thi nhập môn cnsh dai học cần thơ

Sắc kí trao đổi ion: sử dụng vật liệu làm cột hạt mang nhóm chức tích điện âm dương hồi lưu ( elute dung ly) sử dụng dd muối loãng chảy qua cột sau đó( muối làm trung hòa vùng mang điện tích nên cho phép phân tử protein giải phóng khỏi cột) Sắc kí lọc gel: loại protein hình dạng kích thước Các pt pro nhỏ có nhiều khả thâm nhập vào tất lổ.vì time chạy qua cột dài time hồi lưu muộn Nested PCR: PCR có gđ, gđ đầu PCR dùng 1cặp mồi ngồi( PCR vòng ngồi) dùng để khuếch đại đoạn DNA chứa trình tự đặc hiệu muốn tìm Sau dùng sản phẩm PCR vòng ngồi làm khn cho vào ống PCR có cặp mồi trong( gọi PCR vòng trong) để khuếch đại trình tự đặc hiệu muốn tìm Ưu điểm:+ tăng độ nhạy PCR mồi cho trình tự muốn tìm có độ nhạy thấp Nhược điểm:+ nguy ngoại nhiễm cao ( phải mở tube PCR vòng sản phẩm PCR vòng ngồi vào ) Real Time PCR TaqManProbe: đoan nu có trình tự bổ sung với đoạn nằm đoạn mồi Tm đoạn dò ln cao đoạn mồi,vì theo chu kì nhiệt đoạn probe gắn trước đoạn mồi Sp PCR có chiều dài 150 bp Đoạn dò gắn màu Reporyer Quencher đầu.Khi Reporter gần quencher, quencher ức chế phát quang màu Tamra Ở chu kì, đoạn dò gắn vào vị trí đoạn mồi trước, sau đoạn mồi gắn vào Reporter phát quang đoạn dò bị đánh bật lên gãy làm 2, tách quencher reporter, làm reporter phát quang Số lượng màu phát quang tăng theo sản phẩm pcr sinh Ưu điểm: ko cần điện di geo agarose, xác phát nhanh vsv gây bệnh Khuyết điểm: tổng hợp đoạn dò khác cần trình tự khác Syber green: phát màu huỳnh quang bám vào sợi DNA đơi lượng sản phẩm sinh nhiều màu cao Tạo sợi DNA đôi ngắn 20-40 bp , phải tính tốn DNA vừa đủ cho đoạn mồi ko tự bắt cặp với Ưu điểm: rẻ Taq Man Probe, ko cần đoạn dò,giảm cơng sức,đc sd theo dõi khuếch đại mạch đôi Khuyết điểm: đắt tiền PCR thường, ko biết đc kích thước sp DNA sinh ra, phải chạy điện di, ko chuyên biệt, dễ bị nhiễu sai số dương tính giả lk với sợi Dna đơi nào, kể sợi đơi ko đặc hiệu Hài cốt liệt sĩ: Quan hệ huyết thống: lấy DNA đứa bé Hung thủ: lấy dấu vết dựa vào DNA ti so sánh DNA,có huyết thống giống trường đem khuếch đại DNA thể( dùng DNA 50% cha 50% mẹ dựa vào phổ Lấy mẫu DNA đối họ ngoại) DNA điện di DNA khn 27 loci tượng tình nghi đem khuếch đại ti thể bền so sánh, giống 100% nhân thủ Vàng gân xanh: lấy mẫu có chịu chứng Đốm trắng tơm: lấy mẫu DNA có nhiễm đốm vàng non trsich DNa từ gân lá, virus WSSVtrong mẫu tôm , ốc ao Lấy gây pứ dd thí nghiệm kit để ao ni tơm có mầm bệnh, mẫu chạy pCR Cuối dùng pp điện di để phát đem kiểm tra cường độ WSSV với kit Dùng vi khuẩn mẫu có muối nhiễm nested PCR sử dụng đoạn mồi P1, p, p3để bênh có dấu hiệu đặc trưng xuất phát WSSV cặp mồi deca 20a2 phổ điện di deca 20s9 để phát gen giáp xác Gradient PCR: công nghệ gradient nhiệt cho PCR truyền thống: block nhiệt có 96 giếng phép cài đặt nhiệt độ khác hàng giếng pứ block nhiệt Giúp tiến hành thử nghiệm nhiều nhiệt độ bắt cặp khác lần chạy máy Sử dụng enzyme taq pol chịu nhiệt nên ko cần thêm vào sau chu kì PCR tự động thay đổi nhiệt độ theo giai đoạn tồn pứ PCR giếng có nhiệt độ thử nghiệm đươc nhiệt độ bắt cặp lần sử dụng warter baths nhiệt độ khác đẻ thay đổi chu kì nhiệt, việc chạy 30-35 chu kì phiền phức dễ sai sót Enzyme giới hạn: +là enzyme có vị trí nhận biết điểm cắt DNA đặc hiệu +enzyme phân hủy lk photphodieste khung DNA mà ko gây tổn hại đến base +lk hh bị cắt enzyme nối lại enzyme nối ligase +có tên enzyme giới hạn enzym đc khám phá từ chủng E.coli hạn chế phát triển thực khuẩn thể +được cho chế ngăn chặn vi khuẩn trước cơng virus,và loại bỏ trình tự virus + Chỉ cắt trình tự lặp đối xứng đọc theo chiều 5-3 DNA gọi trình tự nhận biết.( vị trí enzyme cắt giới hạn nằm ngồi trình tự nhận biết) +có loại enzyme cắt giới hạn Hiểu biết PCR: +là kỉ thuật cho phép nhân đoạn DNA mong muốn thành nhiều + phát minh Kary mullis +PCR chuỗi nhiều chu kì, gồm gđ : biến tính (94-98độ,2-5p), gắn mồi(40-65độ,20s-2p),kéo dài(68-72độ,20s-5p) + Thành phần phản ứng PCR :nước tiệt trùng Buffer: dùng đề tạo mơi trường pH thích hợp 8,3-8,6 Ion Mg 2+ buffer gắn lk dNTP với dNA pol làm tăng khả bám nối mồi Mg2+ cao gây pư dương tính giả ngược lại dNTP ( loại nu tự ATGC), lượng dNTP tối ưu 200cho loại dNTP Việc tăng dNTP ko làm tăng đáng kể lượng sản phẩm PCR so với hiệu chỉnh yếu tố khác enzyme DNA Taq pol enzyme xúc tác cho trình lắp ráp nu AtgC vào mạch DNA tổng hợp enzyme DNA Taq pol trích từ vi khuẩn có suối nước nóng Themus aquaticus chịu nhiệt độ cao, có khả giải vấn đề enzyme bị biến tính sau chu kì Người ta ko dùng enzyme trích từ Thermus aquaticus mà dùng DNA tái tổ hợp gen vào E.Coli mang enzyme Taq pol Mồi( yêú tố quan trọng nhât pư PCR, mồi chọn phải có tính chun biệt, gồm mồi xi , mồi ngược) mồi đc chọn cần đặc trưng cho trình tự DnA cần khuếch đại ko trùng với trình tự lặp lại DNA ... nhât pư PCR, mồi chọn phải có tính chun biệt, gồm mồi xi , mồi ngược) mồi đc chọn cần đặc trưng cho trình tự DnA cần khuếch đại ko trùng với trình tự lặp lại DNA ... hành thử nghiệm nhiều nhiệt độ bắt cặp khác lần chạy máy Sử dụng enzyme taq pol chịu nhiệt nên ko cần thêm vào sau chu kì PCR tự động thay đổi nhiệt độ theo giai đoạn toàn pứ PCR giếng có nhiệt