NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH PHÔI SOMA THỨ CẤP BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO LỚP MỎNG CÂY CỌC RÀO (Jatropha curcas L.)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH PHÔI SOMA THỨ CẤP BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO LỚP MỎNG CÂY CỌC RÀO (Jatropha curcas L.) Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : LÊ THỊ HIỀN TRANG Niên khóa : 2008 – 2012 Tháng 07/2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH PHÔI SOMA THỨ CẤP BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO LỚP MỎNG CÂY CỌC RÀO (Jatropha curcas L.) Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS ĐỖ ĐĂNG GIÁP LÊ THỊ HIỀN TRANG CN NGUYỄN THỊ KIM LOAN Tháng 07/2012 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tốt nghiệp trưởng thành ngày hôm xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: Thầy - Thạc sĩ Đỗ Đăng Giáp, Thầy tạo điều kiện tốt nhất, đưa ý tưởng, định hướng giúp em hồn thành đề tài Chị Nguyễn Thị Kim Loan anh Trần Trọng Tuấn, người dành cho em quan tâm lớn, đưa lời khuyên, góp ý chân thành cho sai sót em suốt q trình thực khóa luận, anh chị nhiệt tình bảo, hướng dẫn truyền đạt nhiều kinh nghiệm, kỹ năng, khơng chun mơn mà học sống Em xin cảm ơn Ban lãnh đạo phòng thí ngiệm trọng điểm phía Nam Cơng nhệ tế bào thực vât – Viện Sinh học Nhiệt đới tạo điều kiện cho em hoàn thành đề tài Em xin gởi lời cảm ơn đến anh, chị phòng thí ngiệm trọng điểm phía Nam Công nhệ tế bào thực vât: anh Tứ, chị Trang, chị Phòng, chị Thư, chị Hà cho em lời khuyên cần thiết ngày đầu bỡ ngỡ bước chân vào Viện giúp đỡ em nhiều suốt q trình thực khóa luận Cảm ơn người bạn: chị Ngọc Anh, Trường, chị Thoan, anh Tuấn, Tài bên cạnh động viên, hỗ trợ tơi suốt q trình làm đề tài Cảm ơn người bạn thân tập thể lớp DH08SH bên cạnh, động viên nhắc nhở, chia sẻ niềm vui, nỗi buồn suốt năm đại học Xin cảm ơn Ban giám hiệu trường đại học Nông Lâm TPHCM tạo điều kiện cho em suốt năm học tập trường Cảm ơn Thầy Cô dạy dỗ, truyền đạt kinh nghiệm học tập sống Thầy Cô thuộc Bộ môn Công nghệ Sinh học quan tâm truyền đạt kiến thức chuyên ngành bổ ích Con xin dành lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người dù xa bên cạnh quan tâm, động viên, lo lắng cho Con xin cảm ơn Bố Má, người cho tình yêu thương động lực lớn để vượt qua khó khăn sống TPHCM, ngày 16 tháng năm 2012 Lê Thị Hiền Trang i TÓM TẮT Đề tài : “Nghiên cứu phát sinh phôi soma thứ cấp phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào Cọc rào (Jatropha curcas L.)” thực từ tháng năm 2012 đến tháng năm 2012 phòng thí nghiệm trọng điểm phía Nam Cơng nghệ tế bào thực vật - Viện Sinh học Nhiệt đới Ứng dụng công nghệ sinh học để sản xuất nhiên liệu sinh học thay nhiên liệu hóa thạch thời điểm dầu mỏ, khí đốt ngày cạn kiệt vấn đề đáng quan tâm Do đó, phát triển hệ thống phát sinh phôi thứ cấp từ phôi sơ cấp Cọc rào hứa hẹn đem lại tiềm to lớn cho công nghệ vi nhân giống Cọc rào nhằm phục vụ cho sản xuất nhiên liệu sinh học Đề tài thực nghiên cứu phương pháp nhân giống vơ tính Cọc rào thông qua hệ thống phát sinh phôi thứ cấp từ lớp mỏng tế bào phôi sơ cấp Các mô sẹo thu từ nuôi cấy mảnh Cọc rào nuôi cấy môi trường MS chứa 2,4-D (0,01; 0,03; 0,05; 0,07 (mg/l)) kinetin (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 (mg/l)) riêng biệt Sau tuần nuôi cấy, phôi sơ cấp nhận thấy phát sinh tốt nghiệm thức mg/l kinetin với tỉ lệ hình thành phơi 76,67% Phơi sơ cấp cắt theo kỹ thuật cắt lớp mỏng tế bào (ngang dọc) nuôi cấy môi trường MS bổ sung 1,5 mg/l kinetin kết hợp 0,05 mg/l 2,4-D Phôi thứ cấp nhận thấy phát sinh lắt cắt dọc sau tuần nuôi cấy với tỉ lệ 53,33%, lát cắt ngang không nhận thấy phôi thứ cấp phát sinh Các phôi thứ cấp sau khảo sát trưởng thành cách ni cấy chúng môi trường chứa ABA (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 (mg/l)) TDZ (0,05; 0,10; 0,15; 0,20 (mg/l)) riêng lẻ, kết thu được, nghiệm thức bổ sung ABA nồng độ 1,0 mg/l cho hiệu trưởng thành phôi tốt sau tuần nuôi cấy Khi khảo sát tạo rễ tái sinh từ phôi mơi trường khống khác (MS, ½ MS, B5, WPM, White) sử dụng chất điều hòa sinh trưởng với nồng độ khác (IBA: 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 (mg/l); NAA: 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 (mg/l)), rễ nhận thấy hình thành tốt mơi trường B5 bổ sung 1,5 mg/l IBA với tỉ lệ tạo rễ khoảng 80 - 100% Bộ rễ từ hạt, từ phôi soma từ giâm cành thu nhận lại so sánh hình thái cấu trúc, kết so sánh cho thấy rễ từ phơi từ hạt có hình thái cấu trúc giống nhau, từ phơi thay cho trồng hạt ii SUMMARY “Secondary somatic embryogenesis from thin cell layers of Jatropha curcas L.” Jatropha curcas L is one potential source of biofuel-producing enery crop Secondary somatic embryogenesis, a system improvement of somatic embryogenesis for more than, faster and quality plant production has been successfully applied to regenerate plants in Jatropha curcas in first time Embryogenic calli were obtained from leaf explants cultured on MS basal medium supplemented with 2,4-D and kinetin distinct with different concentrations of 0.01 0.07 mg/l 2,4-D and 0.5 - 2.0 mg/l kinetin within weeks Induction of primary somatic embryos from 76,67% of the culture was achieved on MS medium with 1.0 mg/l kinetin Thin cell layers were excised through and length (2 mm) from torpedo primary somatic embryos of Jatropha curcas L then cultured on MS basal medium supplemented with 1.5 mg/l kinetin and 0,05 mg/l 2,4-D After weeks, a total 53,33% secondary embryos obtained from lTCLs of primary somatic embryos In order to progress developmentally beyond proliferation cycles, secondary somatic embryos were cultured on MS with 0.5 – 2.0 mg/l ABA or 0.05 - 0.2 mg/l TDZ for weeks to achive maturation Most embryos matured were obtained in the presence of 1.0 mg/l ABA The best rooting percentage (80 - 100%) was observed on the B5 medium supplement with 1.5 mg/l IBA after weeks of incubation of harvested shoots Roots derived-embryos were cropped and compared roots derived-seedlings and roots derived-planlets Comparison showed results roots derived-embryos and roots derived-planlets was the same morphology and structure and different from roots derived-seedlings This study of secondary somatic embryogenesis in Jatropha curcas L may be an ideal system for future transgenic research or production nuclear iii MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Tóm tắt .ii Summary iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt .vii Danh sách bảng viii Danh sách hình ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Cọc rào 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Nguồn gốc phân bố Cọc rào 2.1.3 Đặc điểm thực vật 2.1.3.1 Đặc điểm hình thái 2.1.3.2 Đặc điểm sinh trưởng phát triển 2.1.4 Thành phần hóa học 2.1.5 Giá trị sử dụng Cọc rào 2.1.5.1 Nhiên liệu sinh học - Giá trị kinh tế, xã hội 2.1.5.2 Bảo vệ môi trường 2.1.5.3 Làm phân hữu thức ăn chăn nuôi 2.1.5.4 Công dụng làm thuốc 2.1.6 Các phương pháp nhân giống Cọc rào 2.1.6.1 Phương pháp nhân giống cổ điển 2.1.6.2 Phương pháp nhân giống đại 2.2 Giới thiệu phôi soma 12 iv 2.2.1 Khái niệm phôi soma 12 2.2.2 Các đường phát sinh phôi soma 13 2.2.3 Các giai đoạn q trình phát sinh phơi soma 14 2.2.4 Phôi soma thứ cấp 15 2.2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến phát sinh phôi soma 17 2.2.5.1 Mẫu cấy 17 2.2.5.2 Auxin 17 2.2.5.3 Kiểu gen 18 2.2.5.4 Các chất điều hòa sinh trưởng khác 18 2.2.5.5 Nguồn nitrogen 19 2.2.5.6 Một số yếu tố khác 19 2.3 Hệ thống nuôi cấy TCL nghiên cứu tái sinh, nhân giống thực vật 20 2.3.1 Định nghĩa hệ thống lớp mỏng tế bào 20 2.3.2 Những đặc điểm hệ thống lớp mỏng tế bào 21 2.3.3 Ưu điểm phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào 22 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 3.2 Vật liệu 24 3.2.1 Vật liệu nghiên cứu 24 3.2.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 24 3.2.2.1 Thiết bị, dụng cụ 24 3.2.2.2 Hóa chất, mơi trường 24 3.2.3 Điều kiện nuôi cấy 25 3.3 Phương pháp nghiên cứu 25 3.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng 2,4-D, kinetin lên hình thành phôi sơ cấp từ mô sẹo Cọc rào 25 3.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát phát sinh phôi soma thứ cấp từ lớp mỏng tế bào phôi soma Cọc rào 26 3.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng ABA, TDZ lên trưởng thành nảy mầm phôi soma Cọc rào 26 3.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên hình thành rễ tái sinh từ phôi soma Cọc rào 27 v 3.3.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng IBA, NAA lên hình thành rễ tái sinh từ phôi soma Cọc rào 27 3.3.6 Thí nghiệm 6: So sánh hình thái cấu trúc rễ Cọc rào từ phôi soma, hạt, giâm cành 28 3.3.7 Phương pháp nhuộm, quan sát hình thái giải phẫu rễ 28 3.3.8 Xử lý số liệu 29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng 2,4-D, kinetin lên hình thành phơi sơ cấp từ mô sẹo Cọc rào 30 4.2 Thí nghiệm 2: Sự phát sinh phôi soma thứ cấp từ lớp mỏng tế bào phôi soma Cọc rào 33 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng ABA, TDZ lên trưởng thành nảy mầm phôi soma Cọc rào 37 4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng mơi trường khống lên hình thành rễ tái sinh từ phôi soma Cọc rào 41 4.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng IBA, NAA lên hình thành rễ tái sinh từ phơi soma Cọc rào 43 4.6 Thí nghiệm 6: So sánh hình thái cấu trúc rễ Cọc rào từ phôi soma, hạt, giâm cành 46 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 49 5.1 Kết luận 49 5.2 Đề nghị 49 Tài liệu tham khảo Phụ lục vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BA : Benzyladenine BAP : Benzylaminopurine CĐHSTTV : Chất điều hòa sinh trưởng thực vật EC : Embryogenic callus GA3 : Gibberellic acid IAA : 3-Indoleacetic acid IBA : 3-Indolebutyric acid IEDC : Induced embryogenic determined cell Kinetin : 6-furfurylaminopurine lTCL : longitudial thin cell layer MS : Murashige Skoog, 1962 NAA : α-Naphthaleneacetic acid PEDC : Pre - embryogenic determined cell PEM : Proembryogenic mass TCL : Thin cell layer TDZ : Thidiazuron tTCL : transverse thin cell layer WPM : woody plant medium vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Khảo sát ảnh hưởng kinetin 2,4-D lên hình thành phơi soma Cọc rào 25 Bảng 3.2 Khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi soma Cọc rào 26 Bảng 3.3 Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên hình thành rễ tái sinh từ phơi soma 27 Bảng 3.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ IBA NAA lên hình thành rễ tái sinh từ phôi soma Cọc rào 28 Bảng 4.1 Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D, kinetin lên phát sinh phôi Cọc rào 30 Bảng 4.2 Sự phát sinh phôi soma thứ cấp từ tế bào lớp mỏng phôi soma Cọc rào 34 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nồng độ ABA, TDZ lên trưởng thành nảy mầm phôi soma Cọc rào 38 Bảng 4.4 Ảnh hưởng mơi trường khống lên hình thành rễ tái sinh từ phôi soma Cọc rào 41 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ IBA, NAA lên hình thành rễ tái sinh từ phôi soma Cọc rào 44 viii Bảng ANOVA Table for TRỌNG LƯỢNG PHÔI by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,00613944 ,000877062 182,36 0,0000 Within groups 0,0000769533 16 0,00000480958 Total (Corr.) 0,00621639 23 Bảng Multiple Range Tests for TRỌNG LƯỢNG PHÔI by NỒNG ĐỘ Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups 0,01 0,0101667 X 0,03 0,0135 X 0,07 0,0138 X 0,5 0,0194667 X 0,05 0,0313 X 0,0337333 X 1,5 0,0447333 X 0,0583333 X -6 Xử lý thống kê ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Bảng Số liệu tổng phôi dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Nghiệm thức ĐC A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 78 112 73 70 55 43 40 40 39 Lần lặp lại 101 125 89 65 72 47 43 43 39 87 107 97 77 66 45 46 42 40 Trung bình 88,67 114,67 86,33 70,67 70,67 45,00 43,00 41,67 39,33 Bảng ANOVA Table for TỔNG PHÔI by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 15040.6 2148.66 47.48 0.0000 Within groups 724.0 16 45.25 Total (Corr.) 15764.6 23 Bảng Multiple Range Tests for TỔNG PHÔI by NỒNG ĐỘ -Method: 95.0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups -0.2 39.3333 X 0.15 41.6667 X 0.1 43.0 X 0.05 45.0 X 64.3333 X 1.5 70.6667 X 86.3333 X 0.5 114.667 X -Bảng Số liệu phơi hình cầu dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Nghiệm thức ĐC A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 25 51 10 Lần lặp lại 41 56 16 10 13 12 31 43 20 11 11 Trung bình 32,33 50,00 15,33 10,00 10,00 6,67 8,33 7,00 5,67 Bảng ANOVA Table for HÌNH CẦU by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4601.96 657.423 49.93 0.0000 Within groups 210.667 16 13.1667 -Total (Corr.) 4812.63 23 Bảng Multiple Range Tests for HÌNH CẦU by NỒNG ĐỘ -Method: 95.0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups -0.2 5.66667 X 0.05 6.66667 X 0.15 7.0 X 0.1 8.33333 X 1.5 10.0 XX 10.0 XX 15.3333 X 0.5 50.0 X -Bảng Số liệu phơi hình tim dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Nghiệm thức ĐC A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 37 31 19 21 21 14 14 15 15 Lần lặp lại 42 42 29 19 30 16 14 14 19 36 39 32 28 24 20 14 19 17 Trung bình 38,33 37,33 26,67 22,67 25,00 16,67 14,00 16,00 17,00 Bảng ANOVA Table for HÌNH TIM by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 1259.17 179.881 10.11 0.0001 Within groups 284.667 16 17.7917 -Total (Corr.) 1543.84 23 Bảng Multiple Range Tests for HÌNH TIM by NƠNG ĐỘ -Method: 95.0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups -0.1 14.0 X 0.15 16.0 XX 0.05 16.6667 XX 0.2 17.0 XX 1.5 22.6667 XX 25.0 X 26.6667 X 0.5 37.3333 X -Bảng 10 Số liệu phơi hình thủy lơi dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Nghiệm thức ĐC A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 16 27 28 29 27 19 21 17 18 Lần lặp lại 18 23 33 30 24 22 16 20 15 20 24 35 34 28 20 23 18 17 Trung bình 18,00 24,67 32,00 31,00 26,33 20,33 20,00 18,33 16,67 Bảng 11 ANOVA Table for THỦY LÔI by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 700.0 100.0 16.44 0.0000 Within groups 97.3333 16 6.08333 Total (Corr.) 797.333 23 Bảng 12 Multiple Range Tests for THỦY LÔI by NỒNG ĐỘ -Method: 95.0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups -0.2 16.6667 X 0.15 18.3333 X 0.1 20.0 X 0.05 20.3333 X 0.5 24.6667 X 26.3333 X 1.5 31.0 X 32.0 X -Bảng 13 Số liệu phôi mầm dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Nghiệm thức ĐC A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 12 10 1 Lần lặp lại 10 5 1 0 0 0 Trung bình 0,00 2,67 10,00 7,00 3,00 1,33 0,67 0,33 0,00 Bảng 14 ANOVA Table for LÁ MẦM by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 267.958 38.2798 15.06 0.0000 Within groups 40.6667 16 2.54167 Total (Corr.) 308.625 23 Bảng 15 Multiple Range Tests for LÁ MẦM by NỒNG ĐỘ -Method: 95.0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups -0.2 0.0 X 0.15 0.333333 XX 0.1 0.666667 XX 0.05 1.33333 XX 0.5 2.66667 XX 3.0 X 1.5 7.0 X 10.0 X -Bảng 16 Số liệu số dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ABA TDZ lên trưởng thành phôi Nghiệm thức ĐC A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 0 0 0 Lần lặp lại 0 1 0 0 0 0 0 0 Trung bình 0,00 0,00 2,33 0,67 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Bảng 17 ANOVA Table for CÂY CON by NỒNG ĐỘ Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14.2917 2.04167 6.13 0.0013 Within groups 5.33333 16 0.333333 Total (Corr.) 19.625 23 Bảng 18 Multiple Range Tests for CÂY CON by NỒNG ĐỘ -Method: 95.0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups -0.1 0.0 X 0.0 X 0.2 0.0 X 0.5 0.0 X 0.15 0.0 X 0.05 0.0 X 1.5 0.666667 X 2.33333 X -7 Xử lý thống kê ảnh hưởng mơi trường khống lên rễ cọc rào Bảng Số liệu tỉ lệ hình thành rễ thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên rễ Cọc rào Nghiệm thức M1 M2 M3 M4 M5 60 80 100 100 100 Lần lặp lại 100 100 100 80 100 80 100 100 80 80 Trung bình 80,00 93,33 100,00 86,67 93,33 Bảng ANOVA Table for TỶ LỆ HÌNH THÀNH RỄ by MƠI TRƯỜNG KHOÁNG Analysis of Variance -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 693,333 173,333 1,08 0,4152 Within groups 1600,0 10 160,0 -Total (Corr.) 2293,33 14 Bảng Số liệu số lượng rễ thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên rễ Cọc rào Nghiệm thức M1 M2 M3 M4 M5 0,8 3,0 4,4 3,4 3,0 Lần lặp lại 1,2 3,6 3,8 2,6 3,4 1,0 3,4 4,0 2,6 2,8 Trung bình 1,00 3,33 4,07 2,87 3,07 Bảng ANOVA Table for SỐ LƯỢNG RỄ by MƠI TRƯỜNG KHỐNG Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 15,5467 3,88667 36,44 0,0000 Within groups 1,06667 10 0,106667 -Total (Corr.) 16,6133 14 Bảng Multiple Range Tests for SỐ LƯỢNG RỄ by MƠI TRƯỜNG KHỐNG -Method: 95,0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -1/2 MS 1,0 X W 2,86667 X WPM 3,06667 X MS 3,33333 X B5 4,06667 X Bảng Số liệu chiều dài rễ thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên rễ Cọc rào Nghiệm thức M1 M2 M3 M4 M5 0,44 1,32 2,04 1,40 1,52 Lần lặp lại 0,58 1,68 2,08 1,20 1,50 0,60 1,72 1,94 1,24 1,30 Trung bình 0,54 1,57 2,02 1,28 1,44b Bảng ANOVA Table for CHIỀU DÀI RỄ by MÔI TRƯỜNG KHOÁNG Analysis of Variance -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 3,49723 0,874307 50,06 0,0000 Within groups 0,174667 10 0,0174667 -Total (Corr.) 3,67189 14 Bảng Multiple Range Tests for CHIỀU DÀI RỄ by MƠI TRƯỜNG KHỐNG -Method: 95,0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -1/2 MS 0,54 X W 1,28 X WPM 1,44 XX MS 1,57333 X B5 2,02 X -Bảng Số liệu trọng lượng rễ thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên rễ Cọc rào Nghiệm thức M1 M2 M3 M4 M5 0,0022 0,0110 0,0180 0,0114 0,0122 Lần lặp lại 0,0030 0,0142 0,0178 0,0096 0,0122 0,0032 0,0146 0,0168 0,0102 0,0108 Trung bình 0,0028 0,0132 0,0175 0,0104 0,0117 Bảng 10 ANOVA Table for TRỌNG LƯỢNG RỄ by MƠI TRƯỜNG KHỐNG Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,000347557 0,0000868893 71,46 0,0000 Within groups 0,00001216 10 0,000001216 Total (Corr.) 0,000359717 14 Bảng 11 Multiple Range Tests for TRỌNG LƯỢNG RỄ by MƠI TRƯỜNG KHỐNG -Method: 95,0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -1/2 MS 0,0028 X W 0,0104 X WPM 0,0117333 XX MS 0,0132667 X B5 0,0175333 X -Bảng Số liệu tỉ lệ chiều cao thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên rễ Cọc rào Nghiệm thức M1 M2 M3 M4 M5 1,40 2,02 2,36 2,22 1,96 Lần lặp lại 1,28 2,20 2,36 2,02 1,88 1,60 2,18 2,42 2,10 1,96 Trung bình 1,29 2,13 2,38 2,11 1,93 Bảng 10 ANOVA Table for CHIỀU CAO CÂY by MÔI TRƯỜNG KHOÁNG Analysis of Variance -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 2,05083 0,512707 21,48 0,0001 Within groups 0,238667 10 0,0238667 -Total (Corr.) 2,28949 14 Bảng 11 Multiple Range Tests for CHIỀU CAO CÂY by MÔI TRƯỜNG KHOÁNG -Method: 95,0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -1/2 MS 1,28667 X WPM 1,93333 X W 2,11333 XX MS 2,13333 XX B5 2,38 X -8 Xử lý thống kê ảnh hưởng NAA, IBA lên rễ Cọc rào tái sinh từ phôi soma Bảng Số liệu tỉ lệ hình thành rễ dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng NAA, IBA lên rễ Cọc rào tái sinh từ phôi soma Nghiệm thức ĐC I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 80 100 100 100 100 100 100 100 100 Lần lặp lại 80 80 100 100 100 80 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 Trung bình 86,67 93,33 100,00 100,00 100,00 93,33 100,00 100,00 100,00 Bảng ANOVA Table for TỶ LỆ HÌNH THÀNH RỄ by NGHIỆM THỨC Analysis of Variance -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 562,963 70,3704 1,58 1,58 Within groups 800,0 18 44,4444 -Total (Corr.) 1362,96 26 Bảng Số liệu số lượng rễ dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng NAA, IBA lên rễ Cọc rào tái sinh từ phôi soma Nghiệm thức ĐC I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 3,2 4,0 3,8 4,6 4,0 4,2 3,8 4,2 4,2 Lần lặp lại 3,2 3,0 4,2 4,6 3,8 3,4 3,8 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,4 4,2 3,6 4,2 4,4 4,2 Trung bình 3,47 3,67 4,00 4,53 4,00 3,73 3,93 4,20 4,13 Bảng ANOVA Table for SỐ LƯỢNG RỄ by MƠI TRƯỜNG KHỐNG Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2,40296 0,30037 2,94 0,00274 Within groups 1,84 18 0,102222 -Total (Corr.) 4,24296 26 Bảng Multiple Range Tests for SỐ LƯỢNG RỄ by NGHIỆM THỨC -Method: 95,0 percent LSD NGHIEM THUC Count Mean Homogeneous Groups -ĐC 3,46667 X I 0,5 3,66667 XX N 0,5 3,73333 XX N1 3,93333 XX I1 4,0 XXX I2 4,0 XXX N2 4,13333 XX N 1,5 4,2 XX I 1,5 4,53333 X Bảng Số liệu chiều dài rễ dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng NAA, IBA lên rễ Cọc rào tái sinh từ phôi soma Nghiệm thức ĐC I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 1,50 2,16 2,34 2,96 2,46 1,98 2,08 2,62 2,36 Lần lặp lại 1,50 1,72 2,26 2,92 2,44 1,56 2,16 2,48 2,36 1,86 2,08 2,36 3,18 2,44 1,94 2,16 2,64 2,38 Trung bình Bảng ANOVA Table for CHIỀU DÀI RỄ by NGHIỆM THỨC Analysis of Variance -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 4,25333 0,531667 25,97 0,0000 Within groups 0,368533 18 0,0204741 -Total (Corr.) 4,62187 26 Bảng Multiple Range Tests for CHIỀU DÀI RỄ by NGHIỆM THỨC -Method: 95,0 percent LSD NGHIEM THUC Count Mean Homogeneous Groups -ĐC 1,62 X N 0,5 1,82667 XX I 0,5 1,98667 XX N1 2,13333 XX I1 2,32 XX N2 2,36667 XXX I2 2,44667 XX N 1,5 2,58 X I 1,5 3,02 X 1,62 1,99 2,32 3,02 2,45 1,83 2,13 2,58 2,37 Bảng Số liệu trọng lượng rễ dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng NAA, IBA lên rễ Cọc rào tái sinh từ phôi soma Nghiệm thức ĐC I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 0,0130 0,0188 0,0210 0,0270 0,0248 0,0176 0,0184 0,0236 0,0210 Lần lặp lại 0,0132 0,0150 0,0204 0,0264 0,0222 0,0138 0,0190 0,0218 0,0206 0,0160 0,0182 0,0212 0,0290 0,0238 0,0168 0,0192 0,0240 0,0216 Trung bình 0,014 0,017 0,021 0,027 0,024 0,016 0,019 0,023 0,021 Bảng 10 ANOVA Table for TRỌNG LƯỢNG RỄ by NGHIỆM THỨC Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,000416439 0,0000520548 28,31 0,0000 Within groups 0,0000330933 18 0,00000183852 Total (Corr.) 0,000449532 26 Bảng 11 Multiple Range Tests for TRỌNG LƯỢNG RỄ by NGHIỆM THỨC -Method: 95,0 percent LSD NGHIEM THUC Count Mean Homogeneous Groups -ĐC 0,0140667 X N 0,5 0,0160667 XX I 0,5 0,0173333 XX N1 0,0188667 XX I1 0,0208667 XX N2 0,0210667 XX N 1,5 0,0231333 XX I2 0,0236 X I 1,5 0,0274667 X Bảng 12 Số liệu chiều cao dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng NAA, IBA lên rễ Cọc rào tái sinh từ phôi soma Nghiệm thức ĐC I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 2,28 2,60 2,62 3,14 2,84 2,44 2,48 3,00 2,72 Lần lặp lại 2,36 2,38 2,58 3,20 2,94 2,28 2,56 2,94 2,72 2,3 2,36 2,66 3,34 3,10 2,36 2,66 3,14 2,88 Trung bình 2,31 2,45 2,62 3,23 2,96 2,36 2,56 3,03 2,77 Bảng 13 ANOVA Table for CHIỀU CAO CÂY by NGHIỆM THỨC Analysis of Variance -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -Between groups 2,43159 0,303948 33,20 0,0000 Within groups 0,1648 18 0,00915556 -Total (Corr.) 2,59639 26 Bảng 14 Multiple Range Tests for CHIỀU CAO CÂY by NGHIỆM THỨC -Method: 95,0 percent LSD NGHIEM THUC Count Mean Homogeneous Groups -ĐC 2,31333 X N 0,5 2,36 X I 0,5 2,44667 XX N1 2,56667 XX I1 2,62 XX N2 2,77333 X I2 2,96 X N 1,5 3,02667 X I 1,5 3,22667 X ... Skoog, 1962 NAA : α-Naphthaleneacetic acid PEDC : Pre - embryogenic determined cell PEM : Proembryogenic mass TCL : Thin cell layer TDZ : Thidiazuron tTCL : transverse thin cell layer WPM : woody... with 1.0 mg/l kinetin Thin cell layers were excised through and length (2 mm) from torpedo primary somatic embryos of Jatropha curcas L then cultured on MS basal medium supplemented with 1.5 mg/l... Gibberellic acid IAA : 3-Indoleacetic acid IBA : 3-Indolebutyric acid IEDC : Induced embryogenic determined cell Kinetin : 6-furfurylaminopurine lTCL : longitudial thin cell layer MS : Murashige