Quan hệ họ hàng của hai loài giun đất pheretima modigliani (rosa, 1889) và pheretima rodericensis (grube, 1879)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC HUÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM  NGUYỄN THỊ THỦ QUAN HỆ HỌ HÀNG CỦA HAI LOÀI GIUN ĐẤT Pheretima modigliani (Rosa, 1889) VÀ Pheretima rodericensis (Grube, 1879) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Huế, 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC HUÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM  NGUYỄN THỊ THỦ QUAN HỆ HỌ HÀNG CỦA HAI LOÀI GIUN ĐẤT Pheretima modigliani (Rosa, 1889) VÀ Pheretima rodericensis (Grube, 1879) Chuyên ngành: Động vật học Mã số: 60 42 01 03 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN VĂN THUẬN PGS.TS TRẦN QUỐC DUNG Huế, 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu chúng tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực, khách quan nghiêm túc Những tài tham khảo cho luận văn có nguồn gốc rõ ràng Nếu có sai sót tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Học viên Nguyễn Thị Thủ Trong suốt thời gian học tập hồn thành luận văn, tơi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô giáo Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Huế nhiệt tình truyền đạt kiến thức cho Tôi xin cảm ơn thầy cô tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Đặc biệt, xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành lời cảm ơn sâu sắc đến thầy giáo PGS TS Nguyễn Văn Thuận thầy giáo PGS TS Trần Quốc Dung tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện thuận lợi để thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến q thầy giáo Phòng thí nghiệm Di truyền-Vi sinh Phòng thí nghiệm Động vật học giúp đỡ dẫn nhiệt tình trình nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến TS Hồng Tấn Quảng anh chị cơng tác Bộ môn sinh học Phân tử, Viện Công nghệ sinh học, Đại học Huế toàn cán Viện giúp đỡ dẫn nhiệt tình q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến người thân gia đình, bạn bè ln quan tâm, động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập nghiên cứu để hoàn thành luận văn Huế, tháng 10 năm 2017 Học viên Nguyễn Thị Thủ MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIÊT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài .6 Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu .7 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu giun đất 1.1.1 Về đa dạng phân bố 1.1.2 Về phân loại 10 1.1.3 Về nhân nuôi .11 1.1.4 Về di truyền .12 1.2 Các phương pháp nghiên cứu đa dạng di truyền ứng dụng .16 1.2.1 Các phương pháp 16 1.2.1.1 Kỹ thuật đa hình đoạn khuếch đại ngẫu nhiên (RAPD) 16 1.2.1.2 Kỹ thuật đa hình chiều dài cắt đoạn giới hạn (RFLP) 17 1.2.1.3 Kỹ thuật đa hình độ dài đoạn khuếch đại (AFLP) 18 1.2.1.4 Kỹ thuật SSR 18 1.2.2 Ứng dụng 19 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .22 2.1 Vật liệu nghiên cứu 22 2.2 Hóa chất thiết bị 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Phương pháp thu thập mẫu .24 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 24 2.3.2.1 Mẫu nghiên cứu đặc điểm hình thái 24 2.3.2.2 Mẫu nghiên cứu đặc điểm di truyền .24 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu mối quan hệ họ hàng dựa vào đặc điểm hình thái .24 2.3.4 Phương pháp tách chiết DNA tổng số .26 2.3.5 Phương pháp PCR .27 2.3.6 Điện di DNA agarose gel 27 2.3.7 Phân tích kết RAPD phần mềm TEPGA (Tool for Populator Genetic Analysis) version 1.3 Mark P.Miller .28 2.3.8 Xây dựng giản đồ phả hệ phần mềm NTSYS version 2.1 28 2.3.9 Xử lý số liệu 28 CHƯƠNG III: KÊT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .28 3.1 Mối quan hệ họ hàng hai loài giun đất Ph modigliani (Rosa, 1889) Ph rodericensis (Grube, 1879) dựa vào đặc điểm hình thái 28 3.2 Mối quan hệ họ hàng hai loài giun đất Ph modigliani (Rosa, 1889) Ph rodericensis (Grube, 1879) dựa vào thị phân tử RADP32 3.2.1 DNA tổng số 32 3.2.2 Kết thực PCR-RAPD 33 3.2.2.1 Kết RAPD với primer OPA-03 33 3.2.2.2 Kết RAPD với primer OPA-04 33 3.2.2.3 Kết RAPD với primer OPB-01 36 3.2.2.4 Kết RAPD với primer OPB-18 36 3.2.2.5 Kết RAPD với primer OPF-04 .39 3.2.2.6 Kết RAPD với primer OPG-17 39 3.2.2.7 Kết RAPD với primer OPD-11 42 3.2.2.8 Kết RAPD với primer OPN-06 42 3.2.3 Hệ số tương đồng di truyền giản đồ phả hệ cá thể giun đất nghiên cứu .45 KÊT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ 48 Kết luận 48 Kiến nghị .48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC 55 DANH MỤC CÁC TỪ VIÊT TẮT AFLP Amplified fragment length polymorphism bp DNA EDTA M NTSYSpc PCI PCR PPB PBS RAPD (Đa hình độ dài đoạn khuếch đại) Base pair (cặp base nitơ) Deoxyribonucleic acid Ethylenediamine tetraacetic acid DNA size marker (thang chuẩn kích thước DNA) Numerical Taxonomy System for personal computer Phenol: Chloroform: Isoamylalcohol Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) Percentage of polymorphic band (Tỷ lệ băng đa hình) Phosphate buffered saline Random amplified polymorphic DNA RFLP (Đa hình đoạn khuếch đại ngẫu nhiên) Restriction fragment length polymorphism SDS SSR TAE (Đa hình độ dài đoạn cắt hạn chế) Sodium dodecylsulfate Simple sequence repeat (Sự lặp lại trình tự đơn giản) Tris base: Acetic acid: EDTA DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các mẫu giun đất Ph modigliani Ph rodericensis 22 sử dụng nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Trình tự primer ngẫu nhiên sử dụng nghiên cứu .22 Bảng 2.3 Các hóa chất sử dụng nghiên cứu 23 Bảng 2.4 Những thiết bị sử dụng nghiên cứu 23 Bảng 3.1 Các đặc điểm hình thái đặc tính sử dụng để xác định mối quan hệ họ hàng hai loài Ph modigliani Ph rodericensis 30 Bảng 3.2 Hệ số tương đồng di truyền (Jaccard’s) hai loài giun đất31 Ph modigliani Ph rodericensis dựa vào đặc điểm hình thái 31 Bảng 3.3 Hệ số tương đồng di truyền (Jaccard’s) mẫu giun đất45 dựa vào thị phân tử RADP .45 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Các địa điểm thu mẫu giun đất .25 Hình 3.1 Giản đồ phả hệ hai loài giun đất nghiên cứu xây dựng phương pháp UPGMA dựa vào đặc điểm hình thái 31 Hình 3.2 DNA tổng số số cá thể giun đất .32 Hình 3.3 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPA-03 34 Hình 3.4 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPA-04 35 Hình 3.5 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPB-01 37 Hình 3.6 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPB-18 38 Hình 3.7 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPF-04 40 Hình 3.8 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPG-17 .41 Hình 3.9 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPD-11 43 Hình 3.10 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer OPN-06 44 Hình 3.11 Giản đồ phả hệ giun đất nghiên cứu xây dựng 46 phương pháp UPGMA dựa vào thị phân tử RAPD 46 Hình 3.11 Giản đồ phả hệ giun đất nghiên cứu xây dựng phương pháp UPGMA dựa vào thị phân tử RAPD Anshul Sharma cộng (2011) mơ tả đặc điểm hình thái phân tử 24 cá thể giun đất (Eisenia fetida Eudrilus eugeniae) thu thập từ vùng địa lý khác Ấn Độ (Kangra, Kullu, Hamipur New Delhi) để đánh giá mức độ biến đổi di truyền Các đặc điểm hình thái sử dụng nghiên cứu chiều dài thân, số đốt, vị trí tơ, vị trí túi nhận tinh vị trí lỗ đực lỗ Mười thị phân tử RAPD, 10 thị phân tử ISSR 10 thị phân tử URP sử dụng cho thấy tính đa hình tương ứng 95,7%; 96,7% 98,3% Nguyễn Thanh Tùng cộng (2012) dựa sở hình thái học, điện di protein SDS - PAGE, giải trình tự mã vạch DNA Barcode) để xác định mối quan hệ đa dạng di truyền số lồi giun đất thuộc nhóm Pheretima đồng sông Cửu Long (Amynthas paraalexandri, A juliani, Metaphire posthuma, M bahli, M peguana, M houlleti, Metaphire sp.8, P elongata P taprobanae) Cả phương pháp cho kết tương thích, xác để giải thích mối quan hệ 46 lồi nhóm loài gần gũi tác taxon bậc cao (họ, giống) Mối quan hệ nhóm Pheretima khơng có manh tràng có manh tràng thể rõ xây dựng sơ đồ phả hệ dựa trình tự DNA Barcode Mối quan hệ lồi giống Amynthas Metaphire chưa thể rõ phương pháp trạng số điện di protein SDS-PAGE, có xu hướng rõ so sánh trình tự DNA barcode Từ kết nghiên cứu chứng minh Metaphire sp.8 loài gần gũi với M houlleti 47 KÊT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đạt được, rút số kết luận sau: Giun đất Ph modigliani Ph rodericensis hai loài tách biệt: - Hệ số tương đồng di truyền cá thể hai loài Ph modigliani Ph rodericensis dựa vào đặc điểm hình thái thấp, từ 38,5%- 58,3% (khoảng cách di truyền lớn, từ 41,7-61,5%) - Hệ số tương đồng di truyền cá thể hai loài Ph modigliani Ph rodericensis dựa vào thị phân tử RADP thấp, từ 6,1-62,5% (khoảng cách di truyền lớn, từ 35,5% - 84,1%) Có thể phân biệt hai lồi Ph modigliani Ph rodericensis dựa vào RADP marker đặc trưng: - Các marker đặc trưng cho loài Ph modigliani OPA03-200 bp, OPA041.500 bp, OPA04-1.200 bp, OPB01-400 bp, OPG17-350 bp, OPD11-1.500 bp OPN6-1.200 bp - Các marker đặc trưng cho loài Ph rodericensis OPA03-1.250 bp, OPA03-1.000 bp, OPF04-1.400 bp, OPF04-1.000 bp, OPF04-400 bp, OPF04-250 bp, OPF04-200 bp, OPG17-1.100 bp OPD11-230 bp Kiến nghị Cần mở rộng phạm vi, vùng nghiên cứu kết hợp với thị phân tử khác COI, 16S rRNA, 12S rRNA… để xác định rõ mối quan hệ di truyền hai loài giun đất Ph modigliani Ph rodericensis 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Thái Trần Bái (1983), Giun đất Việt Nam (Hệ thống học, khu hệ, phân bố địa lý động vật học), Luận án Tiến sĩ Khoa học Sinh học, Trường Đại học Quốc gia Lomonosov (Tiếng Việt) Thái Trần Bái (1989), Giá trị thực tiễn giun đất, Tạp chí Sinh học, 11 (l), tr 39-43 Thái Trần Bái, Đỗ Văn Nhượng (1989), Nhận xét khu hệ giun đất Pnômpênh khu vực lân cận, Thông báo khoa học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội, tr 76-78 Thái Trần Bái, Tào Minh Tuấn, Trịnh Đình Đạt (1996), Điện di so sánh isozim esteraza bốn lồi giun đất giống Pheretima (Megascolecidae), Thơng báo Khoa học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội (1), tr 33-37 Trần Thị Thanh Bình, Đặng Tất Thế (2006), Dẫn liệu DNA hai loài giun đất Ph aspergillum Ph robusta, Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội (4), tr 130-135 Đặng Vũ Bình, Vũ Đình Tơn, Nguyễn Đinh Linh (2008), Đánh giá khả tăng trưởng giun quế (Perionyx excavatus) nguồn thức ăn khác nhau, Tạp chí khoa học Phát triển, VI (4), tr 321-325 Trần Quốc Dung, Trần Văn Thiện, Ngơ Đắc Chứng, Quyền Đình Thi, Đào Thị Tuyết (2008), Nhận dạng hai quần thể nhông cát Leiolepis Cuvier, 1928 Thừa Thiên Huế thị RAPD, Báo cáo hội nghị Sinh học toàn quốc lần thứ IV Hóa sinh Sinh học phân tử phục vụ Nông, Sinh, Y học Công nghiệp thực phẩm, Nxb Khoa học Kỹ thuật, tr 687-700 Trần Quốc Dung (2009), Một số kỹ thuật DNA marker ứng dụng nghiên cứu Lưỡng cư Bò sát, Báo cáo khoa học Hội thảo Quốc gia Lưỡng cư Bò sát Việt Nam, Lần thứ nhất, 28/11/2009, NXB Đại học Huế, tr 314-326 Trịnh Đình Đạt (2006), Công nghệ sinh học - Công nghệ Di truyền, Nxb Giáo dục 49 10 Phạm Thị Hồng Hà (1995), Khu hệ giun đất Quảng Nam – Đà Nẵng, Luận án Phó Tiến sĩ Khoa học Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 11 Nguyễn Thị Minh Hòa (1984), Thử nghiệm quy trình ni giun đất Hà Nội, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 12 Huỳnh Thị Kim Hối (2005), Khu hệ giun đất nhóm Mesofauna vấn đề sử dụng chúng phía Nam miền Trung Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội 13 Huỳnh Thị Kim Hối, Vương Tấn Tú, Nguyễn Cảnh Tiến Trình (2007), Ảnh hưởng số tính chất lý, hố học đất đến thành phần phân bố giun đất Vườn Quốc gia Tam Đảo, Tạp chí Sinh học, 29 (2), tr 26-34 14 Trần Thị Bích Hồng, Ngơ Thị Tố Nga, Quyền Đình Thi, Nguyễn Hữu Ninh, Phạm Anh Tuấn (2009), Xác định thị AFLP đặc trưng cho bảy dòng cá rơ phi ni Việt Nam, Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 7(4), tr 455-462 15 Đỗ Võ Anh Khoa, Nguyễn Thị Kim Khang, Nguyễn Minh Thông, Bùi Xuân Mến (2013), Đa dạng di truyền gen insulin-like growth factor binding protein gà, Tạp chí Khoa học Phát triển 11(1), tr 36-40 16 Ngô Thị Kim, Đặng Thị Thanh Hà, Đặng Tất Thế (2003), Bước đầu nghiên cứu rắn hổ mang theo quần thể địa lý kỹ thuật RAPD, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc lần thứ hai, Nghiên cứu Sinh học, Nông nghiệp, Y học, Nxb Khoa học Kỹ thuật, tr 934-936 17 Võ Thị Phương Lan, Ngô Thị Hà, Phạm Anh Thùy Dương, Nguyễn Mộng Hùng (2009), Đánh giá khác biệt giống gà thị DNA, Báo cáo Hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, Cơng nghệ sinh học phục vụ Nông nghiệp-Lâm nghiệp, Thủy sản, Công nghiệp, Y dược Bảo vệ môi trường, Nxb Khoa học Kỹ thuật, tr 213-220 18 Nguyễn Thị Thu Liên, Hồng Tấn Quảng (2015), Giáo trình Chỉ thị phân tử, Nxb Đại học Huế 19 Trần Thuý Mùi (1985), Khu hệ giun đất vùng đồng sông Hồng, Luận án Phó Tiến Sĩ khoa học Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 20 Hồ Đắc Khánh Ngọc (2012), Nghiên cứu số đặc điểm phân bố ni thử nghiệm lồi giun khoang (Ph aspergillum) thành phố Huế, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Huế 50 21 Đỗ Văn Nhượng (1994), Khu hệ giun đất miền Tây Bắc Việt Nam, Luận án phó Tiến sĩ Khoa học Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 22 Đinh Thị Phòng, Nguyễn Thị Đảm (2009), Đánh giá độ 10 giống tằm (Bombyx mory L.) thị RAPD, Tạp chí Khoa học Phát triển, 7(5), tr 620-627 23 Samphon (1990), Khu hệ giun đất nước Cộng hòa dân chủ nhân dân Lào, Luận án phó Tiến sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 24 Trần Thanh Sơn (2012), Nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể nhông cát rivơ (Leiolepis reevesii Gray, 1831) miền Trung Việt Nam, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Huế 25 Khuất Hữu Thanh (2005), Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen, Nxb Khoa học Kỹ thuật 26 Nguyễn Thị Thơ (2014), Nghiên cứu đặc điểm phân bố nuôi thử nghiệm loài giun đất Pheretima rodericensis (Grube, 1879) thành phố Huế, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Huế 27 Nguyễn Văn Thuận (1994), Khu hệ giun đất Bình Trị Thiên, Luận án phó Tiến sĩ Khoa học Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 28 Nguyễn Văn Thuận (2010), Nghiên cứu thành phần loài, phân bố định hướng ứng dụng giun đất số tỉnh duyên hải phía nam miền Trung (Quảng Ngãi, Bình Định, Phú Yên), Báo cáo tình hình thực nhiệm vụ nghiên cứu cấp nhà nước, Trường Đại học Sư pham Huế, tr 8-9 29 Phan Thị Bích Trâm, Phạm Thị Quỳnh Trâm, Dương Thị Hương Giang, Hà Thanh Toàn (2009), Nghiên cứu sử dụng bột đàm từ trùn quế (Perionyx excavatus) làm thức ăn cho hậu ấu trùng tôm sú (Penaeus monodon), Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 11, tr 9-17 30 Lê Văn Triển (1995), Khu hệ giun đất miền Đơng Bắc Việt Nam, Luận án phó Tiến sĩ Khoa học Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 31 Nguyễn Thanh Tùng (2013), Khu hệ giun đất đồng sông Cửu Long, Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 51 Tiếng Anh 32 Biruntha M., Paul J A J., and Mariappan P (2013), Vermicultural and molecular characterization of composting endemic earthworms, American Journal of Research Communication, 1(3): 168-180 33 Biradar M D., Suresh B., Siddaraju M., Sreepada K., Paliwal R., Giraddi R S., and Gai P B (2013), Genetic diversity of earthworms from westwrn ghats of Karnataka (india) using rapd based molecular markers, Biochem Cell Arch 13(2): 237-242 34 Blakemore R J (2002), Cosmopolitan Earthworms-an Eco-Taxonomic Guide to the Peregrine Species of the World, Published by VermEcology, Australia, 62-237 35 Cameron E K., Bayne E M., Coltman D W (2008), Genetic structure of invasive earthworms Dendtobaena octaedrain the boreal forest of Alberta: insights into introduction mechanisms, Mol Ecol 17: 1189-1197 36 Chang C H., Chen J H (2005), Taxonomic status and intraspecific phylogeography of two sibling species of Metaphire (Oligochaeta: Megascolecidae) in Taiwan, Pedobiologia 49: 591-600 37 Chang C H., Lin M., Chen J H (2008), Molecular systematics and phylogeography of the gigantic earthworms of the Pheretima formosae species group (Clitellata, Megascolecidae), Molecular Phylogenetics and Evolution, 49 (3): 958-968 38 Chen Y (1938), Oligochaeta from Hainan, Kwangtung, Contrib Biol Lab Sci Soc China, Zool., 12: 375-427 39 Easton E G (1979), A revision of the 'acaecate' earthworms of the Pheretima group (Megascolecidae: Oligochaeta): Archipheretima, Metapheretima, Planapheretima, Pleionogaster and Polypheretima, Bull Br Mus Nat Hist Zool., 35: 1-126 40 Gates G E (1959), On a taxonomic puzzle and the classification of the earthworms, Bulletin of the Museum of Comparative Zoology, 121, pp 229-261 41 Gates G E (1972), Burmese earthworms an introduction to the systematic and biology megadrile Oligochaetes with special reference to Southeast Asia, Amer Phil Soc., New Series, 62: 1-326 52 42 Ishizuka K (1999), A review of the genus Pheretimas Iat (Megascolecidae) from Japan, Edaphologia, 62: 55-60 43 Jamieson B G M (1988), On the phylogeny and higher classification of the Oligochaeta, Cladistics, 4: 367-410 44 Kimberling DN, Ferreira AR, Shuster SM, Keim P (1996), RAPD marker estimation of genetic structure among isolated nothern leopard frogs populations in the South western USA, Molecular Ecology, 5: 521-529 45 Kinberg J G H (1867), Annulata nova, Ofves K Vetensk Acad Förch Stockh, 23 Quoted in Sims R W., Easton E G (1972), A numerical revision of the earthworm genus Pheretima auct (Megascolecidae: Oligochaeta) with the recognition of new genera and an appendix on the earthworms collected by the Royal Society North Borneo Expedition, Biological Journal of the Linnean Society, 4: 169-268 46 Lee K E (1959), A Key for the identification of New Zealand earthworms, Tuatara, 8: 13-60 47 Legesse B W., Myburg A A., Pixley K V., Botha A M (2007), Genetic diversity of African maize inbred lines revealed by SSR markers, Hereditas, 144(1): 10-17 48 Maity S., Padhy P K., Chaudhury S (2008), The role of earthworm Lampito mauritii (Kinberg) in amending lead and zinc treated soil, Bioresource Technology, 99 (15): 7291-7298 49 Meenatchi R., Giraddi R S., and Biradar D P., (2009), Assessment of genetic variability among strains of earthworm, Eudrilus eugeniae (Kinberg) using PCR-RAPD technique, Karnataka J Agric Sci., 22(5): 942-945 50 Michaelsen J W (1900), Das Tierreich 10, Oligochaeta Berlin: R Friedländer und Sohn 51 Omodeo P (1958), La reserve naturelle integrale du Mont Nimba I Oligochaetes, Mem inst Fr Afr Noire., 53: 9-10 52 Perrier E (1872), Recherches pour servir a I’histoire des Lumbriciens terrestres-nouv Archis Mus Hist Nat Paris V.81: 1043-1046 53 Reynolds R W., Cook D C (1993), Nomenclatura Oligochaetologica 53 Supplementum Tertium, New Brunswick Museum Monograph, Quoted in Edwards C A and Bohlen P J (1996), Biology and Ecology of Earthworms, 3rd, Chapman and Hall, London 54 Sharma A., Sonah H., Deshmukh R K., Gupta N K., Singh N K., and Sharma T K (2011), Analysis of Genetic Diversity in Earthworms using DNA Markers, Zoological Science, 28(1): 25-31 55 Shen H P., Yeo D C J (2005), Terrestrial earthworms (Oligochaeta) from Singapore, The Raffles Bulletin of Zoology, 53 (1): 13-33 56 Sims R W., Easton E G (1972), A numerical revision of the earthworm genus Pheretima auct (Megascolecidae: Oligochaeta) with the recognition of new genera and an appendix on the earthworms collected by the Royal Society North Borneo Expedition, Biological Journal of the Linnean Society, 4: 169268 57 Somniyam P (2008), The population dynamics and distribution of terrestrial earthworms at Sakaerat Environmental Research Station and adjacent areas, NaJchon Ratchasima Province, Thesis in Environmental Biology, Suranaree University of Technology, Thailand 58 Stephenson J (1930), The Oligochaeta, Oxford University Press, London 59 Nguyen Thanh Tung, Tran Nhan Dung, Pham Minh Tu (2012), Testing on three determining methods of genetic diversity on earthworm species belonging to the Pheretima species group in the Mekong Delta, Journal of biology, 34(1): 6-14 54 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Đặc điểm hình thái Ph rodericensis Ph modigliani Bảng 2.1 Sự sai khác đặc điểm hình thái số mẫu Ph rodericensis Ph modigliani Lồi Đặc điểm Kích thước thể Màu sắc mặt bụng mặt lưng Kiểu môi Lỗ lưng Kiểu tơ Số đốt đai Đai sinh dục Lỗ sinh dục đực Vách đốt 10 Vị trí túi nhận tinh 11 Số lượng túi nhận tinh 12 Vị trí lỗ nhận tinh 13 Nhú phụ sinh dục 14 Manh tràng 15 Vách 8/9 16 Vị trí tinh nang 17 Tơ VIII/ XXX 18 Vị trí đổ 19 Tuyến tiền liệt RTB1 RTB3 RTB4 RHT1 RHT2 RHTR MHT MQB5 MQB6 MQB8 MQB10 MQB12 Lớn Lớn Lớn Lớn TB Lớn Lớn Lớn Lớn Lớn Lớn Lớn Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Khác biệt Prolobus 12/13 Epilobus 10/11 Epilobus 11/12 Epilobus 11/12 Trung gian 12/13 Epilobus 11/12 Prolobus 11/12 Epilobus 11/12 Epilobus 12/13 Epilobus 11/12 Epilobus 11/12 Prolobus 11/12 perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin perichaetin đốt đốt đốt đốt đốt đốt kín, khơng kín, khơng kín, khơng kín, khơng kín, khơng kín, khơng đủ đủ đủ đủ đủ đủ lồi lồi lồi lồi lồi lồi dày dày dày dày dày dày lưng lưng lưng lưng lưng lưng đôi đôi đôi đôi đôi đôi 5/6 5/6 5/6 5/6 5/6 5/6 tròn tròn tròn tròn tròn tròn Đơn giản Đơn giản Đơn giản Đơn giản Đơn giản Đơn giản Mỏng Mỏng Mỏng Mỏng Mỏng Mỏng XI; XII XI; XII XI; XII XI; XII XI; XII XI; XII