BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÒNG TRỊ MỘT SỐ NẤM BỆNH TRÊN THANH LONG BẰNG TRICHODERMA Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : TRƯƠNG MINH TƯỜNG Niên khóa : 2007 – 2011 Tháng 07/2011 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÒNG TRỊ MỘT SỐ NẤM BỆNH TRÊN THANH LONG BẰNG TRICHODERMA Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực Ths TRẦN NGỌC HÙNG TRƯƠNG MINH TƯỜNG Ks BIỆN THỊ LAN THANH Tháng 07/2011 ii LỜI CẢM ƠN Trải qua bốn năm học đại học , bên cạnh sự cố gắng thân có tân tình giúp đỡ q thầy cơ, bạn bè gia đình Hơm tơi hồn thành khóa học thực xong khóa luận tốt nghiệp Để hồn thành khóa luận, tơi xin chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu quý Thầy Cô BM Công Nghệ Sinh Học Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM hết lòng giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành tốt khóa học ThS Trần Ngọc Hùng người trực tiếp hướng dẫn em suốt trình thực đề tài KS Biện Thị Lan Thanh đồng hướng dẫn giúp đỡ em hoàn thành tốt đề tài ThS Nguyễn Như Nhứt tận tình giúp đỡ tư vấn em suốt trình thực đề tài CN Hồ Bang Hoài hướng dẫn tư vấn kỹ thuật để em đẩy nhanh tiến độ thực đề tài Các Anh, Chị công ty TNHH Gia Tường tạo điều kiện giúp đỡ em trình thực đề tài KS Nguyễn Văn Lẫm KS Nguyễn Minh Quang hỗ trợ kiến thức tận tình giúp đỡ em thực đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học Xin cảm ơn bạn lớp DH07SH giúp đỡ học tập trình làm đề tài Cuối cùng, xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Cha, Mẹ gia đình động viên tạo điều kiện cho học tập thật tốt Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô chúc quý thầy cô dồi sức khoẻ, tiếp tục dẫn dắt hệ tiếp bước Ngày 17 tháng năm 2011 Trương Minh Tường i TÓM TẮT Hiện nay, long loại trái có giá trị kinh tế cao loại trái xuất chủ lực Việt Nam Tuy nhiên, tình hình dịch bệnh long diễn phức tạp Trong đó, bệnh nấm thường gây hậu nghiêm trọng, ảnh hưởng nhiều tới sản lượng chất lượng Việc sử dụng thuốc hóa học để trị nấm bệnh không gây ảnh hưởng xấu đến mơi trường mà tồn dư dư lượng sản phẩm Sử dụng chế phẩm sinh học thay cho thuốc diệt nấm hóa học hướng nghiên cứu nhiều nhà nghiên cứu quan tâm Trong đề tài này, nghiên cứu khả đối kháng chủng Trichoderma với số nấm bệnh phân lập từ long bệnh Qua trình nghiên cứu, phân lập chủng nấm bệnh NBT01 gây bệnh thối trái xanh, chủng NBT03 gây bệnh héo dây chủng NBT04 gây bệnh đồng tiền Trong số chủng Trichoderma nghiên cứu, chủng T10, T14 T24 có khả đối kháng tốt loại nấm bệnh phát triển Trên mơi trường PGA, chủng Trichoderma có khả kí sinh làm nấm bệnh ngừng phát triển sau khoảng ngày nồng độ tối thiểu 105 bào tử/ml Cũng mật độ này, nghiên cứu mô long khoảng ngày Việc thử nghiệm bào tử chủng Trichoderma chọn lọc đồng ruộng việc phòng trừ loại nấm bệnh cho hiệu tương đương với thuốc hóa học ii SUMMARY Thesis title "studying the possibility of disease prevention and treatment of a number of pathogenicfungi on the dragon tree by Trichoderma" Currently, the dragon fruit is a high economic value fruit and is one of the main export fruits of Vietnam The epidemic deseases on the dragon is rather complex In particular, diseases caused by fungi that cause the most serious consequences To prevent or treat diseases caused by fungi on the dragon, chemicals are used mainly However, the use of chemicals polluting the environment and harmful to the user Using probiotics instead of chemical fungicides is a research scientist is more interested In this topic, we study the possibility of preventing a fungal disease of fruit tree by the Trichoderma strains Content topics include three main sections are: isolated of fungal diseases, tested for resistance to the fungus Trichoderma strains on the environment on the PGA and resistance of fruit fruit Result, we isolated the fungus NBT01, NBT03 and NBT04 were one of the fungus on the dragon fruit Trichoderma strain T10, T14 and T24 were selected strains, capable of resistance to fungal diseases on the best May recommend the use of spores of Trichoderma strains to resistance to fungal diseases on fruit at a concentration of 105/ml iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC ivv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix Chương MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung nghiên cứu .2 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cây long 2.1.1 Giới thiệu về long .3 2.1.2 Đặc điểm sinh thái .3 2.1.3 Tiềm kinh tế trái long 2.1.4 Một số bệnh nấm gây long 2.1.4.1 Bệnh thán thư 2.1.4.2 Bệnh thối quả xanh 2.1.4.3 Bệnh vàng héo dây 2.1.4.4 Bệnh thối đầu cành 2.1.4.5 Bệnh đốm nâu thân cành 2.1.4.6 Bệnh đốm xám 2.2 Nấm Trichoderma 2.2.1 Phân loại .7 2.2.2 Đặc điểm sinh thái 2.2.3 Đặc điểm hình thái Trichoderma 2.2.4 Đặc điểm sinh lý Trichoderma 2.2.5 Khả kiểm soát nấm bệnh thực vật của Trichoderma 10 iv 2.2.6 Cơ chế đối kháng nấm Trichoderma 10 2.2.7 Ứng dụng nấm Trichoderma 12 2.2.7.1 Sản xuất enzyme 12 2.2.7.2 Chất kiểm soát sinh học 12 2.2.7.3 Kích thích tăng trưởng trồng: 13 2.2.7.4 Nguồn gen để sử dụng chuyển gen 13 2.2.7.5 Trichoderma có khả phân hủy cellulose 13 2.2.7.6 Bảo quản nông sản 13 2.2.8 Một số sản phẩm ứng dụng Trichoderma Việt Nam .14 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Vật liệu 28 3.1.1 Chủng vi sinh vật nghiên cứu .28 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 28 3.1.3 Dụng cụ thiết bị .28 3.1.4 Các loại môi trường 29 3.2 Phương pháp 29 3.2.1 Phương pháp nghiên cứu 29 3.2.1.1 Phương pháp cấy chuyền giữ giống nấm mốc Trichoderma 29 3.2.1.2 Xác định số lượng bào tử Trichoderma phương pháp đếm hồng cầu 29 3.2.1.3 Xác định độ ẩm 30 3.2.2 Phương pháp thí nghiệm 31 3.2.2.1 Phương pháp phân lập nấm bệnh 31 3.2.2.2 Phương pháp gây bệnh nhân tạo 31 3.2.2.3 Phương pháp xác định tốc độ tăng trưởng sợi nấm 33 3.2.2.4 Phương pháp đối kháng của Trichoderma môi trường PGA 33 3.2.2.5 Ảnh hưởng của mật độ bào tử Trichoderma lên khả đối kháng .35 3.2.2.6 Đối kháng bào tử Trichoderma với nấm bệnh mô long 36 3.2.2.7 Đối kháng dịch chiết nuôi cấy lỏng Trichoderma thạch PGA 37 3.2.2.8 Đối kháng dịch chiết nuôi cấy lỏng Trichoderma mơ long 38 3.2.2.9 Đối kháng ngồi đồng ruộng 38 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .41 4.1 Phân lập nấm bệnh .41 v 4.2 Kiểm tra khả gây bệnh của các giống nấm bệnh được phân lập 42 4.3 Tốc độ tăng trưởng của các chủng Trichoderma và các chủng nấm bệnh .44 4.3.1 Tốc độ tăng trưởng của các chủng Trichoderma môi trường PGA 44 4.3.2 Tốc độ tăng trưởng của các chủng nấm bệnh môi trường PGA 45 4.4 Kết quả đối kháng của các chủng Trichoderma môi trường PGA 45 4.4.1 Đối kháng đồng thời 46 4.4.2 Đối kháng sau nấm bệnh đã phát triển 49 4.5 Ảnh hưởng mật độ bào tử các chủng Trichoderma lên khả đối kháng 50 4.6 Kết quả đối kháng bào tử Trichoderma với nấm bệnh mô long 39 4.6.1 Đối kháng đồng thời 39 4.6.2 Đối kháng sau nấm bệnh phát triển 53 4.7 Kết quả đối kháng của dịch chiết nuôi cấy lỏng các chủng Trichoderma 54 4.7.1 Đặc điểm dịch chiết 54 4.7.2 Khả đối kháng của dịch chiết Trichoderma môi trường PGA 55 4.7.2.1 Khả đối kháng của dịch chiết Trichoderma với nấm bệnh NBT01 55 4.7.2.2 Khả đối kháng của dịch chiết Trichoderma với nấm bệnh NBT03 55 4.7.2.3 Khả đối kháng của dịch chiết Trichoderma với nấm bệnh MBT04 56 4.8 Đối kháng của dịch chiết Trichoderma với nấm bệnh mô long 57 4.8.1 Đối kháng đồng thời 57 4.8.2 Đối kháng sau nấm bệnh phát triển 58 4.9 Kết quả thử nghiệm đối kháng đồng ruộng 59 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 60 5.1 Kết luận 60 5.2 Đề nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALG: Tốc độ tăng trưởng đường kính trung bình B: Chế phẩm dạng bột BCA: Biocontrol Agent D: Đường kính khuẩn lạc nấm bệnh trung bình đĩa đối kháng DC: Đối chứng D dc : Đường kính khuẩn lạc nấm bệnh trung bình đĩa đối chứng H: Hiệu quả đối kháng K: Không gây vết thương KL: Khuẩn lạc L: Độ pha loãng MT: Môi trường N: Bào tử nguyên NB: Nấm bệnh NT1: Nghiệm thức NT2: Nghiệm thức PGA: Potato Glucose Agar sp.: Species T: Trichoderma TB: Trung bình ∆T : Khoảng thời gian hai lần đo đường kính vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Các giống Trichoderma dùng thí nghiệm 28 Bảng 3.2 Cách bố trí thí nghiệm để kiểm tra khả gây bệnh của nấm bệnh .32 Bảng 4.1 Đặc điểm và hình dạng khuẩn lạc của nấm bệnh được phân lập 41 Bảng 4.2 Kết gây bệnh nhân tạo long sử dụng bào tử nguyên 43 Bảng 4.3 Kết gây bệnh nhân tạo long sử dụng bào tử dạng bột 31 Bảng 4.4 Tốc độ tăng trưởng của các chủng Trichoderma môi trường PGA 44 Bảng 4.5 Tốc độ tăng trưởng của các chủng nấm bệnh môi trường PGA 45 Bảng 4.6 Khả đối kháng của T10 sau các nấm bệnh đã phát triển .49 Bảng 4.7 Khả đối kháng của T14 sau các nấm bệnh đã phát triển .49 Bảng 4.8 Khả đối kháng của T24 sau các nấm bệnh đã phát triển .50 Bảng 4.9 Ảnh hưởng mật độ bào tử Trichoderma lên khả đối kháng 38 Bảng 4.10 Đối kháng bào tử Trichoderma với nấm bệnh đồng thời 53 Bảng 4.11 Đối kháng bào tử Trichoderma nấm bệnh phát triển 41 Bảng 4.12 Kết quả đối kháng của dịch chiết Trichoderma với NBT01 55 Bảng 4.13 Kết quả đối kháng của dịch chiết Trichoderma với NBT03 56 Bảng 4.14 Kết quả đối kháng của dịch chiết Trichoderma với NBT04 56 Bảng 4.15 Đối kháng dịch chiết Trichoderma với nấm bệnh long 58 Bảng 4.16 Đối kháng Trichoderma với nấm bệnh đồng ruộng 59 viii Analysis of Variance for duong kinh khuan lac - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:thoi gian 1136.06 1136.06 39.95 0.0000 B:chung nam benh 6830.33 3415.17 120.10 0.0000 RESIDUAL 398.111 14 28.4365 -TOTAL (CORRECTED) 8364.5 17 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for duong kinh khuan lac with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 18 37.5 thoi gian 12 29.5556 1.77753 25.7431 33.368 18 45.4444 1.77753 41.632 49.2569 chung nam benh NBT01 49.8333 2.17702 45.1641 54.5026 NBT03 52.6667 2.17702 47.9974 57.3359 NBT04 10.0 2.17702 5.33075 14.6693 Multiple Range Tests for duong kinh khuan lac by thoi gian -Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -12 29.5556 X 18 45.4444 X -Contrast Difference +/- Limits -12 - 18 *-15.8889 5.39159 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục Kết đối kháng chủng Trichoderma với nấm bệnh NBT01 51 Analysis of Variance for hieu qua uc che - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:ngay 36006.5 12002.2 133.69 0.0000 B:chung trichoderm 8492.65 12 707.721 7.88 0.0000 RESIDUAL 2962.71 33 89.7792 -TOTAL (CORRECTED) 48300.3 48 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for hieu qua uc che with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 49 49.2745 13 4.95385 2.62794 -0.392759 10.3005 12 51.1629 2.77033 45.5266 56.7992 13 66.4231 2.62794 61.0765 71.7697 11 74.5582 2.9297 68.5977 80.5187 chung trichoderma T05 41.0 4.7376 31.3613 50.6387 T06 35.45 4.7376 25.8113 45.0887 T07 42.775 4.7376 33.1363 52.4137 T08 41.4279 5.53299 30.1709 52.6849 T09 45.675 4.7376 36.0363 55.3137 T10 69.85 4.7376 60.2113 79.4887 T14 70.55 4.7376 60.9113 80.1887 T16 49.5612 5.53299 38.3042 60.8182 T18 65.1 4.7376 55.4613 74.7387 T19 39.55 4.7376 29.9113 49.1887 T20 35.15 4.7376 25.5113 44.7887 T24 65.55 4.7376 55.9113 75.1887 T25 38.9295 5.52843 27.6818 50.1772 -Multiple Range Tests for hieu qua uc che by -Method: 95.0 percent LSD Count LS Mean Homogeneous Groups -1 13 4.95385 X 12 51.1629 X 13 66.4231 X 11 74.5582 X -Contrast Difference +/- Limits -1 - *-46.2091 7.71716 - *-61.4692 7.56124 - *-69.6043 7.89746 - *-15.2602 7.71716 - *-23.3953 8.04687 - *-8.13511 7.89746 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục Kết đối kháng chủng Trichoderma với nấm bệnh NBT03 52 Analysis of Variance for hieu qua uc che - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:chung trichoderm 14707.0 12 1225.58 11.02 0.0000 B:ngay 36402.3 12134.1 109.06 0.0000 RESIDUAL 4005.39 36 111.261 -TOTAL (CORRECTED) 55114.7 51 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for hieu qua uc che with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 52 56.1512 chung trichoderma T05 49.725 5.27401 39.0288 60.4212 T06 24.2 5.27401 13.5038 34.8962 T07 53.975 5.27401 43.2788 64.6712 T08 40.9375 5.27401 30.2413 51.6337 T09 41.025 5.27401 30.3288 51.7212 T10 76.5025 5.27401 65.8063 87.1987 T14 72.025 5.27401 61.3288 82.7212 T16 65.05 5.27401 54.3538 75.7462 T18 72.225 5.27401 61.5288 82.9212 T19 44.45 5.27401 33.7538 55.1462 T20 39.4 5.27401 28.7038 50.0962 T24 74.625 5.27401 63.9288 85.3212 T25 75.825 5.27401 65.1288 86.5212 13 12.5469 2.9255 6.61373 18.4801 13 57.5692 2.9255 51.636 63.5024 13 75.3731 2.9255 69.4399 81.3063 13 79.1154 2.9255 73.1822 85.0486 -Multiple Range Tests for hieu qua uc che by chung trichoderma -Method: 95.0 percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -T06 24.2 X T20 39.4 X T08 40.9375 X T09 41.025 X T19 44.45 X T05 49.725 X T07 53.975 XX T16 65.05 XX T14 72.025 X T18 72.225 X T24 74.625 X T25 75.825 X T10 76.5025 X Phụ lục Kết đối kháng chủng Trichoderma với nấm bệnh NBT04 53 Analysis of Variance for hieu qua uc che - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:chung trichoderm 5564.59 12 463.716 1.94 0.0619 B:ngay 25030.3 8343.44 34.92 0.0000 RESIDUAL 8600.99 36 238.916 -TOTAL (CORRECTED) 39195.9 51 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for hieu qua uc che with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 52 27.7038 chung trichoderma T05 16.625 7.72846 0.950927 32.2991 T06 15.325 7.72846 -0.349073 30.9991 T07 17.35 7.72846 1.67593 33.0241 T08 38.225 7.72846 22.5509 53.8991 T09 25.375 7.72846 9.70093 41.0491 T10 40.425 7.72846 24.7509 56.0991 T14 42.1 7.72846 26.4259 57.7741 T16 23.35 7.72846 7.67593 39.0241 T18 31.5 7.72846 15.8259 47.1741 T19 14.375 7.72846 -1.29907 30.0491 T20 18.675 7.72846 3.00093 34.3491 T24 39.075 7.72846 23.4009 54.7491 T25 37.75 7.72846 22.0759 53.4241 13 3.31538 4.28698 -5.37903 12.0098 13 12.9615 4.28698 4.26713 21.656 13 34.0846 4.28698 25.3902 42.779 13 60.4538 4.28698 51.7594 69.1483 -Multiple Range Tests for hieu qua uc che by chung trichoderma -Method: 95.0 percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -T19 14.375 X T06 15.325 X T05 16.625 XX T07 17.35 XXX T20 18.675 XXXX T16 23.35 XXXXX T09 25.375 XXXXX T18 31.5 XXXXX T25 37.75 XXXX T08 38.225 XXXX T24 39.075 XXX T10 40.425 XX T14 42.1 X 54 Phụ lục Bảng đo tốc độ tăng trưởng chủng Trichoderma Đường kính khuẩn lạc (mm) Chủng Trichoderma 12 18 giờ L1 L2 L3 L1 L2 L3 T05 13,2 13,1 13,1 19,6 19,5 19,6 T06 14,8 14,9 14,8 21,8 21,9 21,8 T07 11,9 12,1 12 17,5 17,5 17,5 T08 16 16,1 16 21,8 22 22 T09 13,1 12,8 13 21,5 21,4 21,5 T10 17 16,9 16,8 24,8 24,8 24,7 T14 19,1 18,8 18,9 26,2 26,1 26 T16 17,6 17,6 17,5 26,4 26,1 26,3 T18 15,2 15,3 15,2 22,1 22,1 22,1 T19 14,3 14,4 14,4 23,2 23,1 23,3 T20 15 14,9 15,2 23,1 23 23,1 T24 19,1 19,1 19,2 28,3 28 28,1 T25 18,2 18,1 18,1 26 25,9 25,8 Phụ lục Bảng đo tốc độ tăng trưởng chủng nấm bệnh Đường kính khuẩn lạc (mm) Chủng Trichoderma NBT01 L1 38,9 12 L2 38,9 40,0 L1 60,8 NBT03 41,0 39,8 39,9 NBT04 9,1 9,0 9,0 L3 55 18 giờ L2 L3 60,9 60,8 64,2 64,3 64,2 11,0 11,0 11,2 Phụ lục Bảng đo kết đối kháng chủng Trichoderma với NBT01 Trichoderma T5 T6 T7 T8 T09 T10 T14 T16 T18 T19 T20 T24 T25 D1 D2 D3 DTB DDC H 5,1 4,7 4,5 2,8 4,7 5,1 4,7 3,8 4,4 4,2 3,9 5,2 4,2 4,1 4,5 4,5 4,1 1,8 4,1 2,2 0,5 4,6 1,9 0,4 4,5 4,5 1,1 0,2 4,9 2,5 1,1 4,5 4,6 4,3 3,4 5,3 5,1 4,1 4,5 4,6 2,6 1,1 4,6 4,2 4 4,5 4,8 4,2 2,7 4,7 5,1 4,4 4,6 4,3 3,3 4,7 4,4 4,2 4,6 4,6 4,2 1,8 4,3 2,2 0,9 4,2 0,4 4,9 4,6 2,8 0,2 4,9 2,3 0,6 4,9 4,5 4,4 3,6 5,2 4,5 4,6 4,8 2,7 0,9 4,6 4,3 4,1 4,6 4,4 4,3 3,7 5,2 5,1 5,1 3,9 4,6 4,2 4,1 3,4 4,7 4,6 4,5 4,8 4,5 4,3 1,8 4,1 2,5 0,6 4,3 2,1 0,4 5,1 4,6 1,9 0,2 4,9 2,3 1,2 4,6 4,4 3,5 4,2 4,6 4,5 4,5 4,9 2,1 0,8 4,6 4,3 4,2 4,5 4,73 4,63 4,33 3,07 4,87 5,10 4,73 3,90 4,53 4,23 4,03 3,53 4,87 4,40 4,27 1,00 4,63 4,53 4,20 1,80 4,17 2,30 0,67 0,00 4,37 2,00 0,40 0,00 4,83 4,57 1,93 0,20 4,90 2,37 0,97 0,00 4,80 4,57 4,37 3,50 4,90 4,90 4,37 4,53 4,77 2,47 0,93 0,00 4,60 4,27 4,10 4,17 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,93 8,00 9,00 9,00 4,05 42,08 51,85 65,93 1,35 36,25 47,41 56,67 8,11 47,08 55,19 60,74 1,35 45,00 52,59 88,89 6,08 43,33 53,33 80,00 15,54 71,25 92,59 100,00 11,49 75,00 95,56 100,00 2,03 42,92 78,52 97,78 0,68 70,42 89,26 100,00 2,70 42,92 51,48 61,11 0,68 38,75 51,48 49,63 3,38 69,17 89,63 100,00 6,76 46,67 54,44 53,70 56 Phụ lục Bảng đo kết đối kháng chủng Trichoderma với NBT03 Trichoderma T5 T6 T7 T8 T09 T10 T14 T16 T18 T19 T20 T24 T25 D1 D2 D3 DTB DDC H 4,1 2,7 2,2 5,5 5,4 4,7 7,6 5,1 3,9 0,7 5,2 5,1 4,1 3,2 5,1 3,5 3,4 4,5 0,2 5,4 0,2 5,6 2,7 1,1 4,5 2,3 1,3 5,3 2,9 2,1 5,6 4,8 3,8 4,5 4,7 1,6 1,4 3,2 2,2 1,5 0,3 5,8 4,4 2,4 2,1 5,8 5,4 4,9 7,5 6,1 3,6 2,5 0,8 5,3 5,1 4,2 3,2 5,7 5,1 3,2 3,3 3,3 0,3 5,2 1,8 0,2 5,9 2,4 0,8 1,8 1,2 5,7 5,2 2,8 2,6 4,9 3,4 4,5 3,9 1,2 1,2 2,9 2,1 1,4 0,2 5,9 4,3 2,5 2,3 5,4 7,4 5,8 4,3 2,8 1,4 5,5 5,2 3,2 5,6 3,2 3,4 4,5 0,2 0,2 5,8 2,5 0,5 1,3 5,5 5,3 2,8 2,6 5,7 4,8 3,4 4,5 3,7 1,2 1,2 2,8 2,2 1,4 0,3 5,57 4,27 2,53 2,20 5,77 5,40 4,87 7,50 5,67 3,93 2,43 0,97 5,33 5,13 4,10 3,20 5,77 5,07 3,30 3,37 4,10 1,67 0,23 0,00 5,20 1,60 0,20 0,00 5,77 2,53 0,80 0,00 4,17 2,03 1,27 0,00 5,73 5,27 2,83 2,43 5,43 4,83 3,53 4,50 4,10 1,33 1,27 0,00 2,97 2,17 1,43 0,27 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 5,77 8,20 9,00 9,00 3,47 47,97 71,85 75,56 0,00 34,15 45,93 16,67 1,73 52,03 72,96 89,26 7,51 37,40 54,44 64,44 0,00 38,21 63,33 62,59 28,90 79,67 97,41 100,00 9,83 80,49 97,78 100,00 0,00 69,11 91,11 100,00 27,75 75,20 85,93 100,00 0,58 35,77 68,52 72,96 5,78 41,06 60,74 50,00 28,90 83,74 85,93 100,00 48,55 73,58 84,07 97,04 57 Phụ lục 10 Bảng đo kết đối kháng chủng Trichoderma với NBT04 Trichoderma T5 T6 T7 T8 T09 T10 T14 T16 T18 T19 T20 T24 T25 D1 D2 D3 DTB DDC H 1,1 1,5 2,7 1,1 1,6 2,3 2,2 1,2 1,9 1,7 1,1 1,6 0,6 0,5 1,1 1,8 1,8 1,6 1,1 1,8 1,7 1,8 1,3 1,1 1,8 1,8 1,9 1,2 1,8 1,4 0,9 1,1 1,8 2,3 1,8 1,9 2,2 1,1 1,6 1,7 1,2 1,8 1,4 0,1 1,2 1,5 2,4 1,9 1,2 1,6 2,4 2,2 1,2 1,9 2,1 1,2 1,6 1,1 1,4 1,2 1,6 1,7 1,4 1,1 1,6 1,5 1,2 1,6 1,5 1,2 1,6 1,6 1,8 1,2 1,8 1,6 0,8 1,2 1,5 2,3 2,4 1,2 1,5 2,1 1,1 1,7 1,6 1,1 1,5 0,2 1,1 1,5 2,6 1,9 1,1 1,6 2,3 2,2 1,1 1,8 1,7 1,1 1,6 1,1 1,1 1,6 1,7 1,6 1,1 1,5 1,5 1,1 1,4 1,5 1,8 1,7 1,7 1,7 1,7 0,7 1,2 1,6 2,2 2,4 1,2 1,5 2,1 2,2 1,1 1,7 1,7 1,1 1,6 1,5 0,2 1,13 1,50 2,57 1,93 1,13 1,60 2,33 2,20 1,17 1,87 1,83 2,00 1,13 1,60 0,93 0,97 1,13 1,67 1,73 1,53 1,10 1,63 1,57 0,00 1,10 1,60 1,43 0,00 1,10 1,73 1,70 1,80 1,13 1,77 1,57 0,80 1,17 1,63 2,17 2,37 1,13 1,60 2,00 2,17 1,10 1,67 1,67 0,00 1,13 1,63 1,63 0,17 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 1,17 1,90 2,70 3,10 2,86 21,05 4,94 37,63 2,86 15,79 13,58 29,03 0,00 1,75 32,10 35,48 2,86 15,79 65,43 68,82 2,86 12,28 35,80 50,54 5,71 14,04 41,98 100,00 5,71 15,79 46,91 100,00 5,71 8,77 37,04 41,94 2,86 7,02 41,98 74,19 0,00 14,04 19,75 23,66 2,86 15,79 25,93 30,11 5,71 12,28 38,27 100,00 2,86 14,04 39,51 94,62 58 PHỤ LỤC 11 Bảng đối kháng dịch chiết Trichoderma với chủng nấm bệnh Nấm bệnh NBT01 NBT03 NBT04 Dịch chiết chủng Trichoderma Đường kính khuẩn lạc (cm) Đối chứng Môi trường chứa dịch L1 L3 L1 L2 L3 8,2 8,0 2,1 2,2 2,2 7,5 7,5 7,5 1,9 1,9 2,0 T24 7,9 7,8 7,9 1,7 1,6 1,7 T10 9,0 9,0 9,0 3,1 3,2 3,2 T14 9,0 9,0 9,0 3,0 3,0 3,0 T24 9,0 9,0 9,0 3,3 3,2 3,4 T10 1,5 1,4 1,5 0,7 0,6 0,7 T14 1,5 1,6 1,4 0,6 0,6 0,5 T24 1,6 1,7 1,7 0,6 0,7 0,5 T10 8,1 T14 L2 50 Hình phụ lục 12 Hình chủng Trichoderma dùng nghiên cứu 51 Phụ lục 13 Hình kết gây bệnh nhân tạo long NBT03 NBT01 NBT04 NBT04 NBT03 ĐC NBT01 NBT04 52 Phụ lục 14 Hình kết đối kháng đồng thời đĩa petri NBT01-T05 NBT01-T24 NBT01-T14 NBT03-T014 NBT01-T10 NBT01-T19 NBT03-T07 NBT04-T20 NBT03-T10 NBT04-T18 NBT04-T24 NBT04-T09 53 Phụ lục 15 Hình đối kháng sau mơi trường PGA NBT01 NBT03 NBT03 54 Phụ luc 16 Hình đối kháng dịch chiết Trichoderma NBT01 NBT01 NBT01 ĐC NBT01 NBT03 NBT03 NBT03 ĐC NBT03 55 NBT04 NBT04 NBT04 ĐC NBT04 Phụ lục 17 Hình đối kháng mơ long ĐC ĐK ĐỒNG THỜI ĐC ĐK SAU ĐC ĐK ĐỒNG THỜI ĐK SAU 56 ĐK ĐỒNG THỜI ĐK SAU ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÒNG TRỊ MỘT SỐ NẤM BỆNH... BỆNH TRÊN THANH LONG BẰNG TRICHODERMA Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực Ths TRẦN NGỌC HÙNG TRƯƠNG MINH TƯỜNG Ks BIỆN THỊ LAN THANH Tháng 07/2011 ii LỜI CẢM ƠN Trải qua bốn năm học đại học , bên... Chị công ty TNHH Gia Tường tạo điều kiện giúp đỡ em trình thực đề tài KS Nguyễn Văn Lẫm KS Nguyễn Minh Quang hỗ trợ kiến thức tận tình giúp đỡ em thực đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học Xin cảm