1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Nghiên cứu ảnh hưởng của LP20 lên hệ miễn dịch tự nhiên và sức đề kháng của cá tra kháng bệnh gan thận mủ gây ra bởi edwardsiella ictaluri

94 192 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 94
Dung lượng 6,04 MB

Nội dung

Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nghiên cứu Những kết số liệu trích dẫn luận văn tốt nghiệp trung thực, không chép nguồn khác Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước nhà trường cam đoan TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thị Bích Thưởng Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến giáo viên hướng dẫn Thạc sĩ Võ Minh Sơn, cảm ơn giáo viên giới thiệu Th.s Phạm Minh Nhựt nhiệt tình hướng dẫn, dìu dắt, giúp đỡ để tơi hồn thành tốt đồ án tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn Ban giám đốc anh chị làm việc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II dẫn, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành tốt q trình thực nghiệm đồ án Xin cảm ơn Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II hỗ trợ tồn kinh phí máy móc, trang thiết bị để tơi thực đề tài nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Cơng Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, quý thầy cô Khoa Công Nghệ Sinh học – Thực Phẩm – Môi Trường tận tâm bảo, giảng dạy truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường để áp dụng hồn thành tốt đồ án Tôi xin cảm ơn chân thành, sâu sắc đến gia đình tơi tạo điều kiện cho học tập phấn đấu bốn năm qua Cảm ơn bạn lớp 11DSH02, 11DSH01 bạn làm việc, giúp đỡ suốt q trình thực nghiệm Viện Nghiên cứu Ni trồng Thủy sản II Sau cùng, xin gửi tới thầy Trường Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh toàn thể anh chị Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II lời cảm ơn chân thành Đồ án tốt nghiệp Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC .i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan cá tra .3 1.1.1 Giới thiệu cá tra 1.1.1.1 Phân loại 1.1.1.2 Phân bố 1.1.1.3 Hình thái, sinh lý cá tra 1.1.1.4 Đặc điểm dinh dưỡng sinh sản 1.1.2 Tình hình ni trồng xuất cá tra Việt Nam 1.1.2.1 Tình hình ni trồng cá tra 1.1.2.2 Tình hình xuất cá tra .6 1.1.3 Tình hình bệnh gan thận mủ cá tra 1.2 Tổng quan vi khuẩn Edwardsiella ictaluri .7 1.2.1 Giới thiệu vi khuẩn E ictaluri 1.2.2 Các đường xâm nhiễm vi khuẩn E ictaluri 1.2.3 Dấu hiệu bệnh lý cá tra E ictaluri gây 1.3 Tổng quan miễn dịch .11 1.3.1 Giới thiệu miễn dịch 11 i Đồ án tốt nghiệp 1.3.2 Hệ miễn dịch tự nhiên 12 1.3.2.1 Miễn dịch thực bào 12 1.3.2.2 Miễn dịch dịch thể 16 1.3.3 Chất tăng cường miễn dịch 17 1.4 Chế phẩm LP20 22 1.4.1 Sản phẩm HK L-137 .22 1.4.2 Thức ăn LP20 23 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 25 2.2 Vật liệu thí nghiệm .25 2.2.1 Mẫu thí nghiệm .25 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 25 2.2.3 Mơi trường hóa chất .26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 27 2.3.1 Chuẩn bị thức ăn 27 2.3.2 Chuẩn bị dịch vi khuẩn gây bệnh 28 2.3.3 Bố trí thí nghiệm cảm nhiễm miễn dịch 28 2.3.3.1 Thí nghiệm cảm nhiễm 30 2.3.3.2 Thí nghiệm miễn dịch 32 2.4 Xử lí số liệu 38 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 39 3.1 Kết thí nghiệm .39 3.1.1 Thí nghiệm cảm nhiễm 39 ii Đồ án tốt nghiệp 3.1.1.1 Xác định liều gây chết 50% (LD50) vi khuẩn E ictaluri cá 39 3.1.1.2 Khả bảo vệ cá tra kháng bệnh gan thận mủ sau 60 ngày nuôi 40 3.1.2.2 Khả bảo vệ cá tra kháng bệnh gan thận mủ sau 75 ngày nuôi 41 3.1.2.3 Kết kiểm tra vi khuẩn E ictaluri 42 3.1.2 Các thông số miễn dịch tự nhiên 45 3.1.2.1 Hoạt tính lysozyme 45 3.1.2.2 Hoạt động thực bào 47 3.2 Thảo luận chung 49 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .51 4.1 Kết luận .51 4.2 Đề nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ĐC: Đối chứng E Ictaluri: Vi khuẩn Edwardsiella ictaluri LD50: Liều lượng vi khuẩn E ictaluri gây chết 50% LP20 : Chủng vi khuẩn Lactobacillus plantarum 20% L-15: Môi trường leibovitiz – 15 MD: Miễn dịch NT: Nghiệm thức RPS: Tỷ lệ sống tương đối TLS: Tỷ lệ sống Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Ảnh hưởng chất tăng cường miễn dịch cá (Sakai, 1998) 18 Bảng 1.2 Sự khác HK L – 137 vi khuẩn sống .22 Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm thực nghiệm 28 Bảng 3.1 Kết khảo sát LD50 phương pháp tiêm 39 Bảng 3.2 Đặc điểm sinh hóa E.ictaluri Gly09M .44 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cá tra Hình 1.2 Vi khuẩn E ictaluri Hình 1.3 Cá tra khỏe mạnh nội tạng bình thường (A); Cá tra bệnh với triệu chứng nội tạng sưng to nhiều đốm mủ trắng thận, lách gan (B) Hình 1.4 Thực bào trình giết vi sinh vật bên tế bào 15 Hình 1.5 Mẫu bao gói nhãn thức ăn LP20 23 Hình 2.1 Thức ăn bổ sung LP20 27 Hình 2.2 Bố trí thí nghiệm bể kính 150 lít 29 Hình 2.3 Tiêm 0,2 ml vi khuẩn E.ictaluri vào cá tra ăn thức ăn chứa LP20 31 Hình 2.4 Sơ đồ thu huyết cá tra từ mẫu máu 32 Hình 2.5 Lấy máu động mạch chủ đuôi cá ống tiêm vơ trùng 33 Hình 2.6 Máu cá tra sau ly tâm (A); Huyết thu từ máu cá tra (B) 33 Hình 2.7 Lấ y thận trước cá tra (A); Thận trước cá tra sau vô trùn g L-15 (B); Nghiền thận cối xứ vô trùng với môi trường L -15 (C) 35 Hình 2.8 Dịch bạch cầu sau ly tâm nằm percol 37/51% (A); Dịch bạch cầu thu sau q trình xử lí từ thận trước (B) 35 Hình 2.9 Sơ đồ thu nhận dịch bạch cầu từ thận trước cá tra 36 Hình 2.10 Dịch bạch cầu có định lame tất nghiệm thức (A); Dịch bạch cầu rửa PBS sau nhuộm màu với propidium (B) 37 Hình 2.11 Sơ đồ trình xác định hoạt động thực bào 38 Hình 3.1 Tỷ lệ sống cá tra sau cảm nhiễm với E Ictaluri Gly09M sau 60 ngày sử dụng LP20 40 Đồ án tốt nghiệp Hình 3.3 Kết kiểm tra hình thái bên ngồi cá tra sau gây bệnh với vi khuẩn E ictaluri Gly09M 43 Hình 3.4 E ictaluri Gly 09M ni cấy môi trường Blood agar bổ sung 5% máu cừu 43 Hình 3.5 Đồ thị phương trình đường chuẩn lysozyme từ lòng trắng t rứng gà với Microccoccus luteus ATCC 9341 45 Hình 3.6 Hoạt tính lysozyme huyết cá tra sau cho ăn thức ăn trộn với LP20 Số liệu biểu thị giá trị trng bình độ lệch chuẩn (n = 3) 46 Hình 3.7 Tỷ lệ thực bào tế bào bạch cầu cá tra sau cho ăn thức ăn trộn LP20 Số liệu biểu thị số trung bình sai số chuẩn (n = 3) Các chữ (thuờng) khác thời điểm thu mẫu biểu thị khác biệt có ý nghĩa với p < 0,05 47 Hình 3.8 Chỉ số thực bào tế bào bạch cầu cá tra sau cho ăn thức ăn trộn LP20 Số liệu biểu thị số trung bình sai số chuẩn (n = 3) Các chữ (thuờng) khác thời điểm thu mẫu biểu thị khác biệt có ý nghĩa với p < 0,05 48 vii Đồ án tốt nghiệp Bảng C4 Tỷ lệ sống cá tra vòng 10 ngày cảm nhiễm vi khuẩn E.ictaluri sau 75 ngày cho ăn thức ăn bổ sung LP20 N NN N g DT C1 T T y - 1 1 0 0 1 1 0 0 N T 1 1 1 0 0 1 1 0 0 9 7 68 8 9 5 6 2 0 5, 4 , , , , , 2 , , , , , R P , , , , Ghi chú: Số liệu trình bày dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn, số liệu dòng có ký tự viết lên khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê (p

Ngày đăng: 24/01/2019, 15:28

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
[31]. Masahiro Sakai (1998). Current research status of fish immunostimulants, Faculty of Agriculture, Miyazaki UniÕersity, Miyazaki 889-21, Japan Sách, tạp chí
Tiêu đề: Current research status of fish immunostimulants
Tác giả: Masahiro Sakai
Năm: 1998
[33]. Nikoskelainen, S., A. Ouwehand, S. Salminen, and G. Bylund (2001).Protection of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) from furunculosis by Lactobacillus rhamnosus. Aquaculture 198:229-236 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Protection of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) from furunculosis byLactobacillus rhamnosus
Tác giả: Nikoskelainen, S., A. Ouwehand, S. Salminen, and G. Bylund
Năm: 2001
[34]. Panigrahi, A., V. Kiron, J. Puangkaew, T. Kobayashi, S. Satoh, and H. Sugita (2005) The viability of probiotic bacteria as a factor influencing the immune response in rainbow trout Oncorhynchus mykiss. Aquaculture 243:241-254 Sách, tạp chí
Tiêu đề: The viability of probiotic bacteria as a factor influencing the immuneresponse in rainbow trout Oncorhynchus mykiss
[36]. Reed, L.J. and H. Muench (1938). A simple method of estimating fifty percent endpoints. American Journal of Hygiene 27:493-497 Sách, tạp chí
Tiêu đề: A simple method of estimating fifty percentendpoints
Tác giả: Reed, L.J. and H. Muench
Năm: 1938
[39]. Secombes, C.J. (1996) The non-specific immune system: cellular defenses. In:Iwama, G. and T. Nakanishi (eds.) The fish immune system organism, pathogen, and environment (Fish physiology). Academic Press, San Diego. pp. 63-103 Sách, tạp chí
Tiêu đề: The non-specific immune system: cellular defenses". In:Iwama, G. and T. Nakanishi (eds.) "The fish immune system organism, pathogen,and environment (Fish physiology)
[41]. Vadstein, O. (1997). The use of immunostimulation in marine larviculture:possibilities and challenges. Aquaculture 155:401-417 Sách, tạp chí
Tiêu đề: The use of immunostimulation in marine larviculture:"possibilities and challenges
Tác giả: Vadstein, O
Năm: 1997
[42]. Verschuere, L., G. Rombaut, P. Sorgeloos, and W. Verstraete (2000).Probiotic bacteria as biological control agents in aquaculture. Microbiology and Molecular Biology Reviews 64:655-671 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Probiotic bacteria as biological control agents in aquaculture
Tác giả: Verschuere, L., G. Rombaut, P. Sorgeloos, and W. Verstraete
Năm: 2000
[43]. Vine, N.G., W.D. Leukes, and H. Kaiser (2006). Probiotics in marine larviculture. FEMS Microbiology Reviews 30:404-427 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Probiotics in marinelarviculture
Tác giả: Vine, N.G., W.D. Leukes, and H. Kaiser
Năm: 2006
[44]. Vo Minh Son et al. (2009). Dietary adminisattion of the probiotic Lactobacillus Plantarum, enhanced the growth, innate immune response, and desease resistance of the grouper Epinephelus coioides, Department of Tropical Agriculture and International Cooperation, National Pingtung University of Science and Technology, Pingtung 91201, Taiwan, ROC Sách, tạp chí
Tiêu đề: Dietary adminisattion of the probioticLactobacillus Plantarum, enhanced the growth, innate immune response, anddesease resistance of the grouper Epinephelus coioides
Tác giả: Vo Minh Son et al
Năm: 2009
[46]. Whyte, S.K. (2007). The innate immune response of finfish - A review of current knowledge. Fish &amp; Shellfish Immunology 23:1127-1151 Sách, tạp chí
Tiêu đề: ). The innate immune response of finfish - A review ofcurrent knowledge
Tác giả: Whyte, S.K
Năm: 2007
[47]. Yeh, S.-P., C.-A. Chang, C.-Y. Chang, C.-H. Liu, and W. Cheng (2008).Dietary sodium alginate administration affects the fingerling growth and resistance to Streptococcus sp. and Iridovirus, and juvenile non-specific immune responses of the orange-spotted grouper, Epinephelus coicoides. Fish &amp; Shellfish Immunology 25:19-27 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Dietary sodium alginate administration affects the fingerling growth and resistanceto Streptococcus sp. and Iridovirus, and juvenile non-specific immune responses ofthe orange-spotted grouper, Epinephelus coicoides
Tác giả: Yeh, S.-P., C.-A. Chang, C.-Y. Chang, C.-H. Liu, and W. Cheng
Năm: 2008
[29]. Hirose Y, Murosaki S, Yamamoto Y, Yoshikai Y, Tsuru T (2006). Daily intake of heat-killed Lactobaci//us plantarurn L-137 augments acquired immunity in healthy adults. J Nutr 136( 12):3069- 3073 Khác
[30]. House Wellness Foods Corporation (2010). GRAS Exemption Claim for a Heat-Killed Lactobacillus plantarum (HK-LP) Ingredient, lmoji 3-20, Itami, Hyogo664-0011, Japan Khác
[38]. Salinas, I., A. Cuesta, M.A. Esteban, and J. Meseguer (2005) Dietary administration of Lactobacillus delbrüeckii and Bacillus subtilis, single or combined, on gilthead seabream cellular innate immune responses. Fish &amp; Shellfish Immunology 19:67-77 Khác
[40]. Shotts, E. B., Blazer, V S., Waltman, W. D. (1986). Pathogenesis of experimental Edwardsiella lctalun infections in channel catfish (Ictalurus punctatus). Can. J. Fish. aquat. Sciences 43: 3642 Khác
[45]. Waltman. W. D., Shotts. E. B., Blazer, V. S. (1985). Recovery of Edwardsiella ictaluri from danio (Danio devario). Aquaculture, Amsterdam 46: 63-66 Khác

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w