CÂU HỎI ÔN TẬP MÔN KĨ THUẬT HIỆN đại trong TÁCH CHIẾT HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN

GỢI Ý ÔN THI KỸ THUẬT HIỆN ĐẠI TÁCH CHIẾT HCTN Tên gọi phương pháp dùng dung môi hữu chiết tách chất hữu khỏi bột dược liệu? Nguyên tắc chiết lỏng- rắn, áp suất thường, nhiệt độ phòng? Phương pháp chiết rắn – lỏng Nguyên tắc chiết lỏng – rắn nhiệt độ phòng, áp suất thường Các phương pháp chiết gồm có ngâm dầm ngấm kiệt Nguyên tắc bản: bột tiếp xúc dung môi thời gian định, chất phân cực hòa tan dung mơi phân cực, chất phân cực trung bình tan loại dung mơi trung bình, chất khơng phân cực tan dung mơi không phân cực Việc thay đổi dung môi trình chiết phân đoạn thu cao chiết khác để chiết kiệt mẫu Nguyên tắc chiết lỏng- rắn, với áp suất cao hơn? Tên thường gọi phương pháp (tiếng Việt, tiếng Anh)? Chiết lỏng – rắn với áp suất cao (chiết chất lỏng siêu tới hạn – supercritical fluid method): hợp chất diện trạng thái siêu tới hạn hợp chất có nhiệt độ áp suất cao giá trị tới hạn tương ứng Khả hòa tan chất lỏng siêu tới hạn có mối quan hệ chặt chẽ với tỉ trọng yếu tố làm cho chất lỏng siêu tới hạn loại chất lỏng hoàn hảo thích hợp để sử dụng kỹ thuật chiết HCTN - Chất lỏng không giống với trạng thái lỏng thơng thường mà mang đặc tính chất khí chất lỏng - Có khả hòa tan chất đồng thời có độ nhớt thấp khả khuếch tán cao dùng để hòa tan chất ứng dụng vào chiết xuất chất dược liệu Các đặc tính chất lỏng tới hạn (khả hòa tan chất, độ nhớt ) phụ thuộc vào nhiệt độ áp suất Thay đổi điều kiện làm thay đổi đặc tính (độ phân cực, khả hòa tan) chất lỏng tới hạn Nguyên tắc chiết lỏng- rắn, lượng nhỏ, với nhiệt độ cao hơn? Tên thường gọi phương pháp (tiếng Việt, tiếng Anh) phạm vi áp dụng? Soxhlet extraction Phương pháp có ưu điểm sử dụng lượng dung mơi mà chiết kiệt hoạt chất Sự ly trích tự động, liên tục nên nhanh chóng Dựa vào hệ thống kín đun hồn lưu dung môi Dung môi tinh khiết (chỉ cần lượng dung mơi) đun nóng bốc lên cao, gặp ống ngưng làm lạnh ngưng tụ thành thể lỏng, rới thẳng xuống ống chứa bột Dung môi ngấm vào bột chiết chất hữu hòa tan vào dung mơi Khi hợp chất hút xuống bình cầu nằm lại đó, có dung mơi tinh khiết bốc bay lên để tiếp tục trình chiết Nguyên tắc dùng chiết lỏng- rắn, với nhiệt độ cao hơn? Tên thường gọi phương pháp (tiếng Việt, tiếng Anh), phạm vi áp dụng? Extraction with steam distillation Đây phương pháp đặc biệt dùng để ly trích tinh dầu hợp chất dễ bay có Dụng cụ gồm bình cầu lớn để cung cấp nước, nước dẫn sục vào bình có chứa mẫu cây, nước xuyên thấm qua mẫu lôi theo cấu tử dễ bay hơi; nước tiếp tục bay ngưng tụ ống sinh hàn, ta thu hỗn hợp nước-tinh dầu Dùng ether dầu hỏa hay ether ethyl để ly trích tinh dầu khỏi hỗn hợp để yên thời gian bình lóng có tách pha tinh dầu – nước Nguyên tắc chiết pha rắn? Tên thường gọi phương pháp (tiếng Việt, tiếng Anh), phạm vi áp dụng? Nguyên tắc: Dựa tương tác chất tan với dung môi chất hấp phụ Chất tan có tương tác với chất hấp phụ yếu chiết trước ngược lại Tiếng Anh: Solid-phase extraction Phạm vi áp dụng:  Xác định mức độ phân cực chất chưa biết  Làm đậm đặc hợp chất có nồng độ lỗng  Phân chia cao thơ thành phân đoạn có tính phân cực khác  Tương tự sắc ký cột, dùng để cô lập hợp chất thiên nhiên cần khảo sát khỏi cao thô ban đầu tinh chất cần khảo sát Những lưu ý cần thiết để thực tốt qui trình chiết lỏng – lỏng? Lựa chọn dung mơi chiết có độ phân cực phù hợp với chất cần chiết Dung mơi chiết hòa tan tạp chất tốt Lựa chọn dụng cụ (bình lóng) tích phù hợp với thể tích cần chiết Thực thao tác chiết Sử dụng dung mơi có độ phân cực từ thấp đến cao; nên chiết kiệt với loại dung mơi sau đổi qua dung mơi có tính phân cực Chiết nhiều lần, lần với lượng nhỏ dung môi Được thực nhiệt độ phòng Khi lắc bình lóng nhiều lần, dung mơi bình thường tạo nhũ Dùng đũa thủy tinh khuấy nhẹ dung dịch cọ xát nhẹ vào thành bình, chỗ mặt thống dung dịch để phá vỡ bọt khí Hoặc dùng NaCl để tránh việc dung môi tạo nhũ tương Nêu kỹ thuật cải tiến (về điều kiện tiến hành) phương pháp sắc ký cột? Giải ly chất khỏi cột nhờ sử dụng lực đẩy (sắc ký chớp nhoáng), sử dụng lực hút (sắc ký nhanh - cột khơ) Giải ly đơn nồng độ, giải ly tuyến tính Tiến hành điều kiện áp suất thường, cao or thấp, điều kiện mẫu ướt khô, điều kiện pH dung môi, Lựa chọn cột (pha tĩnh) chất rắn xốp có kích thước nhỏ, đường kính nhỏ μm Ngồi loại pha thường, cải tiến pha tạo nối (silica gel) dùng cho pha đảo, pha thường; pha tĩnh thủ tính (có hoạt tính quang hoạt) Hệ thống khử khí dung mơi (bồn siêu âm) HPLC Nêu kỹ thuật cải tiến (về chất hấp phụ) phương pháp sắc ký cột? Silica gel chế hóa, silica gel tạo nối dùng cho sắc ký thủ tính Gel dextran: gel Sephadex khơng tan nước, bền với tất loại dung môi hữu cơ, nước muối, dd acid pH – 12 Chất hấp phụ pha đảo, thủ tính, trao đổi ion, gel, bột giấy, celite, Người ta dùng silica gel chế hóa (có pha thường, pha đảo, sk thủ tính), có đặc tính vật lý đổi khác với silica gel bền hơn, chịu dung môi phân cực mạnh, chịu áp suất mạnh,… Trộn thêm chất kết dính vào alumina Kieselguhr-Celite Sử dụng bột giấy làm pha tĩnh tách chất ưa nước amino acid, đường,… Phát triển loại gel đưa vào sắc ký gel polyacrylamid, gel dextran, sephadex, - Nêu kỹ thuật cải tiến (về thiết bị) phương pháp sắc ký cột? Sắc ký cột khô Sắc ký chớp nhống Sắc ký nhanh cột khơ Có nhiều loại cột phù hợp cho loại sắc ký khác nhau: sk gel, sk trao đổi ion,… Lắp thêm hệ thống bơm dung mơi hay bơm khơng khí tăng lực đẩy hay hệ thống hút chân không để rút ngắn thời gian sắc ký Hệ thống pha dung môi giải ly với độ phân cực tăng dần tuyến tính Hệ thống sắc ký khí GC ngày đại, ghép nhiều thiết bị GC-MS, Hệ thống HPLC 10 So sánh lưu ý kỹ thuật sắc ký cột nhanh khơ sắc ký cột chớp nhống? Kỹ thuật giải ly Pha tĩnh chất khỏi cột Sắc ký nhoáng chớp Sử dụng lực Silica gel hạt cỡ 40 Giữ lớp dung đẩy từ đầu cột - 63μm môi đầu cột, xuống cột không khô sắc ký nhanh – cột dùng lực hút khô tạo chân không đầu cột nhờ máy bơm hút loại nhẹ Silica gel, alumina Cột sắc ký rút loại dùng cho sắc nhanh khô sau ký lớp mỏng, cỡ hạt phân đoạn thu 15 - 40μm, 10μ 11 Kỹ thuật SPE có phải sắc ký cột? Chiết pha rắn SPE có nguyên tắc giống sắc ký cột Đó tương tác chất tan dung dịch lên chất hấp phụ Cột làm thủy tinh Chất hấp phụ pha thường, pha đảo, trao đổi ion Về nguyên tắc chất hấp thu có khả tương tác khác chất hữu mà chất hấp phụ giữ chất lại cột thả cho chất qua khỏi cột SPE có nguyên tắc giống với sắc ký cột (dựa cân hấp phụ), chất giống với sắc ký nhanh cột khơ mục đích sử dụng khác với sắc ký cột Chiết pha rắn sắc ký nhanh cột khô, với vài tương đồng khác sau Tương đồng: mục đích yêu cầu, dụng cụ lắp ráp, loại chất hấp thu sử dụng, giai đoạn thao tác thực hiện,… Khác nhau: độ phân cực dung môi giải ly Sắc ký nhanh cột khô độ phân cực dung môi thường cho tăng từ từ Trong SPE tăng đột ngột 12 Đặc điểm chất hấp phụ dùng sắc ký cột, pha thường? Lưu ý điều kiện mẫu phân tích, hệ giải ly? Đặc điểm chung chất hấp phụ pha thường bề mặt có mang nhóm chức phân cực để tạo lực với chất phân cực mẫu phân tích Mẫu phân tích : thường hợp chất phân cực (mang nhóm –OH, -NH 2, ) có khả tạo nối hydrogen mạnh, bị silica gel giữ chặt lại, bị giải ly muộn, Hệ giải ly: dung mơi có khả tạo liên kết hydro mạnh dung mơi thích hợp để giải ly hợp chất phân cực Do thứ tự dung mơi giải ly phải dung môi phân cực vào trước, rối tăng dần tính phân cực dung mơi pH dung môi không acid 13 Đặc điểm chất hấp phụ dùng sắc ký cột, pha đảo? Lưu ý điều kiện mẫu phân tích, hệ giải ly? Đặc điểm chung chất hấp phụ pha đảo bề mặt có mang nhóm chức phân cực gắn thêm gốc alkyl dài để làm giảm tính phân cực, dây alkyl giữ hợp chất phân cực lại cột Mẫu phân tích: hợp chất phân cực bị giữ chặt cột Hệ giải ly: dung môi thứ tự phân cực → phân cực 14 Đặc điểm chất hấp phụ dùng sắc ký cột trao đổi ion, cách nạp cột? Lưu ý điều kiện mẫu phân tích, hệ dung dịch đệm, hệ giải ly? Chất hấp phụ sắc ký trao đổi ion nhựa trao đổi ion Bề mặt nhựa chứa nhóm chứa mang điện tích dương âm để liên kết với đối ion loại: nhựa trao đổi anion mang nhóm amin –NR 2, -NR4 nhựa trao đổi cation –COOH, -SO3H… Cách nạp nhựa trao đổi vào cột: giữ cột thẳng đứng giá, khóa vòi bên cột Nhựa trao đổi ion cân dung dịch đệm, lượng nhựa thể tích dung mơi cho rót nhựa dễ dàng vào cột, không tạo bọt khí nằm hạt nhựa Để yên – 10 phút cho hạt nhựa lắng xuống, rót đầy cột dung dịch đệm, mở khóa để cột lắng xuống Cần cân cột cách cho dung dịch đệm chảy qua cột, kiểm tra pH Cách nạp mẫu: mở khóa để hạ mức dung dịch đệm xuống vừa sát mức nhựa đầu cột, khóa lại Dùng pipette hút đặt dung dịch mẫu lên đầu cột, mở khóa cho dung dịch mẫu hút vào lớp nhựa đầu cột Để yên 10 – 20 phút mẫu chất tiếp xúc cân với nhựa Khi tất lượng mẫu gắn lên đầu cột nhựa, cho vài ml dung dịch đệm ban đầu chảy qua cột, nối cột với bình cung cấp dung dịch giải ly - Mẫu phân tích: phải có phân tử mang điện tích Muốn hợp chất tan giữ lại cột, chất tan phải đuổi đối-ion, diện bên cạnh nhóm chức có mang điện tích cố định vào pha tĩnh - Hệ dd đệm: dung dịch đệm cation sử dụng cho nhựa trao đổi cation, dung dịch đệm anion sử dụng cho nhựa trao đổi anion dd đệm hòa tan tốt chất cần khảo sát pH nồng độ dd đệm phải thích hợp để hợp chất cần khảo sát có điện tích tồn phần ngược dấu với điện tích nhựa trao đổi nên gắn tốt vào nhựa - Hệ giải ly: hợp chất hấp thu lên nhựa trao đổi anion mạnh, cation mạnh giải ly dung dịch muối; anion yếu giải ly dung dịch có tính base Tùy vào hợp chất khác sử dụng dung dịch giải ly phù hợp 15 Đặc điểm kỹ thuật thực SK trao đổi ion: chọn cột SK cách gỉải ly? Chọn cột: thường sử dụng cột ngắn đường kính lớn, nhựa PTFE, plastic, thủy tinh, Cột dài làm áp suất bên suy giảm thất thường, hợp chất khuếch tán theo chiều ngang Cách giải ly: có cách giải ly:  Giải ly cách tăng dần pH dung dịch giải ly: điện tích toàn phần phân tử lưỡng cực thay đổi theo pH Khi pH môi trường thay đổi cho pH có giá trị pI hợp chất, hợp chất có điện tích tồn phần (hợp chất trở thành trung tính), khơng gắn vào nhựa bị giải ly khỏi cột  Giải ly bằg cách tăng dần nồng độ dung dịch giải ly: hỗn hợp mẫu chất gắn vào nhựa trao đổi ion dung dịch đệm có nồng độ thấp Để tách mẫu khỏi nhựa thường, cần phải gia tăng lực ion dung dịch đệm cách thêm NaCl vào Khi có thêm NaCl dung dịch đệm, ion dung dịch đệm cạnh tranh với ion hỗn hợp mẫu chất, để dành lấy nhóm chức hoạt động nhựa, đẩy hợp chất khỏi nhựa, theo dòng chảy khỏi cột 16 Đặc điểm qui trình sắc ký cột lọc gel, có giống phương pháp trên? Lưu ý điều kiện trương nở gel, mẫu phân tích, hệ giải ly? Các thành phần khác hỗn hợp mẫu ngang qua cột sắc ký gel khỏi cột theo trọng lượng phân tử, phân tử lớn khỏi cột trước, phân tử nhỏ khỏi cột sau Sắc ký gel xem loại sắc ký phân chia hai pha, pha tĩnh lỏng pha động lỏng, mà pha có thành phần hóa học giống Điều kiện trương nở gel: có tính nước nên gel trương nở dung dịch nước tiếp xúc với acid mạnh, gel bị phân hủy Mỗi loại gel hoạt động khoảng pH định Mẫu: dung dịch mẫu cần phải loại bỏ hợp chất dạng rắn cặn Dung dịch mẫu cần hòa tan dung dịch đệm, đặt lên đầu cột sắc ký cổ điển Độ nhớt dung dịch mẫu cao >2 lần độ nhớt dung mơi giải ly ảnh hưởng đến kết tách chất Hệ giải ly: đơn giản, sử dụng dung môi đơn nồng độ, giải ly trọng lực Thường sử dụng dung môi phân cực mạnh 17 Đặc điểm kỹ thuật thực SK lọc gel: chọn cột SK cách nhồi cân cột? Cột sử dụng sắc ký gel giống cột sắc ký cổ điển, cột thủy tinh Các hạt gel trương nở diện dạng huyền phù dung môi phù hợp, cho vào cột theo kỹ thuật nhồi cột sệt Huyền phù chỉnh cho thật sệt rót vào cột chảy thành dòng dễ dàng Sau rót huyền phù vào cột, cân cột cách cho dung môi giải ly chảy ngang qua cột, lượng dung mơi tích 2-3 lần thể tích cột Vận tốc dòng chảy nhanh so với lúc thực nghiệm thực để tách chất 18 Nguyên tắc thu hồi tái sử dụng gel Sephadex? Ý nghĩa kỹ thuật loại gel G-10, G-25, G-50, LH-20? Thu hồi tái sử dụng gel Sephadex: không sử dụng, tổn trữ gel cột bịt chặt đầu với dung môi cột Tuy nhiên, gel dễ bị hư hại, tránh cách thêm dung dịch 0,02% azid natri vào dung môi giải ly cột lần cuối Nhưng tốt làm gel trở hình dạng khơ ban đầu (quy trình trang 329-330) G-10: lượng nước hút 1,0 ± 0,1 G-25: lượng nước hút 2,5 ± 0,2 G-50: lượng nước hút 5,0 ± 0,3 LH-20: gel Sepadex G-25 hydroxylpropyl hóa Việc điều chế dẫn xuất giúp cho gel có thêm tính thân dầu (lipophilicity) bên cạnh tính nước (hydrophhilicity) 19 Nêu tiện ích sắc ký lớp mỏng lưu ý kỹ thuật loại hình SKLM? Tiện ích: Cần lượng mẫu dung mơi để phân tích, q trình sắc ký nhanh Có thể phân tích đồng thời mẫu chất chuẩn đối chứng điều kiện Các hợp chất mẫu phân tích định vị bảng sắc ký, từ ứng dụng kết SKLM cho loại hình sắc ký khác Lưu ý kỹ thuật: Chọn bảng mỏng có kích thước phù hợp Trước chấm sắc ký cần sấy bảng để loại bỏ nước dung mơi bám bảng Các vết chấm có đường kính – mm , cách khoảng cm, cách hai mép bên bảng 0,5 - cm cách mép bảng – 1,5 cm để khơng ảnh hưởng đến q trình & kết sắc ký Trước giải ly bảng cần phải bão hòa dung mơi bình chứa Khơng để mực dung môi giải ly cao vết chấm bảng, tránh di chuyển hệ thống giải ly 20 Nguyên tắc sử dụng máy sắc ký khí lưu ý kỹ thuật mẫu phân tích, hệ khí mang, pha tĩnh, qui trình vận hành? Nguyên tắc sử dụng máy sắc ký khí: hợp chất dễ bay cho vào máy dòng khí mang đưa vào pha tĩnh Tại cột, thành phần khác mẫu tách riêng ra, theo khí mang khỏi cột phát đầu tín hiệu biểu diễn lên sắc ký đồ Mẫu phân tích phải hợp chất khơng phân cực, dễ hóa Trước chích mẫu vào máy, mẫu phải tinh chế sơ bộ, khơng có vết nhờn, bị ẩm Khí mang phải trơ, khơng tác dụng với nguyên liệu nhồi cột sắc ký với mẫu phân tích (heli, nitơ, hydro,…) + Tối ưu hóa tốc độ dòng khí mang để hồn tất việc phân tích mẫu khoảng thời gian ngắn nhất, thời gian chết ngắn Pha tĩnh: + Lựa chọn hệ thống pha tĩnh: loại pha tĩnh, chiều dày pha tĩnh tráng cột + Lựa chọn pha tĩnh có độ phân cực gần với độ phân cực mẫu chất cần phân tích Quy trình vận hành: Có thể sắc ký với chương trình đẳng nhiệt chương trình nhiệt độ + Tối ưu hóa chương trình nhiệt độ lựa chọn nhiệt độ tốt cho chương trình đẳng nhiệt Cách vận hành a) Mở máy phân tích mẫu: - Bật tất cơng tắt điện (auto sampler, máy tính, bơm khơng khí) - Mở tích điện - Mở máy (GC) - Mở khí mang (N2), bình khơng khí (mở lượng nhỏ); mở thêm bình H sử dụng đầu dò FID - Khởi động phần mềm Chromeleon (con tắc kè xanh) - Thiết lập, chạy chương trình đo mẫu b) Tắt máy: - Trên phần mềm, tắt lửa, tất dòng khí lò; tắt phần mềm - Tắt máy vi tính; tắt máy GC - Khóa bình khí, tắt tích điện, tắt tất công tắc điện - Tắt nguồn 21 Áp dụng cách đọc kết SK khí? SK khí ghép khối phổ?/ (xem phổ đồ cụ thể) 22 Kể phương pháp tạo dẫn xuất hóa học cho mẫu phân tích GC? Nguyên nhân áp dụng tiện ích kèm theo? Các phương pháp tạo dẫn xuất hóa học cho GC: Silyl hóa Acyl hóa Alkyl hóa, ester hóa Tạo dẫn xuất để: Làm tăng tính bay hợp chất Làm giảm giảm cấp nhiệt, tăng tính bền nhiệt Gia tăng khả đáp ứng với đầu dò Gia tăng khả tách riêng chất hỗn hợp 23 Nêu ví dụ tác chất tạo dẫn xuất silyl hóa phân tích ưu khuyết điểm loại?  Trimethylchlorosilane (TMCS) TMCS (Trimethylchlorosilane) Là xúc tác sử dụng để làm tăng phản ứng thuốc thử cho silyl hóa Có mùi nhẹ, (là chất xúc tác để làm tăng khả tạo mùi TMS) Tạo sản phẩm phụ lợi, HCl BSA (Bistrimethylsilylacetamide) Thuốc thử sử dụng phổ biến Tác nhân silyl hóa – acetamide nhóm xuất tốt Phản ứng điều kiện bình thường sản phẩm ốn định Tạo dẫn xuất bền TMCS, dùng cho hợp chất hữu đa chức điều kiện phản ứng êm dịu • Thuốc thử để silyl hóa dễ bị hỏng có chứa nước 24 Nêu ví dụ tác chất tạo dẫn xuất acyl hóa phân tích ưu khuyết điểm loại? Họ dẫn xuất Fluorinated Anhydride TFAA - Trifluoroacetoic Anhydride PFPA - Pentafluoropropionic Anhydride HFBA - Heptafluorobutyric Anhydride Phù hợp cho hai loại detector FID ECD (thường dùng tốt ECD) Là tác chất tạo dẫn xuất với alcohol, amine, phenol để có dẫn xuất có khả bay cao, ổn định Sản phẩm phụ acid tách dễ dàng Có khả điều chỉnh thời gian lưu ECD Dẫn xuất từ HFBA dễ làm hư hỏng ECD Dẫn xuất từ PFPA phụ thuộc vào nhiêt độ phân tích thấp TFAA dễ phản ứng với anhydride cho dẫn xuất bay tốt 25 Nêu ví dụ tác chất tạo dẫn xuất alkyl hóa, ester hóa phân tích ưu khuyết điểm loại? DMF-DMA (N,N-Dimethylformamide dimethylacetal) Tác chất dễ hòa tan, phản ứng nhanh Thích hợp cho tạo dẫn xuất alkyl nhanh Sự khác gốc alkyl cho phép hình thành ester khác nhau, tính phân cực tính dễ bay mẫu điều chỉnh cách thay đổi thời gian phản ứng DMF-DMA phản ứng với nước cho alcohol tương ứng TBAH (tetrabutylammonium hydroxide) Hình thành từ butyl ester, cho phép thời gian phản ứng ngắn Thông thường sử dụng cho phân tử nhỏ có tính acid Ưu điểm Thuốc thử cho alkyl hóa dễ dàng tìm Điều kiện phản ứng thay đổi từ tính axit mạnh đến tính bazo mạnh Một vài phản ứng thực dung mơi nước Các dẫn xụất alkyl hóa hầu hết bền Khuyết điểm Khơng phù hợp amin nhóm hydroxyl có tính acid Phản ứng điều kiện phải kiểm sốt thường xuyên Các thuốc thử thường độc 26 Nêu đặc điểm sử dụng thiết bị detector: FID, ECD sắc ký khí? FID (đầu dò ion hóa lửa): đầu dò ion hóa lửa phát hợp chất diện nồng độ nhỏ tất hợp chất hữu Loại đầu dò thơng dụng cho máy sắc ký khí Tuy nhiên dùng cho chất hữu đốt cháy phân mảnh lửa hydrogen áp dụng FID cho sắc ký điều chế ECD (đầu dò bắt điện tử): phân tích diện dạng vết hợp chất thuộc môi trường dư lượng loại thuốc trừ sâu có chứa clo, thuốc diệt cỏ,… nhạy với hợp chất có chứa nguyên tố có độ âm điện mạnh Đầu dò dùng để phát dung mơi có chứa clor, chất làm dẻo, loại khí clorofluorocarbon, hợp chất hữu – kim loại, hợp chất thơm đa nhân, NOx SO2 ống khói ECD khơng làm hư hại mẫu nên áp dụg sắc ký điều chế Tuy nhiên, nhạy số hợp chất 27 Nguyên tắc sử dụng máy sắc ký lỏng cao áp lưu ý kỹ thuật mẫu phân tích, hệ thống bơm, dung mơi, pha tĩnh, qui trình vận hành? Phương pháp HPLC phương pháp phân tích hóa lý, dùng để tách định lượng thành phần hỗn hợp dựa lực khác chất với pha tiếp xúc khơng hòa lẫn vào nhau: Pha tĩnh (trong cột hiệu cao) pha động (dung môi rửa giải) Khi dung dịch hỗn hợp chất cần phân tích đưa vào cột, chúng hấp phụ phân bố vào pha tĩnh tùy thuộc vào chất cột chất cần phân tích Khi ta bơm dung mơi pha động vào cột tùy thuộc vào lực chất với hai pha, chúng di chuyển qua cột với vận tốc khác dẫn đến phân tách Các chất sau khỏi cột phát phận phát gọi detector chuyển qua xử lý kết Kết cuối hiển thị hình đưa máy in Mẫu phân tích: khơng giới hạn tính chất hợp chất cần phân tích: polymer, hợp chất khơng phân cực, phân cực, ion, bền nhiệt… Hệ thống bơm: bơm có áp suất cao để bơm dung mơi xuyên qua pha tĩnh với vận tốc khoảng 0,5 – 40 ml/phút Dung mơi: Dung mơi phải có độ tinh khiết cao, đạt tiêu chuẩn HPLC, khơng có lẫn buội bẩn, trước gắn vào máy HPLC cần phải khử khí (xục khí heli đặt vào bồn siêu âm) Pha tĩnh: dựa vào thành phần tính chất chất cần nghiên cứu mà dùng pha tĩnh khác nhau, cột pha thường, pha đảo, pha tạo nối, trao đổi ion, lọc gel… Đây hạt có lỗ rỗng siêu nhỏ, có diện tích bề mặt lớn chịu áp suất tương đối cao Qui trình vận hành: chạy máy với dung môi pha động để đuổi hết bọt khí có hệ thống ống dẫn trước cho vào cột Đặt đầy đủ điều kiện sắc ký: cấu hình máy, tỉ lệ dung mơi pha động, bước sóng, thành phần mẫu, 28 Áp dụng cách đọc kết SK lỏng cao áp (HPLC), (xem phổ đồ cụ thể)? 29 Nêu đặc điểm sử dụng thiết bị detector: ultraviolet (UVD) refractive index (RID) HPLC? UVD (đầu dò hấp thu tia tử ngoại): lúc khởi đầu, pha động di chuyển khỏi cột, sắc ký đồ vạch đường với độ hấp thu Khi dung mơi có mang chất phân tích, chất phân tích hấp thu UV khiến cho hấp thu dòng dung mơi thay đổi, ống quang điện làm xuất peak sắc ký đồ UVD sử dụng nhiều HPLC khơng nhạy với nhiệt độ có đáp ứng tuyến tính hấp thu UV với lượng mẫu chất Tuy nhiên kén chọn loại hợp chất phân tích số loại hấp thu UV RID (đầu dò số khúc xạ): ngăn chứa có chứa pha động tinh khiết, vị trí tia tới bề mặt cảm quang xem điểm đối chứng bút ghi vẽ giá trị zero Khi pha động chứa hợp chất giải ly vừa khỏi cột, số khúc xạ ngăn chứa thay đổi, tia sáng bị lệch tia khúc xạ chạm đến mặt phẳng nhạy sáng vị trí khác, làm cho bút ghi vẽ tín hiệu RID khơng làm hư hại mẫu phân tích Tuy nhiên khơng phân tích hợp chất dạng vết, nhạy cảm với thay đổi nhiệt độ Rất khó làm việc giải ly cột sắc ký với pha động mà độ phân cực cho tăng dần tuyến tính khó hiệu chỉnh số khúc xạ mẫu phân tích so với số khúc xạ dòng dung mơi tinh khiết sử dụng làm mẫu đối chứng chảy (đầu dò nhạy cảm pha động có thay đổi thành phần) 30 So sánh đặc điểm cột sắc ký kỹ thuật SK khí SK lỏng cao áp? Cột HPLC làm thép không gỉ, thường dài 10-25 cm có đường kính bên 2,1-4,6 mm Cột sắc ký nhồi thật chặt hạt thật mịn, đường kính ≤ 5µm, đạt tiêu chuẩn >10.000 mâm lý thuyết /mét Cột GC đặc biệt dài Loại cột nhồi làm thủy tinh (Pyrex) thép không gỉ, có đường kính 2-6 mm, dài 1-3 m Loại cột mao quản có đường kính 0,2-0,7 mm dài 10-100 m Cột dài cuộn thành khoanh tròn có đường kính 10-20 cm 31 Điều kiện giúp thu nhận mẫu chất tách ly sau dùng máy HPLC? Sử dụng máy HPLC điều chế (Preparative HPLC) 32 Pha tĩnh Pirkle có đặc điểm cấu tạo sao? Vai trò tiện ích, lưu ý điều kiện dùng? Đặc điểm cấu tạo: tạo thành cách cho dẫn xuất amino acid có tính thủ tính ®-N-(3,5-dinitrobenzoyl)phenylglycin gắn vào hạt aminopropinsilica có kích thước µm ngang qua nối hóa trị lực hút tĩnh điện hai ion ngược dấu Vai trò tiện ích: tách nhiều loại cặp đối phân như: alcol, hợp chất thơm có mang nhóm diol, diacylglycerol, thuốc chữa bệnh có cấu trúc hợp chất dị hoàn,… Điều kiện dùng: để pha tĩnh Pirkle nhận diện hợp chất thủ tính, chất phải có vị trí tương tác với pha tĩnh, phải có vị trí phụ thuộc vào hóa lập thể  ... trình chiết lỏng – lỏng? Lựa chọn dung mơi chiết có độ phân cực phù hợp với chất cần chiết Dung mơi chiết hòa tan tạp chất tốt Lựa chọn dụng cụ (bình lóng) tích phù hợp với thể tích cần chiết. .. trị pI hợp chất, hợp chất có điện tích tồn phần (hợp chất trở thành trung tính), khơng gắn vào nhựa bị giải ly khỏi cột  Giải ly bằg cách tăng dần nồng độ dung dịch giải ly: hỗn hợp mẫu chất gắn... đậm đặc hợp chất có nồng độ lỗng  Phân chia cao thơ thành phân đoạn có tính phân cực khác  Tương tự sắc ký cột, dùng để cô lập hợp chất thiên nhiên cần khảo sát khỏi cao thô ban đầu tinh chất