tích tiêm: 10µl - Detector: sử dụng detector SPD-20A, chọn bước sóng phát 280nm - Pha động: Sử dụng chế độ gradient dung môi với kênh A acid formic 0,1% acetonitril kênh B acid formic 0,1% methanol (B) Tỷ lệ kênh A-B ban đầu (30:70), thay đổi tuyến tính đạt đến A–B (40:60) phút thứ 6, thay đổi tuyến tính đạt đến A–B (50:50) phút thứ 23 Thay đổi tuyến tính lại A–B (40:60) phút thứ 27 cuối pha động thay đổi tuyến tính tỷ lệ A–B (30:70) ban đầu phút thứ 30 Phương pháp xây dựng thẩm định, kết cho thấy tiêu đạt yêu cầu, đảm bảo phương pháp áp dụng vào định lượng chấtvỏ thân Gạo Đã áp dụng phương pháp xác định đồng thời hàm lượng hợp chất 100g 01 mẫu vỏ thân Gạo cụ thể sau: epicatechin 12,293mg; catechin 6,716mg; daucosterol 1,811mg; lupeol 9,451mg; stigmasterol 1,915mg friedelin 7,566mg Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi - 46 ĐỀ XUẤT - Tiếp tục phân lập tinh chế thêm hợp chấtvỏ thân Gạo để tiến hành thiết lập chất chuẩn đối chiếu Đây công việc quan trọng kết xác định hàm lượng chất vỏ thân Gạo xác ổn định - Do thời gian có hạn, tơi phân tích 01 mẫu vỏ thân Gạo nên chưa có tính đại diện cao Do cần mở rộng nghiên cứu, nghiên cứu xác định hàm lượng hoạt chất vỏ thân Gạo khác Việt để có số liệu xác hàm lượng hợp chấtGạo - Hồn thiện phương pháp, để góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu Gạo (Bombax Malabaricum DC.) TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Trần Tử An, Thái Nguyễn Hùng Thu (2006), Hoá phân tích II, Trường Đại học Dược Hà Nội, 125-147, 173-223 Đỗ Huy Bích, Bùi Xuân Chương (1980), Sổ tay thuốc Việt nam, Nxb Y học, 201 Nguyễn Huy Bích cs (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt nam, tập I, NXB Khoa học Kỹ Thuật Hà Nội, 852 Bộ Y Tế (1978), Dược liệu Việt Nam, Nxb Y học, 5, 67-68 Văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt nam, Nxb Y học, 508-509 Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt nam, Nxb Y học, 1437-1445 Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, Nxb Khoa học Kỹ Thuật, tập I, 464-466 Văn Chi, Vũ Văn Chuyên (1969), Cây cỏ thường thấy Việt Nam Nxb KHKT, tập I, 146-150 Nguyễn Văn Đàn, Vũ Xuân Quang, Ngô Ngọc Khuyến (2005), Cây hoa chữa bệnh (hoa trị liệu pháp), Nxb Y học, 37-40 10 Lê Trần Đức (1997), Cây thuốc Việt Nam, trồng hái, chế biến, trị bệnh ban đầu Nxb Nông nghiệp, 1195-1200 11 Hồ Thị Thanh Huyền, Thái Nguyễn Hùng Thu, Nguyễn Thái An, Phan Văn Kiệm (2011), “Phân lập nhận dạng epicatechin từ vỏ thân Gạo Bombax malabaricum DC., họ Gạo Bombacaceae”, Tạp chí Dược học, 6/2011(422), 19-20, 44, 57 12 Hồ Thị Thanh Huyền, Thái Nguyễn Hùng Thu, Nguyễn Thái An (2012), “Phân lập catechin momor-cerebrosid I từ vỏ thân Gạo (Bombax malabaricum DC.)”, Tạp chí Dược học, 12/2012(440), 49-52 13 Hồ Thị Thanh Huyền, Thái Nguyễn Hùng Thu, Nguyễn Thái An (2013), “Phân lập lupeol stigmasterol từ vỏ thân Gạo (Bombax malabaricum DC.)”, Tạp chí Dược học, 3/2013(443), 14-18 14 Phó Thuần Hương (2010), “Cây Gạo chứa nhiều bệnh”, Thuốc sức khỏe, 15/11/2010(416), 15 15 Đỗ Tất Lợi, (2003), Những thuốc vị thuốc Việt nam, Nxb Y học, 545 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 16 Nguyễn Tích, Trần Hợp (1971), Tên rừng Việt Nam, Nxb Nông thôn, 64 17 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, Nxb Khoa học Kỹ Thuật 18 Viện Dược liệu (12/2009), Cây thuốc Nghệ An, Nhà in báo Nghệ an, 354-355 19 Viện Dược liệu (12/2009), Cây thuốc động vận làm thuốc Việt nam, tập I, Nxb Khoa học Kỹ Thuật, 852-853 TIẾNG ANH 20 Fernández A, Alvarez A, García MD, Sáenz MT (Apr 2001), “Anti-inflammatory effect of Pimenta racemosa var ozua and isolation of the triterpene lupeol”,II Farmaco, 56(4), 335–338 21 Fernández MA, de las Heras B, García MD, Sáenz MT, Villar A (Nov 2001), “ New insights into the mechanism of action of the anti-inflammatory triterpene lupeol”, J Pharmacy and Pharmacology, 53(11), 1533–1539 22 Paulrayer Antonisamy, Veeramuthu Duraipandiyan, Savarimuthu Ignacimuthu (8/2011), “Anti-inflammatory,analgesic and antipyretic effects of Friedelin isolated from Azima tetracantha Lam in mouse and rat models”, Journal of Pharmacy and Pharmacology, Division of Ethnopharmacology, Entomology Research Institute, Loyola College, Chennai, Tamil Nadu, India, 63(8), 1070– 1077 23 Lin CC, Chen SY, Lin JM, Chiu HF (1992), “ The pharmacological and pathological studies on Taiwan folk medicine (VIII): The anti-inflammatory and liver protective effects of “mu-mien”, The American Journal of Chinese Medicince, 20(2), 135-46 24 M Careri, L Elviri, A Mangia (2001), “Liquid chromatography–UV determination and liquid chromatography–atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometric characterization of sitosterol and stigmasterol in soybean oil”, Journal of Chromatography A, 935(1–2), 249–257 25 Richard E Ostlund Jr (2007), “Phytosterols,Cholesterol Absorption and HealthyDiets”, Journal Lipids, 42(1), 41-45 26 Lee JH, Lee JY, Park JH, Jung HS, Kim JS, Kang SS, Kim YS, Han Y (2007), “Immunoregulatory activity by daucosterol, a beta-sitosterol glycoside, induces 27 28 29 30 31 32 33 34 protective Th1 immune response against disseminated Candidiasis in mice”, Vaccins, 25(19), 3834–3840 Hogg, John A (1992) "Steroids, the steroid community, and Upjohn in perspective: A profile of innovation", Steroids, 57 (12), 593–616 Nima D Namsa, Hui Tag M Mandal, P Kalita, A.K.Das (2009), “ An ethnobotanical study of traditional anti-inflammatory plants used by the Lohit community of Arunachal Pradesh, India”, Journal of Ethnopharmacology, 125(2), 234-245 Padmanabhan P Nair, NabilaTurjman, GeorgeKessie, BeverlyCalkins, Gordon T Goodman, Helene Davidovitz, and Geetha Nimmagadd (1984), “Diet, nutrition intake, and metabolismin, Populations at high and low risk for colon cancer Dietary cholesterol,f3-sitosterol,and stigmasterol”, The American Journal of Clinical Nutrition, 40(4), 927-930 Sundararaman P, Djerassi C (1977) "A convenient synthesis of progesterone from stigmasterol", Journal of Organic Chemistry 42(22), 3633–3634 Mohammed Rahmatullah, Md Rezwanul Haque Sarder Kamrul Islam, Farhana Jarnal, A.B.M Anwarul Bashar, Rasheda Ahmed, Ishtiaq Ahmed, Rownak Jahan, Shamima Absan, Maieedul H Chowdhury (2010) “A survey of the Use of Medicinal Plants by Folk Medicinal Practitioners in Three Areas of Pirojpur District, Bangladesh”, American-Eurasian Journal of Sustainable Agriculture, 4(2), 247-259 Mopuru VIJAYA BHASKAR REDDY, Muntha KESAVA REDDY, Duvvuru GUNASEKAR, Madugula MARTHANDA MURTHY, Cristelle CAUX, and Bernard BODO (2003), “A new Sesquiterpene Lactone from Bombax Malabaricum”, Chemical Pharmaceutical Bulletin, 51(4), 458-459 Rubeena SLEEM, Syed Iqbal AHMAD, Mohammad AHMED, Zareen FAIZI, Sadia ZIKR-UR-REHMAN, Muhammad ALI, and Shaheen FAIZI (2003), “Hypotensive Activity and Toxicology of Constituents from Bombax ceiba Stem Bark”, Biological and Pharmaceutical Bulletin, 26(1), 41-45 Hagen Schroeter, Parmvir Bahia, Jeremy P E Spencer, Olivia Sheppard, Marcus Rattray, Enrique Cadenas, Catherine Rice-Evans, Robert J Williams (2007), “(-) Epicatechin stimulates ERK-dependent cyclic AMP response element Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 35 36 37 38 39 40 41 42 activity and up-regulates GluR2 in cortical neurons”, Journal of Neurochemistry, 101(6), 1596–1606 Hagen Schroeter,Christian Heiss, Jan Balzer, Petra KleinbongardCarl L Keen,Norman K Hollenberg, Helmut Sies, Catherine Kwik-Uribe, Harold H Schmitz, and Malte Kelm (January 24, 2006 ), “(–)-Epicatechin mediates beneficial effects of flavanol-rich cocoa on vascular function in humans”, PNAS, 103(4), 1024-1029 Navindra P Seeram, Yanjun Zhang & Muraleedharan G Nair (2003), “Inhibition of Proliferation of Human Cancer Cells and Cyclooxygenase Enzymes by Anthocyanidins and Catechins”, Nutrition and Cancer, 46(1),101-106 Tang De-song, Shen Sheng-rong, Chen Xun, Zhang Yu-yan, Xu Chong-yang (June 2004), “Interaction of catechins with aluminum in vitro”, Journal of Zhejiang University Science, 5(6), 668-675 K Surendra and E J Corey (2009) "A short enantioselective total synthesis of the fundamental pentacyclic triterpene lupeol”, Journal of the American Chemical Society, 131(39), 13928–13929 Katsuyuki Tanabe, Yoshifuru Tamura, Miguel A Lanaspa, Makoto Miyazaki, Norihiko Suzuki, Waichi Sato, Yohei Maeshima, George F Schreiner, Francisco J Villarreal, Richard J Johnson, and Takahiko Nakagawa (2012), “Epicatechin limits renal injury by mitochondrial protection in cisplatin nephropathy”, American Journal of Physiology, 303(9), 1264-1274 Liby KT, Yore MM, Sporn MB (2007), “Triterpenoids and rexinoids as multifunctional agents for the prevention and treatment of cancer” Nature Review Cancer, 7, 357–369 Ravi V Patel SS, Verma NK, Dutta D, Saleem TSM (2010), “Hepatoprotective Activity of Bombax ceiba L Against Isoniazid and Rifampicin – induced Toxicity in Experimental Rats”, International Journal of Applied Research in Natural Products, 3(3), 19-26 Setzer W, Setzer MC (2003), “Plant-derived triterpenoids as potential antineoplastic agents”, Mini Review in Medical Chemistry, 3(6), 540–556 43 Young-Jae You, Nguyen Hai Nam, Yong Kim, Ki-Hwan Bae and Byung-Zun Ahn (2003), “Antiangiogenic Activitiy of Lupeol from Bombax ceiba”, Phytotherapy Research, 17(4), 341-344 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi PHỤ LỤC Kết khảo sát độ hợp chấtvỏ thân Gạo Kết khảo sát độ với Epicatechin TT S mẫu (mAU.s) S thêm (mAU.s) C thêm (µg/mL) C cũ (µg/mL) C (µg/mL) % tìm lại 38872 50345 7,34 24,25 31,40 97,44 38543 50245 7,34 24,04 31,34 99,39 38590 50346 7,34 24,07 31,40 99,84 38650 50355 7,34 24,11 31,41 99,41 38596 50346 7,34 24,07 31,40 99,79 38652 50345 7,34 24,11 31,40 99,31 24,11 RSD (%) 0.27 0.08 0.00 99,20 0.28 0.07 0.82 Kết khảo sát độ với Catechin TT S mẫu (mAU.s) S thêm (mAU.s) C thêm (µg/mL) C cũ (µg/mL) C (µg/mL) % tìm lại 124346 136841 3,04 29,36 32,31 97,25 124367 137242 3,04 29,36 32,41 100,21 123454 136272 3,04 29,14 32,18 99,77 124356 136765 3,04 29,36 32,29 96,58 123243 136253 3,04 29,09 32,17 101,26 124562 137432 3,04 29,41 32,45 100,17 29,29 RSD (%) 0.41 0.32 0.00 0.42 99,21 0.32 1.71 Kết khảo sát độ với Daucosterol TT S mẫu (mAU.s) S thêm (mAU.s) C thêm (µg/mL) C cũ (µg/mL) C (µg/mL) % tìm lại 6184 9030 1,36 3,06 4,42 99,97 6170 9034 1,36 3,06 4,43 100,58 6155 9052 1,36 3,05 4,43 101,75 6156 9065 1,36 3,05 4,44 102,16 6243 9153 1,36 3,09 4,48 102,19 6182 9082 1,36 3,06 4,45 101,85 3,06 RSD (%) 0.48 0.46 101,42 0.00 0.44 0.44 0.83 Kết khảo sát độ với Lupeol TT S mẫu (mAU.s) S thêm (mAU.s) C thêm (µg/mL) C cũ (µg/mL) C (µg/mL) % tìm lại 60352 75841 7,17 28,36 35,65 101,60 60367 75842 7,17 28,37 35,65 101,51 60454 75672 7,17 28,41 35,57 99,82 60356 75665 7,17 28,37 35,56 100,42 60243 75753 7,17 28,31 35,61 101,74 60862 76132 7,17 28,60 35,78 100,16 28,40 RSD (%) 0.33 0.21 0.00 0.33 100,88 0.20 0.76 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Kết khảo sát độ với Stigmasterol TT S mẫu (mAU.s) S thêm (mAU.s) C thêm (µg/mL) C cũ (µg/mL) C (µg/mL) % tìm lại 6351 9130 1,92 4,36 6,27 99,41 6270 9134 1,92 4,31 6,27 102,43 6325 9172 1,92 4,35 6,30 101,83 6356 9165 1,92 4,37 6,30 100,46 6343 9153 1,92 4,36 6,29 100,48 6362 9132 1,92 4,37 6,27 99,07 4,35 RSD (%) 0.49 0.18 0.00 100,61 0.47 0.22 1.19 Kết khảo sát độ với Friedelin TT S mẫu (mAU.s) S thêm (mAU.s) C thêm (µg/mL) C cũ (µg/mL) C (µg/mL) % tìm lại 21501 27500 4,27 15,93 20,31 102,68 21470 27242 4,27 15,90 20,12 98,79 21454 27372 4,27 15,89 20,22 101,29 21356 27165 4,27 15,82 20,07 99,42 21243 27153 4,27 15,74 20,06 101,14 21262 26832 4,27 15,75 19,82 95,33 15,84 RSD (%) 0.47 0.76 0.00 0.47 99,77 0.76 2.37 Sắc ký đồ hỗn hợp mẫu thử ... tài Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng số chất phân lập từ vỏ thân Gạo thực nhằm mục tiêu: Xây dựng quy trình định lượng đồng thời số hợp chất phân lập từ vỏ thân Gạo phương pháp. .. epicatechin phân lập từ vỏ thân Gạo 31  Hình 3.4 Sắc ký đồ catechin phân lập từ vỏ thân Gạo 31  Hình 3.5 Sắc ký đồ daucosterol phân lập từ vỏ thân Gạo 31  Hình 3.6 Sắc ký đồ lupeol phân lập từ vỏ. .. Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI WY ZX LỤC TUẤN TÚ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ VỎ THÂN CÂY GẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn:

Ngày đăng: 28/02/2019, 11:48