hoa phan tich cong cung trong hoa hoc

Ngày 12/07/2018 - Tìm hiểu HPLC, GC Sáng đọc tài liệu HPLC: + Những điều cần nắm HPLC Hệ thống cung cấp pha động (pump) mục đích (bơm cao áp) bơm dung môi pha động vào cột thực q trình sắc ký Bơm có áp suất tối đa 4000psi thường dùng khoản 3000psi để đảm bảo an toàn cho cột hệ thống Nhiệm vụ bơm tạo dòng dung môi vào cột ổn định liên tục nên bơm có cấu tạo gồm piston làm việc liên tục Bộ phận loại khí (Degaser): dùng để loại bỏ khí hòa tan pha động trước pump vào cột Hệ thông bơm mẫu (Injector): Injector loại điểm, valve vị trí load pha động từ vị trí qua vị trí hay nói cách khác pha động qua bơm vào cột Khi valve vị trí inject pha động qua vị trí 1, 2, 5, đồng thời đẩy mẫu vào cột phân tích Cột (Column): Cột pha đảo chứa pha tĩnh hạt silica alkyl hóa có chức lưu giữ chất thích hơp nhờ có chất trước, sau Đầu dò (Detector): Photodiode Array chức nhận tính hiệu chất khỏi cột Bộ phận ghi nhận xữ lý liệu (Data processor) để nhận liệu từ đầu dò lưu giữ máy chủ Các bước vận hành HPLC: Các bước vận hành - Bật cơng tắc vị trí on cho pump 1525, máy HPLC, detector 2996, máy vi tính - Nhấp chuột vào biểu tượng Empower hình máy vi tính - Nhập User name “system” password “manager” Nhấn enter để đăng nhập vào hệ thống - Chờ phần mềm khởi động đến xuất bảng chọn Empower pro Để tạo Configuge mới: - - - Nhấp chuột vào ô Configuge System Chờ phần mềm khởi động đến xuất hình thao tác Vào File\New\Project Nhấp chuột vào Next để tiếp tục Chọn thông tin New project Wizard - Tablespace thích hợp sau nhấn Next Trong New Project Wizard – Option chọn Photo Diode Array, sau nhấn Next để tiếp tục Trong New Project Wizard – Access Control chọn thơng tin phù hợp, sau nhấn Next để tiếp tục Trong New Project Wizard – Copy Selection chọn thư mục cần lưu Project tạo Project khơng nằm thư mục có sẵn, sau nhấn Next Tiếp theo New Project Wizard – Name Emtry nhập tên Project thông tin mô tả gợi nhớ Project (nếu cần) Theo bước hoàn thành viện tạo Project mới, nhiên để chạy mẫu (Run sample), hay định lượng định tính, Project cần phải có Instrument Method Develop Method Để thực được, sau tạo Project, trở hình Nhấp vào Run Sample Chọn Project hệ thống thích hợp Nhấp vào Vào Edit thiết lập thông số: Đặt thông số cho điều khiển nhiệt độ Đặt thông số cho đầu dò 2996 (đối với chế độ UV-Vis thơng thường qt bước sóng cố định – 2D) Giá trị lambda tùy thuộc vào phương pháp đo (có thể chọn từ 190nm – 800nm) Đặt thông số cho đầu dò 2996 (chế độ qt khoảng bước sóng – 3D) Giá trị lambda quét tùy vào phương pháp đo (có thể chọn 190nm – 800nm) Đặt thơng số cho pump 1525 (chế độ đẳng dòng Isocratic) Các giá trị cài đặt tùy thuộc vào phương pháp thí nghiệm Đặt thơng số cho pump 1525 (chế độ Gradient dung môi) Các giá trị tùy thuộc vào phương pháp phòng thí nghiệm Lưu Instrument method vừa tạo Vào File\Save Đặt tên cần lưu vào ô Name để lưu Instrument vào project Tại lúc trước tạo Instrument Method - - Vào File\New\Method Set Chọn Instrument tương ứng ô Instrument Method Vào File\Save\ Nhấn Save Trong ô Instrument Method, chọn Instrument cần sử dụng Nhấp Monitor Chờ đến Base Line ổn định Nhấp vào biểu tượng Abort để chuẩn bị tiêm mẫu Chọn hình Single Inject pump 1525 vị trí Load Load tối thiểu lần thể tích loop (VD: Samle loop 20µL phải Load mẫu 60 µL) Sau nhấn Prepare tiêm mẫu vào để nguyên vị trí kim tiêm Injector (q trình tiêm ý bọt khí kim tiêm), lúc valve Injector vị trí Load Bấm vào biểu tượng Inject đồng thời gạt valve từ vị trí Load sang vị trí Inject (gạt valve sang phải) Chờ góc hình xuất dòng Injection running, di chuyển valve từ vị trí Inject sang vị trí Load (phải sang trái) Rữa kim tiêm Load dung mơi rửa Loop Lưu ý: vị trí valve phải Load rửa Sau chạy xong mẫu, để xữ lý kết quả, ta thực thao tác: Trong giao diện Empower Pro, vào Browse Project Vào channels Chọn tất mẫu cần tính tốn Vào biểu tượng sắc ký đồ để Extract từ dạng 3D sang 2D Nhập bước sóng Extract Nhấp vào biểu tượng Extract Vào File\Save\Chromatogram để lưu mẫu sắc ký đồ cần Extract Tương tự hết bảng mẫu TRỞ LẠI MÀN HÌNH CHANNELS Chọn sắc ký đồ dạng 2D chuẩn có hàm lượng thấp đường chuẩn Vào biểu tượng Review Click chuột chọn vào ô Use processing Method Wizard Tiếp tục theo hướng dẫn hình Có thể thay đổi Threshold để cắt diện tích xác Có thể thay đổi giá trị Start End để cắt tất Peak mong muốn - Có thể đặt giá trị Minimum Area Minimum Hight để loại peck tạp không mong muốn để tiếp tục Đặt đơn vị tính vào ô để tiếp tục Đặt tên Processing Method để tiếp tục Vào biểu tượng Processing method để đặt nồng độ chuẩn Vào Default Amount để đặt mức nồng độ chuẩn Vào File\Save để hoàn thành việc tạo Processing Method Trong channels, chọn tất mẫu cần phân tích Click chuột phải Chọn Process… Chọn Processing Method sử dụng để tính tốn Click OK Vào Curver để chọn đường chuẩn cần in Click chuột phải Chọn Print… Chọn máy in Click OK Vào Results để chọn mẫu cần in Click chuột phải Chọn Print… Chọn Processing Method sử dụng lúc Process kết Chọn kiểu Reporting (default theo reporting tự tạo) Click OK Click OK để tiếp tục Click NEXT để tiếp tục Click FINISH để tiếp tục Click FINISH Buổi chiều tìm hiểu máy GC: Cấu tạo máy GC 1.1 Nguồn cung cấp khí mang: sử dụng bình chứa khí thiết bị sinh khí (thiết bị tách khí N2 từ khơng khí, thiết bị cung cấp khí H2 từ nước cất,…) 1.2 Lò cột: dùng để điều khiển nhiệt độ cột phân tích 1.3 Bộ phận tiêm mẫu: − Bộ phận tiêm mẫu dùng để đưa mẫu vào cột phân tích theo với thể tích bơm thay đổi Khi đưa mẫu vào cột, sử dụng chế độ chia dòng (split) khơng − chia dòng (splitless) Có cách đưa mẫu vào cột: tiêm mẫu thủ công tiêm mẫu tự động (Autosamper – có khơng có phận hóa – headspace) 1.4 Cột phân tích Có loại cột: cột nhồi cột mao quản − Cột nhồi (packed column): pha tĩnh nhồi vào cột, cột có đường kính 2- − 4mm chiều dài 2-3m Cột mao quản (capillary): pha tĩnh phủ mặt (bề dày 0.2-0.5m), cột có đường kính 0.1-0.5mm chiều dài 30-100m 1.5 Đầu dò Đầu dò dùng phát tín hiệu để định tính định lượng chất cần phân tích Có nhiều loại đầu dò khác tùy theo mục đích phân tích đầu dò ion hóa lửa (FID – Flame Ioniation Detector), đầu dò dẫn nhiệt (TCD – Thermal Conductivity Detector), đầu dò cộng kết điện tử (ECD – Electron capture Detector), đầu dò quang hóa lửa (FPD – Flame Photometric Detector), đầu dò NPD (NPD – Nitrogen Phospho Detector), đầu dò khối phổ (MS – Mass Spectrometry) 1.6 Bộ phận khuếch đại tín hiệu đầu dò phát 1.7 In liệu Sau phân tích xong, liệu in qua máy in kết nối với máy tính có cài phần mềm điều khiển Các bước vận hành 2.1 Mở máy: Lần lượt sau: − − Mở valve khí: N2, H2 Mở khóa máy nén khí, khóa valve xả khí thừa (bên máy nén) Sau cắm − điện cho máy nén Mở máy GC Claurus 500, máy tự kiểm tra bên trong, sau kiểm tra, hình xuất hiện: Login Language Chọn “Login” để vào hình thiết bị Mở máy vi tính, click vào biểu tượng Total Chrom Navigator Desktop Xuất giao diện 2.1 Thao tác máy GC: Từ hình chính, cài đặt thông số sau: − − Vào PSSI: để cài • Nhiệt độ cho Injector: thường chọn 150 - 200 • Carrier Gas (Nitrogen): thường chọn 2ml/min • Split (Ratio): thường chọn 25:1 Vào oven: để cài chương trình nhiệt độ cho buồng đốt: thường dao động khoảng 40 - 220 Vào A-FID: để cài Nhiệt độ cho detector FID: thường chọn 200-200 • Gas flow (ml/min): bao gồm Air Hydrogen, tiến hành sau: Vào Tool\Configuration\A-FID\ • − Air: 450m/min H2: 45.0ml/min Chọn OK\Close\ − Khi nhiệt độ FID nằm khoảng 150-220, Khí Air H2 ổn định, tiến hành đánh lửa cách click vào biểu tượng Ignite, khí Air giảm sau tăng lên dần ổn định lại đồng thời nghe tiếng bụp, tín hiệu điện xuất gần 1mV, đánh lửa thành công 2.3 Chuẩn bị mẫu đo: − Yêu cầu chung chất cần lập đường chuẩn chất nội chuẩn: phải có nhiệt độ sơi 250 khơng bị phân hủy, chất có độ tinh khiết cao ( khoảng − 99%), peak phải rõ ràng, thời gian xuất peak không ngắn ( 2.5 phút) Chọn chất nội chuẩn thích hợp cho chất cần lập đường chuẩn (mẫu) sau: Phải tan tốt dung môi dùng để pha mẫu, không phản ứng với mẫu có thời gian xuất peak gần với thời gian xuất peak mẫu đo ( cách khoảng 1- − − phút tốt nhất) Peak xuất dung môi phải cách xa peak mẫu nội chuẩn Pha mẫu với dung mơi thích hợp theo nồng độ 1%, 2%, 3%, 4%, 5% thể tích nồng độ xác định chất nội chuẩn (1% thể tích) Tùy theo độ cao peak xuất mà chọn số lượng mẫu nồng độ thích hợp ( thông thường chon khoảng nồng độ khác nhau) Chú ý: Nồng độ mẫu pha cần phải xác 2.4 Thao tác phần mềm Total Chrom Navigator: − Chọn phương pháp đo: Chọn biểu tượng Method hình chính, sau chọn Method thích hợp cho mẫu cần đo Có cách để setup điều kiện đo lên máy GC: Chọn trực tiếp Biểu tượng setup hình thực thao tác bước Từ cửa sổ Method Editor, chọn Setup thực thao tác bước kế Trong cửa sổ Setup, thực sau: Setup type: Method Method: Mở đường dẫn đến method cần sử dụng Raw file path: Mở đường dẫn đến vị trí cần lưu file raw Result file path: Mở đường dẫn đến vị trí cần lưu file result Base file name: Nhập tên mẫu cần đo, loại mẫu, kèm theo ngày tháng,… Chọn Vial list: mở sổ Sequence cho phép nhập thông tin mẫu, GEN, số lượng mẫu,…: nhập theo thứ tự mẫu tăng dần theo nồng độ Processing: chọn suppress processing − − Sau nhập xong, chọn OK Chương trình kết nối với máy GC, kết nối thành cơng, góc phía trái hình máy GC xuất chữ “External”, không thành công, xuất chữ “Method 5” Chú ý: Cần nhớ xác tên file name nơi chứa mẫu để dễ dàng cho việc Calobration − − Đo mẫu: Sau cài đặt điều kiện đo mẫu, thực inject mẫu sau: Dùng ống tiêm (loại 1l) rút khoảng 0.5l (tùy theo phương pháp nồng độ mẫu), − tránh để có bọt khí sexlamf sai lệch kết đo Đặt kim vào vị trí Inject, sau chọn biểu tượng Run hình máy GC 2.5 Màn hình Run xuất hiện, nhấn START, máy đếm ngược từ 5sec vè 0sec nghe tiếng píp − Khi inject mẫu vào thiết bị, máy ghi nhận kết đếm thời gian bắt đầu hoạt động, chờ khoảng 0.2min rút kim Chú ý: Đối với mẫu cần định lượng, cần rút xác lượng mẫu inject vào máy − Lần lượt đo tất mẫu với lượng mẫu inject điều kiện đo 2.6 Phân tích kết quả: - - - Sau kết thúc thời gian đo máy tự lưu kết vào file raw theo vị trí cài đặt Từ hình Total Chrom Navigator , nhấn nút Batch mở file cần xử lý kết ( theo đường dẫn cài đặt bước 5), click vào biểu tượng Star , sau đóng lại Cửa sổ Reprocess Result xuất với đồ thị mẫu cần xem Máy tự phân tích kết quả, thao tác để sủa kết phân tích Muốn xem kết phân tích vào Display\Peak Report, hình xuất bảng “TEST QUANTITATION REPORT” thể toàn kết tồn peak có đồ thị Nhấn vào biểu tượng “  ” chữ : “RETURN” để quay hình cửa sổ Reprocess Result Sau xử lý lưu lại kết cách vào File\Save: lưu chồng với kết máy phân tích vào File\Save As: lưu với tên Chú ý: cần ghi lại thời gian xuất peak phổ để nhập phần tạo Calibration curve 2.7 Calibration - - Từ sổ Total Chrom Navigator Clarus 500, chọn biểu tượng Method, sau chọn Method thích hợp cho mẫu cần tạo đường chuẩn, xuất cửa sổ Method Editor Việc tạo Calibration curve thực cửa sổ Trên Menu chọn Components\New Component, hình xuất bảng Components Trên bảng chọn Indentification Trên thẻ cần nhập thông tin sau: Trong khung Component Type: click chọn Peak Name: nhập tên chất nội chuẩn Retention time: nhập thời gian xuất Peak Absolute window: 3.00s Relative window: 3% Click chọn “Find tallest peak in widow” Click chọn “This component is an internal satndard” Sau nhập xong thông tin chất nội chuẩn, chọn New component để xác định chất nội chuẩn Sau xác nhận, tên chất nội chuẩn xuất khung bên trái thẻ Indentification Tiếp theo, nhập thông tin cho chất cần xác định đường chuẩn, sau: + + + + + - Trong khung Component Type: click chọn Peak Name: nhập tên chất nội chuẩn Retention time: nhập thời gian xuất Peak Absolute window: 3.00s Relative window: 3% Click chọn “Find tallest peak in widow” Click chọn “This component is a retention reference” Click chọn “ Internal standard” chọn ten chất nội chuẩn vừa nhập Sau nhập xong thông tin chất cần xác định, chọn New component để xác nhận chất Sau xác nhận, tên chất vừ nhập xuất khung bên trái thẻ Indentification Tiếp tục nhập tương tự cho chất lại + + + + + - 10 − Mẫu 1: Rs = = 1,87 − Mẫu 2: Rs = = 1,81 − Mẫu 3: Rs = =1,9 Câu hỏi tập củng cố Mô tả cấu tạo phân HPLC Bình chứa pha động Bộ phận khử khí Bơm cao áp Bộ phận tiêm mẫu Cột sắc ký (pha tĩnh) Đầu dò Hệ thống ghi nhận tín hiệu, xử lý liệu điều khiển hệ thống In liệu Vai trò degass máy HPLC ? Nhằm lọai trừ bọt nhỏ sót lại dung mơi pha động, tránh xảy số tượng đường dung môi không làm cho thời gian lưu peak thay đổi hay làm áp suất tăng đột ngột ảnh hưởng đến hoạt động hệ thống HPLC  sai kết phân tích Nêu phương pháp lựa chọn pha động phân tích Paracetamol cafein HPLC? Vai trò việc lọc phân tích paracetamol cafein HPLC? Kết bị ảnh hưởng nàokhi thay đổi dung môi tỉ lệ dung mơi phân tích paracetamol cafein? 39 Ngày 23/08/2018 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG METHANOL, N-BUTANOL, ETHANOL BẰNG GC Cấu tạo máy GC 1.1 Nguồn cung cấp khí mang: sử dụng bình chứa khí thiết bị sinh khí (thiết bị tách khí N2 từ khơng khí, thiết bị cung cấp khí H2 từ nước cất,…) 1.2 Lò cột: dùng để điều khiển nhiệt độ cột phân tích 1.3 Bộ phận tiêm mẫu: − Bộ phận tiêm mẫu dùng để đưa mẫu vào cột phân tích theo với thể tích bơm thay đổi Khi đưa mẫu vào cột, sử dụng chế độ chia dòng (split) khơng − chia dòng (splitless) Có cách đưa mẫu vào cột: tiêm mẫu thủ cơng tiêm mẫu tự động (Autosamper – có khơng có phận hóa – headspace) 1.4 Cột phân tích Có loại cột: cột nhồi cột mao quản − Cột nhồi (packed column): pha tĩnh nhồi vào cột, cột có đường kính 24mm chiều dài 2-3m 40 − Cột mao quản (capillary): pha tĩnh phủ mặt (bề dày 0.2-0.5m), cột có đường kính 0.1-0.5mm chiều dài 30-100m 1.5 Đầu dò Đầu dò dùng phát tín hiệu để định tính định lượng chất cần phân tích Có nhiều loại đầu dò khác tùy theo mục đích phân tích đầu dò ion hóa lửa (FID – Flame Ioniation Detector), đầu dò dẫn nhiệt (TCD – Thermal Conductivity Detector), đầu dò cộng kết điện tử (ECD – Electron capture Detector), đầu dò quang hóa lửa (FPD – Flame Photometric Detector), đầu dò NPD (NPD – Nitrogen Phospho Detector), đầu dò khối phổ (MS – Mass Spectrometry) 1.6 Bộ phận khuếch đại tín hiệu đầu dò phát 1.7 In liệu Sau phân tích xong, liệu in qua máy in kết nối với máy tính có cài phần mềm điều khiển Các bước vận hành 2.1 Mở máy: Lần lượt sau: − − Mở valve khí: N2, H2 Mở khóa máy nén khí, khóa valve xả khí thừa (bên máy nén) Sau cắm − điện cho máy nén Mở máy GC Claurus 500, máy tự kiểm tra bên trong, sau kiểm tra, hình xuất hiện: Login Language 41 Chọn “Login” để vào hình thiết bị Mở máy vi tính, click vào biểu tượng Total Chrom Navigator Desktop Xuất giao diện 2.1 Thao tác máy GC: Từ hình chính, cài đặt thơng số sau: − − Vào PSSI: để cài • Nhiệt độ cho Injector: thường chọn 150 - 200 • Carrier Gas (Nitrogen): thường chọn 2ml/min • Split (Ratio): thường chọn 25:1 Vào oven: để cài chương trình nhiệt độ cho buồng đốt: thường dao động khoảng 40 - 220 Vào A-FID: để cài Nhiệt độ cho detector FID: thường chọn 200-200 Gas flow (ml/min): bao gồm Air Hydrogen, tiến hành sau: Vào Tool\Configuration\A-FID\ • • − Air: 450m/min H2: 45.0ml/min Chọn OK\Close\ − Khi nhiệt độ FID nằm khoảng 150-220, Khí Air H2 ổn định, tiến hành đánh lửa cách click vào biểu tượng Ignite, khí Air giảm sau tăng lên dần ổn định lại đồng thời nghe tiếng bụp, tín hiệu điện xuất gần 1mV, đánh lửa thành công 2.3 Chuẩn bị mẫu đo: 42 − Yêu cầu chung chất cần lập đường chuẩn chất nội chuẩn: phải có nhiệt độ sơi 250 khơng bị phân hủy, chất có độ tinh khiết cao ( khoảng − 99%), peak phải rõ ràng, thời gian xuất peak không ngắn ( 2.5 phút) Chọn chất nội chuẩn thích hợp cho chất cần lập đường chuẩn (mẫu) sau: Phải tan tốt dung môi dùng để pha mẫu, không phản ứng với mẫu có thời gian xuất peak gần với thời gian xuất peak mẫu đo ( cách khoảng 1- − − phút tốt nhất) Peak xuất dung môi phải cách xa peak mẫu nội chuẩn Pha mẫu với dung mơi thích hợp theo nồng độ 1%, 2%, 3%, 4%, 5% thể tích nồng độ xác định chất nội chuẩn (1% thể tích) Tùy theo độ cao peak xuất mà chọn số lượng mẫu nồng độ thích hợp ( thơng thường chon khoảng nồng độ khác nhau) Chú ý: Nồng độ mẫu pha cần phải xác 2.4 Thao tác phần mềm Total Chrom Navigator: − Chọn phương pháp đo: Chọn biểu tượng Method hình chính, sau chọn Method thích hợp cho mẫu cần đo Có cách để setup điều kiện đo lên máy GC: Chọn trực tiếp Biểu tượng setup hình thực thao tác bước Từ cửa sổ Method Editor, chọn Setup thực thao tác bước kế Trong cửa sổ Setup, thực sau: Setup type: Method Method: Mở đường dẫn đến method cần sử dụng 43 Raw file path: Mở đường dẫn đến vị trí cần lưu file raw Result file path: Mở đường dẫn đến vị trí cần lưu file result Base file name: Nhập tên mẫu cần đo, loại mẫu, kèm theo ngày tháng,… Chọn Vial list: mở sổ Sequence cho phép nhập thông tin mẫu, GEN, số lượng mẫu,…: nhập theo thứ tự mẫu tăng dần theo nồng độ Processing: chọn suppress processing − − Sau nhập xong, chọn OK Chương trình kết nối với máy GC, kết nối thành cơng, góc phía trái hình máy GC xuất chữ “External”, không thành công, xuất chữ “Method 5” Chú ý: Cần nhớ xác tên file name nơi chứa mẫu để dễ dàng cho việc Calobration − − Đo mẫu: Sau cài đặt điều kiện đo mẫu, thực inject mẫu sau: Dùng ống tiêm (loại 1l) rút khoảng 0.5l (tùy theo phương pháp nồng độ mẫu), − tránh để có bọt khí sexlamf sai lệch kết đo Đặt kim vào vị trí Inject, sau chọn biểu tượng Run hình máy GC 4.5 Màn hình Run xuất hiện, nhấn START, máy đếm ngược từ 5sec vè 0sec nghe tiếng píp − Khi inject mẫu vào thiết bị, máy ghi nhận kết đếm thời gian bắt đầu hoạt động, chờ khoảng 0.2min rút kim Chú ý: Đối với mẫu cần định lượng, cần rút xác lượng mẫu inject vào máy 44 − Lần lượt đo tất mẫu với lượng mẫu inject điều kiện đo 2.6 Phân tích kết quả: - - - Sau kết thúc thời gian đo máy tự lưu kết vào file raw theo vị trí cài đặt Từ hình Total Chrom Navigator , nhấn nút Batch mở file cần xử lý kết ( theo đường dẫn cài đặt bước 5), click vào biểu tượng Star , sau đóng lại Cửa sổ Reprocess Result xuất với đồ thị mẫu cần xem Máy tự phân tích kết quả, thao tác để sủa kết phân tích Muốn xem kết phân tích vào Display\Peak Report, hình xuất bảng “TEST QUANTITATION REPORT” thể tồn kết tồn peak có đồ thị Nhấn vào biểu tượng “  ” chữ : “RETURN” để quay hình cửa sổ Reprocess Result Sau xử lý lưu lại kết cách vào File\Save: lưu chồng với kết máy phân tích vào File\Save As: lưu với tên Chú ý: cần ghi lại thời gian xuất peak phổ để nhập phần tạo Calibration curve 2.7 Calibration - - Từ sổ Total Chrom Navigator Clarus 500, chọn biểu tượng Method, sau chọn Method thích hợp cho mẫu cần tạo đường chuẩn, xuất cửa sổ Method Editor Việc tạo Calibration curve thực cửa sổ Trên Menu chọn Components\New Component, hình xuất bảng Components Trên bảng chọn Indentification Trên thẻ cần nhập thông tin sau: Trong khung + + Component Type: click chọn Peak Name: nhập tên chất nội chuẩn 45 Retention time: nhập thời gian xuất Peak Absolute window: 3.00s Relative window: 3% Click chọn “Find tallest peak in widow” Click chọn “This component is an internal satndard” Sau nhập xong thông tin chất nội chuẩn, chọn New component để xác định chất nội chuẩn Sau xác nhận, tên chất nội chuẩn xuất khung bên trái thẻ Indentification Tiếp theo, nhập thông tin cho chất cần xác định đường chuẩn, sau: + + + - Trong khung Component Type: click chọn Peak Name: nhập tên chất nội chuẩn Retention time: nhập thời gian xuất Peak Absolute window: 3.00s Relative window: 3% Click chọn “Find tallest peak in widow” Click chọn “This component is a retention reference” Click chọn “ Internal standard” chọn ten chất nội chuẩn vừa nhập Sau nhập xong thông tin chất cần xác định, chọn New component để xác nhận chất Sau xác nhận, tên chất vừ nhập xuất khung bên trái thẻ Indentification Tiếp tục nhập tương tự cho chất lại Sau nhập xong chọn Apply để xác nhận thông tin vừa nhập Tiếp theo, bảng Component, chọn thẻ Calibration, nhập thông tin cho chất theo thứ tự từ xuống khung xuất tên chất muốn chọn chất thìclick vào tên chất đó, chất nhập thông tin thẻ sau: + Calibration Type: Use Curve + Respone: Area + Curve fit type: st Order + Saling: None + Purity (%): nhập độ tinh khiết thực chất + + + + + - Trong khung cần nhập sau: No Level Amt Area ( 46 + + + Cột Level: nhập ký hiệu theo nồng độ mẫu tăng dần Cột Amt: nhập xác nồng độ mẫu cho chất từ thấp đến cao Cột Area (: sau Calibration mày tự Update số liệu đo vào cột Chú ý: tên thứ tự level phải giông cho tất chất có phương pháp - Sau nhập xong thông tin, kiểm tra lại nhấn OK 2.8 Tiến hành Calibrate: - - Trên Menu cửa sổ Method Editor, chọn Components\Calibrate… Màn hình xuất bảng Manual Calibration, lần luột thực theo trình tự level từ level đến level cuối tương ứng với level(*) Ứng với level ta thực theo bước sau: - Level: chọn theo thứ tự từ xuống tương ứng với level (*) nồng độ bảng - Type: chọn Replace - Selected File: click vào biểu tượng  để mở đường dẫn đến file kết mẫu đo bước bước Chọn filename tương ứng với nồng độ mẫu level(*) để thu kết Click Add để xác nhậ liệu filename với level chọn Lần lượt thực hết level setup tron bảng level(*) Sau nhập xong tất level, click OK Máy tự động lấy số liệu từ file tương ứng để lập đường cong chuẩn Chú ý: phải thực thứ tự nồng độ mẫu tăng dần level 2.9 Xem kết sau Calibrated: - Khi hình cửa sổ Method Editor chia làm ba khu vực, sau: 47 - Bên trái hình danh sách tên tất chất có phương pháp đo (bao gồm chất nội chuẩn) - Bên phải hình đường cong chuẩn cho chất tương ứng danh sách - Phương trình đường chuẩn sai số chuẩn hiển thị bên đường cong chuẩn - Giữa hình tương ứng thông tin mẫu - Muốn xem đường cong chuẩn chất click vào tên chất (trong list bên trái hình) đường cong chuẩn thơng tin chất hiển thị tương ứng hình 2.10 Lưu phương pháp với đường cong chuẩn vừa tạo: - Vào File\Save As - Xuất bảng Docmentation để nhập thông tin cần thiết Chọn OK - Nhập tên file cho phương pháp vừa tạo chọn vị trí lưu thích hợp - Chọn Save để lưu 2.11 In kết để lưu trữ: - Muốn xem kết trước in vào File\Print Review report - Muốn thay đổi mẫu báo cáo in vào File\New Report Format…, sau chọn mẫu báo cáo muốn in - Muốn in kết phân tích vào File\Print Chú ý: sau lần đo cần in để lưu trữ 2.12 Tắt máy - Cần lấy lại thao tác máy GC để thực việc tắt máy, sau: - Trên hình Total Chrom Navigator, vào Run Release Control - Trên máy GC vào Tools\Release\OK 48 - Khi góc trái hình GC xuất chữ “Method 5” thay “External” - Sau tiến hành tắt thơng số sau: + Vào PSSI: để tăt Nhiệt độ cho Injector: Heater off + Vào Oven: cài oven nhiệt độ 200oC khoảng 10 phút, sau để oven trở nhiệt độ phòng + Vào A-FID: để tắt • Nhiệt độ cho detector FID: Heater off • Gas flow (ml/min): bao gồm Air Hydrogen, tiến hành sau: • - Vào Tools\Configuration\A-FID\ + Air: ml/min + H2: 0.0 ml/min Chọn OK\Close\ Chờ nhiệt độ FID Injector xuống 100oC, tiến hành tắt máy sau: - Vào Tools\Logout - Tắt công tắt máy GC - Khố van khí Hydrogen, Nitrogen xả khí Air pressure - Tắt chương trình Total Chrom Navigator Shut down máy vi tính Chú ý: Cần kiếm tra áp suất bình khí để thay kịp thời Sau tắt máy, cần vệ sinh thiết bị Các bước tiến hành - Yêu câu nồng độ cuối 5l/ml methanol ethanol l/ml n-buthanol, pha bình định mức với hỗn hợp methanol nbuthanol ethanol, nồng độ thấp hao hụt bay sử dụng điểm methanol 50l/ml n-buthanol 10l/ml để định tính, mục đích làm quen thao tác cách pha mẫu GC - Bắt đầu từ dung dịch methanol 50000l/l n-buthanol 10000l/l: - Cho khoảng 30ml ethanol vào bình định mức 100ml, sau hút lần lược 5ml methanol 1ml n-buthanol cho vào bình, tiếp tục định mức đến vạch đậy nút kín, lắc thật đều, thu dung dịch (1) - Sau pha lỗng xuống 500l/l n-buthanol 100l/l: - 49 - - - Cho khoảng 30ml ethanol vào bình định mức 100ml, sau hút xác 1mL dung dịch (1) cho vào bình , tiếp tục định mức đến vạch đậy nút kín, lắc thật thu dung dịch (2) Sau pha lỗng xuống 50l/l n-buthanol 10l/l: Hút xác 1mL dung dịch (2) cho vào bình định mức 10ml có chứa sẵn khoảng 3ml ethanol, sau định mức đến vạch, đậy nút kín, lắc đều, thu dụng dịch (3) Điểm cuối có nồng độ methanol 5l/l n-buthanol 1l/l: Hút xác 1mL dung dịch (3) cho vào bình định mức 10ml có chứa sẵn khoảng 3ml ethanol, sau định mức đến vạch, đậy nút kín, lắc đều, thu dụng dịch (4) Kết thảo luận tR met 2,2 tR but tR et W met 0,4 W but 0,2 W et 0,6 Me-et: Rs = Et-but: Rs = Câu hỏi tập củng cố: 50 Mơ tả phận GC Hệ thống cung cấp khí mang Hệ thống tiêm mẫu Cột sắc ký Đầu dò Bộ phận xử lý liệu In liệu So sánh ưu nhược điểm cột nhồi cột mao quản  Cột mao quản Ưu điểm Đa số phép phân tích sắc kí khí sử dụng cột mao quản dài từ 15 đến 100m đường kính nhỏ từ 0.10 đến 0.53 mm Các cột chế tạo từ thủy tinh oxit tinh khiết nấu chảy có mức độ liên kết ngang cao nhiều so với thủy tinh thường nên bền chịu nhiệt độ cao đến 350oC Lực căng cao ống thủy tinh cho phép chế tạo cột có thành mỏng dễ uốn Các cột mao quản mở có lớp phim mỏng tráng thành ống cung cấp độ phân giải cao hơn, thời gian phân tích ngắn độ nhạy cao cột nhồi chúng có dung lượng thấp cho mẫu Cột mao quản mở hẹp cung cấp độ phân giải cao cột mao quản mở rộng chúng đòi hỏi áp suất cao để hoạt động có dung lượng cho mẫu nhỏ Nhược điểm Lớp phim mỏng lỏng pha tĩnh dày khoảng từ 0.1 đến µm bề mặt bên Nếu giảm độ dày lớp phim làm tăng độ phân giải, giảm thời gian lưu giảm dung lượng cho mẫu  Cột nhồi Ưu điểm Cột thường làm thép không rỉ, nicken, thủy tinh với đường kính khoảng từ đến mm chiều dài khoảng từ đến 5m Cột nhồi chứa hạt chất mang rắn phủ lớp pha tĩnh lỏng thân hạt rắn pha tĩnh Chất mang rắn thường diatomite silan hóa để giảm liên kết hydro với chất phân cực 51 Kích thước hạt đồng làm giảm chiều cao cột tăng độ phân giả Cỡ hạt nhỏ làm giảm thời gian cân hòa tan nhờ làm cải thiện hiệu cột Tuy nhiên, kích thước hạt nhỏ không gian trống hạt áp suất để ép pha động qua cột phải cao.Kích thước hạt biểu diễn theo micromet, tức cở lưới mà hạt qua bị giữ lại sang Ví dụ hạt cở 80/100 mesh qua cở sàng 80 mesh (170µm) khơng qua cở 100 mesh (150 µm).Yêu cầu chất mang rắn không tham gia vào tách có khả giữ pha tĩnh ( khơng 10 %) Nhược điểm Cột nhồi thường sử dụng với máy sắc ký hệ cũ máy dành cho mục đích đặc biệt Hiệu thấp số đĩa lý thuyết thường nhỏhơn 8000 Nhưng tăng chiều dài cột dài gây áp suất đầu cột q lớn Vì mà cột khơng thể dài dẫn đến số đĩa lý thuyết nhỏ Vai trò nhiệt độ phân tích sắc ký khí ? Nhiệt độ sử dụng để cung cấp cho trình phân tách chất, GC người ta thường Sep up nhiệt độ lớn nhiệt độ chất cao chất cần phân tách, nhiệt độ cung cấp liên tục tăng dần trình phân tách, dãy chất cần phân tách, chất đạt đến điểm sơi hóa hơi, rời khỏi pha tính, đến đầu dò đầu dò đưa tính hiệu Nhiệt độ cột q cao dẫn đến thời gian lưu giữ ngắn mức phân tách tất thành phần chủ yếu nằm pha khí Tuy nhiên, để phân tách xảy thành phần cần có khả tương tác với pha tĩnh Nếu hợp chất không tương tác với pha tĩnh, thời gian lưu giảm Đồng thời, chất lượng phân tách bị suy giảm, khác biệt thời gian lưu giữ khơng rõ rệt Sự phân tách tốt thường quan sát cho 52 gradient nhiệt độ, khác biệt phân cực điểm sôi sử dụng 53 ... nhấn Next Trong New Project Wizard – Option chọn Photo Diode Array, sau nhấn Next để tiếp tục Trong New Project Wizard – Access Control chọn thơng tin phù hợp, sau nhấn Next để tiếp tục Trong New... phải hình đường cong chuẩn cho chất tương ứng danh sách - Phương trình đường chuẩn sai số chuẩn hiển thị bên đường cong chuẩn - Giữa hình tương ứng thơng tin mẫu - Muốn xem đường cong chuẩn chất... đường cong chuẩn chất click vào tên chất (trong list bên trái hình) đường cong chuẩn thơng tin chất hiển thị tương ứng hình 2.10 Lưu phương pháp với đường cong chuẩn vừa tạo: - Vào FileSave As