KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA NUÔI THÂM CANH Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG TRONG NĂM 2007

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA NUÔI THÂM CANH Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA NUÔI THÂM CANH

Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG TRONG NĂM 2007

Sinh viên thực hiện: PHẠM QUỐC PHONG Ngành: NUÔI TRỒNG THỦY SẢN

Chuyên ngành: NGƯ Y Niên khóa: 2004 - 2008

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

THÁNG 09/ 2008

KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN VI KHUẨN GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA NUÔI THÂM CANH

Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG TRONG NĂM 2007

ii

TÓM TẮT

Đề tài nghiên cứu: “Kháng sinh đồ trên vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ trên cá tra nuôi thâm canh ở đồng bằng sông Cửu Long trong năm 2007”

Sau thời gian thực hiện đề tài chúng tôi thu được kết quả:

Trong 30 chủng định danh được E ictaluri (100%) bằng test IDS 14GNR từ

cá tra bệnh được thử độ nhạy trên các loại kháng sinh như: Amoxicillin, Ampicillin, Cefaclor, Colistin, Doxycyclin, Enrofloxacin, Florphenicol, Gentamycin, Kanamycin, Neomycin, Norfloxacin, Oxytetracyclin, Streptomycin, Tetracyclin theo phương pháp đĩa giấy của Kirby-Bauer, thì phần trăm các chủng vi khuẩn nhạy cảm với kháng sinh lần lượt như sau: Ampicillin (96,67%), Doxycyclin (96,67%), Neomycin (96,67%), Florfenicol (93,33%), Amoxicillin (86,67%), Tetracyclin (83,33%), Oxytetracyclin (80%), Enrofloxacin (70%), Streptomycin (23,33%),

Colistin (13,33%) 100 % Edwardsiella ictaluri nhạy cảm với Cefaclor,

Gentamycin, Kanamycin và Norfloxacin

Trong số các chủng vi khuẩn được phân lập, phát hiện có sự kháng với Amoxicillin, Ampicillin, Colistin, Doxycyclin, Enrofloxacin, Florphenicol, Neomycin, Oxytetracyclin, Streptomycin, Tetracyclin

CẢM TẠ

Chúng tôi xin chân thành cảm ơn:

Ban Giám Hiệu cùng toàn thể thầy cô khoa Thủy Sản Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh đã tận tình giảng dạy và truyền đạt kiến thức cho chúng tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài tại trường

Thầy Nguyễn Hữu Thịnh, cô Lưu Thị Thanh Trúc, thầy Trần Hữu Lộc đã tận tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho chúng tôi hoàn thành đề tài này

Ngoài ra tôi xin chân thành cám ơn gia đình và các bạn sinh viên lớp Ngư y

30 đã giúp đỡ và động viên tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài này

Dù rất cố gắng, song đề tài này không tránh khỏi những thiếu sót Do vậy, chúng tôi rất mong nhận được ý kiến đóng góp của quý thầy cô và các bạn

2.1 Đặc Điểm Sinh Học Của Cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) 2

2.3 Đặc Điểm Gây Bệnh Của Edwardsiella ictaluri 5

2.5 Sơ Lược Về Kháng Sinh 8

2.5.1 Định nghĩa 8

2.6 Một Số Kết Quả Ứng Dụng Của Kháng Sinh Đồ 19

2.7 Tình Hình Sử Dụng Kháng Sinh Ở Đồng Bằng Sông Cửu Long 20

Chương 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 22

3.1 Thời Gian Và Địa Điểm 22

3.1.2 Địa điểm 22 3.2 Phương Pháp Phân Lập Vi Khuẩn 22

3.6.6 Dụng cụ và hóa chất 31

3.6.7 Quy trình thực hiện 31

3.6.8 Phương pháp thống kê kết quả 34

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35

4.2 Kết Quả Kháng Sinh Đồ 37

4.2.1 Tính nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh 37

4.2.2 Tính kháng và đa kháng của vi khuẩn đối với kháng sinh 40

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44

5.1 Kết Luận 44 5.2 Đề Nghị 44

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

ASTS : Antibiotic Sentivity Testing Study

Ax : Amoxicillin

BHIA : Brain Heart Infusion Agar

CFU : Colony Forming Unit

E ictaluri : Edwardsiella ictaluri

ELISA : Enzyme Linked Immunosorbant Assay

MHA : Muller Hinton Agar

MIC : Minimum Inhibitory Concentration

MR : Methyl Red

NA : Nutrient Agar

Nr : Norfloxacin

ONPG : O- Nitrophenyl Beta- D- Galactopyrannoside

Ox : Oxytetracyclin

PAD : Phenyl Alanin Deaminase

PCR : Polymerase Chain Reaction

DANH SÁCH CÁC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ

Bảng 3.1 Thứ tự cho các đĩa giấy sinh hóa vào các giếng 28

Bảng 3.3 Tiêu chuẩn đánh giá đường kính vùng ức chế 34

Bảng 4.1 Kết quả định danh E ictaluri bằng kit IDS 14GNR 36

Bảng 4.3 Tỷ lệ đa kháng với kháng sinh của E ictaluri 42

Biểu đồ 4.1 Phần trăm về tính đa kháng của E ictaluri 42

x

DANH SÁCH ĐỒ THỊ VÀ HÌNH ẢNH

Đồ thị 4.2 Đồ thị thể hiện tính đơn kháng của Edwardsiella ictaluri 40

Hình 2.1 Cấu trúc hóa học của Florphenicol 8

Hình 2.3 Cấu trúc hóa học của Gentamycin 10

Hình 2.4 Cấu trúc hóa học của Colistin 10

Hình 2.6 Cấu trúc hóa học của Tetracyclin 12

Hình 2.7 Cấu trúc hóa học của Oxytetracyclin 12

Hình 2.8 Cấu trúc hóa học của Amoxicillin 13

Hình 2.9 Cấu trúc hóa học của Ampicillin 14

Hình 2.10 Cấu trúc hóa học của Streptomycin 15

Hình 2.11 Cấu trúc hóa học của Neomycin 16

Hình 2.12 Cấu trúc hóa học của Norfloxacin 16

Hình 2.13 Cấu trúc hóa học của Enrofloxacin 17

Hình 2.14 Cấu trúc hóa học của Doxycyclin 17

Hình 3.1 Quá trình tráng huyền dịch vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 30

Hình 4.1 Hình dạng khuẩn lạc Edwardsiella ictaluri trên đĩa thạch BHI 33

Hình 4.4 Hình ảnh của vòng vô khuẩn quanh đĩa kháng sinh 35

Chương 1 GIỚI THIỆU 1.1 Đặt Vấn Đề

Do vị trí và vai trò của ngành Thủy Sản trong cơ cấu các ngành kinh tế quốc dân ngày càng chiếm vị trí quan trọng, đặc biệt là ở các tỉnh đồng bằng sông Cửu Long, thì việc tăng sức sản xuất bằng các biện pháp kỹ thuật như nuôi thâm canh mật độ cao đã phát sinh dịch bệnh Trong số những bệnh do virus, vi khuẩn, nấm,

ký sinh trùng thì bệnh do vi khuẩn rất thường gặp, gây thiệt hại đáng kể cho người nuôi cá Đặc biệt , bệnh do vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ trên cá tra nuôi

Bệnh mủ gan được phát hiện lần đầu tiên tại Việt Nam năm 1998 Đây là một bệnh gây thiệt hại nghiêm trọng cho các hộ nuôi cá tra, basa ở Đồng Bằng Sông Cửu Long Tỷ lệ xuất hiện bệnh mủ gan trên cá tra khoảng (61%) không cao hơn nhiều so với các bệnh khác như bệnh đỏ mỏ đỏ kỳ (68,3%), bệnh phù đầu (51,2%) (Trần Anh Dũng, 2005) Nhưng tỷ lệ chết là cao nhất (60 - 80%) (Crumlish và ctv, 2002) làm giảm năng suất đáng kể trong các hệ thống nuôi

Tìm hiểu về bệnh mủ gan trên cá tra, basa nhằm tìm ra biện pháp phòng trị bệnh hiệu quả là mối quan tâm hàng đầu của các nhà nuôi cá

Để chẩn đoán đúng bệnh và giảm thiểu tỷ lệ cá chết thì nhiều phương pháp

đã được áp dụng Việc điều trị bệnh bằng hóa chất và thuốc kháng sinh là không tránh khỏi Và để xác định tính nhạy cảm của vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ với một số loại kháng sinh, được sự đồng ý của khoa Thủy Sản Trường Đại Học Nông

Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài:” Kháng sinh đồ trên vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ trên cá tra nuôi thâm canh ở đồng bằng sông Cửu Long trong năm 2007”

1.2 Mục Tiêu

Khảo sát tính nhạy cảm của vi khuẩn gây bệnh gan thận mủ đối với một số kháng sinh Trên cơ sở đó có thể gợi ý một số kháng sinh có khả năng áp dụng trong

2

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Đặc Điểm Sinh Học Của Cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus)

2.1.1 Phân loại và hình thái

a Phân loại

Theo hệ thống phân loại của Tyson Roberts và Vidthayvanon, 1991 thì cá tra

có vị trí phân loại như sau

Lớp: Osteichthyes

Bộ: Siluriformes

Họ: Pangasiidae Giống: Pangasianodon

Loài: Pangasianodon hypophthalmus (Sauvage, 1878)

b Hình thái

Cá tra là cá da trơn, thân dài, lưng xám đen, bụng hơi bạc, miệng rộng, có 2 đôi râu dài Cá tra sống chủ yếu trong nước ngọt, có thể sống được ở vùng nước hơi

lợ (độ mặn 7 – 10‰), có thể chịu đựng được nước phèn với pH >5, dễ chết ở nhiệt

độ thấp dưới 15 0C, nhưng chịu nóng tới 39 0C Cá tra có số lượng hồng cầu trong máu nhiều hơn các loài cá khác Cá có cơ quan hô hấp phụ và còn có thể hô hấp bằng bóng khí và da nên chịu đựng được môi trường nước thiếu oxy hòa tan Tiêu hao oxy và ngưỡng oxy của cá tra thấp hơn 3 lần so với cá mè trắng (Trích từ: http://www.nghean.gov.vn)

2.1.2 Phân bố

Cá tra phân bố ở lưu vực sông Mê Kông, có mặt ở cả 4 nước Lào, Việt Nam, Campuchia và Thái Lan Ở Thái Lan còn gặp cá tra ở lưu vực sông Mekloong và Chao Phraya Ở nước ta những năm trước đây khi chưa có cá sinh sản nhân tạo,

cá bột và cá giống của cá tra được vớt trên sông Tiền và sông Hậu Cá trưởng thành chỉ thấy trong ao nuôi, rất ít gặp trong tự nhiên địa phận Việt Nam, do cá

có tập tính di cư ngược dòng sông Mê Kông để sinh sống và tìm nơi sinh sản tự nhiên Khảo sát chu kỳ di cư của cá tra ở địa phận Campuchia cho thấy cá ngược dòng từ tháng 10 đến tháng 5 và di cư về hạ lưu từ tháng 5 đến tháng 9 hàng

năm

2.1.3 Môi trường sống

Cá tra sống chủ yếu trong các thủy vực nước ngọt, có thể sống được ở độ mặn dưới 10‰ Cá có cơ quan hô hấp phụ nên có thể sống được trong điều kiện nước có hàm lượng oxy thấp, nơi nước tù Chịu được pH = 4 – 5, nhiệt độ sống thích hợp 26 – 30 0C

2.1.4 Tập tính ăn

Đây là loài cá ăn tạp thiên về động vật và cũng dễ dàng chuyển đổi loại thức

ăn Khi phân tích thức ăn trong đường ruột cá đánh bắt ngoài tự nhiên thành phần thức ăn được tìm thấy như sau

Giáp xác: 2,3% (Theo D.Menon và P.I.Cheko, 1955)

Trong điều kiện nuôi ao, cá tra có khả năng thích nghi với nhiều loại thức ăn khác nhau như mùn bả hữu cơ, cám, rau, thức ăn hỗn hợp, phân (Phạm Văn Khánh, 2000)

4

tăng trọng nhanh hơn, có khi đạt tới 5 - 6 kg/năm tùy thuộc môi trường sống và sự cung cấp thức ăn cũng như loại thức ăn có hàm lượng đạm nhiều hay ít (Nguồn: http://www.nghean.gov.vn)

2.1.6 Sinh sản

Tuổi thành thục của cá đực là 2 tuổi và cá cái 3 tuổi, trọng lượng cá thành thục lần đầu từ 2,5 - 3 kg Trong tự nhiên chỉ gặp cá thành thục trên sông ở địa phận của Campuchia và Thái Lan Năm 1972 Thái Lan công bố quy trình sinh sản nhân tạo cá tra với phương pháp nuôi vỗ cá bố mẹ thành thục trong ao đất

Cá tra không có cơ quan sinh dục phụ (sinh dục thứ cấp), nên nếu chỉ nhìn hình dáng bên ngoài thì khó phân biệt được cá đực, cái Ở thời kỳ thành thục, tuyến sinh dục ở cá đực phát triển lớn gọi là buồng tinh hay tinh sào, ở cá cái gọi là buồng trứng hay noãn sào Tuyến sinh dục của cá tra bắt đầu phân biệt được đực cái từ giai đoạn II tuy màu sắc chưa khác nhau nhiều Các giai đoạn sau, buồng trứng tăng về kích thước, hạt trứng màu vàng, tinh sào có hình dạng phân nhánh, màu hồng chuyển dần sang màu trắng sữa Hệ số thành thục của cá tra khảo sát được trong tự nhiên từ 1,76 – 12,94 (cá cái) và từ 0,83 – 2,1 (cá đực) ở cá đánh bắt tự nhiên trên sông cỡ từ 8 – 11 kg (Nguyễn Văn Trọng, 1989) Trong ao nuôi vỗ, hệ số thành thục

cá tra cái có thể đạt tới 19,5%

Mùa vụ thành thục của cá trong tự nhiên bắt đầu từ tháng 5 - 6 dương lịch,

cá có tập tính di cư đẻ tự nhiên trên những khúc sông có điều kiện sinh thái phù hợp thuộc địa phận Campuchia và Thái Lan, không đẻ tự nhiên ở phần sông của Việt Nam Cá đẻ trứng dính vào giá thể thường là rễ của loài cây sống ven sông Gimenila asiatica, sau 24 giờ thì trứng nở thành cá bột và trôi về hạ nguồn

Trong sinh sản nhân tạo, ta có thể nuôi thành thục sớm và cho đẻ sớm hơn trong tự nhiên (từ tháng 3 dương lịch hàng năm), cá tra có thể tái phát dục 1 - 3 lần trong một năm

Số lượng trứng đếm được trong buồng trứng của cá gọi là sức sinh sản tuyệt đối Sức sinh sản tuyệt đối của cá tra từ 200 ngàn đến vài triệu trứng Sức sinh sản tương đối có thể tới 135 ngàn trứng/kg cá cái Kích thước của trứng cá tra tương đối nhỏ và có tính dính Trứng sắp đẻ có đường kính trung bình 1 mm Sau khi đẻ ra và

hút nước đường kính trứng khi trương nước có thể tới 1,5 - 1,6 mm (Nguồn: http://www.nghean.gov.vn)

2.2 Lịch Sử Bệnh Do Edwardsiella ictaluri

Trích từ: Nguyễn Hữu Thịnh, 2007 Bài giảng: “Bệnh cá 2” Đại Học Nông

Lâm Thành phố Hồ Chí Minh

Bệnh được ghi nhận trên cá da trơn ở Mỹ năm 1976

1981: lần đầu tiên bệnh được mô tả nguyên nhân do vi khuẩn Tên bệnh là bệnh nhiễm trùng huyết và viêm ruột hay còn gọi là bệnh lỗ đầu

1987: bệnh xảy ra trên cá trê ở Thái Lan

1992: bệnh được phát hiện trên cá tra, basa nuôi ao, bè ở Việt Nam

Bệnh này xuất hiện lần đầu tiên trên cá tra nuôi ở đồng bằng sông Cửu Long vào cuối năm 1998 (Ferguson và cộng sự, 2001)

2001: bệnh được gọi là bệnh mủ gan hay bệnh gan thận mủ

Bệnh gây thiệt hại trong các ao nuôi cá tra hương (cỡ từ 4 – 6 cm) đến 5 – 6 tháng tuổi, tỷ lệ tử vong của cá từ 60 – 70 %, có trường hợp 100 %

2.3 Đặc Điểm Gây Bệnh Của Edwardsiella ictaluri

Trích từ: http://www.vemedim.vn

Bệnh thường xảy ra nhiều vào mùa mưa lũ kéo dài đến mùa khô Thời điểm phát triển bệnh và mức độ thiệt hại khác nhau theo từng năm

E.ictaluri có thể nhiễm cho cá bằng hai đường khác nhau Vi khuẩn trong

nước có thể, qua đường mũi của cá xâm nhập vào cơ quan khứu giác và di chuyển vào dây thần kinh khứu giác, sau đó vào não (Miyazaki và Plumb 1985; Shotts và

ctv,1986) Bệnh lan rộng từ màng não đến sọ và da E ictaluri cũng có thể xâm

nhiễm qua đường tiêu hoá qua niêm mạc ruột vào máu gây nhiễm trùng máu (Shotts

và ctv,1986) Bằng đường này thì vi khuẩn vào mao mạch trong biểu bì gây hoại tử

và mất sắc tố của da Cá da trơn còn nhiễm E.ictaluri qua đường miệng gây nhiễm

khuẩn ruột Bệnh tiến triển gây viêm ruột, viêm gan và viêm cầu thận trong vòng 2 tuần sau khi nhiễm bệnh ( Shotts và ctv, 1986)

6

Tóm lại, vi khuẩn E ictaluri có thể xâm nhập vào cơ thể cá từ môi trường

nước qua da, qua mang cá và qua miệng bằng đường thức ăn gây bệnh mủ gan cho

cá

2.4 Bệnh Gan Thận Mủ Trên Cá Tra

Trích từ: Nguyễn Hữu Thịnh, 2007 Bài giảng “Bệnh cá 2” Đại Học Nông

Lâm TP.HCM

2.4.1 Tác nhân gây bệnh

Bệnh mủ gan (bệnh đốm trắng trên gan, thận) trên cá tra do nhóm vi khuẩn

Edwardsiella ictaluri gây ra (Crumlish và ctv, 2002)

Edwardsiella ictaluri là vi khuẩn gây bệnh bắt buộc Nó có khả năng gây

bệnh cho cá khỏe, đây là vi khuẩn kén vật chủ

Edwardsiella thuộc họ Enterobacteriaceae Vi khuẩn này là vi khuẩn Gram

âm, di động yếu Là trực khuẩn, kích thước 0,75 – 1,25 µm, Oxidase (-) , lên men và sinh hơi Glucose, H2S (-) tính, Indol (-) tính, không hình thành bào tử Có từ 1 – 3

Plasmid liên kết với E ictaluri (Speyerer và Boyle, 1987; Newton và ctv,1988)

Nhiệt độ tốt nhất cho sinh trưởng là 25 – 30 0C Bị ảnh hưởng mạnh ở 60 0C trong 1 giờ Bị giết chết bởi ethanol hoặc isopropanol 70%, ammonia bậc 4, aldehyde, acid mạnh và bazơ, thuốc tẩy rửa (Chlorine 540 mg/l và các hợp chất của Iod 250 ppm) trong 30 phút Có thể sống 3 – 4 tháng ở nước ao, bùn (Nguồn: http://www.oie.int)

Mùa vụ xuất hiện bệnh tháng 7 – 12, đặc biệt sau khi kết thúc mùa lũ Cao điểm xuất hiện bệnh thường xảy ra từ tháng 9 – 12 hàng năm, vào thời kỳ thời tiết chuyển mát (Nguyễn Hữu Thịnh, Trương Thanh Loan; 2007)

Treo lơ lửng cơ thể ở mặt nước

Bỏ ăn ngay sau khi nhiễm khuẩn

2.4.3 Triệu chứng

Cá bệnh có biểu hiện kém ăn hoặc bỏ ăn

Triệu chứng bên ngoài: xuất huyết quanh hậu môn, miệng, bụng, gốc vây, bụng hơi trương to Tích dịch dưới da vùng sọ (phù đầu) Lồi mắt, mang nhạt màu

Triệu chứng bên trong: mảng trắng trên gan, thận, lách với đường kính 1 – 3

mm Đây là bệnh tích điển hình của bệnh gan thận mủ Bệnh nặng phát triển thành

mủ Dịch viêm xoang bụng trong, hơi vàng, có lẫn máu Xuất huyết điểm trên ruột,

cơ, mô mỡ Lòng ruột có chứa dịch lẫn máu

2.4.4 Chẩn đoán

Việc điều trị chỉ có hiệu quả khi phát hiện sớm bệnh Do đó, trong quá trình nuôi cần thường xuyên quan sát những biểu hiện của cá để phát hiện bệnh và xử lý kịp thời Giai đoạn đầu vài con tách đàn bơi lờ đờ ở đầu bè hoặc dạt về góc bè, dọc

bờ ao đôi lúc cá giảm ăn Bắt khoảng 5 – 10 con kiểm tra các đốm trắng ở gan, thận

và tỳ tạng (Trích từ: Đặng Thị Hoàng Oanh, 2007 Bài giảng: “Quản lý dịch bệnh thủy sản” Trường Đại Học Cần Thơ)

Phân lập vi khuẩn từ gan, thận, lách → nuôi cấy trên môi trường TSA + 5% máu, BHIA → Ủ 28 – 30 0C, 48 giờ → khuẩn lạc trắng nhỏ

Kit API 20E

Miễn dịch: kháng huyết thanh, ELISA

PCR

2.4.5 Phòng bệnh

Quản lý môi trường nước tốt, tránh làm cá xây xát

Nên cho cá ăn thức ăn nấu chín hoặc thức ăn viên để phòng bệnh xâm nhập qua đường thức ăn

Bổ sung Vitamin C, Prozyme, Vime Glucan nâng cao sức đề kháng cho cá (Trích từ: http://www.khoahocchonhanong.com.vn/tintuc)

Sử dụng vaccine bị giết chết bằng formalin cấp cho cá bằng phương pháp ngâm và cho ăn đem lại đáp ứng kháng thể trong cá nhưng kháng thể tạo ra ít, không đáp ứng miễn dịch trong thời gian dài và không hiệu quả (C A Shoemaker

8

và P H Klesius,1997; David J.Wise và ctv, 2000; Mark L Lawrence và ctv, 1997; Ronald L Thune và ctv, 1997)

2.4.6 Trị bệnh

Theo các nghiên cứu gần đây vi khuẩn E ictaluri gây bệnh mủ gan cá tra,

basa, cá trê rất nhạy với Florphenicol

Đầu năm 2006, Khoa Thủy sản Trường Đại học Cần Thơ công bố kết quả nghiên cứu tìm kiếm các loại thuốc kháng sinh thay thế các loại thuốc cấm, đã công nhận Florfenicol là kháng sinh đặc trị bệnh này Sử dụng Florphenicol với liều 10 mg/kg thể trọng/ngày Ngưng cấp thuốc cho cá trước khi thu hoạch 12 ngày

Oxytetracyclin với liều 55 mg/kg thể trọng/ngày

2.5 Sơ Lược Về Kháng Sinh

2.5.1 Định nghĩa

Kháng sinh là hợp chất hữu cơ được chiết xuất từ vi sinh vật (nấm, vi khuẩn…) hoặc bằng con đường tổng hợp hóa học, có khả năng kìm hãm sự phát triển của vi khuẩn hoặc tiêu diệt vi khuẩn dựa trên cơ sở kết hợp với một điểm tiếp nhận (receptor)

Tế bào động vật đa bào và tế bào virus không có các receptor liên kết với kháng sinh Vì vậy kháng sinh không có tác dụng trong việc điều trị bệnh truyền nhiễm do virus (Theo Nguyễn Như Pho, 2007)

2.5.2 Đặc điểm của một số kháng sinh

Trích từ: Nguyễn Như Pho, 2007 Bài giảng “Thuốc và hóa chất dùng trong thủy sản” Đại Học Nông Lâm TP.HCM và một số trang web khác

a Florphenicol

Công thức phân tử của Florphenicol là C12H14Cl2FNO4S Cấu trúc hóa học của Florphenicol

Hình 2.1: Cấu trúc hóa học của Florphenicol Nguồn: http://usa.com

www.aquaflor-Florphenicol là kháng sinh mới, phổ rộng, hiệu quả cao trên nhiều loại vi khuẩn đã lờn với các kháng sinh khác Điều trị rất hiệu quả các bệnh phổ biến trên

cá như: bệnh gan-thận có mủ, xuất huyết, đốm đỏ, lở loét, trắng da-tuột nhớt, thối

đuôi, thối vây, gây ra bởi các vi khuẩn: Edwardsiella ictaluri, Aeromonas, Pseudomonas, Vibrio, Flexibacter, thường gặp trên cá tra, cá basa, cá trê, cá lóc

Phổ kháng khuẩn trên vi khuẩn Gram (+) lẫn Gram (-) Rất bền, ở nhiệt độ đun nấu vẫn còn

Có khả năng khuếch tán vào tất cả các mô, xoang khi dùng qua đường uống, không có vị đắng như Chloramphenicol

Được chỉ định trong hầu hết các bệnh nhiễm trùng của tôm, cá Có thể kết hợp với Doxycyclin

Liều lượng sử dụng: 10 mg/kg thể trọng/ngày (Nguồn: Nguyễn Hữu Thịnh,

2007 Bài giảng “Bệnh cá 2” Đại học Nông Lâm TP HCM.)

Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

b Cefaclor

Công thức phân tử của Cefaclor: C15H14ClN3O4S

Cấu trúc hóa học của Cefaclor

Hình 2.2: Cấu trúc hóa học của Cefaclor Nguồn: http://www.drugbank.ca

Hấp thụ qua ruột 80%, nồng độ cao trong mật và bài tiết qua thận (Theo Bùi Kim Tùng, 2001)

Cefaclor dùng để xử lý các trường hợp nhiễm trùng gây ra bởi vi khuẩn như: viêm đường hô hấp và tai, da, hầu và nhiễm trùng hệ thống bài tiết

Phổ kháng khuẩn rộng, diệt được cả vi khuẩn Gram dương hiếu khí như:

Staphylococci, Streptococcus pneumoniae, và Streptococcus pyogenes Và vi khuẩn Gram âm hiếu khí như: Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Klebsiella sp, và Proteus mirabilis

Độ hòa tan trong nước theo FDA là 8,6 mg/ml

Ở thú nếu sử dụng Cefaclor quá liều sẽ gây ra các triệu chứng như: tiêu chảy, buồn nôn, rối loạn dạ dày (Trích từ: pharmacycode.com)

c Gentamycin

Kháng sinh chiết từ nấm Micromonospora purpurea, dạng bột trắng, tan

trong nước

Cấu trúc hóa học của Gentamycin

Hình 2.3: Cấu trúc hóa học của Gentamycin Nguồn: http://

commons.wikimedia.org

Phổ diệt khuẩn trên vi khuẩn Gram (+), Gram (-) (kể cả Pseudomonas và Proteus), tuy nhiên không có hiệu quả đối với vi khuẩn kỵ khí

Không hấp thu qua đường tiêu hóa, hấp thu tốt qua đường tiêm Phân bố tập trung ở thận, đạt nồng độ trị liệu ở mang, phúc mạc, cơ quan sinh dục, cơ Bài thải chủ yếu qua thận

Chỉ định trị các bệnh nhiễm trùng toàn thân

d Colistin

Kháng sinh chiết từ Aerobacillus colitinus Dạng bột kết tinh trắng, tan tốt

trong nước, bền ở trạng thái khô và dung dịch

Cấu trúc hóa học của Colistin

Hình 2.4: Cấu trúc hóa học của Colistin Nguồn: http://en.wikipedia.org Đây là một polypeptid có công thức phức tạp

Không hấp thu qua đường tiêu hóa Ít dùng qua đường tiêm do độc tính cao Tác động sát khuẩn trên vi khuẩn Gram (-)

Chỉ định: Viêm ruột, khi cấp qua đường cho ăn

Liều dùng: tôm 350 ppm, cá: 150 ppm trong thức ăn

Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

e Kanamycin

Cấu trúc hóa học của Kanamycin

Hình 2.5: Cấu trúc hóa học của Kanamycin Nguồn: http://

www.chemblink.com

Kanamycin là kháng sinh nhóm Aminoglycoside, sản sinh bởi Streptomyces kanamyceticus Thuốc có tác động trên vi khuẩn Gram (+), Gram (-) và hiệu quả

Thuốc không hấp thụ qua ruột, khi tiêm thuốc khuếch tán tốt và nhanh, Kanamycin bị chuyển hóa ít khoảng 20%

Phổ kháng khuẩn rộng trên vi khuẩn Gram (+) và Gram (-) như:

Staphylococcus, E.coli và Klebsiella sp

Nên tránh kết hợp với các thuốc gây độc thận và độc tai, như Vancomycin, Capreomycin và Enviomycin, do khả năng tăng độc tính lên thận và tai

Tránh trộn chung với các thuốc khác vì Kanamycin có thể gây nhuộm màu hay mất hiệu lực

Sau khi pha thuốc nên dùng ngay, nếu không phải bảo quản ở nhiệt độ phòng

Bảo quản thuốc ở nhiệt độ phòng

Nguồn từ: ykhoa.net

f Tetracyclin

Công thức phân tử: C22H24N2O8.xH2O Cấu trúc hóa học của Tetracyclin

Hình 2.6: Cấu trúc hóa học của Tetracyclin Nguồn: http:// berlin.de

www.zct-Tetracyclin là một kháng sinh phổ rộng có tác dụng kìm khuẩn do ức chế quá trình tổng hợp protein của vi khuẩn Dạng bột, màu vàng tan tốt trong nước

Tetracyclin có tác dụng trên nhiều vi khuẩn gây bệnh, cả Gram âm và Gram

dương, hiếu khí và kỵ khí; thuốc cũng có tác dụng trên Chlamydia, Mycoplasma, Rickettsia…

Các thuốc chống acid chứa nhôm, Calci khi dùng đồng thời sẽ làm giảm tác dụng điều trị của Tetracyclin

Tính hấp thu 60 %, dùng trị nhiễm trùng toàn thân

Liều sử dụng trong thức ăn: cá: 600 – 700 ppm, tôm: 1000 – 1200 ppm

Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

g Oxytetracyclin

Công thức phân tử: C22H24N2O9.2H2O Cấu trúc hóa học của Oxytetracyclin

Hình 2.7: Cấu trúc hóa học của Oxytetracyclin

Với R1= -H; R2= -CH3; R3= -OH; R4= -OH

Nguồn: http://commons.wikimedia.org

Oxytetracylin là một kháng sinh phổ rộng được sử dụng nhiều trong thuốc thú y, phần nào do nó có độc tính thấp và có khả năng phân bố dễ dàng ở khắp nơi trong cơ thể và vào trong các mô (Chambers, 2001) Oxytetracyclin và các Tetracyclin khác chủ yếu kìm hãm vi khuẩn và ức chế sự tổng hợp protein của vi khuẩn bằng cách ngăn cản sự kết hợp giữa phức hợp aa-tARN với Ribosome của vi khuẩn Oxytetracyclin dùng để trị xuất huyết nhiễm trùng máu và bệnh do

Pseudomonas ở cá da trơn tại nhiệt độ trên 16 0C (FDA-CVM, 2007) Liều dùng được FDA chấp nhận là 55 – 83 mg/kg thể trọng/ngày liên tục trong 10 ngày, và thời gian ngưng thuốc 21 ngày (Ron A Miller, Ph.D., 2007)

(Nguồn:http://drum.umd.edu/dspace/bitstream/1903/7256/1/umi-umd-4656.pdf)

Kháng sinh được chiết từ nấm Streptomyces rimosus, dạng bột màu vàng

nhạt, tan trong nước

Hấp thu tốt qua đường uống và tiêm chích Phân bố khắp nơi trong cơ thể Bài thải chủ yếu qua thận, một phần qua mật rồi xuống ống tiêu hóa

Tác động kìm vi khuẩn Gram (+), Gram (-), Mycoplasma

Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

h Amoxicillin

Công thức phân tử: C16H19N3O5S Cấu trúc hóa học của Amoxicillin

Hình 2.8: Cấu trúc hóa học của Amoxicillin Nguồn: http://www.ganfyd.org

Hấp thu tốt qua đường uống (80%)

Phổ kháng khuẩn trên vi khuẩn Gram (+) và Gram (-), Leptospira, tuy nhiên không có hiệu quả đối với Pseudomonas và các chủng Staphylococcus sản sinh penicillinase

Tác dụng nhanh, mạnh hơn Ampicillin và các tiền chất Ampicillin Khả năng hấp thụ của thuốc không bị ảnh hưởng bởi thức ăn

Chỉ định: các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn Gram (+), Gram (-)

Liều dùng trong thức ăn: tôm: 750 – 1000 ppm; cá: 500 – 600 ppm

Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

i Ampicillin

Công thức phân tử: C16H19N3O4S Cấu trúc hóa học của Ampicillin

Hình 2.9: Cấu trúc hóa học của Ampicillin Nguồn: http://

www.bmb.leeds.ac.uk

Đây là Penicillin đầu tiên trị được khuẩn Gram (-), Ampicillin làm hại tạp khuẩn ruột Thức ăn làm giảm hấp thụ thuốc (Theo Bùi Kim Tùng, 2001)

Tính chất: Dạng bột màu trắng, tan trong nước Bền trong môi trường nước

và pH thấp Hấp thu chủ yếu qua đường ruột nhưng kém (24 - 40%)

Đường cấp: cho ăn, tắm

Phổ kháng khuẩn tương tự như Amoxicillin

Chỉ định các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn Gram (+), Gram (-)

Liều dùng trong thức ăn: tôm: 750 – 1000 ppm; cá: 500 – 600 ppm

Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

pH tối ưu từ 3 – 8, pH<3 hay pH>8 có thể phá hủy thuốc

Nhiệt độ và các tác nhân oxy hóa khử, các hợp chất có nhóm –SH cũng làm

hư hỏng Streptomycin

Muối Na, K, Phosphate, Tartrate làm giảm hoạt tính

Phổ kháng khuẩn hẹp, tác động trên vi khuẩn Gram (-), Leptospira Ít tác

dụng trên vi khuẩn kỵ khí

Do tính phân cực, các aminoside tan tốt trong nước

Không hấp thu qua đường tiêu hóa Đường uống chỉ cho tác động tại chổ

Có thể tiêm để trị nhiễm trùng toàn thân

Chỉ định: Nhiễm trùng đường ruột (tôm: 1200 – 1500 ppm, cá: 400 – 500 ppm) Nhiễm trùng toàn thân (ở cá tiêm 30 mg/kg thể trọng/ngày)

k Neomycin

Công thức phân tử: C23H46N6O13 Cấu trúc hóa học của Neomycin

Hình 2.11: Cấu trúc hóa học của Neomycin Nguồn: http://

home.caregroup.org/ /Drugs/Neomycin.htm

Phổ kháng khuẩn hẹp, tác động trên vi khuẩn Gram (-) ( trực khuẩn Gram (-) hiếu khí)

Do tính phân cực Neomycin tan tốt trong nước

Không hấp thu qua đường tiêu hóa

Đường uống chỉ có tác động tại chổ

Không dùng đường tiêm do độc tính cao

Chỉ định: nhiễm trùng đường ruột (tôm: 600 – 700 ppm, cá: 400 – 500 ppm) Đây là kháng sinh hạn chế sử dụng trong sản xuất kinh doanh thủy sản kèm theo quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

l Norfloxacin

Công thức phân tử: C16H18FN3O3 Cấu trúc hóa học của Norfloxacin

Tác động sát khuẩn trên vi khuẩn Gram (+), Gram (-), Mycoplasma

Chỉ định: nhiễm trùng toàn thân, đường tiêu hóa

Liều dùng: tôm 300 – 400 ppm, cá: 250 – 300 ppm

Đây là kháng sinh đã bị Bộ Thủy Sản cấm sử dụng theo quyết định số 26/2005/QĐ-BTS ngày 18/08/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

m Enrofloxacin

Công thức phân tử: C19H22FN3O3 Cấu trúc hóa học của Enrofloxacin

Hình 2.13: Cấu trúc hóa học của Enrofloxacin Nguồn: http://

www.drugs.com

Phổ kháng khuẩn trên vi khuẩn Gram (-) và Gram (+) Chống lại hoạt động

của Mycoplasma spp, Pasteurella multocida, Haemophilus somnus

Enrofloxacin ngăn chặn quá trình tổng hợp của DNA đối với vi khuẩn, kết quả làm cho vi khuẩn có thể bị chết

Liều sử dụng cho động vật: 2,5 – 5 mg/kg thể trọng/ngày liên tục trong 3 ngày

Nguồn: http:www.drugs.com/vet/baytril-100-enrofloxacin-10

Đây là kháng sinh đã bị Bộ Thủy Sản cấm sử dụng theo quyết định số 26/2005/QĐ-BTS ngày 18/08/2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản

n Doxycyclin

Công thức phân tử: C22H24N2O8 Cấu trúc hóa học của Doxyxyclin

Hình 2.14: Cấu trúc hóa học của Doxycyclin Nguồn: http:// berlin.de

www.zct-Doxycyclin hấp thụ tốt và không bị ảnh hưởng bởi thức ăn Thuốc dễ tan trong lipid nên dễ khuếch tán vào dịch não tủy và mật Chủ trị các bệnh nhiễm trùng toàn thân (Theo Bùi Kim Tùng, 2001)

Doxycyclin là kháng sinh phổ rộng, có tác dụng kìm khuẩn Thuốc ức chế vi khuẩn tổng hợp protein do gắn vào tiểu đơn vị 30 S và có thể cả với 50 S của Ribosom vi khuẩn nhạy cảm; thuốc cũng có thể gây thay đổi ở màng bào tương Doxycyclin có phạm vi kháng khuẩn rộng với vi khuẩn ưa khí và kỵ khí Gram dương và Gram âm, và cả với một số vi sinh vật kháng thuốc tác dụng với thành tế

bào, như Rickettsia, Coxiella burnetii, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia spp., Legionella spp., Ureaplasma, một số Mycobacterium không điển hình, và Plasmodium spp.,

Kháng các Tetracyclin: Vi sinh vật kháng với một Tetracyclin thì cũng kháng với các Tetracyclin khác Escherichia coli và có thể cả những chủng vi khuẩn khác

đã kháng các Tetracyclin chủ yếu qua trung gian plasmid Theo báo cáo ASTS

(1997 - 1998), ở Việt Nam, nhiều chủng vi khuẩn như E.coli, Enterobacter, Shigella flexneri, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus đã kháng Doxycyclin

Nguồn:

http://www.cimsi.org.vn/cqldvn/Duoc%20thu/Documents/Doxycyclin.htm_44k

Tính hấp thu: 95%, dùng trị nhiễm trùng toàn thân

Liều dùng trong thức ăn: tôm :500 – 600 ppm, cá: 300 – 400 ppm

2.6 Một Số Kết Quả Ứng Dụng Của Kháng Sinh Đồ

Florphenicol (42,5%), Amoxicilin (40,4%), Tetracyclin (31,9%), Doxycyclin (27,7%)

 Theo Trương Ngọc Loan và cộng sự, 2007 Edwardsiella ictaluri nhạy với

các kháng sinh như sau: Doxycyclin (63,8%), Amoxicilin (59,6%), Tetracyclin (48,9%), Florphenicol (27,7%), Colistin (2,1%)

 Theo Waltman và Shotts, 1984 Tỷ lệ chủng E ictaluri phân lập từ cá nheo

của Mỹ kháng với Colistin là 95,3% và 100% chủng nhạy cảm với Sulfamethoxazole/Trimethoprim

 Theo Nguyễn Hữu Thịnh, Trương Thanh Loan, 2007 “Phân lập và khảo sát

đặc điểm kháng kháng sinh của Edwardsiella ictaluri gây bệnh gan thận mủ trên

cá tra, Pangasius hypophthalmus, nuôi thâm canh” Kết quả khảo sát tính đề kháng với kháng sinh trên 47 chủng E ictaluri như sau:

Sulfamethoxazole/Trimethoprim 100% (47/47), Amoxicillin 40,4% (19/47), Doxycyclin 27,7% (13/47), Colistin 97,9% (46/47), Oxytetracyclin 31,9% (15/47), Florfenicol 42,5% (20/47)

 Theo Trần Mai Hải Yến, 2005 “Phân lập hệ vi khuẩn sống cộng sinh trên cá

tra (Pangasius hyphthalmus) và thử nghiệm kháng sinh đồ” Kết quả thử nghiệm

kháng sinh đồ trên mẫu cá cho thấy vi khuẩn có tỷ lệ kháng trên 30% với 4 loại kháng sinh Ampicillin, Tetracyclin, Trimethoprim/Sulfamethoxazole và Nalidixic Acid Chloramphenicol và Nitrofurantoin có tỷ lệ kháng trên 20% Đồng thời kiểm tra tính đa kháng của vi khuẩn trên cá thì thấy gần 70% vi khuẩn có tính đa kháng

Ở mẫu bùn tỷ lệ kháng với các loại kháng sinh thử nghiệm còn thấp ngoại trừ Nalidixic Acid trên 40% Mức độ đa kháng cũng không cao (khoảng 20%)

2.7 Tình Hình Sử Dụng Kháng Sinh Ở Đồng Bằng Sông Cửu Long

Theo Võ Văn Thiên, 2007 “Điều tra thành phần và công dụng thuốc, hóa chất sử dụng trong nuôi cá tra tại tỉnh Bến Tre” Kết quả như sau:

Đối với thuốc kháng sinh trong nuôi cá tra thì phân loại kháng sinh về hoạt chất gồm nhóm chỉ có kháng sinh chiếm 53,49% (23/43), nhóm kháng sinh kết hợp với vitamin chiếm 34,88% (15/43) và nhóm kháng sinh kết hợp với chất tăng cường chức năng chiếm 11,63% (5/43) Trong 23 nhãn thuốc, nhóm chỉ dùng một loại

kháng sinh 39,13% (9/23), nhóm dùng nhiều loại kháng sinh kết hợp chiếm 60,87% (14/23) Phân loại theo mục đích sử dụng gồm có nhóm vừa phòng vừa trị bệnh chiếm 65,12% (28/43), nhóm trị bệnh chiếm 34,88% (15/43)

Người dân ở đây chủ yếu đã và đang sử dụng các kháng sinh sau: Tetracyclin, Oxytetracyclin, Trimethoprim, Sulfadimidine, Colistin, Gentamycin, Kanamycin, Streptomycin, Ampicillin, Doxycyclin, Neomycin

Thông thường kháng sinh được dùng để trị bệnh nhưng theo điều tra của Võ Văn Thiên thì các công ty thuốc thường hướng dẫn người dân sử dụng kháng sinh

để phòng bệnh với liều thấp nên không diệt được vi khuẩn mà còn làm cho vi khuẩn

có hiện tượng kháng thuốc

Khi bệnh xảy ra thì kháng sinh được sử dụng với liều cao hơn so với liều khuyến cáo sử dụng trong nuôi thủy sản nước ngọt Chẳng hạn như kháng sinh Florfenicol liều được người dân sử dụng theo khuyến cáo của Vime – fenfish (Vemedim) là: cá 30, 45 ngày tuổi thì sử dụng liều 20 mg/kg và 12 mg/kg cá cao hơn dùng trong thủy sản là 10 mg/kg cá (Chen Kong Jung, 1988)

Theo kết quả kiểm tra dư lượng kháng sinh trong thủy sản nuôi ở đồng bằng sông Cửu Long của Trung tâm chất lượng, an toàn vệ sinh và thú y thủy sản vùng 5

và 6 vào tháng 1 năm 2007 thì phát hiện trong sản phẩm thủy sản nuôi còn tồn dư kháng sinh Enrofloxacin, Ciprofloxacin, Oxolinic acid Điều này chứng tỏ rằng trước khi thu hoạch người nuôi đã sử dụng những kháng sinh này Nguồn:

http://fistenet.gov.vn

Theo điều tra của Trương Ngọc Loan, 2007 Người dân ở đồng bằng sông Cửu Long đã sử dụng các kháng sinh sau để trị bệnh: Amoxicilin, Doxycyline, Florphenicol, Colistin, Tetracycline, Sulfamethoxazole/Trimethoprim Với liều dùng tùy theo mức độ bệnh