Kiểm soát điều hòa biểu hiện gen Sao mã RNA: cắt ghép RNA, vận chuyển và định vị RNA, các tác nhân ảnh hưởng đến RNA Dịch mã Protein: các yếu tố kiểm soát hoạt hóa protein 1. Tế bào vật chủ E. coli Giá thành Dễ thao tác Nấm men: Đã được nghiên cứu kỹ về mặt di truyền Có khả năng thực hiện glycosyl hóa protein Sacharomyces cerevisiae, Pichia pastoris (Nấm men là hostcell vì có thể thực hiện glycosyl hóa và giá thành rẻ hơn nhiều so với trên đông vật) Baculovirus AcMNPV: Có sự tương đồng giữa các hệ thống biến đổi sau dịch mã giữa tế bào côn trùng và động vật có vú Chỉ lây nhiễm vào động vật không xương sống Promoter cho gen polyhedrin Có vector con thoi E.colitế bào côn trùng (bacmit) Động vật: Có thể sản xuất các protein tái tổ hợp với đầy đủ các biến đổi sau dịch mã Tế bào có nguồn gốc từ thận khỉ xanh châu Phi (COS), thận chuột hamster non (BHK) và thận phôi người (HEK239) để biểu hiện gen tạm thời Các tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc để biểu hiện ổn định và lâu dài Thực vật Có sử dụng nhưng ít. 3, Vector biểu hiện gen và vector cài nhập Vector biểu hiện Vector cài nhập Khái niệm Vector biểu hiện (Expression vector): Cho phép đoạn DNA ngoại lai cài nhập biểu hiện ra protein ở tế bào Vector cài nhập (Integration vector): cho phép cài nhập đoạn DNA ngoại lai vào genome của vật chủ Đặc điểm Có mặt đầy đủ các yếu tố để biểu hiệnđiều hòa biểu hiện gen: Promoter, Terminator, Trình tự đuôi (tag) và trình tự cắt của protease tinh sạch Trình tự các vùng không được dịch mã tại đầu 5’ và 3’ (untranslated regions, UTR) hiệu quả dịch mã và độ bền của mRNA Vị trí bám của ribosome (RBS, ribosome binding site) Trình tự Kozak, trình tự tiết Có gen để thể biến nạp sàng lọc được qua dấu chuẩn (kháng kháng sinh). Có mặt của promoter mạnh (có ái lực cao đối với RNA polymerase) phiên mã liên tục Có thể được điều chỉnh: có thể kiểm soát mức độ phiên mã một cách chính xác. Promoter từ operon lac (lactoza) và trp (tryptophan) của E. coli Có 2 đoạn tương đồng với đoạn DNA trên genome của tế bào chủ Có marker để sàng lọc các tế bào chủ được cài nhập đoạn DNA ngoại lai
Kiểm sốt điều hòa biểu gen Sao mã RNA: cắt ghép RNA, vận chuyển định vị RNA, tác nhân ảnh hưởng đến RNA Dịch mã Protein: yếu tố kiểm sốt hoạt hóa protein Tế bào vật chủ E coli Giá thành Dễ thao tác Nấm men: Đã nghiên cứu kỹ mặt di truyền Có khả thực glycosyl hóa protein Sacharomyces cerevisiae, Pichia pastoris (Nấm men hostcell thực glycosyl hóa giá thành rẻ nhiều so với đông vật) Baculovirus AcMNPV: Có tương đồng hệ thống biến đổi sau dịch mã tế bào côn trùng động vật có vú Chỉ lây nhiễm vào động vật khơng xương sống Promoter cho gen polyhedrin Có vector thoi E.coli-tế bào côn trùng (bacmit) Động vật: Có thể sản xuất protein tái tổ hợp với đầy đủ biến đổi sau dịch mã Tế bào có nguồn gốc từ thận khỉ xanh châu Phi (COS), thận chuột hamster non (BHK) thận phôi người (HEK-239) để biểu gen tạm thời Các tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc để biểu ổn định lâu dài Thực vật Có sử dụng 3, Vector biểu gen vector cài nhập Khái niệm Vector biểu Vector cài nhập Vector biểu (Expression vector): Cho phép đoạn DNA ngoại lai cài nhập biểu protein tế bào Vector cài nhập (Integration vector): cho phép cài nhập đoạn DNA ngoại lai vào genome vật chủ Đặc điểm Có mặt đầy đủ yếu tố để biểu hiện/điều hòa biểu gen: Promoter, Terminator, Trình tự (tag) trình tự cắt protease tinh Trình tự vùng không dịch mã đầu 5’ 3’ (untranslated regions, UTR) hiệu dịch mã độ bền mRNA Vị trí bám ribosome (RBS, ribosome binding site) Trình tự Kozak, trình tự tiết Có gen để thể biến nạp sàng lọc qua dấu chuẩn (kháng kháng sinh) Có mặt promoter mạnh (có lực cao RNA polymerase) phiên mã liên tục Có thể điều chỉnh: kiểm sốt mức độ phiên mã cách xác Promoter từ operon lac (lactoza) trp (tryptophan) E coli Có đoạn tương đồng với đoạn DNA genome tế bào chủ Có marker để sàng lọc tế bào chủ cài nhập đoạn DNA ngoại lai ...Đặc điểm Có mặt đầy đủ yếu tố để biểu hiện /điều hòa biểu gen: Promoter, Terminator, Trình tự (tag) trình tự cắt protease tinh Trình tự vùng... Kozak, trình tự tiết Có gen để thể biến nạp sàng lọc qua dấu chuẩn (kháng kháng sinh) Có mặt promoter mạnh (có lực cao RNA polymerase) phiên mã liên tục Có thể điều chỉnh: kiểm sốt mức độ phiên... cách xác Promoter từ operon lac (lactoza) trp (tryptophan) E coli Có đoạn tương đồng với đoạn DNA genome tế bào chủ Có marker để sàng lọc tế bào chủ cài nhập đoạn DNA ngoại lai