PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE (MH) VÀ GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM TRÊN HEO

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA CHĂN NI THÚ Y ************ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE (MH) VÀ GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM TRÊN HEO Họ tên sinh viên : LÊ THỊ TUYẾT TOAN Lớp : DH05TY Ngành : Thú Y Niên khoá : 2005 - 2010 Tháng 08/2010 BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA CHĂN NUÔI THÚ Y ************ LÊ THỊ TUYẾT TOAN PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE (MH) VÀ GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM TRÊN HEO Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sĩ nghành Bác sĩ thú y Giáo viên hướng dẫn: TS NGUYỄN THỊ PHƯỚC NINH TS NGUYỄN ĐÌNH QUÁT BSTY LÂM THỊ TÚ ANH Tháng 08/2010 XÁC NHẬN VỀ VIỆC SỬA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên thực tập: Lê Thị Tuyết Toan Tên đề tài: “Phân lập, định danh Mycoplasma hyopneumoniae (MH) gây bệnh thực nghiệm heo” Đã hoàn thành luận văn theo yêu cầu của giáo viên hướng dẫn và các ý kiến nhận xét, đóng góp của Hội đồng chấm thi tốt nghiệp Khoa ngày: Giáo viên hướng dẫn LỜI CẢM ƠN  Xin chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Ban chủ nhiệm khoa Chăn Nuôi Thú Y Trường Đại Học Nông Lâm Cùng toàn thể quý thầy cô Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh đã tận tình chỉ dạy , truyền đạt kiến thức tạo điều kiện thuận lợi suốt trình học tập nghiên cứu  Trân trọng biết ơn sâu sắc: TS Nguyễn Thị Phước Ninh TS Nguyễn Đình Quát BSTY Lâm Thị Tú Anh đã tận tình dạy bảo , hướng dẫn em suốt thời gian học và hoàn thành luận văn tốt nghiệp  Chân thành cảm ơn: Ban Giám Đốc Bệnh Viện Thú Y Trường Đại học Nông Lâm TP HCM Ban Giám Đốc Viện nghiên cứu công nghệ sinh học môi trường Trường Đại học Nông Lâm TP HCM Ban quản lý Trạm Thú Y quận Bình Thạnh Ban Giám đốc xí nghiệp chế biến thực phẩm Nam Phong Và tất anh chị làm việc, nghiên cứu quan tạo điều kiện thuân lợi, giúp đỡ nhiều thực tập  Kính dâng lòng biết ơn sâu sắc đến ba má , và những người thân gia đình đã hết lòng chăm lo, ni dưỡng cho có được ngày hôm  Cuối xin cả m ơn tất cả những người bạn đã luôn chia xẻ , động viên giúp đỡ suốt năm đại học qua Xin chân thành cảm ơn TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài “Phân lập, định danh Mycoplasma hyopneumoniae (MH) gây bệnh thực nghiệm heo” thực vòng tháng từ ngày 1/2/2010 đến ngày 1/8/2010, tiến hành xí nghiệp chế biến thực phẩm Nam Phong, Bệnh Viện Thú Y Viện Nghiên Cứu Công Nghệ Sinh Học Và Môi Trường, Trường Đại Học Nông Lâm Tp HCM Nghiên cứu theo dõi biểu gây bệnh MH heo thử nghiệm sau phân lập định danh MH nhằm góp phần làm xác việc xây dựng phương pháp chẩn đốn MH phòng thí nghiêm Với phương pháp như: quan sát đánh giá bệnh tích đại thể phổi heo thịt, chọn mẫu bệnh phẩm có bệnh tích đặc trưng để phân lập MH môi trường canh thạch Friis’ xác định MH kỹ thuật PCR Sau thực số phản ứng sinh hóa đồng thời gây bệnh cho heo từ canh MH phân lập định danh Chúng tơi có kết sau: Tỷ lệ phổi có bệnh tích chung đánh giá 96,71 % (147/152), mức độ tổn thương trung bình phổi có bệnh tích chung 39,298 % Tỷ lệ phổi có bệnh tích đặc trưng MH heo thịt giết mổ 68,7 % (101/147) Điểm trung bình phổi nghi ngờ MH 1,9 điểm Mức độ tổn thương trung bình phổi nghi ngờ MH thùy tim phổi có mức độ tổn thương lớn nhất, phổi phải cao phổi trái Việc phân lập MH từ mẫu phổi nghi ngờ môi trường thạch Friis’ cho kết dương tính 27,27 %, mơi trường canh cho kết dương tính 22,73 % Kỹ thuật PCR để xác định MH phổi có bệnh tích nghi ngờ cho kết dương tính 13,64 % MH phân lập có phản ứng sinh hóa gồm lên men glucose, digitonin dương tính, phản ứng thủy phân arginine, urea âm tính Sau tuần gây bệnh thử nghiệm, heo nhỏ mũi canh MH cho kết heo có bệnh tích đại thể, vi thể nghi ngờ MH kết phân lập, PCR dương tính với MH MỤC LỤC TRANG Trang tựa i Phiếu xác nhận giáo viên hướng dẫn ii Lời cảm tạ iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt ix Danh sách bảng x Danh sách hình xi Danh sách sơ đồ biểu đồ xii Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Chương CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Bệnh viêm phổi địa phương truyền nhiễm 2.1.1 Lịch sử phân bố địa lý 2.1.1.1 Lịch sử bệnh 2.1.1.2 Phân bố địa lý 2.1.2 Căn bệnh 2.1.3 Đặc điểm Mycoplasma 2.1.3.1 Đặc điểm sinh học Mycoplasma 2.1.3.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.3.3 Sức đề kháng 2.1.3.4 Phân bố tự nhiên 2.1.4 Đặc điểm MH 2.1.5 Đặc điểm dịch tễ MH 2.1.5.1 Loài vật mắc bệnh Chất 2.1.5.2 chứa bệnh Đường 2.1.5.3 xâm nhập 2.1.5.4 Cách lây lan truyền bệnh 2.1.6 Cơ chế sinh bệnh 10 2.1.7 Triệu chứng 11 2.1.8 Bệnh tích 11 2.1.8.1 Bệnh tích đại thể 11 2.1.8.2 Bệnh tích vi thể 12 Chẩn 2.1.9 đoán 13 2.1.9.1 Chẩn đoán lâm sàng phân biệt 13 2.1.9.2 Chẩn đốn phòng thí nghiệm 13 Điều 2.1.10 trị 14 Phòng 2.1.11 bệnh 15 2.2 Những phương pháp phát MH 16 Quan 2.2.1 sát bệnh tích đại thể 16 2.2.2 Quan sát bệnh tích vi thể 16 Phân 2.2.3 lập MH 16 Môi 2.2.3.1 trường nuôi cấy 16 2.2.3.2 Ý nghĩa thành phần môi trường nuôi cấy MH 17 Nguyên 2.2.4 lý số phản ứng sinh hóa 17 Kỹ 2.2.5 thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) 18 2.2.5.1 thiệu Giới sơ lược PCR 18 2.2.5.2 Nguyên lý kỹ thuật PCR 19 2.3 Sơ lược số nghiên cứu có liên quan đến đề tài 20 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP KHẢO SÁT 22 3.1 Thời gian địa điểm 22 3.2.1 Thời gian 22 3.2.2 Địa điểm 22 3.2 Đối tượng nghiên cứu 22 3.3 Dụng cụ vật liệu thí nghiệm 22 3.3.1 Dụng cụ 22 3.3.2 Vật liệu 23 3.4 Nội dung 23 3.5 Phương pháp tiến hành 24 3.5.1 Bố trí lấy mẫu 24 3.5.2 Đánh giá mức độ hư hại phổi 24 3.5.2.1 Đánh giá bệnh tích hư hại phổi khơng đặc trưng cho MH theo công thức Christensen (1999) 25 3.5.2.2 Đánh giá bệnh tích hư hại nghi ngờ MH 25 3.5.3 Phân lập MH từ mẫu phổi nghi bệnh 26 3.5.3.1 Quy trình phân lập MH 26 3.5.3.2 Thu thập mẫu 26 3.5.3.3 Xử lý mẫu 27 3.5.4 Định danh MH từ mẫu phổi nghi bệnh 27 3.5.4.1 Phản ứng PCR 27 3.5.4.2 Phản ứng sinh hóa 30 3.5.5 Gây bệnh thực nghiệm heo 32 3.5.5.1 Đếm đơn vị đổi màu CCU (Colour Changing Unit) 32 3.5.5.2 Gây bệnh thực nghiệm heo 33 3.6 Công thức tính 33 3.7 Xử lý số liệu 34 Chương KẾT QUẢ THẢO LUẬN 35 4.1 Kết đánh giá bệnh tích đại thể phổi 35 4.1.1 Đánh giá bệnh tích chung phổi 35 4.1.1.1 Tỷ lệ phổi có bệnh tích 35 4.1.1.2 Đánh giá mức độ hư hại phổi có bệnh tích 36 4.1.1.3 Các bệnh tích thường gặp phổi khảo sát 37 4.1.2 Đánh giá bệnh tích đại thể phổi có tính định hướng MH 39 4.1.2.1 Tỷ lệ phổi có bệnh tích nghi ngờ MH 39 4.1.2.2 Đánh giá bệnh tích phổi nghi ngờ MH 40 4.2 Kết phân lập MH môi trường canh thạch Friis’ 43 4.3 Kết xác định MH kỹ thuật PCR từ mẫu phổi 46 4.4 Kết phản ứng sinh hóa 48 4.5 Kết nuôi heo thử nghiệm 49 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Đề nghị 56 Tài liệu tham khảo 57 Phụ lục 60 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT APP : Actinobacillus pleuropneumoniae BHI : Brain Heart Infusion broth bp : base pair CF : complement fixation CCU : colour changing unit gây bệnh heo Ngồi mơi trường ni thử nghiệm sạch, mật độ thơng thống, xa khu vực chăn ni nên khơng có bệnh tích quan khác Heo đối chứng ni riêng biệt, hồn tồn bình thường, khơng có triệu chứng hơ hấp bệnh tích phổi, kết phân lập MH âm tính Kết gây bệnh thực nghiệm cho thấy gốc MH phân lập định danh có khả gây bệnh heo Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua q trình khảo sát nghiên cứu, chúng tơi rút kết luận sau: Tỷ lệ phổi có bệnh tích chung đánh giá 96,71 % Tỷ lệ phổi có bệnh tích đặc trưng MH heo thịt giết mổ 68,7 % Mức độ tổn thương trung bình phổi nghi ngờ MH thùy tim phổi có mức độ tổn thương lớn nhất, phổi phải cao phổi trái Việc phân lập MH từ mẫu phổi nghi ngờ môi trường thạch Friis’ cho kết dương tính 27,27 %, mơi trường canh cho kết dương tính 22,73 % Kỹ thuật PCR để xác định MH phổi có bệnh tích nghi ngờ cho kết dương tính 13,64 % Kết thử số phản ứng sinh hóa gồm lên men glucose digitonin dương tính, phản ứng thủy phân arginine urea âm tính, phù hợp với đặc tính sinh hóa MH Kết ni thử nghiệm, heo có bệnh tích đại thể, vi thể nghi ngờ MH kết phân lập, PCR dương tính với MH cho thấy gốc MH phân lập định danh có khả gây bệnh heo, góp phần kiểm nghiệm lại độ xác cho phương pháp chẩn đốn phòng thí nghiệm Đồng thời quan sát, đánh giá đặc tính gây bệnh MH heo 5.2 Đề nghị Nên tiến hành ly trích DNA sau lấy mẫu Tiếp tục thực thêm phản ứng sinh hóa khác thử hoạt tính phosphate Ổn định qui trình môi trường nuôi cấy để xác định MIC (nồng độ ức chế tối thiểu kháng sinh ức chế phát triển MH), tiến hành làm kháng sinh đồ MH TÀI LIỆU THAM KHẢO PHẦN TIẾNG VIỆT Quách Tuyết Anh, 2003 Một số kinh nghiệm ứng dụng kỹ thuật PCR để phát Mycoplasma hyopneumoniae mẫu bệnh tích phổi heo nhục hóa LVTN, Khoa CNTY, Trường Đại Học Nông Lâm Tp.HCM Tô Minh Châu, 2000 Bài giảng môn vi sinh đại cương Tủ sách Đại Học Nông Lâm Tp.HCM, trang 25-26 trang 133 Tô Minh Châu Trần Thị Bích Liên, 2001 Vi khuẩn nấm gây bệnh thú y Tủ sách Đại Học Nông Lâm Tp.HCM, trang 94-97 Đỗ Tiến Duy, 2004 Chẩn đoán Mycoplasma hyopneumoniae dựa vào bệnh tích đại thể, vi thể, kỹ thuật ELISA heo thịt giết mổ xí nghiệp chế biến thực phẩm Nam Phong TP HCM LVTN, Khoa CNTY, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM Trần Thị Dân, Trần Thị Bích Liên, Nguyễn Thị Phước Ninh, Nguyễn Ngọc Tuân, Đỗ Tiến Duy, Nguyễn Ngọc Hải Nguyễn Văn Khanh, 2005 Xác định tuổi nhiễm phương pháp phát Mycoplasma hyopneumoniae virus PRRS trại chăn ni heo Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp (3): 257 – 260 Huỳnh Lê Ngọc Diễm, 2008 Phân lập ứng dụng kỹ thuật PCR để phát Mycoplasma hyopneumoniae, so sánh mức độ gây bệnh Mycoplasma hyopneumoniae heo cai sữa heo thịt LVTN, Khoa CNTY, Đại Học Nơng Lâm Tp.HCM Hồng Văn Đức, 2008 Phân lập ứng dụng kỹ thuật PCR để phát Mycoplasma hyopneumoniae phổi heo thịt trại chăn nuôi công nghiệp tỉnh Đồng Nai LVTN, Khoa CNTY, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Đặng Thị Thu Hường, 2005 Khảo sát bệnh tích phổi ứng dụng kỹ thuật PCR để phát Mycoplasma hyopneumoniae heo thịt đưa đến giết mổ sở chế biến thực phẩm Nam Phong Thành Phố Hồ Chí Minh LVTN, Khoa CNTY, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Phạm Sỹ Lăng Trương Văn Dung, 2002 Một số bệnh vi khuẩn Mycoplasma gia súc gia cầm nhập nội biện pháp phòng trị Nhà xuất Nông Nghiệp, trang 95 – 109 10 Nguyễn Thành Lâm, 2005 Khảo sát bệnh tích phổi ứng dụng kỹ thuật PCR để phát Mycoplasma hyopneumoniae heo thịt đưa đến giết mổ sở chế biến thực phẩm Nam Phong Thành Phố Hồ Chí Minh LVTN, Khoa CNTY, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM 11 Nguyễn Thị Phước Ninh, 2006 Các phương pháp chẩn đốn Mycoplasma hyopneumoniae (MH) phòng thí nghiệm Chuyên đề tiến sỹ, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 12 Nguyễn thị Phước Ninh, 2006 Đặc điểm sinh học, chế sinh bệnh Mycoplasma đáp ứng miễn dịch đường hô hấp Chuyên đề tiến sỹ, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 13 Nguyễn Thị Phước Ninh, Đỗ Tiến Duy, Nguyễn Tất Toàn, Nguyễn Ngọc Tuân, Trần Thị Dân, 2006 Phân lập Mycoplasma hyopneumoniae số vi khuẩn liên quan đến bệnh hô hấp phổi heo Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y (3) 14 Nguyễn thị Phước Ninh, 2009 Phân lập Mycoplasma hyopnenmoniae (MH) heo, xác định số đặc tính sinh hóa tính nhạy cảm với số kháng sinh sử dụng đàn heo Chuyên đề tiến sỹ, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 15 Nguyễn Như Pho, 1999 Nội khoa thú y Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 16 Trần Thanh Phong, 1996 Bệnh truyền nhiễm vi trùng heo Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 17 Nguyễn Vĩnh Phước, 1978 Gíao trình bệnh truyền nhiễm gia súc Nhà xuất Nông Nghiệp, trang 320 – 334 18 Vân Minh Tâm, 2005 Chẩn đoán Mycoplasma hyopneumoniae heo thịt thu thập xí nghiệp chế biến thực phẩm Nam Phong LVTN, Khoa CNTY, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 19 Nguyễn Thoại Thức, 2005 Chẩn đoán Mycoplasma hyopneumoniae heo thịt giết mổ xí nghiệp chế biến thực phẩm Nam Phong LVTN, Khoa CNTY, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM 20 Nguyễn Thị Thanh Trúc, 2006 Chẩn đoán Mycoplasma hyopneumoniae heo thịt thu thập xí nghiệp chế biến thực phẩm Nam Phong LVTN, Khoa CNTY, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM 21 Trần văn Trường, 2009 Chẩn đoán Mycoplasma hyopneumoniae kỹ thuật PCR ELISA LVTN, Bộ môn CNSH, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM 22.Nguyễn Ngọc Hoa Xuân, 2009 Chẩn đoán bệnh Mycoplasma hyopneumoniae dựa vào bệnh tích đại thể, phân lập kết hợp với kỹ thuật PCR phổi heo thịt có bệnh tích nghi ngờ LVTN, Khoa CNTY, Đại Học Nơng Lâm Tp.HCM PHẦN TIẾNG NƯỚC NGỒI 23 Friis N F., 1974 Mycoplasma in pig, with special regard to the respiratory tract DSR FORLAG Royal Veterinary and Agricultural University 24 Kirchhoff H., and Rosengarten R., 1984 Isolation of a Motile Mycoplasma from Fish Journal of General Microbiology 130: 2439 – 2445 25 Linda D Van Til, Ian R Dohoo and Randy S Morley, 1990 Epidemiological Associations between Mycoplasma hyopneumoniae and Actinobacillus pleuropneumoniae Antibody Titers and Lung Lesions in Prince Edward Island Swine Herds University of Prince Edward Island Island 347 - 351 26 Osborne A D., Saunders J R and Sebunya T K., 1981 An Abattoir Survey of the Incidence of Pneumonia in Saskatchewan Swine and an Investigation of the Microbiology of Affected Lungs Department of Veterinary Microbiology, Western College of Veterinary Medicine, University of Saskatchewan, Canadian 82 - 85 27 Quinn P.J., Carter M.E., Markey B., and Carter G.R., 1994 Clinical veterinary microbiology Mosby International, England, pp 320 – 326 28 Ross.R.F., 1999 Mycoplasmal diseases In: Diseases of Swine, ed Straw B.E.D.A.S, Mengeling W.L., Taylor D.J., Iowa State University Press, Ames, IA Pp 459-520 29 Tat Toan Nguyen, 2004 Comparative Evaluation of Isolation, PCR retection and Clinico – pathological Diagnostis Approaches in Field case of M hyopneumoniae Infection in Selacted Farm of Luzon, Philippines The Master’s Thesis University of the Philippines Los Bãnos PHỤ LỤC THÀNH PHẦN CÁC HÓA CHẤT DÙNG TRONG PHẢN ỨNG PCR VÀ MỘT SỐ PHẢN ỨNG ĐẶC TRƯNG CỦA MH Các hóa chất dùng ly trích SDS 20 %: 20 mg pha 100 µl nước cất hấp khử trùng Protein K: 20 mg pha 1ml nước cất hấp khử trùng Các hóa chất dùng điện di TBE (5X):Tris base 89 mM: 5,39 g Acid boric 89 mM: 2,8 g Na EDTA 2,5 mM: 0,47 g (Hoặc EDTA mM: 0,29 g) Điều chỉnh pH 8,3 – 8,4 NaOH 0,1 N HCl 0,1 N TBE (0,5 X): thể tích TBE X pha với thể tích nước cất Hóa chất nhuộm gel: 300 ml TBE (0,5 X) + 30 µl ethium bromide Phản ứng sinh hóa  Lên men đường glucose Trước tiến hành thí nghiệm chuẩn bị sẵn canh khuẩn có chứa MH canh glucose 10 % điều chỉnh với pH = 7,5 Phản ứng thực môi trường canh cách cho vào ống nghiệm ml glucose 10 % ml canh khuẩn thuần, riêng ống đối chứng không cho canh khuẩn Tất ủ 370C với – 10 % CO Trong vòng 48 mơi trường chuyển sang màu vàng MH lên men đường glucose sản xuất acid làm giảm pH mơi trường ni cấy phản ứng xem dương tính mơi trường đổi màu âm tính mơi trường khơng đổi màu  Phản ứng thủy phân urease Phản ứng thực môi trường canh phải cho vào môi trường 10 % ure 0,8 % MnCl điều chỉnh pH = Trước tiên cho canh khuẩn MH vào ống nghiệm có sẵn ml 10 % ure 0,8 % MnCl , ống nghiệm có 10 % ure 0,8 % MnCl mà canh khuẩn để làm đối chứng Tất ủ 370C với – 10 % CO Phản ứng dương tính mơi trường chuyển sang màu đỏ sau 48 âm tính chuyển sang màu vàng  Phản ứng thủy phân arginine Phản ứng giống phản ứng lên men đường ta thay glucose 10 % arginine 10 % Đầu tiên cho ml arginine 10 % vào ống nghiệm, cho 1ml canh khuẩn MH vào (trừ ống đối chứng có arginine 10 %) Tất ủ 370C với – 10 % CO quan sát vòng 48 Nếu môi trường chuyển từ màu hồng sang màu đỏ phản ứng dương tính chuyển sang màu vàng âm tính  Nhạy cảm digitonin Phản ứng thực môi trường thạch ta phải chuẩn bị thêm đĩa giấy tiệt trùng đường kính mm tẩm digitonin 1,5 % ethanol khô, đĩa thạch vô trùng môi trường canh khuẩn MH Đầu tiên ta cho canh khuẩn MH lên mặt thạch, tráng bỏ phần canh khuẩn dư thạch, sau đặt đĩa giấy digitonin khô lên mặt thạch cuối ủ 370C với – 10 % CO Đọc kết xuất khuẩn lạc thạch, phản ứng dương tính xuất vùng ức chế khoảng mm xung quanh đĩa giấy digitonin sau 48 PHỤ LỤC CÁC SO SÁNH BẰNG PHẦN MỀM MINITAB VERSION 12.21 Sự khác biệt mức độ tổn thương chung thùy phổi bảng 4.2 có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) One-way Analysis of Variance Analysis of Variance for %huhai Source DF SS MS Thuyphoi 27878 4646 Error 1022 1437328 1406 Total 1028 1465206 Level DT TT HT DP TP HP PP N 147 147 147 147 147 147 147 Pooled StDev = Mean 30.98 38.27 33.01 41.54 47.14 42.96 39.75 StDev 35.53 35.96 34.30 38.41 38.59 40.43 38.90 37.50 F 3.30 P 0.003 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) ( * -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ 32.0 40.0 48.0 Sự khác biệt mức độ tổn thương trung bình phổi trái phổi phải bảng 4.2 có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) One-way Analysis of Variance Analysis of Variance for %huhai Source DF SS MS phoitrai 6747 6747 Error 292 289067 990 Total 293 295815 Level TT TP N 147 147 Pooled StDev = Mean 33.55 43.13 31.46 F 6.82 P 0.010 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ 31.25 ( * -) 31.67 ( * -) -+ -+ -+ -+ 30.0 36.0 42.0 48.0 Sự khác biệt mức độ tổn thương chung thùy phổi nghi ngờ MH biểu đồ 4.1 có ý nghĩa mặt thống kê (P = 0,05) One-way Analysis of Variance Analysis of Variance for %tonthuo Source DF SS MS thuyphoi 17494 2916 Error 700 967169 1382 Total 706 984662 Level DT TT HT DP TP HP PP N 101 101 101 101 101 101 101 Pooled StDev = Mean 32.28 39.80 33.68 41.24 47.69 43.18 41.68 StDev 35.63 34.47 34.69 37.39 37.96 40.30 39.35 37.17 F 2.11 P 0.050 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( * -) ( * ) ( -* ) ( * ) ( -* ) ( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+30 40 50 60 Sự khác biệt mức độ tổn thương trung bình phổi trái phổi phải biểu đồ 4.2 có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) One-way Analysis of Variance Analysis of Variance for %tonthuo Source DF SS MS phoi 4113 4113 Error 200 192717 964 Total 201 196831 Level TT TP N 101 101 Pooled StDev = Mean 34.43 43.45 31.04 F 4.27 P 0.040 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ 30.79 ( -* ) 31.29 ( -* ) -+ -+ -+ -+ 30.0 36.0 42.0 48.0 Sự khác biệt điểm trung bình thùy phổi nghi ngờ MH bảng 4.6 có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) One-way Analysis of Variance Analysis of Variance for %tonthuo Source DF SS MS thuyphoi 29.75 4.96 Error 700 1290.06 1.84 Total 706 1319.81 Level DT TT HT DP TP HP PP N 101 101 101 101 101 101 101 Pooled StDev = Mean 1.564 2.089 1.772 2.069 2.228 2.000 1.990 StDev 1.396 1.192 1.348 1.243 1.363 1.470 1.466 1.358 F 2.69 P 0.014 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) ( -* ) ( * -) ( -* ) ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 1.40 1.75 2.10 2.45 Sự khác biệt điểm trung bình phổi trái phổi phải nghi ngờ MH bảng 4.6 khơng có ý nghĩa mặt thống kê (P > 0,05) One-way Analysis of Variance Analysis of Variance for %tonthuo Source DF SS MS phoi 3.31 3.31 Error 200 262.63 1.31 Total 201 265.94 Level TT TP N 101 101 Pooled StDev = Mean 1.794 2.050 1.146 F 2.52 P 0.114 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ -1.168 ( -* ) 1.124 ( * -) + -+ -+ -+ -1.60 1.80 2.00 2.20 PHỤ LỤC PHẦN KẾT QUẢ NUÔI HEO THỬ NGHIỆM Bảng Các biểu lâm sàng heo thử nghiệm Thời gian nuôi ngày Tần số hô Heo thử nghiệm đầu ngày hấp Cân nặng (lần/phút) (kg) 39,2 20-30 13 Biểu lâm sàng Thân nhiệt (OC) Ăn uống, phân bình thường Stress, sợ, nhát nt 39,8 nt 12,5 nt 40,1 nt 11,5 Phân bết (do thay đổi thức 38,6 20-30 15 ăn), ho ngắn sau nhỏ Bình thường 39,2 nt 14 mũi Có ho ngắn 38,4 nt 13 ngày Phân bình thường, có ho ngắn 40,2 30-40 17 sau Có ho ngắn 39,5 20-30 15 nhỏ Bình thường, khơng thấy ho 38,4 20-30 14 Ăn giảm, ho nhiều thường 40,5 ;40,2 40-60 18 40,3; 40,6 30-40 16 lần mũi lần ngày sau vào sáng sớm, lúc ăn hay lúc bị nhỏ trượt đuổi, sổ mũi nước, khịt mũi mũi đỏ, phân bình thường lần Ăn uống bình thường, ho khan ngắn hồi 2-5 tiếng ngày Bình thường 39,8; 40,1 20-30 15 Ăn ít, xuất thở bụng, ho 40; 39;8 60-80 21 14 nhiều dài 2-10 tiếng, hay nằm Còn ho ngắn 40,1; 40;2 40-60 19,5 Bình thường 39,4; 39,1 20-30 18 Ăn bình thường trở lại, ho, hay 39,5; 39,4; 39; 60-80 28 nằm, thở bụng 39,3 thấy ho, có thở bụng 40,1; 40,2; 39,7; 40-60 25 ngày 39,8 Bình thường 39,9; 39,5; 39,6; 20-30 24 39,7; 39;3 60-80 30 39,7 ngày Lanh hơn, hoạt động ăn uống bình trước thường Ho nhiều dài, thở bụng rõ mổ Mổ Ho ít, thở bụng nhẹ 39,1; 39,5 40-60 28 Bình thường 40,1; 39,7 20-30 27 Ho dài,mũi khô, thở bụng nặng, 38,2 80 32 đợt thể trạng tốt, da lơng bình thường Ho ít, thở bụng 39,5 60-70 30 Bình thường 40,1 30-40 29 ngày tiếp Ho, thở bụng 39,3; 39 60-80 34 theo Bình thường 39,7; 40,1 30-40 31,5 Mổ đợt 2 Ho, thở bụng, thể trạng da lơng 39 77 35 39,8 40 32 bình thường Bình thường Bảng Các bệnh tích đại thể heo thử nghiệm Bệnh tích đại thể phổi Heo Thùy Thùy tim Thùy Thùy Thùy Thùy Thùy Bệnh tích đại thể đỉnh trái trái hồnh đỉnh tim hồnh phụ khác cách mơ phải phải cách mô Xẹp, NH Xuất NH NH nhục Xẹp 60% huyết 10%, 20%, 10%, Lách tương đối hóa điểm Xẹp Xẹp Xẹp tốt, to Thận (NH) 5%, NH 10% 20% 5% xung huyết Dạ 80% 10% dày có nốt Viêm Xẹp loét Ruột có ký phổi kẽ 30% sinh trùng 15%, NH 10% NH Hạch thủy thủng NH NH 80% 10% NH 5% NH NH Xẹp Xuất Thận xung huyết, Viêm 20% 70% viêm huyết có vài chổ hoại phổi kẽ 1% tử sơ Gan có phổi kẽ vài điểm trắng nhỏ Dạ dày xuất huyết thân vị Bàng quang xung huyết Hạch lympho màng treo ruột xung huyết, sưng to Ngã van hổi manh tràng xung huyết Ruột có ký sinh trùng Xẹp Xẹp 80%, Xẹp Xẹp Xẹp 100%, XH 2% 100%, 90% 90% XH 1% NH 1% XH 1% Xẹp 90% NH Xẹp Gan có vài đốm 100%, trắng Ruột có ký XH sinh trùng 1% 70% ĐC Phổi tốt, xuất huyết nhẹ bề mặt phổi Ruột có ký sinh trùng Bảng Các bệnh tích vi thể heo thử nghiệm Heo Bênh tích vi thể phổi Vi thể quan khác (gan, thận, hạch, dày, lách) Bệnh tích vi thể đặc trưng MH Bạch cầu lympho tăng sinh tiểu phế quản, kế khí quản lớn Tăng sinh vách phế nang làm dày lên Có vách liên phế nang dày lên, có dấu hiệu PRRS Xung huyết nhẹ có bệnh tích MH mức độ nhẹ Sự Thận có xung huyết nhẹ vài nơi tích tụ lympho quanh tiểu phế quản Phổi có hóa thận Gan bình thường Thể lách gan Có thể có kết hợp APP số tiểu thùy tốt Hạch bình thường Dạ dày có viêm nhẹ, có bạch cầu lympho rãi rác Cấu tạo bề mặt dày tốt Một số vùng có phế nang viêm dính lại tạo nên Thận cấu tạo bình thường, có xung chỗ phổi xẹp Viêm phổi mảng, tăng lympho huyết vài nơi vùng vỏ Gan bình bào Khơng có bệnh tích đặc trưng MH Phổi có hóa thường Lách có mơ bạch huyết gan tốt, khơng thấy xuất huyết Hạch phổi có xung huyết, cấu tạo hạch bình thường Dạ dày có viêm nhẹ, bạch cầu niêm mạc ... Actinobacillus pleuropneumoniae BHI : Brain Heart Infusion broth bp : base pair CF : complement fixation CCU : colour changing unit DNA : deoxyribonucleic acid dNTP : deoxyribonucleic triphosphate... Mỹ, Thụy Sỹ, Hungari, Bỉ, Phần Lan Bệnh có châu Á (Trung Quốc, Nhật Bản, Việt Nam) Châu Phi Kể từ sau phát hiện, bệnh lan nhanh, mạnh xảy nhiều quốc gia giới gây thi t hại khơng cho nghành chăn... lên men Mặc dù chưa xác định cách xác, chất chiết chứa nhiều nucleic acid tiền chất nucleic acid Huyết thanh: cung cấp acid béo cholesterol dễ đồng hóa khơng độc, thỏa mãn tổng hợp màng Phenol