Nghiên cứu phát triển phương pháp chemometric để xác định đồng thời các chất có phổ hấp thụ phân tử xen phủ nhau và áp dụng trong phân tích dutom tat LA trang (tieng viet)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP CHEMOMETRIC ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CÁC CHẤT CÓ PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ XEN PHỦ NHAU VÀ ÁP DỤNG TRONG PHÂN TÍCH DƯỢC PHẨM TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP CHEMOMETRIC ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CÁC CHẤT CÓ PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ XEN PHỦ NHAU VÀ ÁP DỤNG TRONG PHÂN TÍCH DƯỢC PHẨM CHUN NGÀNH: HĨA PHÂN TÍCH MÃ SỐ: 62 44 01 18 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Năm 2018 MỞ ĐẦU Thuật ngữ chemometric đưa vào năm 1972 Svante Wold (người Thụy Điển) Bruce R Kowalski (người Mỹ) Sau đời Hiệp hội Chemometric vào năm 1974 đưa định nghĩa ngành chemometric, việc ứng dụng phương pháp tốn học, thống kê, đồ họa,… để quy hoạch thực nghiệm, tối ưu hóa thơng tin hóa học trích từ tập số liệu phân tích đưa tối đa thơng tin hữu ích từ tập số liệu ban đầu Chemometric ứng dụng nhiều lĩnh vực hóa học mơi trường, hóa học hữu cơ, hóa sinh, hóa học lý thuyết, thống kê hóa học đặc biệt xác lập vị trí quan trọng ngành hóa học phân tích.Hóa học phân tích cơng cụ phục vụ đắc lực lĩnh vực khoa học cơng nghệ, hóa học, sinh học, nông học, y học, thực phẩm…, đặc biệt ngành dược phẩm Các phương pháp chemometric nhà nghiên cứu nước quan tâm nhiều năm qua để phân tích đồng thời hỗn hợp chất đối tượng khác nhau, có dược phẩm Các cơng trình nghiên cứu cho thấy, phương pháp chemometric thường dùng nhiều phương pháp bình phương tối thiểu riêng phần (PLS), phương pháp hồi quy cấu tử (PCR), phương pháp bình phương tối thiểu cổ điển (CLS), phương pháp mạng nơron nhân tạo (ANN), phương pháp phổ đạo hàm, phương pháp lọc Kalman (Kalman filter)… Mỗi phương pháp có ưu điểm hạn chế riêng Phương pháp CLS sử dụng tồn số liệu đo phổ để lập hệ m phương trình n ẩn số (m>n) Phép biến đổi ma trận theo nguyên tắc phương pháp bình phương tối thiểu cho kết mắc sai số thỏa mãn yêu cầu Tuy nhiên số liệu đo phổ có nhiều nhiễu (hay sai số đo phổ) và/hoặc cấu tử có tương tác với tạo hiệu ứng quang học làm thay đổi hệ số hấp thụ cấu tử, phương pháp khơng loại nhiễu, dẫn đến kết phân tích mắc sai số lớn ; Phương pháp ANN có nhược điểm thời gian luyện mạng lâu địi hỏi nhiều thuật toán khác nhau, nên xây dựng mơ hình phân tích, địi hỏi phải thử nhiều mơ hình khác để tìm cấu trúc mạng tối ưu Phương pháp phổ đạo hàm không áp dụng mẫu chứa nhiều cấu tử có phổ hấp thụ quang xen phủ tương tự nhau, khó để lựa chọn bước sóng thích hợp để xác định cấu tử đó, phổ đạo hàm chúng có cực đại hấp thụ trùng Phương pháp lọc Kalman loại bỏ tối đa nhiễu giảm tối đa sai số, hạn chế phương pháp phải lựa chọn giá trị khởi tạo cho lọc, tức phải chọn giá trị ban đầu phù hợp hàm lượng chất phân tích hỗn hợp chúng sai số kèm theo (được thể qua phương sai) Nếu giá trị khởi tạo (nồng độ phương sai) không phù hợp, kết cuối mắc sai số lớn Trên giới có số nghiên cứu áp dụng phương pháp lọc Kalman vào chemometric – trắc quang để xác định đồng thời hỗn hợp chất dược phẩm, song nghiên cứu không đưa cách lựa chọn giá trị khởi tạo phù hợp không đề cập đến giá trị khởi tạo vậy, khó áp dụng cho phịng thí nghiệm phân tích Ở nước ta, Mai Xuân Trường nghiên cứu áp dụng phương pháp lọc Kalman để xác định đồng thời vitamin dược phẩm, nguyên tố đất hiếm…nhưng tác giả không giới thiệu cách chọn giá trị khởi tạo vậy, hạn chế khả áp dụng phương pháp đề xuất vào thực tế Xuất phát từ vấn đề trên, rõ ràng nghiên cứu phát triển phương pháp chemometric – trắc quang kết hợp với sử dụng phương pháp lọc Kalman cần thiết, đặc biệt định lượng đồng thời hỗn hợp chất khó phân tích – hỗn hợp chứa chất có phổ hấp thụ quang xen phủ đối tượng mẫu khác nhau, có mẫu dược phẩm Song, thách thức đặt phải tìm giải pháp phù hợp để lựa chọn giá trị khởi tạo cho lọc Kalman cho đưa kết phân tích xác (độ lặp lại độ tốt) hay mắc sai số chấp nhận được, đồng thời cần xây dựng quy trình phân tích theo phương pháp chemmometric – trắc quang kết hợp với phương pháp lọc Kalman cho áp dụng thuận lợi trong lĩnh vực kiểm nghiệm dược phẩm nước ta Với lí đó, đề tài “Nghiên cứu phát triển phương pháp chemometric để xác định đồng thời chất có phổ hấp thụ phân tử xen phủ áp dụng phân tích dược phẩm” thực nhằm mục đích: i) Xây dựng quy trình phân tích chemometric - trắc quang kết hợp với phương pháp lọc Kalman để phân tích đồng thời hỗn hợp chất có phổ hấp thụ quang xen phủ mẫu dược phẩm; ii) Áp dụng quy trình xây dựng để phân tích đồng thời hỗn hợp chất số loại dược phẩm lưu hành thị trường Việt Nam Bố cục luận án Luận án gồm 184 trang, với 50 bảng 14 hình, đó: - Mục lục, danh mục viết tắt, bảng, hình: 09 trang - Phần mở đầu: 04 trang - Chương 1: Tổng quan 43 trang - Chương 2: Nội dung phương pháp nghiên cứu 16 trang - Chương 3: Kết thảo luận 67 trang - Kết luận: 02 trang - Danh mục cơng trình cơng bố kết nghiên cứu: 01 trang Tài liệu tham khảo: 15 trang, với 127 tài liệu tham khảo NỘI DUNG LUẬN ÁN CHƯƠNG TỔNG QUAN - Định luật Bughe-Lambe-Bia tính chất cộng tính độ hấp thụ quang + Định luật Bughe – Lambe - Bia + Tính chất cộng tính độ hấp thụ quang - Một số phương pháp phân tích quang phổ UV-VIS kết hợp với chemometric xác định đồng thời cấu tử có phổ hấp thụ xen phủ + Phương pháp Vierordt + Phương pháp phổ đạo hàm + Phương pháp phổ tồn phần (Phương pháp bình phương tối thiểu hệ đa biến) + Phương pháp bình phương tối thiểu phần + Phương pháp bình phương tối thiểu phần + Phương pháp hồi quy cấu tử + Phương pháp mạng nơron nhân tạo + Phương pháp lọc Kalman - Tổng quan dược phẩm đa thành phần hoạt chất nghiên cứu + Sơ lược phát triển dược phẩm đa thành phần + Tổng quan telmisartan (TEL), hydrochlorothiazide (HYD) + Tổng quan paracetamol (PAR) caffeine (CAF) + Tổng quan paracetamol (PAR) ibuprofen (IB) +Tổng quan amlodipine besylat (AML), hydroclorothiazid (HYD), valsartan (VAL) CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Nghiên cứu nhằm tìm giải pháp phù hợp để lựa chọn giá trị khởi tạo (giá trị nồng độ phương sai ban đầu) cho lọc Kalman để áp dụng phương pháp chemometric – trắc quang xác định đồng thời hỗn hợp chất có phổ hấp thụ quang xen phủ (hỗn hợp chứa chất hỗn hợp chứa chất) Nghiên cứu xây dựng chương trình máy tính theo thuật tốn lọc Kalman phần mềm Microsoft-Excel 2016 với ngơn ngữ lập trình Visual Basic for Applications, cho phép tính tốn nhanh nồng độ cấu tử có phổ hấp thụ quang phân tử xen phủ hệ nghiên cứu (chứa chất đồng thời) Kiểm định độ tin cậy phương pháp phân tích – Phương pháp chemometric-trắc quang sử dụng thuật toán lọc Kalman: So sánh phương pháp phân tích với phương pháp chemometric-trắc quang khác (phương pháp bình phương tối thiểu dùng phổ toàn phần phương pháp phổ đạo hàm) phân tích mẫu chuẩn phịng thí nghiệm (chứa chất phân tích) Xây dựng quy trình phân tích theo phương pháp chemometric-trắc quang sử dụng thuật toán lọc Kalman (tính tốn chương trình phần mềm xây dựng được) Áp dụng quy trình phân tích xây dựng vào thực tế phân tích mẫu dược phẩm đa thành phần (chứa thành phần) lưu hành thị trường Việt Nam 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp lọc Kalman chương trình tính i) Ghi phổ dung dịch đơn chất phân tích (dung dịch chuẩn phịng thí nghiệm) dung dịch hỗn hợp chất phân tích, thu liệu phổ (độ hấp thụ quang k bước sóng lựa chọn) dạng file có txt (số bước sóng lựa chọn tùy thuộc vào đặc điểm cấu tử hệ nghiên cứu); ii) Nhập file liệu phổ đơn chất hỗn hợp chất vào chương trình phần mềm máy tính (lập trình phần mềm Microsoft-Excel 2016) để tính giá trị ε (hệ số hấp thụ phân tử) đơn chất; iii) Chạy lọc Kalman: - Đưa giá trị khởi tạo ban đầu, gồm: ước lượng trạng thái nồng độ Cest(0) hiệp phương sai sai số Pest(0) (nội dung nghiên cứu (1) đưa giá trị khởi tạo ban đầu); - Ngoại suy dự báo trạng thái nồng độ: C pri( k ) = Cest ( k −1) (2.1) - Ngoại suy hiệp phương sai sai số: Ppri( k ) = Pest ( k −1) (2.2) - Tính tốn Lợi Kalman: ( K(k ) = Ppri(k )εT (k ) ε(k ) Ppri(k)εT (k ) + R( k ) −1 ) (2.3) - Cập nhật ước lượng trạng thái nồng độ: ( Cest (k ) = C pri(k ) + K(k ) A(k ) − ε(k )C pri(k ) ) (2.4) - Cập nhật hiệp phương sai sai số: Pest ( k ) =  INV − ε( k ) K ( k )  Ppri ( k )   (2.5) Các bước tính tốn thực từ bước sóng thứ đến bước sóng cuối Cuối cùng, chương trình tính cho kết gồm: Nồng độ cấu tử hệ hiệp phương sai sai số Hiệp phương sai thường bé bước sóng cuối 2.2.2 Phương pháp bình phương tối thiểu sử dụng phần mềm simulan (BPTT) Bước Chuẩn bị dung dịch chuẩn riêng cấu tử hỗn hợp chúng Bước 2: Ghi phổ hấp thụ quang dung dịch chuẩn để tính ma trận hệ số hấp thụ cấu tử: ε= (εij )mxn Bước 3: Ghi phổ hấp thụ quang (A) dung dịch hỗn hợp, nhập ma trận: A = (Ai1)mx1 Bước 4: Giải hệ m phương trình n ẩn số: A= ε C để tìm nồng độ C 2.2.3 Phương pháp phổ đạo hàm (PĐH) Bước Chuẩn bị dung dịch chuẩn riêng cấu tử hỗn hợp chúng Bước 2: Ghi phổ hấp thụ quang phổ đạo hàm, tìm bước sóng đo thích hợp mà giá trị phổ đạo hàm chất cần phân tích khác cực đại, giá trị phổ đạo hàm chất Bước 3: Sau xác định bước sóng đo bậc đạo hàm định, tiến hành định lượng chất theo phương pháp đường chuẩn thêm chuẩn 2.2.4 Phương pháp xây dựng chương trình máy tính Phương pháp trắc quang – chemometric dùng phổ tồn phần kết hợp thuật toán lọc Kalman viết phần mềm Microsoft-Excel với ngơn ngữ lập trình Visual basic for Applications (VBA) 2.2.6 Phương pháp xử lý số liệu Tính tốn đại lượng thống kê (trung bình số học, độ lệch chuẩn, RSD); so sánh hai độ lặp lại (hay hai phương sai), dùng kiểm định F (F-test); So sánh hai giá trị trung bình, dùng kiểm định t (t-test); So sánh hai phương pháp, dùng kiểm định t theo cặp (paired-t-test) CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 LỰA CHỌN GIÁ TRỊ KHỞI TẠO BAN ĐẦU 3.1.1 Lựa chọn giá trị khởi tạo ngẫu nhiên Theo cách này, chọn giá trị khởi tạo ngẫu nhiên chọn giá trị cho nồng độ Cest(0) phương sai Pest(0) Đối với hỗn hợp chứa chất chất (là hỗn hợp chất chuẩn phịng thí nghiệm), nghiên cứu lựa chọn ngẫu nhiên giá trị khởi tạo ban đầu chất nồng độ Cest(0) = 0,3 µg/mL phương sai Pest(0) = Bảng 3.1 Kết xác định nồng độ TEL HYD hỗn hợp theo phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo ngẫu nhiên(*) Hỗn hợp H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 Co 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 (µg/mL) TEL C (µg/mL) 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 RE (%) -70 -85 -90 -93 -94 -95 -96 -96 -97 Co 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 (µg/mL) HYD C (µg/mL) 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 RE(%) -97 -96 -96 -95 -94 -93 -90 -85 -70 (*) Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định Từ bảng 3.1 cho thấy với tỉ lệ nồng độ khác nhau, nồng độ dung dịch chuẩn nồng độ xác định mắc sai số tương đối RE% lớn (nằm khoảng 69,7 % - 96,7 %) Giá trị nồng độ xác định tất hỗn hợp giá trị nồng độ khởi tạo đưa vào ban đầu (0,3 µg/mL) Bảng 3.2 Kết xác định nồng độ AML, HYD VAL hỗn hợp theo phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo ngẫu nhiên(*) AML Hỗn hợp Co (µg/mL) C (µg/mL) H1 0,250 0,300 H2 0,50 0,300 H3 1,00 0,300 H4 5,00 0,304 RE (%) 20 -40 -70 -94 Co (µg/mL) 0,325 0,65 1,30 5,00 HYD C (µg/mL) 0,307 0,304 0,302 0,299 RE (%) -6 -53 -77 -94 Co (µg/mL) 4,00 8,00 16,00 5,00 VAL C (µg/mL) 0,301 0,300 0,300 0,299 RE (%) -93 -97 -98 -94 (*) Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định Từ bảng 3.2 cho thấy với tỉ lệ nồng độ khác nhau, nồng độ dung dịch chuẩn nồng độ xác định mắc sai số RE% lớn (nằm khoảng -5,5 % - 98,1 %) Giá trị RE % bé (-5,5 %) ứng với nồng độ chuẩn 0,325 (gần với nồng độ khởi tạo x = 0,3) Nồng độ chuẩn xa giá trị khởi tạo RE % lớn Như vậy, với kết kiểm chứng bảng 3.1 bảng 3.2, nhận thấy phương pháp khởi tạo theo cách chọn giá trị nồng độ phương sai ngẫu nhiên chưa hồn thiện, kết tính tốn cịn mắc sai số tương đối lớn 3.1.2 Lựa chọn giá trị khởi tạo giả định Trong nghiên cứu này, khảo sát cách lựa chọn giá trị khởi tạo giả định khác so với nghiên cứu trước (đối với hệ chất): - Phương án 1: Giải hệ (hoặc 3) phương trình với (hoặc 3) ẩn số nồng độ chất) (hoặc 3) bước sóng gần (phương trình phụ thuộc độ hấp thụ quang nồng độ chất hỗn hợp với hệ số hấp thụ phân tử biết trước, tính tốn từ phổ dung dịch chuẩn đơn cấu tử/hay đơn chất), xác định nồng độ chất hỗn hợp, lấy chúng làm giá trị khởi tạo nồng độ Còn giá trị khởi tạo phương sai lựa chọn ngẫu nhiên, chẳng hạn - Phương án 2: Lựa chọn giá trị nồng độ khởi tạo ngẫu nhiên (nhưng có chủ ý) 0,3 µg/mL (cho chất hỗn hợp chất) Nhưng phương sai, giá trị khởi tạo cho khơng chọn ngẫu nhiên, mà tính tốn theo phương trình Horwitz: Với nồng độ C = 0,3 µg/mL = 3.10-7, tính toán phương sai 0,003 lựa chọn giá trị làm giá trị khởi tạo 3.1.2.1 Đối với hệ hai cấu tử TEL HYD Áp dụng phương pháp Kalman cho liệu phổ đơn chất hỗn hợp chất (trong khoảng bước sóng 220 nm – 340 nm) với cách lựa chọn giá trị khởi tạo giả định (theo phương án phương án 2), thu kết bảng 3.3 3.4 Bảng 3.3 Kết xác định nồng độ TEL HYD hỗn hợp phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo giả định – Phương án 1(*) Hỗn hợp H1 Co (µg/mL) C (µg/mL) RE (%) Co (µg/mL) C (µg/mL) RE (%) TEL HYD H2 H3 H4 1,00 2,00 3,00 0,99 1,99 -0,9 H6 H7 H8 H9 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 2,95 3,88 5,03 6,07 7,18 7,99 9,00 -2 -3 -0,1 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 8,91 7,84 6,86 6,02 5,06 3,95 3,01 1,98 1,03 -1,1 -2,0 0,4 -1,2 0,3 -0,8 -0,6 -2,0 H5 -0,6 1,3 (*)Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định Bảng 3.4 Kết xác định nồng độ TEL HYD hỗn hợp phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo giả định – Phương án 2(*) Hỗn hợp Co (µg/mL) TEL C (µg/mL) RE (%) Co (µg/mL) HYD C (µg/mL) RE (%) H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 0,30 0,30 0,31 0,31 0,32 0,35 0,38 0,42 0,48 -70,0 -84,9 -89,8 -92,3 -93,5 -94,2 -94,6 -94,7 -94,6 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,30 -96,6 -96,2 -95,6 -94,8 -93,7 -92,2 -89,7 -84,7 -69,7 (*)Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định Kết bảng 3.3 3.4 cho thấy: - Theo phương án 1, phương pháp Kalman cho kết tin cậy nồng độ chất hỗn hợp với sai số RE < % (đối với TEL HYD) Tuy vậy, theo phương án này, cách thực phức tạp phụ thuộc vào bước sóng lựa chọn để giải phương trình xác định giá trị nồng độ khởi tạo Mặt khác, áp dụng vào thực tế, ảnh hưởng pha (matrix), phép đo phổ mắc sai số lớn hơn, nên phương án mắc sai số lớn hơn; - Theo phương án 2, phương pháp Kalman cho kết mắc sai số lớn, giá trị phương sai khởi tạo giả định phù hợp so với cách chọn giá trị phương sai ngẫu nhiên (bằng 1) trường hợp trước (mục 3.1.1) - Các kết cho phép nhận xét rằng, nồng độ phương sai, giá trị khởi tạo nồng độ đóng vai trị quan trọng (hay định hơn) đến sai số kết cuối (khi xác định theo phương pháp Kalman) Rõ ràng, cần phải có cách phù hợp để lựa chọn giá trị khởi tạo nồng độ 3.1.2.2 Đối với hệ cấu tử AML, HYD VAL Bảng 3.5 Kết xác định nồng độ AML, HYD VAL hỗn hợp phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo giả định – Phương án 1(*) Kí hiệu H1 H2 H3 H4 Co (µg/mL) 0,250 0,50 1,00 5,00 AML C (µg/mL) 1,731 0,478 0,530 5,032 RE (%) -30,8 -4,5 -47 0,6 Co (µg/mL) 0,325 0,65 1,30 5,00 HYD C (µg/mL) 2,794 0,495 1,610 5,910 RE (%) -14,0 -23,8 23,85 18,2 Co (µg/mL) 4,00 8,00 16,00 5,00 VAL C (µg/mL) 4,796 11,053 29,067 3,949 RE (%) 19,9 38,2 81,7 -21,03 (*)Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định 10 Bảng 3.6 Kết xác định nồng độ AML, HYD VAL hỗn hợp phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo giả định – Phương án 2(*) Hỗn hợp H1 H2 H3 H4 Co (µg/mL) 0,250 0,50 1,00 5,00 AML C (µg/mL) 0,300 0,300 0,282 0,477 RE (%) 20,0 -40,0 -71,8 -90,5 Co (µg/mL) 0,325 0,65 1,30 5,00 HYD C (µg/mL) 0,301 0,304 0,368 0,443 RE (%) -7,4 -53,2 -71,7 -91,1 Co (µg/mL) 4,00 8,00 16,00 5,00 VAL C (µg/mL) 0,319 0,454 0,542 0,289 RE (%) -92,0 -94,3 -96,6 -94,2 (*)Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định Kết bảng 3.5 3.6 cho thấy: - Theo phương án 1, ngoại trừ trường hợp AML hỗn hợp H2 H4 (sai số RE < 4,5 %), trường hợp cịn lại có sai số lớn với RE khoảng 14 % – 82 % Như vậy, khác với hệ cấu tử (nỗng độ chúng mắc sai số với RE < 3%), hệ cấu tử, phương pháp mắc sai số lớn nhiều Rõ ràng, số cấu tử hệ tăng lên, ảnh hưởng qua lại chúng lớn hơn, dẫn đến việc giải hệ phương trình với ẩn số (nồng độ chất hệ) mắc sai số lớn Rõ ràng, phương án áp dụng cho hệ cấu tử Mặt khác, phương án phức tạp, sai số phương pháp phụ thuộc vào bước sóng lựa chọn để thiết lập giải phương trình - Theo phương án 2, tương tự trường hợp hệ cấu tử, việc đưa giá trị khởi tạo cho phương sai tiếp cận với thực tế (do ước lượng từ phương trình Horwitz), song phương pháp mắc sai lớn với RE khoảng 7% – 97 %) Đến đây, thấy rằng, cách lựa chọn giá trị khởi tạo cho nồng độ phương sai – lựa chọn giá trị khởi tạo ngẫu nhiên lựa chọn giá trị khởi tạo giả định – chưa cho kết tốt (hay mắc sai số lớn), trừ giá trị khởi tạo nồng độ chọn ngẫu nhiên, tính tốn phương án 11 (thuộc cách lựa chọn gái trị khởi tạo giả định), gần với giá trị thực nồng độ chất hệ Rõ ràng, cần phải có cách lựa chọn giá trị khởi tạo khác, cho giá trị nồng độ khởi tạo chất hệ gần với giá trị thực tốt Xuất phát từ lí trên, cần phải đề xuất giải pháp lựa chọn giá trị khởi tạo nhằm đáp ứng yêu cầu: - Giá trị nồng độ khởi tạo gần với giá trị thực chất hệ tốt; - Phương sai (hay sai số) nồng độ không nên lựa chọn ngẫu nhiên, mà nên lựa chọn cho phù hợp với hướng dẫn quốc tế xác định nồng độ C bất kỳ, chẳng hạn, dựa vào phương trình Horwitz để ước lượng giá trị phương sai khởi tạo; - Giải pháp khởi tạo đưa phải cho dễ dàng áp dụng vào thực tế phân tích hỗn hợp chất bất kỳ, mà chưa biết trước nồng độ chúng 3.1.3 Lựa chọn giá trị khởi tạo gần - Áp dụng phương pháp bình phương tối thiểu thông thường (viết tắt BPTT) để giải hệ m phương trình với n ẩn số (m số bước sóng lựa chọn để quét phổ hấp thụ quang dung dịch hỗn hợp cấu tử, n số cấu tử hệ), sử dụng phương pháp khử Gauss để đưa hệ phương trình dạng n phương trình với n ẩn số; Các phương trình hệ có dạng bội tuyến tính thỏa mãn tính cộng tính độ hấp thụ quang; Nồng độ cấu tử thu từ việc giải hệ phương trình chọn làm giá trị khởi tạo nồng độ Cest(0); Theo cách này, giá trị nồng độ ước lượng ban đầu tương đối gần với giá trị thực nồng độ cấu tử hệ nghiên cứu, hệ biết trước nồng độ thực (chẳng hạn, dung dịch chuẩn hỗn hợp cấu tử) chưa biết trước nồng độ thực cấu tử hệ (chẳng hạn, mẫu thực tế); - Áp dụng phương trình Horwitz để ước lượng giá trị phương sai ứng với nồng độ C cấu tử hệ chấp nhận giá trị thu giá trị khởi tạo cho phương sai cấu tử Pest(0) Giá trị phương sai Pest(0) ứng với nồng độ Cest(0) cấu tử hệ tính từ phương trình Horwitz sau: 12 - Từ công thức (3.1), S RSDHorwitz (%) = Cest (0) ×100 (3.1) Tính độ lệch chuẩn S = [RSDHorwitz*Cest(0)]/100; Trong đó, RSDHorwitz tính theo cơng thức (3.2), mà Cest(0) biểu diễn phân số 1−0.5lgCest ( 0) RSDHorwitz (%) = (3.2) - Từ S, tính phương sai S2 = Pest(0) 3.1.3.1 Đối với hệ cấu tử TEL HYD Bảng 3.7 Kết xác định nồng độ TEL HYD hỗn hợp phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo gần đúng(*) Hỗn hợp Co (µg/mL) TE C (µg/mL) RE (%) Co (µg/mL) HY C (µg/mL) RE (%) H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 0,99 1,99 2,95 3,88 5,03 6,07 7,18 7,99 9,00 -0,9 -0,6 -2 -3 -0,6 -0,1 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 8,93 8,03 7,05 6,05 5,06 3,95 3,00 1,99 1,03 -0,8 0,4 0,6 0,8 1,3 -1,2 0,7 2,7 (*)Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định Kết cho thấy: Đối với hỗn hợp với tỷ lệ nồng độ (ppm/ppm) TEL/HYD từ 1/9 đến 9/1, phương pháp Kalman cho kết tin cậy với sai số nhỏ, RE ≤ % 3.1.3.2 Đối với hệ cấu tử AML, HYD VAL Bảng 3.8 Kết xác định nồng độ AML, HYD VAL hỗn hợp phương pháp Kalman với cách lựa chọn giá trị khởi tạo gần (*) Hỗn hợp H1 H2 13 H3 H4 Co (µg/mL) 0,250 0,50 1,00 5,00 C (µg/mL) 0,253 0,511 1,016 4,981 RE (%) 1,2 2,2 1,6 0,4 0,325 0,65 1,30 5,00 Co (µg/mL) HYD C (µg/mL) 0,320 0,646 1,290 5,064 RE (%) -1,5 -0,6 -0,8 1,3 4,00 8,00 16,00 5,00 Co (µg/mL) VAL C (µg/mL) 3,99 8,06 16,05 4,821 RE (%) -0,2 0,8 0,3 -3,6 *)Co: Nồng độ chất dung dịch chuẩn hỗn hợp; C: Nồng độ chất xác định AML Các kết cho thấy, phương pháp cho kết tin cậy nồng độ cấu tử hệ với sai số nhỏ, RE ≤ % Như vậy, hệ cấu tử, giải pháp lựa chọn giá trị khởi tạo gần cho kết tin cậy giải pháp lựa chọn giá trị khởi tạo ngẫu nhiên giả định Song, để khẳng định chắn giải pháp lựa chọn giá trị khởi tạo gần lợi phương pháp Kalman (với giải pháp lựa chọn đó), cần có nghiên cứu so sánh phương pháp Kalman với số phương pháp truyền thống khác như: Phương pháp chemometric-trắc quang sử dụng thuật tốn bình phương tối thiểu (viết tắt BPTT), phương pháp phổ đạo hàm (viết tắt PĐH) xác định nồng độ cấu tử hỗn hợp chúng dung dịch chuẩn mẫu thực tế (mẫu dược phẩm) 3.2 CHƯƠNG TRÌNH MÁY TÍNH ĐỂ TÍNH TỐN THEO THUẬT TỐN LỌC KALMAN Tiến trình tính tốn mơ tả hình 3.1: 14 Hình 3.1 Sơ đồ chương trình tính tốn theo thuật tốn lọc Kalman với giải pháp lựa chọn giá trị khởi tạo gần (áp dụng cho hệ cấu tử) Chương trình cho phép in kết nồng độ cấu tử hỗn hợp sai số tương đối RE tương ứng 3.3 KIỂM CHỨNG PHƯƠNG PHÁP KALMAN ĐỐI VỚI HỖN HỢP HAI CẤU TỬ Kiểm chứng phương pháp xác định đồng thời hỗn hợp hai chất gồm Telmisartan (TEL) Hydrochlothiazide (HYD); Paracetamol (PAR) Cafein (CAF); Paracetamol (PAR) Ibuprofen (IB) Dùng phương pháp chemometric (phương pháp Kalman, BPTT phổ đạo hàm) để tính tốn 3.3.1 Phổ hấp thụ quang phổ đạo hàm Kết khảo sát phổ đạo hàm phổ hấp thụ quang hỗn hợp cho thấy: Có thể xác định đồng thời hàm lượng TEL HYD, PAR CAF, PAR IB phương pháp phổ toàn phần phương pháp phổ đạo hàm 3.3.2 Kiểm định phương pháp dung dịch chuẩn phịng thí nghiệm 3.3.2.1 So sánh ba phương pháp chemometric-trắc quang Cả phương pháp – phương pháp Kalman, phương pháp BPTT phương pháp PĐH áp dụng để xác định nồng độ chất (hay cấu tử) dung dịch hỗn hợp chúng Các dung dịch hỗn hợp chuẩn bị từ 15 dung dịch chuẩn phịng thí nghiệm Tiêu chí để đánh giá so sánh kết phương pháp sai số tương đối (RE) Kết khảo sát cho thấy: xác định nồng độ chất, phương pháp lọc Kalman, sai số lớn -3,7 % (khi xác định IB hỗn hợp PAR IB), sai số bé % (khi xác định HYD hỗn hợp TEL HYD); phương pháp BPTT, sai số lớn -3,7 % (khi xác định IB hỗn hợp PAR IB), sai số bé % (khi xác định TEL hỗn hợp TEL HYD); phương pháp quang phổ đạo hàm, sai số lớn 4,0 % (khi xác định IB hỗn hợp PAR IB), sai số bé 0,0 % (khi xác định IB hỗn hợp PAR IB) Các phương pháp cho kết chấp nhận với sai số RE (%) nhỏ có độ tốt 3.3.2.2 Độ lặp lại phương pháp phân tích dung dịch chuẩn phịng thí nghiệm Kết khảo sát cho thấy giá trị RSD tất chất hỗn hợp từ 0,1 đến 2%, nhỏ giá trị ½ RSDH (5,3 – 8,0 %), chứng tỏ phương pháp đạt độ lặp lại tốt 3.4 KIỂM CHỨNG PHƯƠNG PHÁP KHI XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI HỖN HỢP BA CHẤT Vì với hỗn hợp ba chất, để tìm bước sóng phổ đạo hàm chất khác 0, cịn phổ đạo hàm hai chất lại khó Đây nhược điểm phương pháp quang phổ đạo hàm Chính vậy, phần khảo sát phổ tồn phần tính kết theo phương pháp Kalman phương pháp CLS (khảo sát hỗn hợp: Amlodipine (AML), hydroclorothiazid (HYD), valsartan (VAL) 3.4.1 Khảo sát phổ hấp thụ hỗn hợp Kết khảo sát phổ hấp thụ hỗn hợp cho thấy, xác định đồng thời hàm lượng AML, HYD VAL phương pháp trắc quang – chemometric dùng phổ toàn phần 3.4.2 Đánh giá độ tin cậy phương pháp phân tích dung dịch chuẩn phịng thí nghiệm hỗn hợp 3.4.2.1 Sai số phương pháp 16 Kết khảo sát cho thấy với tỉ lệ nồng độ khác nhau, nồng độ dung dịch chuẩn nồng độ xác định mắc sai số RE (%) nhỏ Đối với phương pháp lọc Kalman, sai số bé -3,6%, sai số lớn 2,2%; phương pháp CLS, sai số bé 3,2%, sai số lớn 2,2% Như vậy, phương pháp cho kết chấp nhận với sai số RE (%) nhỏ có độ tốt 3.4.2.2 Đánh giá độ lặp phương pháp phân tích dung dịch chuẩn phịng thí nghiệm Kết cho thấy: Giá trị RSD AML VAL lần đo lặp lại cho mẫu từ H1 đến H4 0,4 % , HYD từ 0,4 % đến 0,5 % < ½ RSDH, chứng tỏ phương pháp đạt độ lặp lại tốt (bảng 3.21) Nồng độ trung bình ba chất AML, HYD VAL mẫu H1, H2 tính theo hai phương pháp (p>0,05) Trong mẫu H3 H4 nồng độ trung bình xác định theo hai phương pháp khác (p tlt Vì kết luận nồng độ trung bình tính từ hai phương pháp khác có ý nghĩa mặt thống kê (với p< 0,05) 17 Bảng 3.9 Kết xác định độ lặp lại phương pháp hỗn hợp AML, HYD VAL Mẫu H1 H2 H3 H4 AML Thơng số CK (µg/mL) RSDK (%) CS (àg/mL) RSDS (%) ẵ RSDH CK (àg/mL) RSDK (%) CS (àg/mL) RSDS (%) ẵ RSDH CK (àg/mL) RSDK (%) CS (àg/mL) RSDS (%) ẵ RSDH CK (àg/mL) RSDK (%) CS (àg/mL) RSDS (%) ẵ RSDH HYD VAL Ln Lần Lần TB Lần Lần Lần TB Lần Lần Lần TB 0,253 0,252 0,254 0,253 0,320 0,320 0,321 0,320 3,990 3,980 4,010 3,993 0,253 0,253 0,254 0,253 0,319 0,319 0,321 0,319 3,993 3,981 4,009 3,994 8,109 8,071 8,107 8,070 16,114 16,053 16,101 16,040 4,844 4,825 4,898 4,878 0,4 0,3 0,4 9,9 0,511 0,510 0,4 9,5 0,514 0,512 0,646 0,645 0,4 0,511 0,510 0,514 1,013 0,512 0,645 1,016 1,290 1,017 1,284 8,043 1,291 16,050 15,994 0,4 1,290 1,284 16,037 15,980 4,987 5,064 5,054 0,4 5,5 5,089 5,069 4,821 4,811 0,4 4,865 0,4 6,3 8,059 0,5 7,9 5,008 4,831 0,646 0,4 5,9 1,296 1,279 0,4 4,841 8,044 0,4 1,021 4,971 8,060 0,4 0,649 1,286 0,4 8,0 4,981 0,647 0,5 8,6 1,020 1,013 0,650 0,644 0,4 1,017 0,4 6,5 0,5 0,4 8,9 1,016 0,4 4,846 5,109 5,099 0,4 5,135 0,4 6,3 5,114 4,873 4,864 0,4 6,3 CK, RSDK: Nồng độ, độ lặp lại tính theo phương pháp Kalman; CS, RSDS: Nồng độ, độ lặp lại tính theo phương pháp Simulan 18 3.6 Áp dụng thực tế 3.6.1 Kiểm soát chất lượng phương pháp phân tích 3.6.1.1 Độ lặp lại Kết khảo sát mẫu thuốc chứa hỗn hợp TEL HYD; PAR CAF; PAR IB; AML, HYD VAL cho thấy độ lặp lại RSD là: từ 0,8 % đến 5,7 %; từ 0,3 % đến 0,9 %; từ 0,2 % đến 1,2 %, từ 2,2 % đến 2,3 % (đều < ½ RSDH) Như quy trình phân tích áp dụng để xác định đồng thời TEL HYD mẫu thuốc cho độ lặp lại tốt 3.6.1.2 Độ Phân tích mẫu thêm chuẩn: - Kết phân tích hỗn hợp cấu tử (hỗn hợp TEL HYD, hỗn hợp PAR CAF, hỗn hợp PAR IB) hỗn hợp cấu tử (AML, HYD VAL) cho thấy: Cả phương pháp Kalman, bình phương tối thiểu, phổ đạo hàm đạt độ tốt với độ thu hồi thỏa mãn yêu cầu: Theo AOAC (Hiệp hội nhà hóa học phân tích Mỹ), phân tích nồng độ cỡ ppm - 10 ppm (ppm ≈ µg/mL), đạt độ thu hồi khoảng 80 - 110 %, đạt yêu cầu Cụ thể: Phương pháp Kalman BPTT đạt độ thu hồi từ 90 % (khi xác định AML hỗn hợp AML, HYD VAL) đến 107 % (khi xác định IB hỗn hợp PAR IB) Phương pháp PĐH đạt độ thu hồi từ 93 % đến 113 % (khi xác định TEL hỗn hợp TEL HYD) Điển kết độ thu hồi AML hỗn hợp AML, HYD VAL thể bảng 3.40 Đối với hỗn hợp hai chất: Tuy độ lặp lại phương pháp Kalman, BPTT, PĐH (đánh giá qua S S2) có khác nhau, chúng đạt độ tốt (đối với PAR IB) so sánh với phương pháp HPLC với p > 0,05 Đối với hỗn hợp ba chất cho thấy: Kết phương pháp Kalman phương pháp BPTT cho kết không sai khác có ý nghĩa thống kê so với phương pháp HPLC (do giá trị ttính nhỏ giá trị ttới hạn với p > 0,30) Tuy vậy, dựa vào giá trị p (mức ý nghĩa thống kê), nhận xét rằng, phương pháp Kalman cho kết gần với kết phương pháp HPLC (p = 0,55 – 0,96) so với phương pháp BPTT (p = 0,38 – 0,66) hay nói cách khác, phương pháp Kalman đạt độ tốt so với phương pháp BPTT (khi so sánh với phương pháp HPLC) 19 Bảng 3.40 Kết xác định độ phương pháp phân tích mẫu thực tế thuốc Exforge (*) AML Mẫu Phương pháp Ct Cx (µg/mL) (µg/mL) HYD Rev (%) Ct (µg/mL) Cx (µg/mL) 0,965 1,168 1,200 94,0 0,30 1,451 1,415 90,0 0,60 1,710 Mẫu B1 0,967 1,171 BPTT 1,202 94,0 0,30 1,457 1,418 90,2 0,60 1,719 0,980 1,186 Kalman 1,214 93,6 0,30 1,470 1,450 94,0 0,60 1,759 Mẫu B2 0,981 1,189 BPTT 1,217 94,4 0,30 1,474 1,454 94,6 0,60 1,762 0,937 1,134 Kalman 1,171 93,6 0,30 1,416 1,397 92,0 0,60 1,698 Mẫu B3 0,939 1,137 BPTT 1,173 93,6 0,30 1,422 1,400 92,2 0,60 1,697 RevTB (%)-Kalman 92,9 94,0 RevTB (%)-BPTT 93,2 94,2 (*) Co: Nồng độ chất mẫu (µg/mL) (theo tỉ lệ AML: HYD: VAL 1,0: 1,25: 16) Kalman 0,25 0,50 0,25 0,50 0,25 0,50 0,25 0,50 0,25 0,50 0,25 0,50 20 VAL Rev (%) 94,3 90,3 95,3 91,3 94,7 95,5 95,0 95,5 95,0 94,5 95,0 93,3 Ct (µg/mL) Cx (µg/mL) 4,0 8,0 4,0 8,0 4,0 8,0 4,0 8,0 4,0 8,0 4,0 8,0 16,997 21,112 24,876 17,086 21,251 25,067 17,249 21,363 25,497 17,340 21,505 25,697 16,506 20,603 24,567 16,589 20,736 24,754 101,8 103,0 Rev (%) 102,9 98,5 104,1 99,8 102,9 103,1 104,2 104,5 102,4 100,8 103,7 102,1 So sánh với phương pháp HPLC: Bảng 3.41 So sánh phương pháp chemometric với phương pháp HPLC xác định hàm lượng AML, HYD VAL thuốc Exforge HCT(*) Chất PT AML HYD VAL (*) Phương pháp phân tích Đại lượng thống kê Kalman BPTT HPLC 9,65/9,80/9,37 9,67/9,81/9,39 9,54/9,41/9,59 xi (mg/viên) TB (mg/viên) 9,61 9,62 9,51 S (mg/viên) 0,22 0,21 0,09 Ftính/ F(0,05;2;2) 5,30/19 5,30/19 Sp 0,16 0,16 ttính/ t(0,05; f) 0,53/4,3 0,63/4,3 P 0,65 0,59 xi (mg/viên) 11,68/11,86/11,34 11,71/11,89/11,37 11,72/11,76/11,41 TB (mg/viên) 11,66 11,66 11,63 S (mg/viên) 0,26 0,26 0,19 Ftính/ F(0,05;2;2) 1,9/19 1,9/19 Sp 0,34 0,34 ttính/ t(0,05; f) -0,06/4,3 0,51/4,3 P 0,96 0,66 xi (mg/viên) 169,97/172,49/ 165,06 170,86/173,40/ 165,89 TB (mg/viên) S (mg/viên) Ftính/ F(0,05;2;2) Sp ttính/ t(0,05; f) P 169,17 3,78 9,32/19 0,10 0,71/4,30 0,55 3,82 9,5/9 0,10 1,11/4,30 0,38 166,35/168,81/ 167,82 167,66 1,24 Kết phân tích lặp lại (i = 1-3); Ftính = phương sai phương pháp Kalman (hoặc BPTT) / phương sai phương pháp HPLC; F(0,05;2;2): Giá trị F tới hạn mức ý nghĩa thống kê 0,05 bậc tự phương sai tử số mẫu số; Sp: Phương sai chung, tính từ phương sai phương pháp phương sai phương pháp (tức Ftính< F(0,05;2;2)); t(0,05;f=4): Giá trị tới hạn t mức ý nghĩa thống kê p=0,05 bậc tự f=4 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu lý thuyết thực nghiệm, đề tài luận án đến kết luận sau: 1) Trên sở khảo sát giải pháp lựa chọn giá trị khởi tạo cho thuật toán lọc Kalman, lần tìm giải pháp - lựa 21 chọn giá trị khởi tạo gần nồng độ (bằng cách tính tốn theo phương pháp bình phương tối thiểu dùng phổ tồn phần) phương sai (tính tốn theo phương trình Horwitz) Giải pháp khởi tạo cho phép áp dụng thuận lợi phương pháp chemmometric-trắc quang sử dụng thuật toán lọc Kalman (phương pháp Kalman) để xác định đồng thời hai ba chất có phổ hấp thụ quang xen phủ hỗn hợp chúng 2) Kết kiểm định phương pháp Kalman ba dung dịch chuẩn hỗn hợp (mỗi dung dịch chứa hai chất) dung dịch chuẩn hỗn hợp chứa ba chất (các chất có phổ hấp thụ quang xen phủ nhau) cho thấy, phép đo độ hấp thụ quang mắc sai số đáng kể (hay nhiễu đo lớn), đặc biệt hỗn hợp chứa ba chất, phương pháp Kalman mắc sai số nhỏ có độ lặp lại tốt so với phương pháp bình phương tối thiểu dùng phổ toàn phần 3) Lần xây dựng quy trình phân tích đồng thời chất có phổ hấp thụ quang xen phủ mẫu dược phẩm (thuốc) đa thành phần chứa hai ba hoạt chất phương pháp Kalman Mặt khác, thiết lập chương trình máy tính sử dụng ngơn ngữ lập trình Visual basic for Applications phần mềm Microsoft – Excel 2016 kèm quy trình phân tích vậy, cho phép tính tốn nhanh thuận lợi áp dụng vào thực tế kiểm nghiệm dược phẩm phịng thí nghiệm nước ta Quy trình xây dựng khơng có thao tác đơn giản hơn, mà cho phép giảm chi phí phân tích so với phương pháp chuẩn phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 4) Độ độ lặp lại quy trình phân tích (hay phương pháp) xây dựng được kiểm tra phân tích mẫu thuốc chứa hoạt chất (các hoạt chất có phổ hấp thụ quang xen phủ nhau): Đối với thuốc chứa hoạt chất, phương pháp đạt độ tốt với độ thu hồi 93 % – 102 % độ lặp lại tốt với RSD < 2,5 % (n = 3); Đối với thuốc chứa hoạt chất, phương pháp đạt độ tốt với độ thu hồi 90 % – 107% độ lặp lại tốt với RSD < 3,5 % (n = 3) So sánh với phương pháp HPLC - phương pháp chuẩn, phương pháp Kalman đạt độ tốt (với p < 0,05) phân tích thuốc chứa thành phần 5) Đã áp dụng quy trình phân tích xây dựng vào thực tế để xác định đồng thời hỗn hợp hoạt chất có phổ hấp thụ quang xen phủ số loại thuốc đa thành phần lưu hành thị trường, gồm nhóm thuốc khác nhau: thuốc điều trị huyết áp, hạ sốt giảm đau, tim mạch Đặc biệt, lần áp dụng 22 phương pháp Kalman xác định đồng thời ba hoạt chất (AML, HYD VAL) thuốc Exforge HTC đạt độ độ lặp lại tốt, không thua phương pháp khác sử dụng Điều đóng góp tích cực vào lĩnh vực kiểm nghiệm dược phẩm nước ta DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA LUẬN ÁN [1] Nguyễn Thị Quỳnh Trang, Trần Thúc Bình, Châu Viết Thạch (2017) Xác định đồng thời Paracetamol Cafein hỗn hợp phương pháp trắc quang kết hợp thuật toán lọc Kalman, Tạp chí phân tích hóa, lý sinh học, T-22, tr.14-21 [2] Nguyen Thi Quynh Trang, Tran Thuc Binh, Vo Thi Kim Truc, Ngo Van Tu (2017) Simultaneous determination of telmiasartan and hydrochlorothiazide in pharamacy by full spectrum spectrophometric method using Kalman filter algorithm, Conference proceeding, The 5th Analytical Vietnam Conference 2017, pp.22-29 [3] Tran Thuc Binh, Nguyen Thi Quynh Trang, Vo Thi Kim Truc, Ngo Van Tu (2017) Simultaneous spectrophotometric determination of telmiasartan and hydrochlorothiazide in pharamaceutical product by least-square method using full spectra, Conference proceeding, The 5th Analytica Vietnam Conference 2017, pp.14-21 [4] Nguyễn Thị Quỳnh Trang, Trần Thúc Bình, Ngơ Văn Tứ (2017) Xác định đồng thời amlodipine, hydrochlorothiazide valsartan dược phẩm phương pháp trắc quang- chemometric dùng phổ tồn phần Tạp chí Khoa học - Khoa học Tự nhiên, Đại học Huế, 126(1D), tr.125-137 [5] Trần Thúc Bình, Nguyễn Thị Quỳnh Trang, Nguyễn Thị Hồng Vân (2017) Xác định đồng thời Paracetamol Ibuprofen dược phẩm phương pháp quang phổ đạo hàm, Tạp chí phân tích hóa, lý sinh học, T-22, tr.8-16 [6] Nguyễn Thị Quỳnh Trang, Trần Thúc Bình, Nguyễn Thị Hồng Vân (2017) Xác định đồng thời paracetamol ibuprofen dược phẩm phương pháp trắc quang phổ tồn phần dùng thuật tốn lọc Kalman Tạp chí Khoa học Công nghệ, Chuyên san Khoa học Tự nhiên, Kỹ thuật Công nghệ, Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế, 11(1), tr.93-104 23 ... 184 trang, với 50 bảng 14 hình, đó: - Mục lục, danh mục viết tắt, bảng, hình: 09 trang - Phần mở đầu: 04 trang - Chương 1: Tổng quan 43 trang - Chương 2: Nội dung phương pháp nghiên cứu 16 trang. .. NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP CHEMOMETRIC ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CÁC CHẤT CÓ PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ XEN PHỦ NHAU VÀ ÁP DỤNG TRONG PHÂN TÍCH DƯỢC PHẨM CHUN NGÀNH: HĨA PHÂN TÍCH... nghiên cứu 16 trang - Chương 3: Kết thảo luận 67 trang - Kết luận: 02 trang - Danh mục cơng trình cơng bố kết nghiên cứu: 01 trang Tài liệu tham khảo: 15 trang, với 127 tài liệu tham khảo NỘI DUNG