Khảo sát sự biến động hàm lượng GS4 trong cây dây thìa canh theo thời gian (gymnemasylvestre (retz) r br ex schult )

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TẠ KHẮC CÔNG KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỘNG HÀM LƯỢNG GS4 TRONG CÂY DÂY THÌA CANH THEO THỜI GIAN Gymnema sylvestre Retz R.Br.ex Schult... BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

TẠ KHẮC CÔNG

KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỘNG

HÀM LƯỢNG GS4 TRONG CÂY DÂY THÌA CANH THEO THỜI GIAN

(Gymnema sylvestre (Retz) R.Br.ex Schult.)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI-2013

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

TẠ KHẮC CÔNG

KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỘNG HÀM LƯỢNG GS4 TRONG CÂY DÂY THÌA CANH THEO THỜI GIAN

(Gymnema sylvestre (Retz) R.Br.ex Schult.)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn:

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện đề tài này tôi đã nhận được sự ủng hộ, tạo điều kiện của Ban Giám Hiệu, phòng Đào Tạo Trường ĐH Dược Hà Nội, sự hướng dẫn, giúp đỡ tận tình của các thầy cô giáo ở Bộ môn Thực vật, gia đình

và bạn bè

Tôi xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới thầy giáo Trần Văn Ơn, người thầy đã trực tiếp hướng dẫn tôi tận tình trong quá trình làm nghiên cứu khoa học và làm đề tài tại Bộ môn

Tôi cũng xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới chị Chu Thị Thoa cùng các thầy cô, các chị kỹ thuật viên Bộ môn Thực vật đã luôn giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình làm thực nghiệm tại Bộ môn

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn bạn Nguyễn Thị An (lớp A4 K63), anh Trần Viết Văn (Yên Ninh –Phú Lương –Thái Nguyên), chị Lê Thị Vân (Công

ty TNHH MTV Dược Khoa - Trường ĐH Dược Hà Nội) đã hỗ trợ thu hái dược liệu trong quá trình nghiên cứu

Hà Nội, tháng 5 năm 2013

Sinh viên

Tạ Khắc Công

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3

1.1 Cây Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz) R.Br.ex Schult.) 3

1.1.1 Vị trí phân loại 3

1.1.2.Đặc điểm thực vật và phân bố 4

1.1.3.Thành phần hóa học 6

1.1.4 Tác dụng sinh học 13

1.2 Thu hoạch (thu hái) dược liệu theo GACP [37] 15

1.3 Tổng quan về sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao 16

1.3.1 Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao 16

1.3.2 Ứng dụng sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao 16

CHƯƠNG 2 17

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị nghiên cứu 17

2.1.1 Nguyên liệu 17

2.1.2 Dụng cụ và hóa chất 18

2.2 Nội dung nghiên cứu 19

2.2.1 Khảo sát sự biến đổi hàm lượng GS4 theo giai đoạn phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 19

2.2.2 Khảo sát sự biến động hàm lượng GS4 theo các tháng của cây Dây thìa canh 19

2.3 Phương pháp nghiên cứu 20

2.3.1 Theo dõi sự phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 20

2.3.2 Khảo sát sự thay đổi hàm lượng GS4 theo thời gian và theo các giai đoạn phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 20

2.3.2 Khảo sát sơ bộ sự thay đổi các thành phần hoá học trong dịch chiết Dây thìa canh qua các tháng và giai đoạn phát triển sau thu hái 22

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24

3.1 Khảo sát sự biến đổi hàm lượng GS4 theo giai đoạn phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 24

3.1.1 Sự phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 24

3.1.2 Sự biến đổi hàm lượng GS4 theo giai đoạn phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 25

3.2 Khảo sát sự biến động hàm lượng GS4 theo các tháng của cây Dây thìa canh 26

3.3 Khảo sát sơ bộ sự thay đổi các thành phần hoá học trong dịch chiết Dây thìa canh qua các tháng và giai đoạn phát triển sau thu hái 27

3.4 Bàn luận 30

3.4.1 Các giai đoạn phát triển Dây thìa canh sau thu hái và sự biến đổi hàm lượng GS4 30

3.4.2.Sự biến đổi hàm lượng GS4 theo thời gian 31

3.4.3 Sự biến đổi thành phần hoá học theo các tháng của dịch chiết cây Dây thìa canh 33

KẾT LUẬN 34

ĐỀ XUẤT 35

TÀI LIỆU THAM KHẢO 36

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DTC Dây thìa canh

GS Gymnema sylvestre (Retz.) R Br ex Schult

GS4 Tủa saponin toàn phần thu được từ dịch chiết Ethanol của cây Dây thìa canh

ĐTĐ Đái tháo đường TLC Sắc ký lớp mỏng HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao GACP Thực hành tốt Trồng trọt và Thu hái dược liệu NBC Niacin-bound chromium

HCA-SX Acid Hydroxycitric BMI Chỉ số cơ thể LDL Lipoprotein tỉ trọng thấp HDL Lipoprotein tỉ trọng cao GS3 Tủa GS ở giai đoạn 3 NXB Nhà xuất bản

HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao

DW Khối lượng khô

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Danh mục các loài trong chi Gymnema có ở Việt Nam 3Bảng 1.2 Hàm lượng acid Gymnemic trong các bộ phận của cây 10 Bảng 3.1 Hàm lượng GS4 của cành và lá Dây thìa canh theo giai

đoạn phát triển sau thu hái

26

Bảng 3.2 Sự biến đổi hàm lượng GS4 theo thời gian của các mẫu

dược liệu Dây thìa canh

Hình 2.3 Phần bánh tẻ của cây Dây thìa canh 18

Hình 3.1 Sự phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái 25 Hình 3.2 Sự biến đổi hàm lượng GS4 theo thời gian của các mẫu

dược liệu Dây thìa canh

ĐẶT VẤN ĐỀ

Việt Nam có hệ động thực vật phong phú và đa dạng, trong đó có nhiều cây có tiềm năng chữa bệnh với khoảng 4.000 loài cây thuốc trong tổng số khoảng 12.000 loài thực vật đã biết cùng với nền Y học cổ truyền phát triển lâu đời [7] Nền tảng này và xu hướng sử dụng các sản phẩm thiên nhiên thực

sự đã mở ra tiềm năng phát triển cho ngành Công nghiệp Dược Việt Nam trong khi nghiên cứu sản xuất thuốc mới có nguồn gốc từ hoá học và công nghệ sinh học vẫn còn hạn chế

Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) R Br Ex Schult.) đã được sử

dụng trong nền Y học Ấn Độ từ hơn 2.000 năm nay để điều trị đái tháo đường (ĐTĐ) Dựa trên kinh nghiệm này, hàng loạt nghiên cứu đã được thực hiện ở nhiều nơi trên thế giới như Mỹ, Nhật Bản, Trung Quốc,…tạo cơ sở cho sự ra đời của nhiều chế phẩm điều trị ĐTĐ như GlucosCare Tea, Gymnema Sylvestre Extract, Gymnema Sylvestre leaf, v.v…[4], [5], [6] Ở Việt Nam, cây Dây thìa canh đã được trồng ở quy mô lớn theo các khuyến cáo về Thực hành tốt trồng trọt và thu hái cây thuốc (GACP) của WHO tại huyện Phú Lương –Thái Nguyên để làm nguyên liệu phục vụ sản xuất Mặc dù vậy, việc xác định thời gian thu hái tối ưu cây Dây thìa canh để đảm bảo dược liệu chất lượng tốt vẫn chưa được sáng tỏ

Nhằm hoàn thiện quy trình thu hái dược liệu Dây thìa canh định hướng theo các khuyến cáo về Thực hành tốt trồng trọt và thu hái cây thuốc (GACP) của WHO, đề tài “Khảo sát sự biến động hàm lượng GS4 theo thời gian trong

cây Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz) R Br Schult.” được thực hiện

với những mục tiêu sau:

1 Khảo sát sự biến đổi hàm lượng GS4 theo giai đoạn phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái

2 Khảo sát sự biến động hàm lượng GS4 theo các tháng của cây Dây

thìa canh

3 Khảo sát sơ bộ sự thay đổi các thành phần hoá học trong dịch chiết

Dây thìa canh qua các tháng và giai đoạn phát triển sau thu hái

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 Cây Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz) R.Br.ex Schult.) 1.1.1 Vị trí phân loại

Theo hệ thống phân loại của Takhtajan năm 1987 [2] cây Dây thìa canh

là một loài trong chi Gymnema, thuộc họ Thiên lý (Asclepiadaceae), bộ Long

đởm (Gentianales), phân lớp Bạc hà (Lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)

Theo các tài liệu [4], [6], [11], [12], ở Việt Nam hiện đã xác định có 7

loài thuộc chi Gymnema, được tóm tắt và trình bày trong Bảng 1.1

Bảng 1.1 Danh mục các loài trong chi Gymnema đã xác định ở Việt Nam

1 Gymnema acuminatum(Roxb.) Wall Lõa ty nhọn

2 Gymnema albiflorum Cost Lõa ty hoa trắng

3 Gymnema inodorum (Lour.) Decne Lõa ty không mùi, Rau

Dây thìa canh gân mạng

7 Gymnema tingens (Roxb) Spreng Rau mỏ, Dây thìa canh lá

to, Lõa ty nhuộm

1.1.2.Đặc điểm thực vật và phân bố

Dây leo, cao từ 3-5 m Thân non màu xanh, phủ lông mịn; thân già màu nâu, có lỗ vỏ, đường kính lỗ vỏ từ 0,5-1 mm Toàn cây có nhựa mủ màu trắng hay hơi vàng Lá mọc đối Cuống dài 3-5 mm; đường kính 2-3mm; phiến hình bầu dục, trứng hay trứng ngược, dài 6-7cm, rộng 2,5-5cm, gốc thuôn, mép nguyên, ngọn nhọn; có 4-6 cặp gân phụ, rõ ở mặt dưới Hoa nhỏ màu trắng hơi vàng, xếp thành xim dạng tán ở nách lá, dài 8mm, rộng 12-15mm Đài chia 5, các thuỳ dài 1mm, có lông mịn và rìa lông Tràng 5, dính nhau thành ống, dài 1,8-2 mm, mặt ngoài nhẵn; tràng phụ gắn với tràng, có 5 răng, dính với họng tràng Cột nhị nhụy hình trụ, dài khoảng 1,5mm, rộng 0,8-1mm Bộ nhị có bao phấn ngắn; khối phấn gồm hai thùy, dài khoảng 0,2mm, liên kết với nhau nhờ trung đới màu vàng nâu Bộ nhụy có vòi với đầu rộng hình nón, vượt quá bao phấn Quả đại dài 5-6cm, rộng ở dưới, đường kính chỗ lớn nhất khoảng 1,5cm Hạt dẹp, dài 3mm, có mào lông màu trắng, dài khoảng 3-3,5cm, thường có khoảng 40 hạt trong một quả

Cây ra hoa vào tháng 7, có quả vào tháng 8 [3], [4], [5]

Cây gặp ở Ấn Độ, Trung Quốc, Việt Nam, Indonesia, v.v…[3], [4], [5], [19], [22], [24]

Ở Việt Nam, cây mọc hoang dại ở các tỉnh Hải Dương, Hưng Yên, Hải Phòng, Bắc Giang, Ninh Bình, Thanh Hóa [3],[4],[5], Nghệ An, Hà Tĩnh, Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên - Huế đến Khánh Hoà, Bình Thuận [11] Cây thường mọc ở các bờ bụi, hàng rào

Hình 1.1 Đặc điểm hình thái cây Dây thìa canh [11]

A: Ảnh toàn cây; B: Cụm hoa; C: Cành mang quả; D: Quả chín và hạt

Ở Việt Nam, cây Dây thìa canh được nghiên cứu nhân giống và trồng

lần đầu tiên vào năm 2007 tại Vườn Thực vật - Trường ĐH Dược Hà Nội

Vào năm 2008, việc khảo nghiệm vùng trồng được tiến hành tại Nam Định

(Hải Hậu), đại diện cho vùng đồng bằng sông Hồng, và Thái Nguyên (Phú

Lương), đại diện cho vùng núi thấp Đông Bắc Kết quả cho thấy, cây phát

triển tốt cả ở hai vùng nghiên cứu Tuy nhiên, vùng trồng ở Phú Lương – Thái Nguyên cho hàm lượng GS4 cao hơn [9]

Các nghiên cứu phân loại dưới loài đã xác định Dây thìa canh có 3 giống phân biệt bởi màu hoa, gồm giống hoa màu vàng kem, màu trắng và màu hồng Tuy nhiên, sự khác biệt về hàm lượng GS4 của các giống là không lớn [9], [11]

Có 11 hợp chất đã được xác định có ở dịch chiết Chloroform phần phía trên của cây và 24 hợp chất đối với phần rễ Trong đó có các thành phần đáng chú ý như Eicosane (20,81% với thân lá và 23,50% đối với rễ), acid Oleic (15,71% trong rễ), Stigmasterol (9,31% với thân lá và 12,66% với rễ ) [15]

1.1.3.1 GS4

GS4 là saponin toàn phần được tạo thành bằng cách tủa dịch chiết Dây thìa canh bằng H2SO4 do saponin trong cây Dây thìa canh không tan trong môi trường acid Phần lớn những nghiên cứu về tác dụng hạ đường huyết của Dây thìa canh đều tiến hành bằng GS4 Quy trình chiết xuất GS4 được trình bày trong Hình 1.2 [14], [23], [28]

nhóm Dammaran Nhóm oleanan có acid Gymnemic và Gymnema Saponin,

trong khi đó nhóm Dammaran có Gymnemosides [15], trong đó acid Gymnemic là thành phần chính được xác định là có tác dụng hạ đường huyết [17], [20]

Chiết Ethanol 700

H2SO4 5%

pH acid Bốc hơi dung môi

1.1.3.2 Saponin nhóm Olean

(1) Acid Gymnemic

Acid Gymnemic là một acid hữu cơ thuộc nhóm Saponin triterpenoid,

là thành phần chính của GS4 có tác dụng hạ đường huyết Năm 1886, Hopper

đã phân lập được chất này ở dạng acid đơn vô định hình, có cấu trúc glycosid

và đặt tên là acid Gymnemic Năm 1892, Shore đã phân lập được acid Gymnemic ở dạng tinh thể trắng bằng phương pháp cải tiến và nhận định đó

là một dẫn xuất của acid Anthranilic Năm 1959, Warren và Pfaffmann đã tách được acid Gymnemic dạng tinh thể có nhiệt độ nóng chảy 1990C và Pfaffmann đã công bố các thành phần của dịch thủy phân acid Gymnemic gồm đường Glucose, Arabinose, và Glucuronolacton Yackzan cũng đã xác định được trọng lượng phân tử của acid Gymnemic là khoảng 600 dựa vào kỹ thuật siêu ly tâm [29]

Năm 1967 Stocklin và cộng sự đã tách riêng được 4 thành phần từ A1 đến A4 của acid Gymnemic Các thành phần này chưa xác định được đầy đủ cấu trúc mặc dù đã xác định được chúng là loại D-glucoronid của Hexahydroxyolean-12-en cs tên là Gymnemagenin, acyl hóa với thành phần khác nhau như acid Formic, acid Acetic, n-Butyric và Isovaleric [29], [30]

Năm 1989, Yoshikawa và các cộng sự đã phân lập được 12 acid Gymnemic từ cây Dây thìa canh, đặt tên là acid Gymnemic(I-XII) (Hình 1.7) [29] Các acid Gymnemic này đều có phần aglycon là Gymnemagenin, riêng acid Gymnemic VII có phần aglycon là Gymnestrogenin Do vậy, Liu và cộng sự đã đổi tên acid Gynmemic VII (9) thành acid Gymnestroic VII (9) (Hình 1.5) [29]

Năm 1990, Kiuchi và cộng sự công bố phân lập được 2 acid Gymnemic được xác định là acid Gymnemic VIII và acid Gymnemic IX Để tránh nhầm lẫn với acid Gymnemic VIII và acid Gymnemic IX do

Yoshikawa phân lập, 2 chất trên được đặt tên là acid Gymnemic XIII (13) và acid Gymnemic XIV (14) (Hình 1.7)

H

HO

CH2OH OH OH

H

OH H

H H

OH

OH 24

30

O O HO

H OH H

H

OH

CH2OH

Bảng 1.2 Hàm lượng acid Gymnemic trong các bộ phận của cây

1.1.3.3 Saponin nhóm Dammaran

Ngoài những saponin có thành phần aglycon là thuộc nhóm Olean , Yoshikawa còn công bố những saponin khác thuộc nhóm Dammaran là Gymnemaside I-VII [35] cùng với những saponin nhóm Dammaran đã được phân lập trước đó là Gypenosid XXVIII, XXXVII, LV, LXII và LXIII [26] Năm 2008, Xu-Min Zhu và cộng sự đã phân lập được thêm 2 saponin mới, đó

là Gymnemoside-W1 và Gymnemoside-W2 [29]

1.1.3.4 Một số thành phần khác

Gurmarin là một chuỗi polypeptid gồm 35 acid amin và 3 cầu nối disulfid nội phân tử Cấu trúc và vị trí của các cầu nối disulfid đã được xác định như Hình 1.6 [33], [34] Gurmarin được phân lập từ cây Dây thìa canh

đã được chứng minh là một chất làm mất vị ngọt

Hình 1.6 Cấu trúc của Gurmarin

Năm 2004, X Liu và cộng sự đã xác định được trong lá GS có Kaempferol (3 - O - β - D – glucopyranosyl - (1→4) – α – L – rhamnopyranosyl - (1→6) –

β – D - galactopyranoid) và Quercetin (3 – O - 6’’ - (3 – hydroxyl – 3 - methylglutaryl) - β – D -glucopyranoside) [30]

O O HO

H OH H

H3C C H

C CH3

O tig:

Tigloyl

mba: CH3CH2 C

H CO

CH3(S)-2-Methylbutyryl

OG: β-Arabino-2 –Hexulopyranosyl β-glc: β-Glucopyranosyl

Hình 1.7 Các acid Gymnemic

1.1.4 Tác dụng sinh học

1.1.4.1 Tác dụng làm mất cảm giác ngọt

(1) Tác dụng của hỗn hợp acid Gymnemic

Hỗn hợp acid Gymnemic có tác dụng ức chế rất mạnh cảm giác ngọt ở người và tinh tinh nhưng lại không có tác dụng ức chế đối với các loài động vật thí nghiệm bao gồm cả động vật gặm nhấm [18], [19], [33], [34]

(2) Tác dụng của Gurmarin

Gurmarin đã được chứng minh là một chất làm mất vị ngọt mà không ảnh hưởng đến các vị chua, mặn và đắng ở chuột và không ảnh hưởng đến dây thần kinh vị giác và các tế bào vị giác của chuột [12] Tác dụng làm mất cảm giác này của Gurmarin kéo dài khá lâu trên 2 - 3 giờ, nhưng nhanh chóng mất tác dụng khi rửa lưỡi với thành phần Anti - Gurmarin trong huyết thanh của chuột [33], [34] Kết quả này cho thấy rằng Gurmarin đóng vai trò quan trọng như một chất ức chế đặc trưng cho các đáp ứng của hệ thống vị giác ngoại biên của các loài gặm nhấm [18] Không giống như acid Gymnemic, Gurmarin không có tác dụng đối với cảm giác ngọt ở người [18],[19],[33]

Về mặt sinh học, hai chất ức chế cảm giác ngọt này đóng vai trò như một chức năng bảo vệ, giúp cây chống lại các loài sâu bọ gây hại và nhiều loại động vật có vú do làm mất cảm giác ngon ở các loài này [18]

1.1.4.2 Tác dụng hạ đường huyết

Cây Dây thìa canh đã được nền Y học cổ truyền Ayurveda của Ấn Độ

sử dụng từ hơn 2.000 năm nay để điều trị đái tháo đường [14], [17], [18], [19], [23], [24], [25], [29]

Hai dịch chiết nước thu được từ lá Dây thìa canh gồm GS3 và GS4 đã được thử nghiệm tác dụng đối với nồng độ glucose nội sinh và các mô tụy nội tiết trên chuột gây ĐTĐ bằng Streptozocin Ở chuột ĐTĐ, nồng độ Glucose lúc đói đã trở về bình thường sau 60 ngày uống GS3 và 20 ngày uống GS4

Máu trong các thí nghiệm dung nạp Glucose đường uống được thu thập lại để khảo nghiệm Insulin huyết thanh Kết quả là việc điều trị với GS3 và GS4 đã làm cho mức Insulin huyết thanh tăng lên gần với mức Insulin bình thường lúc chuột đói Trong tụy của chuột ĐTĐ, cả GS3 và GS4 đều có khả năng nhân lên số tiểu đảo và số lượng tế bào β đảo tụy Liệu pháp điều trị thảo dược này mang đến sự cân bằng nồng độ glucose nội mô thông qua việc tăng nồng độ Insulin huyết thanh do sự phục hồi của tuyến tụy nội tiết [14], [28]

Hiệu quả tác dụng kiểm soát tăng đường huyết của GS4 từ cây Dây thìa canh đã được thí nghiệm trên 22 bệnh nhân ĐTĐ typ 2 GS4 được dùng với liều 400mg/ ngày qua đường uống trong thời gian 18-20 tháng đồng thời với các thuốc thông thường khác Kết quả cho thấy đường máu, Hemoglobin Glucosylat và Glycosylat protein huyết tương đều giảm ở mức có ý nghĩa và

có thể giảm liều các thuốc khác 5 trong số 22 bệnh nhân có thể ngừng sử dụng các thuốc khác mà mức đường huyết vẫn được kiểm soát Điều này cho thấy các tế bào β có thể được phục hồi khi sử dụng GS4 [23]

1.1.4.3 Tác dụng hạ lipid máu, chống béo phì

Sự kết hợp dịch chiết của Gymnema sylvestre với Niacin-bound

chromium (NBC) và Acid hydroxycitric (HCA-SX) đã được tiến hành để kiểm tra tác dụng chống béo phì bằng cách theo dõi các chỉ số trọng lượng cơ thể, chỉ số BMI (chỉ số khối cơ thể ), sự ngon miệng, thành phần Lipid, Leptin trong huyết thanh và sự bài tiết chất béo chuyển hóa qua thận Nghiên cứu được tiến hành ngẫu nhiên trên 60 người béo phì ở Elluru (Ấn Độ), độ tuổi từ 21-50, chỉ số khối cơ thể BMI > 26kg/ m2 Các đối tượng được cung cấp chế

độ ăn cho thấy trọng lượng cơ thể và BMI giảm từ 5-6%; tổng lượng Cholesterol, LDL (Lipoprotein tỉ trọng thấp) và các Triglycerid trong huyết thanh đều giảm trong khi lượng HDL (Lipoprotein tỉ trọng cao) trong máu và

sự bài tiết chất béo tăng lên Nghiên cứu này cho thấy việc kết hợp dịch chiết

Dây thìa canh với HCA-SX và NBC là một công thức an toàn và hiệu quả trong việc làm giảm trọng lượng cơ thể, giảm chỉ số khối cơ thể (BMI) trong

khi làm tăng nồng độ các HDL trong máu [17]

1.1.4.4 Tác dụng kháng khuẩn

Dịch chiết cồn của cây Dây thìa canh đã được công bố là có tác dụng

ức chế trên các chủng vi khuẩn: Bacillus pumilis, Bacillus subtilis,

Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas syringae và Staphylococus aureus;

nhưng không có tác dụng đối với Escherichia coli và Proteus vulgaris [25],

[2]

1.2 Thu hoạch (thu hái) dược liệu theo GACP [37]

Theo GACP, thu hái cây thuốc trong mùa hay khoảng thời gian tối ưu

để đảm bảo dược liệu chất lượng tốt nhất Thời điểm thu hái phụ thuộc vào bộ phận dùng của cây nghiên cứu Có thể tìm được các thông tin chi tiết về việc

ấn định thời điểm thích hợp cho thu hái, trong các Dược điển quốc gia, các tiêu chuẩn đã xuất bản, những chuyên khảo chính thức và những loại sách tham khảo chủ yếu Thời điểm tốt nhất cho thu hoạch (mùa vụ/thời điểm đạt chất lượng cao nhất) cần được xác định theo chất lượng và số lượng các hợp phần có tính sinh học hơn là tổng sản lượng thực vật của các bộ phận cây thuốc được nhắm đến Nên thu hái cây thuốc trong những điều kiện tốt nhất

có thể, tránh sương mưa hoặc ẩm quá cao

Các thiết bị thu hoạch và các loại máy khác cần được giữ sạch và điều chỉnh để giảm sự thiệt hại và ô nhiễm do đất và các loại vật liệu khác

Càng tránh cho dược liệu chạm đất để giảm tối thiểu lượng vi khuẩn trong các dược liệu đã thu hái Nếu có dùng các bộ phận dưới mặt đất (như rễ), thì phải loại bỏ mọi đất cát bám vào dược liệu ngay khi thu hoạch Dược liệu đã thu hái phải được vận chuyển ngay trong điều kiện sạch và khô đến cơ

sở chế biến

Mọi đồ đựng dùng trong thu hoạch phải được giữ sạch, không bị ô nhiễm bởi các cây thuốc khác đã thu hoạch trước và những tạp chất

Nên tránh mọi sự hư hại cơ học hoặc nén chặt dược liệu, ví dụ như chất đống dược liệu hoặc dồn quá đầy vào các túi hay bao Dược liệu bị phân hủy cần phải được đánh dấu và loại bỏ trong khi thu hoạch, kiểm tra sau thi hoạch

và chế biến, để tránh ô nhiễm vi khuẩn ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm

1.3 Tổng quan về sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao

1.3.1 Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao

Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao (HPTLC) là dạng nâng cao và tự động hóa của TLC cho phép chấm mẫu lên bản mỏng chính xác hơn và đánh giá định lượng các vết được tách Sự cải tiến về kĩ thuật này làm tăng hiệu lực tách và giảm thời gian phân tích Sự khác nhau giữa TLC và HPTLC ở chỗ kích thước và mức độ đồng đều hạt của chất hấp phụ TLC thường có phạm vi kích thước hạt từ 10-50µm, trung bình khoảng 20µm Nhưng với HPTLC, phạm vi kích thước hạt nhỏ hơn và kích thước hạt trung bình khoảng 5µm Phương pháp đưa mẫu lên bản mỏng cũng được cải tiến với thiết kế dụng cụ chấm mẫu chính xác, làm giảm đường kính vết chấm ban đầu Những cải tiến này làm giảm đáng kể thời gian và tăng hiệu lực tách của peak [1], [16]

1.3.2 Ứng dụng sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao

Phương pháp HPTLC được dùng để định tính, bán định lượng, thử tinh khiết, định lượng, kiểm nghiệm Dược liệu [1]