Định danh và khảo sát sự sinh trưởng hệ sợ của nấm linh chi đen

MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề: 1.2 Tình hình nghiên cứu: 1.3 Mục đích nghiên cứu: 1.4 Nhiệm vụ nghiên cứu: 1.5 Phương pháp nghiên cứu: 1.6 Các kết đạt đề tài: 1.7 Kết cấu đồ án tốt nghiệp: CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nấm Linh chi 2.1.1 Khái quát chung [1, 2, 8, 10] 2.1.2 Vị trí phân loại 2.1.3 Đặc điểm hình thái chu trình sống nấm Linh chi đen 2.1.3.1 Đặc điểm hình thái nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum) 2.1.3.2 Các giai đoạn phát triển sợi nấm [3, 13] 2.1.4 Điều kiện sống nấm linh chi 10 2.1.4.1 Các yếu tố vật lý ảnh hưởng đến sinh trưởng hệ sợi nấm 10 2.1.4.2 Các yếu tố hóa học ảnh hưởng đến sinh trưởng hệ sợi nấm 11 i 2.1.5 Các nghiên cứu nấm linh chi đen: 13 2.2 Nguyên liệu trồng nấm 14 2.3 Định danh phương pháp sinh học phân tử 16 2.3.1 Tổng quan phương pháp ly trích DNA 16 2.3.1.1 Nguyên tắc 16 2.3.1.2 Phương pháp ly trích DNA vi sinh vật mơi trường tự nhiên 16 2.3.2 Kỹ thuật PCR ứng dụng q trình phát lồi 18 2.3.2.1 Kỹ thuật PCR 18 2.3.2.2 Gen rDNA 18 2.3.2.3 Ứng dụng PCR trình phát loài vi sinh vật 20 2.3.3 Điện di 21 2.3.3.1 Nguyên tắc 21 2.3.3.2 Các loại gel công dụng loại 22 2.3.4 Xây dựng phát sinh loài 22 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 24 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu: 24 3.1.2 Thiết bị dụng cụ tiến hành 24 3.1.3 Hóa chất: 24 3.2 Nội dung phương pháp bố trí thí nghiệm 26 3.2.1 Sử dụng phương pháp phòng ẩm để định danh hình thái: 26 3.2.2 Sử dụng sinh học phân tử để định danh: 27 ii 3.2.2.1 Tách chiết DNA: 27 3.2.2.2 Chạy phản ứng PCR: 27 3.2.3 Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen môi trường thạch nhiệt độ khác nhau: 29 3.2.4 Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen pH khác nhau: 29 3.2.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ carbon khác lên sinh trưởng nấm Linh chi đen: 29 3.2.6 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nitrogen khác lên sinh trưởng nấm Linh chi đen: 30 3.2.7 Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon khác lên sinh trưởng nấm Linh chi đen: 30 3.2.8 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen khác lên sinh trưởng nấm Linh chi đen: 31 3.2.9 Khảo sát sinh trưởng sợ nấm Linh chi đen môi trường nuôi cấy tổng hợp khác nhau: 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1 Kết quan sát hình thái học nấm sợi: 32 4.1.1 Kết quan sát khuẩn lạc: 32 4.1.2 Kết quan sát sợi nấm 33 4.2 Kết li trích, thu nhận nhân đoạn gen ITS rDNA nấm Linh chi đen 34 4.2.1 Kết ly trích thu nhận gen nấm Linh chi đen: 34 4.2.2 Kết nhân đoạn gen bảo tồn ITS rDNA 34 iii 4.3 Kết so sánh vùng gen bảo tồn ITS rDNA nấm Linh chi đen ngân hàng gen NCBI thiết lập phân loài: 35 4.3.1 Kết Giải trình tự vùng gen ITS rDNA mẫu nấm LC1: 35 4.4 Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen điều kiện nhiệt độ khác nhau: 36 4.5 Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen điều kiện pH khác nhau: 37 4.6 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ carbon khác lên phát triển sợi nấm Linh chi đen: 39 4.7 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nitrogen khác lên phát triển sợi nấm Linh chi đen: 40 4.8 Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon khác lên sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen: 41 4.9 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen khác lên sinh trưởng sợi nấm Linh chi đen: 42 4.10 Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen nuôi loại môi trường khác nhau: 44 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 5.1 Kết luận: 46 5.2 Đề nghị: 47 CHƯƠNG 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC iv v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT o C : Degree Celsius 𝜇m : micromet bp : base pairs ANOVA : Analysis Of Variation ATP : Adenosin Triphosphate BLAST : Basic Local Alignment Tool CTAB : Cetyl – Trimetyl – Amoniumbromide DNA : Deoxyribonucleotide Acid EDTA : Ethylene – Diamine – Tetraacetic – Acid ITS : Internal Transcribed Spacer PCR : Polymerase chain reation P:C:I : Phenol : Chloroform : Isoamyl alchol PDA : Potato Dextrose Agar SDS : Sodium dodecyl sulfate RNA : Ribonucleic acid rDNA : Ribosomal Deoxyribonucleotide Acid TAE : Tris – Acetic – EDTA UV : Ultra violet vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Điều kiện môi trường cần thiết cho phát triển nấm Linh chi 11 Bảng 2.2 Nồng độ số dạng muối khoáng cần cho nấm trồng 13 Bảng 2.3 Hàm lượng chất có mùn cưa 14 Bảng 2.4 Thành phần dinh dưỡng cám 15 Bảng 2.5 Internal transcribed spacer region (ITS region, including the 5.8S gene) 19 vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Thể tự nhiên Amauroderma subresinosum Hình 2.2 Thành phần cấu tạo nấm Amauroderma subresinosum Hình 2.3 Chu trình phát triển nấm Linh chi Hình 2.4 Bảng đồ primer ITS 20 Hình 4.1 Khuẩn lạc mẫu nấm LC1 32 Hình 4.2 Hình thái sợi nấm quan sát tiêu cự X40/0.65 33 Hình 4.3 Hình thái sợi nấm quan sát tiêu cự X100/1.25 33 Hình 4.4 Kết ly trích gen mẫu nấm Linh chi đen 34 Hình 4.5 Kết điện di sản phẩm PCR vùng ITS 35 Hình 4.6 Kết dựng phát sinh loài 36 Hình 4.7 Biểu đồ thể sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi đen nhiệt độ khác 37 Hình 4.8 Biểu đồ thể ảnh hưởng pH đến sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi đen 38 Hình 4.9 Kết sau ngày nuôi cấy hệ sợi nấm linh chi đen pH khác 38 Hình 4.10 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ carbon đến sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi đen 39 Hình 4.11 Kết sau ngày nuôi cấy hệ sợi nấm linh chi đen nồng độ carbon khác 40 Hình 4.12 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ nitrogen lên sinh trưởng nấm linh chi đen 40 Hình 4.13 Kết sau ngày nuôi cấy hệ sợi nấm linh chi đen nồng độ nitrogen khác 41 viii Hình 4.14 Biểu đồ thể ảnh hưởng nguồn carbon khác đến sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi đen 42 Hình 4.15 Kết sau ni cấy nấm linh chi đen môi trường với nguồn carbon khác 42 Hình 4.16 Biểu đồ thể ảnh hưởng nguồn nitrogen đến sinh trưởng nấm linh chi đen 43 Hình 4.17 Kết sau ni cấy hệ sợi nấm linh chi đen môi trường với nguồn nitrogen khác 44 Hình 4.18 Biểu đồ sinh trưởng hệ sợi chủng nấm linh chi đen nuôi loại môi trường khác 44 Hình 4.19 So sánh sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi đen nuôi loại môi trường khác 45 ix CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề: Từ xưa đến nay, nhu cầu chữa trị bệnh để khắc phục bệnh tật, bảo toàn mạng sống trước ngưỡng cửa chết kéo dài tuổi thọ điều thiết yếu lồi người, họ khơng ngừng cố gắng tìm cách để đạt điều Từ kinh nghiệm lưu truyền dân gian, loài người sử dụng nhiều loại thuốc, từ dạng sơ chế đến tinh chế, đặc, trích xuất từ loại thảo dược có sẵn tự nhiên để điều trị bệnh Ngày xu hướng sử dụng thảo dược thiên nhiên để trị bệnh trở nên phổ biến, việc tìm kiếm khả chữa trị từ loại thảo dược tiến hành nhiều nơi giới: Nhật Bản, Trung Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan, ….Trong đó, nấm Linh chi đối tượng nghiên cứu nhiều quốc gia, đặc biệt nước vùng Châu Á, có nhiều tiềm nguồn dược liệu Ở Trung Quốc, nấm Linh chi nghiên cứu nhiều sử dụng thảo dược quý để trị bệnh có tác dụng bổ dưỡng, điều hồ huyết áp, chống lão hóa, kéo dài tuổi thọ,…Tác dụng Linh chi khẳng định xếp vào hàng “thượng dược” trị bách bệnh Những nghiên cứu gần cho thấy Linh chi có khả giải độc chì, điều hòa huyết áp, làm giảm hàm lượng cholesterol máu….[11, 14] Nấm Linh chi đen loại nấm quý, biết đến với tên gọi Hắc chi, sáu loại nấm linh chi quý (lục bảo linh chi) Nấm linh chi đen có nhiều công dụng việc chữa bệnh, nâng cao sức khỏe cho người, ứng dụng rộng rãi y học Xuất phát từ tình hình thực tế trên, đề tài “Định danh khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen” thực hiện, nhằm giúp nâng cao, tối ưu hóa mơi CHƯƠNG 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống, 2003 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh, 2000 Nấm ăn nấm dược liệu - công dụng công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Hà nội Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn Zani Federico, 2002 Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Trần Hùng, 2004 Phương pháp nghiên cứu dược liệu Đại học Y Dược TP.HCM Nguyễn Đức Lượng, 2003 Vi sinh học công nghiệp, tập Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền Nuyễn Ánh Tuyết, 2003 Thí nghiệm cơng nghệ sinh học, tập 2, thí nghiệm vi sinh vật học Nhà xuất Đại học Quốc Gia TPHCM Trần Văn Mão, 2004 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Phước Nhuận, 2001 Giáo trình sinh hố học, phần Nhà xuất Đại học Quốc Gia TPHCM 10 Lê Xuân Thám, 1996 Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng 48 nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr).Karst Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà nội, Việt nam 11 Lê Xuân Thám, 1996 Nấm Linh chi - dược liệu quí việt nam Nhà xuất Mũi Cà Mau 12 Lê Xuân Thám, 2005 Nấm Linh chi vàng - nấm Hoàng chi Báo khoa học phổ thông, số 31/05 (1154) 13 Lê Duy Thắng, 2001 Kỹ thuật nuôi trồng nấm ăn, tập Nhà xuất Nông nghiệp 14 Arichi D.S and Hagashi D.T., 2003 Linh chi nguyên chất bệnh thời (Đoàn Sáng dịch) Nhà xuát Y học, Hà nội, Việt nam 15 Hồ Huỳnh Thùy Dương (2008) Sinh học phân tử Nxb Giáo dục, Tp HCM Tiếng Anh 16 Shufeng Zhou, A clinical Study of a Ganoderma lucidum extract in patients with type II diabetes mellitus Division of Pharmacology and Clinical Pharmacology, Faculty of Medicine and Health Science, Auckland University, Auckland, New Zealand 17 Yihuai Gao, Guoliang Chen, Jin Lan, He Gao and Shufeng Zhou, 2001 Extractoin of Ganoderma polysaccharides at relatively low temperature Froc Int Symposium Ganoderma Sci, Auckland 18 Yihuai Gao, Jin Lan and Zhifang Liu, Extraction and determination of Ganoderma polysaccharides Int Med Complement Med Vol 1, Supplement 1,00-00 49 19 Steyaert R.L, 1972 Species of Ganoderma and related genera mainly of the boyor and leiden herbaria National de Beigique, Burxelle 20 Zhaoji – Ding, 1980 The Ganodermataceae in chine Berlin Shiffigart 21 Zhou, J, Bruns, M.A and Tiedje, JM 1996 DNA recovery from soils of driverse composition 22 Ausubel, F.M.; Brent, R.; KingSton, R.E.; Moore, D.D.; Seidman, J.G.; Smith, J.A.; Struhl, K Current protocols in molecular biology New York: Greene Publishing Association; Wiley-Interscience, 1992 v.1 23 Shufeng Zhou, Yihuai Gao, Gouliang Chen, Xihu Dai and Jingxian Ye A phase I/II study of a Ganoderma lucidum extract in patients with coronary heart disease 24 Chandana Jayasinghe 2008 Favorable Culture Conditions for Mycelial Growth of Korean Wild Strains in Ganoderma lucidum Tài Liệu từ Internet 25 http://www.About Lingzhi.htm 26 http://www activeCompoundsReishi.html 27 http://www Mushroom Information Gano HIV.mht 28 http://www.bfa-ernaehrung.de/Deutsch/Information/pflanzenstoffe/artikel3.pdf 29 http://203.162.44.79/khcn/magazine/Tap7/So6/06.htmđnh5 30.http://sonongnghiep.dongnai.gov.vn/Documents/Ganodermataceae%20%28Repaire d%29c.pdf 50 PHỤ LỤC Phụ lục A: DNA mẫu nấm LC1 sau giải trình tự: Phụ lục B: Một số hình ảnh so sánh vùng gen bảo tồn ITS rDNA nấm Linh chi đen ngân hàng gen NCBI thiết lập phân loài: Phụ lục C: Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen điều kiện nhiệt độ khác nhau: Nhiệt độ Đĩa Trung bình 20oC 25oC 6,15 6,15 5,8 5,85 5,9875 ± 0,19 8,6 8,55 8,6 8,5 8,5625±0,05 30oC 8,8 8,95 8,9 8,95 8,9±0,07 35oC 3,2 2,65 2,85 2,6 2,825±0,27 Kết xử lý ANOVA: ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 95.0531 0.35125 95.4044 Df 12 15 Mean Square F-Ratio 31.6844 1082.46 0.0292708 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups X t_35 2.825 X t_20 5.9875 X t_25 8.5625 X t_30 8.9 Contrast t_20 - t_25 t_20 - t_30 t_20 - t_35 t_25 - t_30 t_25 - t_35 t_30 - t_35 Sig * * * * * * Difference -2.575 -2.9125 3.1625 -0.3375 5.7375 6.075 +/- Limits 0.263587 0.263587 0.263587 0.263587 0.263587 0.263587 P-Value 0.0000 Phụ lục D: Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen điều kiện pH khác pH Đĩa 6,1 9,05 8,6 7,55 2,0 5,9 9,15 8,65 6,3 1,95 6,2 9,05 8,6 6,05 1,85 6,1 9,1 8,7 6,4 1,8 9,0875±0,05 8,6375±0,05 6,575±0,67 1,9±0,09 Trung bình 6,075±0,13 Kết xử lý ANOVA: ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 130.401 1.41875 131.82 Df 15 19 Mean Square F-Ratio 32.6002 344.67 0.0945833 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean pH_8 1.9 pH_4 6.075 pH_7 6.575 pH_6 8.6375 pH_5 9.0875 Contrast pH_4 - pH_5 pH_4 - pH_6 pH_4 - pH_7 pH_4 - pH_8 Sig * * * * Homogeneous Groups X X X X X Difference -3.0125 -2.5625 -0.5 4.175 +/- Limits 0.46352 0.46352 0.46352 0.46352 P-Value 0.0000 pH_5 - pH_6 pH_5 - pH_7 pH_5 - pH_8 pH_6 - pH_7 pH_6 - pH_8 pH_7 - pH_8 * * * * * 0.45 2.5125 7.1875 2.0625 6.7375 4.675 0.46352 0.46352 0.46352 0.46352 0.46352 0.46352 Phụ lục E: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ carbon khác lên phát triển sợi nấm Linh chi đen Nồng độ carbon 10 g/l 20 g/l 30 g/l 6,7 8,4 8,3 8,7 8,025±0,89 8,6 8,7 8,9 8,65 8,7125±0,13 8,3 7,65 8,3 8,2 8,1125±0,31 40 g/l Đĩa Trung bình 8,8 8,4 8,8 8,6 8,65±0,19 Kết xử lý ANOVA ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 1.52375 2.88125 4.405 Df 12 15 Mean Square F-Ratio 0.507917 2.12 0.240104 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups C10 8.025 X C30 8.1125 X C40 8.65 X C20 8.7125 X P-Value 0.1516 Contrast C10 - C20 C10 - C30 C10 - C40 C20 - C30 C20 - C40 C30 - C40 Sig Difference -0.6875 -0.0875 -0.625 0.6 0.0625 -0.5375 +/- Limits 0.754928 0.754928 0.754928 0.754928 0.754928 0.754928 Phụ lục F: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nitrogen khác lên phát triển sợi nấm Linh chi đen Nồng độ nitrogen Đĩa Trung bình g/l 8,95 8,5 8,5 8,7 8,6625 ±0,21 10 g/l 4,75 4,3 4,25 4,3 4,4 ±0,23 15 g/l 2,0 1,95 2,15 2,0 2,025 ±0,09 20 g/l 1,25 1,1 1,4 1,2 1,2375 ±0,13 Kết xử lý ANOVA ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 133.618 0.37125 133.989 Df 12 15 Mean Square F-Ratio 44.5394 1439.66 0.0309375 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups N20 1.2375 X X N15 2.025 X N10 4.4 X N5 8.6625 P-Value 0.0000 Contrast N5 - N10 N5 - N15 N5 - N20 N10 - N15 N10 - N20 N15 - N20 Sig * * * * * * Difference 4.2625 6.6375 7.425 2.375 3.1625 0.7875 +/- Limits 0.270987 0.270987 0.270987 0.270987 0.270987 0.270987 Phụ lục G: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon khác lên sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen Nguồn carbon Glucose Succrose 8,7 8,75 8,85 8,8 8,775 ±0,06 7,05 7,0 6,9 6,4 6,8375 ±0,29 Lactose Maltose 7,9 7,95 7,8 8,15 7,95 ±0,15 6,6 6,65 6,85 6,9 6,75 ±0,15 Đĩa Trung bình Kết xử lý ANOVA ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 11.2205 0.409375 11.6298 Df 12 15 Mean Square F-Ratio 3.74016 109.64 0.0341146 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups X Mal 6.75 Suc 6.8375 X X Lac 7.95 X Glu 8.775 P-Value 0.0000 Contrast Glu - Lac Glu - Mal Glu - Suc Lac - Mal Lac - Suc Mal - Suc Sig * * * * * Difference 0.825 2.025 1.9375 1.2 1.1125 -0.0875 +/- Limits 0.284561 0.284561 0.284561 0.284561 0.284561 0.284561 Phụ lục H: Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen khác lên sinh trưởng sợi nấm Linh chi đen Nguồn nitrogen Yeast extract Peptone Đĩa Trung bình 8,85 8,75 8,55 8,6 8,6 ±0,14 7,6 7,45 8,2 7,7 7,7 ±0,23 Amonium Nitrate 7,75 7,45 7,7 7,8 7,8 ±0,16 Urea 0 0 ±0 Kết xử lý ANOVA ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 196.179 0.44625 196.625 Df 12 15 Mean Square F-Ratio 65.3929 1758.46 0.0371875 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups X URE 0.0 X AN 7.675 X PEP 7.7375 X YE 8.6875 10 P-Value 0.0000 Contrast AN - PEP AN - URE AN - YE PEP - URE PEP - YE URE - YE Sig Difference -0.0625 7.675 -1.0125 7.7375 -0.95 -8.6875 * * * * * +/- Limits 0.297101 0.297101 0.297101 0.297101 0.297101 0.297101 Phụ lục I: Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen nuôi loại môi trường khác Môi trường Czapek PDA Hen Hop Đĩa Trung bình 7,95 8,15 8,05 7,95 8,025 ±0,09 8,95 8,95 8,85 8,8 8,8875 ±0,08 6,1 6,35 6,05 5,9 6,1 ±0,19 6,45 6,15 6,55 6,95 6,525 ±0,33 Kết xử lý ANOVA ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 20.2317 0.476875 20.7086 Df 12 15 Mean Square F-Ratio 6.74391 169.70 0.0397396 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups X Hen 6.1 X Hop 6.525 X Czapek 8.025 X PDA 8.8875 11 P-Value 0.0000 Contrast Czapek - Hen Czapek - Hop Czapek - PDA Hen - Hop Hen - PDA Hop - PDA Sig * * * * * * Difference 1.925 1.5 -0.8625 -0.425 -2.7875 -2.3625 +/- Limits 0.307127 0.307127 0.307127 0.307127 0.307127 0.307127 12 ... Hắc chi (Linh chi đen gọi Huyền chi)  Thanh chi (Linh chi xanh gọi Long chi)  Bạch chi (Linh chi trắng gọi Ngọc chi)  Hồng chi (Linh chi vàng gọi Kim chi)  Tử chi (Linh chi tím) Nấm Linh chi. .. lên sinh trưởng nấm Linh chi đen: 30 3.2.8 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen khác lên sinh trưởng nấm Linh chi đen: 31 3.2.9 Khảo sát sinh trưởng sợ nấm Linh chi đen môi... chi đen: 41 4.9 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitrogen khác lên sinh trưởng sợi nấm Linh chi đen: 42 4.10 Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen nuôi loại môi trường khác