Ảnh hưởng của nồng độ, ph, nhiệt độ đến khả năng trung hòa độc tố của vi khuẩn vibrio harveyi của kháng thể igy

BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN NUÔI TRỒNG THỦY SẢN  ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Bệnh học thủy sản ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ, pH, NHIỆT ĐỘ ĐẾN KHẢ NĂNG TRUNG HÒA ĐỘC TỐ CỦA VI KHUẨN Vibrio harveyi CỦA KHÁNG THỂ IgY Giảng viên hướng dẫn: ThS Phạm Thị Hạnh Sinh viên thực hiện: Trần Thị Kiều MSSV: 56133026 Khánh Hòa – 2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN NI TRỒNG THỦY SẢN BỘ MƠN QUẢN LÍ SỨC KHỎE ĐỘNG VẬT THỦY SẢN ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Bệnh học thủy sản ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ, pH, NHIỆT ĐỘ ĐẾN KHẢ NĂNG TRUNG HÒA ĐỘC TỐ CỦA VI KHUẨN Vibrio harveyi CỦA KHÁNG THỂ IgY GVHD: ThS Phạm Thị Hạnh SVTH: Trần Thị Kiều MSSV: 56133026 Khánh Hòa, tháng 7/2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kết đề tài: “Ảnh hưởng nồng độ kháng thể, pH nhiệt độ đến khả trung hồ đợc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể đặc hiệu IgY” cơng trình hồn tồn tơi nghiên cứu thực duới hướng dẫn cô giáo ThS Phạm Thị Hạnh Các số liệu luận văn hồn tồn xác chưa công bố công trình khoa học khác thời điểm Tôi xin chịu trách nhiệm trước Nhà trường, Bộ Giáo Dục  Đào tạo pháp luật lời cam đoan Sinh viên Trần Thị Kiều i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nỗ lực thân tơi nhận nhiều quan tâm giúp đỡ từ cá nhân tập thể Qua xin bày tỏ lòng tri ân lời biết ơn sâu sắc đến giúp đỡ q báu Trước tiên, tơi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành đến Ban lãnh đạo, Ban chủ nhiệm Viện Nuôi Trồng Thủy Sản nhà Trường Đại học Nha Trang thầy cô giáo viên môn viện tạo điều kiện học tập dạy dỗ, trang bị tảng kiến thức cho tơi suốt khóa học Trường Đại Học Nha Trang Tiếp theo, xin gởi lời biết ơn sâu sắc tới Cô Phạm Thị Hạnh – người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi nhiều suốt q trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản III, đặc biệt Th.S Võ Đức Duy người bảo tạo điều kiện trang thiết bị thí nghiệm q trình thực đề tài truyền đạt kinh nghiệm, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè, người bên cạnh động viên học tập trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn! Khánh Hòa, tháng năm 2018 Sinh viên thực Trần Thị Kiều ii TÓM TẮT Nghiên cứu nhằm đánh giá ảnh hưởng nồng độ, pH, nhiệt độ đến khả trung hòa độc tố vi khuẩn Vibrio harveyi kháng thể IgY Nghiên cứu thực từ tháng 02/2018 đến tháng 06/2018 Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản III Các mức nồng độ kháng thể IgY sử dụng nghiên cứu 20, 15, 10, mg/ml Thí nghiệm sử dụng mức pH 2, 4, 6, 7, 8, 10 12 Các mức nhiệt độ sử dụng để thí nghiệm 0, 4, 20, 30, 40, 60, 80°C Từ nội dung nghiên cứu kết cho thấy nồng độ 20 mg/ml, pH =7 nhiệt độ - 30°C kháng thể IgY có khả trung hòa độc tố vi khuẩn Vibrio harveyi tốt Từ khóa: IgY, vi khuẩn V harveyi, độc tố, nhiệt độ, pH, nồng độ kháng thể iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH .vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan kháng thể IgY 1.1.1 Cấu trúc IgY 1.1.2 Tính chất kháng thể IgY 1.1.4 Ưu điểm việc sử dụng kháng thể công tác phòng trị bệnh 1.2 Tình hình nghiên cứu ứng dụng IgY giới Việt Nam 11 1.2.1 Trên giới 11 1.2.2 Ở Việt Nam 14 1.3 Một số hiểu biết vi khuẩn V harveyi 16 1.4 Bệnh Vibrio sp tác hại nghề nuôi trồng thuỷ sản 18 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Vật liệu nghiên cứu 21 2.2.1 Chủng vi khuẩn Vibrio harveyi 21 2.2.2 Kháng thể IgY 21 2.2.3 Dụng cụ, thiết bị hóa chất sử dụng nghiên cứu 21 2.3 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 23 2.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm 24 2.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ kháng thể đến khả trung hoà độc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể đặc hiệu IgY 24 iv 2.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng pH đến khả trung hoà độc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể đặc hiệu IgY 25 2.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến khả trung hoà độc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể đặc hiệu IgY 25 2.5 Phương pháp xử lí phân tích số liệu 26 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Ảnh hưởng nồng độ đến khả trung hòa độc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể IgY 27 3.2 Ảnh hưởng pH đến khả trung hòa độc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể IgY 28 3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả trung hòa độc tố vi khuẩn V harveyi kháng thể IgY 32 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 4.1 Kết luận 34 4.1 Kiến nghị 34 TÀI LIẸU THAM KHẢO 35 PHỤ LỤC 40 v DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Một số bệnh động vật thủy sản Vibrio spp gây (Bùi Quang Tề, 2006) 18 Bảng 1: Dịch chiết kháng thể IgY bốn nồng độ (20, 15, 10, mg/ml) 24 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1: Sự phân bố loại kháng thể trứng gà Hình 2: Cấu trúc phân tử IgY gà so với IgG động vật có vú Hình 3: Vi khuẩn V harveyi 17 Hình 1: Kháng thể IgY sau chiết xuất phương pháp PEG 21 Hình 2: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 23 Hình 1: Hiệu trung hòa kháng thể IgY nồng độ 20, 15, 10, mg/ml thể tích 50, 20 10µl Đối chứng khơng cho kháng thể pha lỗng PBS 27 Hình 2: Hiệu trung hòa độc tố kháng thể IgY trước (A) sau (B) cho kháng thể vào pH 28 Hình 3: Hiệu kháng thể IgY trung hòa độc tố V harveyi sau ủ pH 2, 4, 6, 8, 10 12 0, 1, Đối chứng không thêm kháng thể pha loãng với PBS 30 Hình 4: Kháng thể IgY xử lí mức nhiệt độ khác 10 phút ủ 32 vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT IgY Yolk Immunoglobin (globulin miễn dịch IgY hay kháng thể IgY) Ig G Immunoglobin G kDa Kilo Dalton CFU Colony Forming Unit PEG Polyethylene Glycol PBS Phosphate Buffered Saline TCBS Thiosunphate Citrate Bile Salt Agar MB Marine Broth OD Optical Density ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay ANOVA Analysis Of Varience SPSS Statistical Pakage for the Social Sciences IVI Viện vaccine Quốc tế CDC Trung tâm kiểm sốt phòng dịch Mỹ ĐBSCL Đồng sông Cửu Long AHPND Acute hepatopancreatic necrosis disease (bệnh hoại tử gan tụy cấp) PG Porphyromonas Gingivalis (vi khuẩn gây viêm lợi, viêm nha chu) DC Decay Care Hp Helicobacter pylori viii f d b a a a c e f d b a Thời gian (giờ) a a c e g e c b a ab d f g e c b a b d f 100 200 300 400 500 600 700 800 pH4 pH2 900 Số khuẩn lạc (CFU/ml) ĐC pH12 pH10 pH8 pH7 pH6 Hình 3: Hiệu kháng thể IgY trung hòa độc tố V harveyi sau ủ pH 2, 4, 6, 8, 10 12 0, 1, Đối chứng không thêm kháng thể pha loãng với PBS 30 Chú giải: Các chữ khác cột mức pH thể sai khác thống kê hiệu kháng thể IgY mức pH thời gian khác (P