A. PHƯƠNG PHÁP KHỐI PHỔI. TỔNG QUAN VỀ KHỐI PHỔ: Khối phổ (mass spectrometry – MS): là một kỹ thuật quang phổ do nhà vật lí học người Anh Joseph John Thomson phát minh ra vào năm 1897. Chính nhờ kĩ thuật này đã giúp Thomson phát hiện ra các đồng vị của nguyên tố và chứng minh sự tồn tại hai đồng vị của khí Neon. Với phát minh này đã giúp Thomson giành được giải thưởng Nobel năm 1906.1. Khối phổ là gì?Là một kỹ thuật phân tích hóa học giúp xác định hàm lượng và loại chất hóa học có trong một mẫu bằng cách đo tỷ lệ khối lượng trên điện tích và số lượng của các ion pha khí từ phân tử hoặc nguyên tử của mẫu. Dùng thiết bị chuyên dụng là khối phổ kế. Kĩ thuật này có nhiều ứng dụng, thường được kết hợp với một số sinh học phân tử khác như:•Khối phổ kết hợp với sắc ký khí.•Khối phổ kết hợp với sắc ký lỏng.•Khối phổ kết hợp điện di2. Nguyên lý của phương pháp khối phổ:Là kỹ thuật phân tích đo phổ về khối lượng của các phân tử tích điện khi chúng di chuyển trong điện trường. Các ion được tạo thành trong buồng ion hóa, được gia tốc và tách riêng nhờ bộ phận phân tích khối phổ trước khi đến detector. Tất cả các quá trình này diễn ra trong hệ thiết bị chân không.Tín hiệu tương ứng với các ion sẽ được thể hiện bằng một số vạch (pic) có cường độ khác nhau tập hợp lại thành một khối phổ đồ hoặc phổ khối. Dữ liệu phổ khối được tự động ghi lại và sử dụng để nhận dạng mẫu bằng các công cụ tin sinh học. Đồng thời, có thể xác định cấu trúc cũng như là định lượng các chất trong mẫu mà ta phân tích http:www.biomedia.vnreviewphuongphapkhoiphoms.html3. Sự hình thành khối phổ (sự ion hóa): Để có thể nghiên cứu các chất bằng pp khối phổ thì các phân tử chất nghiên cứu ở dạng khí hoặc hơi phải được ion hóa bằng phương pháp thích hợp. Phương pháp ion hoá bằng va chạm điện tử (dùng phổ biến nhất)•Trong buồng ion hoá, các điện tử phát ra từ cathode (làm bằng vonfram hoặc reni) bay về anode với vận tốc lớn. •Các phân tử chất nghiên cứu ở trạng thái hơi sẽ va chạm với điện tử trong buồng ion hoá, có thể nhận năng lượng điện tử và bị ion hoá. Phương pháp ion hóa bằng trường điện từ (dùng khá phổ biến)4. Máy khối phổ: là một thiết bị dùng cho phương pháp khối phổ, cho ra phổ khối lượng của một mẫu, để tìm ra thành phần của nó. Có thể ion hóa mẫu và tách các ion của nó với các khối lượng khác nhau và lưu lại thông tin dựa vào việc đo đạc cường độ dòng ion. Tùy theo loại điện tích của ion đem nghiên cứu mà người ta phân biệt máy khối phổ ion dương hoặc ion âm. Một khối phổ kế thông thường gồm 3 phần:•phần nguồn ion•phần phân tích khối lượng•phần đo đạc.