Bước đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm linh chi

Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu đồ án hoàn toàn trung thƣc, chƣa đƣợc sử dụng để cơng bố cơng trình khác Các thơng tin, tài liệu trích dẫn luận án đƣợc ghi rõ nguồn gốc Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2015 Sinh viên thực Đồng Thị Ngọc Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi LỜI CẢM ƠN Để có đƣợc đồ án tốt nghiệp nhận đƣợc giúp đỡ lớn từ gia đình, thầy cơ, bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc tơi xin gửi lời cảm ơn đến trƣờng Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh – HUTECH tạo hội cho đƣợc học tập trƣờng, quý thầy cô khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng với tri thức tâm huyết truyền đạt kiến thức quý báu cho thời gian học tập trƣờng Tôi xin gửi lời cảm ơn đến TS Nguyễn Thị Hai cung cấp chủng nấm Trichoderma hazianum T2; cô Đỗ Thị Tuyến cung cấp chất β-glucan enzyme cellulase; Th.S Nguyễn Thị Ngọc Yến cung cấp bào tử nấm Linh chi; Th.S Trần Thị Ngọc Mai cung cấp chế phẩm Viscozyme L Đặc biệt tơi xin cảm ơn TS Nguyễn Hồi Hƣơng, ngƣời trực tiếp tận tình hƣớng dẫn để tơi hồn thành đồ án tốt nghiệp Cùng với đó, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè có động viên to lớn suốt q trình học tập giúp tơi hồn thành chƣơng trình học tập trƣờng cách tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Đồng Thị Ngọc Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ .ix HÌNH ix MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu Mục đích đề tài Mục tiêu đề tài Phƣơng pháp nghiên cứu Kết đạt đƣợc đề tài Hạn chế đề tài Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Nấm Linh chi 1.2 Phân loại 1.2.1 Phân loại theo khoa học 1.2.2 Phân loại theo hình dạng màu sắc 1.3 Đặc điểm sinh học nấm Linh chi 10 1.3.1 Cuống nấm 10 1.3.2 Mũ nấm 10 1.3.3 Thụ tầng 11 1.3.4 Bào tử nấm Linh chi 11 i Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 1.3.5 Chu kỳ sống nấm Linh chi 15 1.4 Điều kiện sinh trƣởng phát triển nấm Linh chi 16 1.4.1 Dinh dƣỡng 16 1.4.2 Nhiệt độ 17 1.4.3 Độ ẩm 17 1.4.4 Khơng khí 17 1.4.5 Ánh sáng 17 1.4.6 Trị số pH 18 1.5 Thành phần dƣợc tính nấm Linh chi 18 1.5.1 Thành phần dƣợc tính tổng quát 18 1.5.2 Triterpenoid 19 1.5.3 Hợp chất saponin 23 1.5.4 Những thành phần khác 24 1.6 Công dụng nấm Linh chi 25 1.6.1 Phòng ngừa ung thƣ 25 1.6.2 Tăng cƣờng khả miễn dịch 25 1.6.3 Khả chống oxy hoá 26 1.6.4 Điều trị bệnh đái tháo đƣờng 26 1.7 Nghiên cứu bào tử nấm Linh chi 27 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 30 2.1 Vật liệu – thiết bị - hóa chất 30 2.1.1 Vật liệu 30 2.1.2 Nơi tiến hành 30 2.1.3 Thời gian thực 30 ii Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 2.1.4 Thiết bị dụng cụ 30 2.2 Hóa chất – Mơi trƣờng sử dụng 31 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 34 2.3.1 Phá vách bào tử lên men khuẩn Lactic 36 2.3.2 Phá vỡ vách bào tử chế phẩm enzyme thƣơng mại 37 2.3.3 Khảo sát phá vách bào tử enzyme nuôi cấy 44 2.3.4 Phá vỡ vách bào tử nấm Linh chi hỗn hợp enzyme cellulase dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 50 2.3.5 Phá vách bào tử nấm Linh chi phƣơng pháp lạnh đông kết hợp sử dụng enzyme cellulase dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 51 2.3.6 Định tính số hoạt chất sinh học dịch trích ly bào tử nấm Linh chi qua xử lý vách 52 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 55 3.1 Khả phá vách bào tử nấm Linh chi dịch lên men khuẩn lactic 55 3.2 Khả phá vách bào tử nấm Linh chi chế phẩm enzyme thƣơng mại 56 3.2.1 Chế phẩm Viscozyme L 56 3.2.2 Enzyme cellulase Novozyme 58 3.3 Enzyme nuôi cấy 61 3.4 Khả phá vách bào tử nấm Linh chi sử dụng hỗn hợp enzyme cellulase dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 66 3.5 Phá vách bào tử nấm Linh chi phƣơng pháp lạnh đông kết hợp sử dụng enzyme cellulase dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum iii Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi T2 69 3.6 Định tính hoạt chất dịch trích ly 70 3.6.1 Định tính triterpenoid – steroid 70 3.6.2 Định tính saponin 72 Chƣơng : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 74 4.1 Kết luận 74 4.2 Kiến nghị 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 iv Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT PDA: Potato Dextrose Agar MRS: Deman, Rogosa and Sharpe MT1: môi trƣờng MT2: môi trƣờng MT3: môi trƣờng EC: C20032 (enzyme cellulase) 10% TH: enzyme chitinase dịch tăng sinh nấm Trichoderma hazianum T2 BT: bào tử VK: vi khuẩn vii Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi DANH MỤC BẢNG STT Bảng 1.1 Nội dung Trang Biến động kích thƣớc bào tử đảm nấm Linh chi chuẩn 11 mẫu vật khác (Lê Xuân Thám, 1996) 1.2 So sánh khả ức chế ung thƣ vú phận 26 trạng thái khác nấm Linh chi (2.5mg/mL 2.1 Đƣờng chuẩn glucose 37 2.2 Xác định hoạt tính Viscozyme 1% nhiệt độ phòng 38 2.3 Khảo sát thời gian xử lý bào tử nấm Linh chi 39 Viscozyme L1% 2.4 Đƣờng chuẩn glucose cho enzyme cellulase 2.5 Xác định nhiệt độ tối ƣu cho hoạt động enzyme 41 40 cellulase 2.6 Đƣờng chuẩn glucosamine 3.1 Phản ứng xác định hoạt tính Viscozyme L 1% nhiệt 55 47 độ phòng 10 3.2 Xác định qua lƣợng đƣờng khử tạo thành sau 55 khoảng thời gian ngâm 11 3.3 Hàm lƣợng glucose (mg/ml) theo thời gian ngâm (h) 55 bào tử nấm Linh Chi 12 3.4 Xác định nhiệt độ tối ƣu cho enzyme Cellulase 10% 13 3.5 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hoạt tính enzyme cellulase 58 57 10% 14 3.6 Xác định nhiệt độ tối ƣu cho enzyme chitinase 64 15 3.7 Hoạt tính trung bình chitinase nhiệt độ 65 viii Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ HÌNH stt Hình Nội dung Trang 1.1 Xích chi - Ganoderma lucidum 1.2 Thanh chi - Ganoderma genus 1.3 Hoàng chi - Laetiporus sulphureus 1.4 Hắc chi - Polyporus melanopus 1.5 Bạch chi - Fomitopsis officinalis 1.6 Tử chi - Ganoderma sinense 1.7 Hình thái giải phẫu thể bào tử đảm nấm hồng chi 12 Ganoderma lucidum 1.8 Các kiểu bào tử đảm đặc thù họ Linh chi 13 Ganodermataceae 1.9 Chu kì sống nấm Linh chi 14 10 1.10 Cấu trúc không gian 29 loại triterpenoids trông bào tử 20 nấm Linh chi (Bingji Ma et al (2011)) 11 1.11 29 triterpenoids bào tử nấm Linh chi (Bingji Ma et 21 al (2011)) 12 3.1 Bào tử nấm Linh chi sau xử lý vách lên men vi 54 khuẩn lactic 3.2 Bào tử nấm Linh chi sau xử lý với Viscozyme L 1% 56 13 3.3 Định tính enzyme chitinase chế phẩm cellulase 10% 58 14 3.4 Bào tử nấm Linh chi sau xử lý cellulase 10% 60 15 3.5 Vòng phân giải chitin dịch tăng sinh MT1 môi 61 trƣờng chitin – agar 16 3.6 Vòng phân giải chitin dịch tăng sinh MT2 61 môi trƣờng chitin – agar 17 3.7 Vòng phân giải chitin dịch tăng sinh MT3 môi 62 trƣờng chitin – agar ix Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 18 3.8 Bào tử nấm Linh chi sau ngâm dich tăng sinh 62 nấm Trichoderma haziaum T2 3, ngày nhiệt độ phòng 19 3.9 Bào tử nấm Linh chi sau xử lý vách hỗn hợp EC 66 TH nhiệt độ phòng 20 3.10 Bào tử nấm Linh chi sau xử lý với hỗn hợp EC, TH, 67 60oC 21 3.11 Lạnh đông bào tử nấm Linh chi kết hợp sử dụng hỗn hợp 68 enzyme EC : TH, nhiệt độ phịng 22 3.12 Định tính triterpenoid – steroid dịch trích ly ethanol 70 96% 23 3.13 Định tính triterpenoid – steroid dịch trích ly 71 diethyether 24 3.14 Định tính saponin 72 SƠ ĐỒ stt Sơ đồ 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 34 2.2 Quy trình phá vách bào tử nấm Linh chi lên men vi 35 Nội dung Trang khuẩn lactic 2.3 Xác định nhiệt tối ƣu cho enzyme cellulase 41 2.4 Xử lý bào tử nấm Linh chi dịch tăng sinh nấm 44 Trichoderma harzianum T2 2.5 Sử dụng kết hợp enzyme Cellulase dịch tăng sinh nấm 49 Trichoderma harzianum T2 2.6 Quy trình phá vách bào tử lạnh đơng bào tử kết hợp 50 chế phẩm enzyme cellulase enzyme chitinase ni cấy 2.7 Quy trình trích ly 51 4.1 Quy trình phá vỡ vách bào tử trích ly hoạt chất sinh học 74 từ bào tử đƣợc phá vách nấm Linh chi x Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Khả phá vách bào tử nấm Linh chi kết hợp sử dụng C20032 10% dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 nhiệt độ phịng Hình 3.9: Bào tử nấm Linh chi sau xử lý vách hỗn hợp EC TH nhiệt độ phòng Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày 67 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Qua kết quan sát dƣới kính hiển vi (vật kính × 100) nhận định nhiệt độ phòng hỗn hợp EC TH với tỷ lệ có khả phá vách bào tử nấm Linh chi sau 3, ngày xử lý vách với tỷ lệ EC : 1TH, EC : TH cho khả phá vách cao so với tỷ lệ lại Khả phá vách bào tử nấm Linh chi sử dụng hỗn hợp chế phẩm C20032 10% dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 60oC Hình 3.10: Bào tử nấm Linh chi sau xử lý với hỗn hợp EC, TH, 60oC Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, 60oC, ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : 1TH, 60oC, ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, 60oC, ngày 68 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, 60oC , ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, 60oC, ngày Bào tử nấm Linh chi sau ngâm EC : TH, 60oC, ngày Sau xử lý vách bào tử nấm Linh chi hỗn hợp enzyme 60oC, bào tử bị phá vỡ tỷ lệ enzyme sau 3, ngày xử lý Quan sát bào tử dƣới kính hiển vi (vật kính ×100), kết nhận đƣợc 60oC, tỷ lệ hỗn hợp enzyme EC: TH cho khả phá bào tử tốt Kết xác định hoạt tính loại C20032 10% chitinase lần lƣợt 60oC 50oC, nên lặp lại thí nghiệm nên thử nghiệm 50oC 55oC để tìm kết tốt Trong đồ án này, thí nghiệm đƣợc tiến hành khoảng nhiệt độ nhiệt độ phịng 60oC, nhìn chung khả phá vỡ bào tử nấm Linh chi với tỷ lệ hỗn hợp enzyme TH : EC hai khoảng nhiệt độ tỷ lệ EC : TH nhiệt độ phịng có khả phá vách bào tử tƣơng đƣơng Tuy nhiên, lƣợng C20032 10% đƣợc cung cấp không nhiều để thuận tiện cho thí nghiệm nên tỷ lệ hỗn hợp EC : TH nhiệt độ phòng đƣợc sử dụng cho thí nghiệm 3.5 Phá vách bào tử nấm Linh chi phƣơng pháp lạnh đông kết hợp sử dụng C20032 10% dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 Hình 3.11: Lạnh đơng bào tử nấm Linh chi: Sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày 69 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Sau ngâm EC : TH, nhiệt độ phòng ngày Với phƣơng pháp lạnh đông bào tử kết hợp sử dụng hỗn hợp enzyme tỷ lệ EC : TH nhiệt độ phòng cho khả phá vách vào tử tốt phƣơng pháp phá vách bào tử đƣợc thực nghiên cứu 3.6 Định tính hoạt chất dịch trích ly 3.6.1 Định tính triterpenoid – steroid Tiến hành thí nghiệm định tính triterpenoid – steroid, kết thí nghiệm thu đƣợc nhƣ sau: Trích ly dung mơi diethylether: Trong dịch trích ly bào tử nấm Linh chi qua xử lý vách bào tử cho thấy diện triterpenoid – steroid, cho dịch trích ly diethyl ether đƣợc bốc tới cặn phản ứng với thuốc thử ống nghiệm 2, kết định tính cho màu cam Trong dịch trích ly bào tử nấm Linh chi chƣa qua xử lý vách bào tử khơng có diện triterpenoid – steroid, cho dịch trích ly diethylether đƣợc bốc tới cặn phản ứng với thuốc thử ống nghiệm 3, kết định tính cho màu vàng 70 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Hình 3.12: Định tính triterpenoid – steroid dịch trích ly diethyether Ống chứa anhydride acetic, chloroform, H2SO4 đậm đặc, không màu Ống mẫu bào tử qua xử lý vách hòa anhydride acetic, chloroform, H2SO4 đậm đặc, sau phản ứng có màu cam Ống mẫu bào tử chƣa qua xử lý vách hòa anhydride acetic, chloroform, H2SO4 đậm đặc, sau phản ứng có màu vàng Trích ly dung mơi ethanol 96%: Trong dịch trích ly bào tử nấm Linh chi qua xử lý vách chƣa qua xử lý vách diện triterpenoid – steroid, cho dịch trích ly ethanol 96% đƣợc bốc tới cặn phản ứng với thuốc thử ống nghiệm 2, 3, kết định tính cho màu vàng 71 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Hình 3.13: Định tính triterpenoid – steroid dịch trích ly ethanol 96% ống chứa anhydride acetic, chloroform, H2SO4 đậm đặc, không màu 2, ống mẫu bào tử chƣa qua xử lý vách hòa anhydride acetic, chloroform, H2SO4 đậm đặc, sau phản ứng có màu vàng 3.6.2 Định tính saponin Tiến hành thí nghiệm định tính saponin, kết thí nghiệm thu đƣợc nhƣ sau: cho vào ống nghiệm (NaOH, pH 13 HCl pH 1) ml dịch trích ly dung mơi diethylether, nhận định dịch trích ly bào tử nấm Linh chi diethylether qua xử lý vách tế bào có diện có saponin triterpenoid , chiều cao cột bọt ống nghiệm NaOH, pH 13 không cao nhiều so với ống nghiệm HCl, pH (ống pH 13 cột bọt cao 2,5 cm, ống pH cột bọt cao 2,0 cm), nhiên, độ bền bọt ống nghiệm (pH pH 13 tƣơng đƣơng sau tƣơng đƣơng 72 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Hình 3.14: Định tính saponin: ống nghiệm pH pH 13 định tính saponin ống nghiệm pH pH 13 sau định tính saponin 73 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Chƣơng : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận - Chế phẩm C20032 10% Novozyme có khả phá vách bào tử nấm Linh chi 60oC, nhiên khả phá vách bào tử loại enzyme thấp - Enzyme chitinase dịch nuôi cấy lỏng lắc nấm Trichoderma hazianum T2 có khả phá vách bào tử nấm Linh chi sau 3, ngày xử lý - Kết hợp enzyme C20032 10% enzyme chitinase nuôi cấy EC : 1TH; EC : TH nhiệt độ phòng EC : TH 60oC có khả phá vách bào tử nấm Linh chi cao - Lạnh đông bào tử trƣớc kết hợp chế phẩm C20032 10% enzyme chitinase nuôi cấy giúp tăng khả phá vách bào tử - Dung mơi diethyether có khả trích ly triterpenoid – steroid bào tử sau phá vỡ - Có diện triterpenoid – steroid, saponin – triterpenoid dịch trích ly - Từ thử nghiệm trên, quy trình tổng quát phá vách bào tử nấm Linh chi trích ly hoạt chất bào tử sau phá vách đƣợc đƣa 74 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Sơ đồ 4.1: Quy trình phá vỡ vách bào tử trích ly hoạt chất sinh học từ bào tử đƣợc phá vách nấm Linh chi Bào tử + 20 ml nƣớc cất Lạnh đông-4oC, 12 Rã đông, nhiệt độ phòng Ly tâm 4000 vòng/ phút, 10 phút Nƣớc Bào tử + (15 ml EC : 15 ml TH) ủ nhiệt độ phòng, ngày Dịch Cặn Ly tâm 4000 vòng/ phút, 10 phút Bào tử Sản phẩm Dung mơi, lắc 30 phút, nhiệt độ phịng Cơ 70oC Lọc Thu dịch lọc 75 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 4.2 Kiến nghị - Tìm phƣơng pháp xác định tỷ lệ bào tử nấm Linh chi bị phá vách - Tìm kiếm enzyme thƣơng mại có khả nâng cao tỷ lệ phá vách bào tử nấm Linh chi - Khảo sát số điều kiện nhiệt độ, pH tối ƣu sử dụng hỗn hợp enzyme cho quy trình phá vách - Khảo sát tỷ lệ, thời gian, nhiệt độ cho dung môi trích ly - Nghiên cứu quy trình trích ly - Định lƣợng triterpenoid – steroid, saponin dịch trích ly 76 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Lân Dũng Công nghệ nuôi trồng nấm Tập 2, NXB Nông nghiệp, 2010 Nguyễn Minh Khang, 2005 Khảo sát sinh trưởng nấm Linh Chi đen (Amauroderma subresinosum, Corner) phát vùng núi Chứa Chan – Việt Nam Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Cơng nghệ Sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Trần Thị Huỳnh Mai Tổng quan quy trình phá vỡ bào tử nấm linh chi bước đầu nghiên cứu điều kiện nảy mầm bào tử Đồ án tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ Sinh học, Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Kim Phi Phụng, Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, 2007 Lê Xuân Thám Nấm Linh Chi nguồn dược liệu quý Việt Nam Nhà xuất Mũi Cà Mau (1996) Nguyễn Thị Sáu (2014) Bài giảng công nghệ trồng chế biến nấm, Trƣờng Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh Tài liệu Tiếng Anh Boh B, et al Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds Biotechnol Annu Rev, 2007 Borchers AT, et al Mushrooms, tumors, and immunity Proc Soc Exp Biol Med, 1999 Báo cáo FDA 1/8/1999 10 Borchers AT, et al Mushrooms, tumors, and immunity Proc Soc Exp Biol Med, 1999 11 Bao X, et al Structural and immunological studies of a major polysaccharide from spores of Ganoderma lucidum (Fr.) Karst Carbohydr Res, 2005 12 Bao XF, et al Structural features of immunologically active polysaccharides from Ganoderma lucidum Phytochemistry, 2002 77 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 13 Bingji Ma, Wei Ren, Yan Zhou, Jinchuan Ma, Yuan Ruan, and Chun-Nan Wen, Triterpenoids from the spores of Ganoderma lucidum N Am J Med Sci 2011 Nov; 3(11): 495–498 14 Chen RY, Yu DQ Studies on the triterpenoid constituents of the spores of Ganoderma Lucidum Karst J Chine Pharm Sci 1993;2(2):91–96 15 Chen RY, Yu DQ Application of 2D NMR techniques in the structure determination of ganosporelactone A and B Acta Pharm Sin 1991;26(6):430– 436 16 Chaiyavat Chaiyasut*, Chakkrapong Kruatama and Sasithorn Sirilun, Breaking the spores of Ganoderma lucidum by fermentation with Lactobacillus plantarum Department of Pharmaceutical Sciences, Faculty of Pharmacy, Chiangmai University, Thailand Accepted 30 September, 2010 17 Chen , Zhong JJ p53 is important for the anti-invasion of ganoderic acid T in human carcinoma cells Phytomedicine, 2010 18 Chen X, et al Monitoring of immune responses to a herbal immuno-modulator in patients with advanced colorectal cancer Int Immunopharmacol (1999) 19 Cao LZ, Lin ZB Regulation on maturation and function of dendritic cells by Ganoderma lucidum polysaccharides Immunol Lett (2002) 20 De-hui Dai, Wei-lian Hu, Guang-rong Huang and Wei Li 2011 Purification and characterization of a novel extracellular chitinase from thermophilic Bacillus sp Hu1 African Journal of Biotechnology Vol 10(13), pp 24762485 21 Heim, Y R Li, Q Chen, Z Lin, D Xia, L Ma, 1992 Chemical studies on immunologically active polysaccharides of Ganoderma lucidum (Leyss Ex Fr.) Karst Chung – Kuo – Chung – Yao – Tsa – Chih 17 (4):266 – 256 (1992) 22 Hikino H, et al Isolation and hypoglycemic activity of ganoderans A and B, glycans of Ganoderma lucidum fruit bodies Planta Med (1985) 23 Hikino H, et al Mechanisms of hypoglycemic activity of ganoderan B: a glycan of Ganoderma lucidum fruit bodies Planta Med (1989) 78 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 24 Hansen, L 1958 On the anatomy of the Danish species of Ganoderma Bot Tidsskrifft 54:333 – 352 (1958) 25 Hou CY, Sun YT, Yan L, et al Studies on the chemical constituents of the spores from Ganoderma Lucidum Acta Bot Sin 1988;30(1):66–70 26 Jungjing MA, Zhengyi FU, Peiyan MA, Yanli SU, Qingjie Z (2007) Breaking and characteristics of Ganoderma lucidum spores by high speed centrifugal shearing pulverizer J W uhan Univ Tech-Mater Sci Ed 22: 617-621 27 Jiang J, et al Ganoderic acids suppress growth and invasive behavior of breast cancer cells by modulating AP-1 and NF-kappaB signaling Int J Mol Med (2008) 28 Jose D Connolly, Rober A Hill Dictionary of terpenoid Volume Chapman & Hall London 1991 29 Lui X J.,1994 Hepatopathy and uterofunctional Bleeding mainly Treated with Ganoderma lucidum Proc 94 Inter Sym On Ganoderma Res., p58-9 Beijing, China, 1994 30 Lee I, et al Selective cholinesterase inhibition by lanostane triterpenes from fruiting bodies of Ganoderma lucidum Bioorg Med Chem Lett (2011) 31 Lin YL, et al An immunomodulatory protein, Ling Zhi-8, induced activation and maturation of human monocyte-derived dendritic cells by the NF-kappaB and MAPK pathways J Leukoc Biol (2009) 32 Mims C W., and F Seabury 1989 Ultrastructure of tube formation and basidiospores development in Ganoderma lucidum Mycologia 81: 754 – 764 (1989) 33 Min BS, Nakamura N, Miyashiro H, et al Triterpenes from the spores of Ganoderma Lucidum and their inhibitory activity against HIV-1 protease Chem Pharm Bull.1998;46(10):1607–1612 34 Min BS, Gao JJ, Nakamura N, et al Triterpenes from the spores of Ganoderma Lucidum and their cytotoxicity against meth-A and LLC tumor cells Chem 79 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Pharm Bull.1998;48(7):1026–1033 35 Mau JL, Lin HC, Chen CC Antioxidant properties of several medicinal mushrooms J Agric Food Chem (2001) 36 Ma J, et al New lanostanoids from the mushroom Ganoderma lucidum J Nat Prod (2002) 37 Perreau J 1973 Contribution aletude des ornaments sporaux chez Ganodermes Rev mycol Paris 37:241 – 252 (1973) 38 Wachtel-Galor S, Tomlinson B, Benzie IF Ganoderma lucidum ("Lingzhi"), a Chinese medicinal mushroom: biomarker responses in a controlled human supplementation study Br J Nutr (2011) 39 Wu Y, Wang D A new class of natural glycopeptides with sugar moietydependent antioxidant activities derived from Ganoderma lucidum fruiting bodies J Proteome Res (2009) 40 Zhao, J.D.,Zhang, X.Q., 1994 Resources and taxonomy of lingzhi Ganoderma in China Proc 94 inter Sym On Ganoderma Res.:44 – 47 Beijing, China, 1994 Tài liệu internet 41 https://lib.lhu.edu.vn/ViewFile/10103 42 Method ME015 Extraction of triterpenoid saponins from plants 866-995-5100 | mwave@milestonesci.com 43 Phytother Res.(2008), DOI: 10.1002/ptr.2707 (Zhang et al.) www.interscience.wiley.com 80 Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi 81 ... nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi đồ án tốt nghiệp: “BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU PHÁ VÁCH BÀO TỬ NẤM LINH CHI? ?? Tình hình nghiên cứu Việc nghiên cứu thành phần hợp chất quý nấm Linh chi đƣợc thực... cơng bố cơng trình nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi trình lên men vi khuẩn Lactobacillus plantarum bào tử nấm Linh chi Bƣớc đầu nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi Mục đích đề tài... có bào tử Để đóng góp phần nhỏ việc nghiên cứu chi? ??t xuất hiệu hoạt chất có bào tử nấm Linh chi tơi có nghiên cứu sơ số phƣơng pháp phá vỡ vách bào tử nấm Linh chi đƣợc thực Bƣớc đầu nghiên cứu