PHÂN TÍCH CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC CƠ BẢN CỦA BỘT XƯƠNG THỊT VÀ BỘT HUYẾT ĐỂ LÀM CƠ SỞ DỮ LIỆU CHO MÁY NIRS 5000

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI - THÚ Y ***************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN TÍCH CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC CƠ BẢN CỦA BỘT XƯƠNG THỊT VÀ BỘT HUYẾT ĐỂ LÀM CƠ SỞ DỮ LIỆU CHO MÁY NIRS 5000 Sinh viên thực hiện: PHAN CHÍ HIẾU Lớp: DH08TA Ngành: Chăn ni Niên khóa: 2008 - 2012 Tháng 08/2012 BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y **************** PHAN CHÍ HIẾU PHÂN TÍCH CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC CƠ BẢN CỦA BỘT XƯƠNG THỊT VÀ BỘT HUYẾT ĐỂ LÀM CƠ SỞ DỮ LIỆU CHO MÁY NIRS 5000 Khố luận đệ trình đáp ứng yêu cầu cấp kỹ sư Chăn Nuôi chuyên ngành CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT THỨC ĂN CHĂN NUÔI Giáo viên hướng dẫn TS NGÔ HỒNG PHƯỢNG Tháng 08/2012 i XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực hiện: Phan Chí Hiếu Tên đề tài: “Phân tích thành phần hóa học bột xương thịt bột huyết để làm sở liệu cho máy NIRS 5000” Đã hoàn thành luận văn tốt nghiệp theo yêu cầu giáo viên hướng dẫn ý kiến nhận xét góp ý hội đồng chấm thi tốt nghiệp khóa ngày 16-17/08/12 Giáo viên hướng dẫn TS NGƠ HỒNG PHƯỢNG ii LỜI CẢM TẠ Tơi xin chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu trường Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Ban chủ nhiệm khoa Chăn Nuôi Thú Y Bộ môn Dinh Dưỡng Gia Súc Cùng tồn thể q thầy trường Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Đã tận tình dạy dỗ giúp đỡ suốt bốn năm theo học trường Xin tỏ lòng thành kính biết ơn đến: TS Ngô Hồng Phượng, Ths Nguyễn Thụy Đoan Trang Cô Trần Thị Phương Dung, cô Nguyễn Thị Lộc Đã hết lòng giúp đỡ tơi suốt thời gian làm đề tài hoàn thành luận văn Con xin cảm ơn gia đình chăm lo cho ăn học nên người Xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến tình u to lớn đời tơi, người bạn thân yêu, bên cạnh lúc buồn vui thất vọng, sát cánh bên tơi suốt thời gian làm khóa luận, xin cảm ơn tập thể lớp DH08TA cho sống khoảnh khắc sinh viên đáng nhớ Xin chân thành cảm ơn! TP.HCM, ngày….tháng năm 2012 Người thực Phan Chí Hiếu iii TĨM TẮT LUẬN VĂN Đề tài nghiên cứu “Phân tích thành phần hóa học bột xương thịt bột huyết để làm sở liệu cho máy NIRS 5000” Thí nghiệm tiến hành từ 07/12/2011 đến 30/06/2012 Bộ môn Dinh Dưỡng Gia Súc, khoa Chăn Nuôi – Thú Y, trường Đại Học Nơng Lâm Tp HCM Phân tích thành phần hóa học vật chất khơ, protein thơ, lipid thơ, khống tổng số, canxi phospho theo tiêu chuẩn AOAC, 1998 Kết thu sau: - Bột xương thịt (122 mẫu): vật chất khô (93,80 %), protein thơ (46,90 %), lipid thơ (9,87 %), khống tổng số (33,54 %), canxi (12,15 %), phospho (3,85 %) - Bột huyết (110 mẫu): vật chất khô (91,91 %), protein thô (88,00 %), khoáng tổng số (2,17 %), canxi (0,28 %), phospho (0,11 %) Kết xây dựng đường chuẩn sau: Xây dựng đường chuẩn bột xương thịt dựa kết 110 mẫu phân tích, xây dựng đường chuẩn bột huyết dựa kết 100 mẫu phân tích Đối với bột xương thịt: Có thể sử dụng đường chuẩn để dự đốn nhanh tiêu vật chất khơ, protein thơ, béo thơ, khống tổng số, canxi phospho Đối với bột huyết: Có thể sử dụng đường chuẩn để dự đốn nhanh tiêu vật chất khô iv MỤC LỤC Trang TRANG TỰA i XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN ii LỜI CẢM TẠ .iii TÓM TẮT LUẬN VĂN iv MỤC LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x Chương MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Chương TỔNG QUAN 2.1 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CẬN HỒNG NGOẠI (NIRS) 2.1.1 Lịch sử phát triển 2.1.2 Định nghĩa quang phổ cận hồng ngoại 2.1.3 Cấu tạo máy NIRS 2.1.3 Nguyên lý hoạt động 2.1.4 Phương trình đường chuẩn máy NIRS 2.1.5 Xây dựng đường chuẩn 2.1.6 Ưu điểm nhược điểm máy NIRS 2.1.7 Ứng dụng máy NIRS 2.2 TỔNG QUAN VỀ CÁC CHỈ TIÊU PHÂN TÍCH 2.2.1 Vật chất khô ( DM – Dry Matter) v 2.2.2 Protein thô (CP – Crude Protein) 2.2.3 Lipid thô (EE – Ether Extract) 10 2.3.4 Khoáng tổng số (Ash- Total Ash) 11 2.3.5 Canxi (Ca – Calcium) 11 2.3.6 Phospho (P) 12 2.3 TỔNG QUAN VỀ NGUYÊN LIỆU THÍ NGHIỆM 12 2.3.1 Bột xương thịt – Meat and Bone Meal (MBM) 12 2.3.2 Bột huyết (Blood Meal) 15 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 19 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 19 3.2 ĐỐI TƯỢNG THÍ NGHIỆM 19 3.3 CHỈ TIÊU KHẢO SÁT 19 3.4 PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 19 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu 19 3.4.2 Phương pháp phân tích mẫu 21 3.5 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 21 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 BỘT XƯƠNG THỊT 22 4.1.1 Kết phân tích thành phần hóa học bột xương thịt 22 4.1.2 Phổ hấp phụ bột xương thịt máy NIRS 5000 23 4.1.3 Các tham số đường chuẩn dự đốn nhanh thành phần hóa học bột xương thịt 24 4.2 BỘT HUYẾT 29 4.2.1 Kết phân tích thành phần hóa học bột huyết 29 4.2.2 Phổ hấp phụ bột huyết máy NIRS 5000 29 4.2.3 Các tham số đường chuẩn dự đốn nhanh thành phần hóa học bột huyết 30 vi Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 5.1 KẾT LUẬN 35 5.2 ĐỀ NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt AOAC Official Methods of Analysis of Hiệp hội phân tích hóa Association of Offical Agricultural học sản phẩm nông Chemist nghiệp Near Infrared Reflectance Spectroscopy Quang phổ cận hồng NIRS ngoại DM Dry Matter Vật chất khô CP Crude Protein Đạm thô EE Ether Extract Béo thô CF Crude Fiber Xơ thô Ash Total Ash Khoáng tổng số Ca Calcium Calci P Phosphor Phốt RSQ R-squared Hệ số tương quan đường chuẩn SEC Standard error of calibration Sai số đường chuẩn SECV Standard error of cross validation Sai số dự đoán 1-VR One minusthe variance ratio Hệ số tương quan dự đoán SE Standard error Sai số chuẩn SEP Standard error of cross validation Sai số chuẩn kết NIRS R2 Hệ số tương quan kết hóa học kết NIRS Cộng cs viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Thành phần giá trị dinh dưỡng bột xương thịt 13 Bảng 2.2: Thành phần acid amin tiêu biểu bột xương thịt 14 Bảng 2.3: Thành phần giá trị dinh dưỡng bột huyết 16 Bảng 2.4: Thành phần acid amin tiêu biểu bột huyết 17 Bảng 4.1: Kết phân tích thành phần hóa học bột xương thịt 22 Bảng 4.2: Các tham số đường chuẩn dự đốn nhanh thành phần hóa học bột xương thịt 25 Bảng 4.3: So sánh kết NIRS kết hóa học bột xương thịt 26 Bảng 4.4: Kết phân tích thành phần hóa học (% mẫu) bột huyết 29 Bảng 4.5: Các tham số đường chuẩn dự đốn nhanh thành phần hóa học bột huyết 31 Bảng 4.6: So sánh kết NIRS kết phân tích hóa học bột huyết 33 ix Như vậy, từ kết đường chuẩn kết sử dụng phương trình đường chuẩn để dự đoán nhanh kết 20 mẫu bột xương thịt ta dùng đường chuẩn bột xương thịt để dự đoán nhanh hàm lượng vật chất khơ, protein thơ, béo thơ, khống tổng số, canxi phospho bột xương thịt với độ xác cao 4.2 BỘT HUYẾT 4.2.1 Kết phân tích thành phần hóa học bột huyết Kết phân tích thành phần hóa học bột huyết trình bày bảng 4.4 Bảng 4.4: Kết phân tích thành phần hóa học (% mẫu) bột huyết Thành phần hóa học (%) Bột huyết DM CP Ash Ca P Mean 91,91 88,00 2,17 0,92 0,11 SD 1,71 2,19 1,19 0,25 0,06 (n=110) (Mean: trung bình mẫu, SD: độ lệch chuẩn) Kết phân tích hóa học 110 mẫu bột huyết cho nhìn khái quát thành phần dinh dưỡng bột huyết: Tỷ lệ vật chất khơ (91,91 %), protein thơ (88,00 %), khống tổng số (2,17 %), canxi (0,28 %), phospho (0,92 %) Chúng nhận thấy tỷ lệ vật chất khô protein thơ bột huyết chúng tơi phân tích cao so với kết phân tích Viện Chăn Nuôi (vật chất khô 89,50 % protein thô 80,10 %) Đối với tỷ lệ khoáng tổng số, canxi phospho kết chúng tơi phân tích thấp so với kết Viện Chăn Ni (khống tổng số 2,17 %, canxi 0,28 % phospho 0,11 %) Nguyên nhân kết thành phần sản xuất bột huyết, phương pháp chế biến bảo quản kết phân tích thời điểm khác Bột huyết loại phẩm chất tốt khơng có chất béo xơ 4.2.2 Phổ hấp phụ bột huyết máy NIRS 5000 29 Hình 4.3: Phổ hấp phụ cận hồng ngoại bột huyết máy NIRS 5000 Sau quét 110 mẫu máy NIRS 5000, thu phổ hấp phụ mẫu bột huyết Hình 4.3 phổ hấp phụ bột huyết máy NIRS 5000, với trục tung (y) độ hấp thu bột huyết, trục hồnh (x) bước sóng Trên hình 4.3 có vùng màu riêng biệt liên kết tạo nên cấu trúc thành phần chất hữu cơ: màu xám (overtone): phân tử hấp thụ, dao động với mức lượng tăng lên; màu đen: vùng bước sóng xác định liên kết O-H hấp thụ; màu xanh dương nhạt: vùng hấp thụ liên kết N-H; màu xám nhạt (combination): liên kết dao động kết hợp Qua (hình 4.3) ta thấy khả hấp phụ ánh sáng mẫu bột huyết tương đối đồng với ánh sáng có bước sóng ngắn (từ 1900 nm đến khoảng 2100 nm) Nhìn chung, phổ mẫu bột huyết biến động tương đối lớn 4.2.3 Các tham số đường chuẩn dự đoán nhanh thành phần hóa học bột huyết Phổ 110 mẫu bột huyết quét máy NIRS 5000 với bước sóng từ 1100 – 2500 nm kết hợp với số liệu phân tích hóa học 05 tiêu dùng để xây dựng đường chuẩn phần mềm chuyên dụng WinISITM 4.0 (Infrasoft International LLC and FOSS) Phương trình tuyến tính hồi quy thiết lập cho tiêu Sau tính tốn loại bỏ mẫu có giá trị xa với trung bình chung 110 mẫu, đường chuẩn bột huyết thể giá trị thông số 100 30 mẫu Các tham số đường chuẩn dự đốn nhanh thành phần hóa học bột huyết trình bày bảng 4.5 Bảng 4.5: Các tham số đường chuẩn dự đoán nhanh thành phần hóa học bột huyết Thành N Mean SD phần Est Est Min Max SEC RSQ SECV 1-VR DM 100 91,91 1,40 87,68 96,13 0,41 0,91 0,46 0,89 CP 102 88,26 1,96 82,36 94,16 1,05 0,71 1,10 0,68 Ash 102 2,09 0,82 0,00 4,55 0,25 0,90 0,29 0,87 Ca 104 0,25 0,14 0,00 0,70 0,12 0,23 0,13 0,15 P 104 0,10 0,04 0,00 0,24 0,02 0,67 0,02 0,60 (Giải thích: N: số mẫu đường chuẩn, SD: độ lệch chuẩn, Est Min: giá trị nhỏ theo ước lượng đường chuẩn, Est Max: giá trị lớn theo ước lượng đường chuẩn, RSQ (R-squared) hệ số tương quan đường chuẩn, SEC (Standard error of calibration) sai số đường chuẩn, SECV (Standard error of cross validation) sai số dự đoán, 1-VR (One minusthe variance ratio) hệ số tương quan dự đốn) Hình a 31 Hình b Hình c Hình d Hình e 32 Hình 4.4: Mối tương quan kết phân tích kết dự đoán NIRS bột huyết tiêu vật DM (hình a), CP (hình b), P (hình c), Ca (hình d), Ash (hình e) Bảng 4.6: So sánh kết NIRS kết phân tích hóa học bột huyết Kết NIRS Chỉ tiêu Trung bình Kết hóa học SEP Trung bình (n = 20) SE R2 (n = 20) DM 92,17 1,05 93,07 0,24 0,74 CP 87,85 1,83 88,66 0,50 0,43 Ash 1,83 0,48 1,91 0,11 0,12 Ca 0,20 0,06 0,19 0,01 0,14 P 0,09 0,02 0,10 0,00 0,00 Kết xây dựng phương trình dự đốn nhanh vật chất khơ, protein thơ, khoáng tổng số, canxi phospho cho thấy SEC nhỏ (từ 0,02 đến 1,05) SECV nhỏ (từ 0,02 đến 1,10) nên không gây sai số lớn cho kết phân tích Đối với 05 thành phần hóa học bột huyết, vật chất khơ khống tổng số có hệ số tương quan RSQ 1-VR cao (vật chất khơ: RSQ= 0,91và 1-VR= 0,89, khống tổng số: RSQ= 0,90 1-VR= 0,87) Điều cho thấy sử dụng phương trình đường chuẩn để dự đốn nhanh hàm lượng vật chất khơ khống tổng số mẫu bột huyết, kết dự đoán cho kết tương đương với kết phân tích hóa học Thật vậy, tiến hành sử dụng phương trình để dự đốn nhanh thành phần hóa học 20 mẫu bột huyết, hàm lượng vật chất khơ có độ xác cao so với kết phân tích hóa học, với hệ số tương quan (R2) 0,74; khống tổng số kết dự đoán NIRS cho kết khác biệt so với kết phân tích hóa học, với hệ số tương quan (R2= 0,12) Đối với protein thô (RSQ= 0,71; 1-VR= 0,68) phospho (RSQ= 0,67; 1VR= 0,60) có hệ số tương quan cao Điều cho thấy sử dụng phương trình đường chuẩn để dự đốn nhanh hàm lượng protein thô phospho, kết dự đốn tương đương kết phân tích hóa học Nhưng tiến hành kiểm 33 tra lại độ tin cậy phương trình dự đốn nhanh kết dự đoán nhanh NIRS khác biệt so với kết phân tích hóa học với hệ số tương quan (R2) (0,43 0,00) Và hàm lượng protein thơ thí nghiệm biến động lớn khoảng 82,36 % đến 94,16 % Ngoài ra, hệ số tương quan thấp canxi (RSQ= 0,23; 1-VR= 0,15), cho thấy có khác biệt kết dự đốn NIRS kết phân tích hóa học Và sử dụng phương trình để dự đốn nhanh kết 20 mẫu bột huyết, kết dự đoán NIRS khác biệt so với kết phân tích hóa học, với hệ số tương quan thấp (R2= 0,14) Như từ kết đường chuẩn kết sử dụng phương trình đường chuẩn để dự đoán nhanh kết 20 mẫu bột huyết ta dùng đường chuẩn bột huyết để dự đốn nhanh hàm lượng vật chất khơ bột huyết với độ xác cao 34 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Qua q trình thực đề tài “Phân tích thành phần hóa học bột xương thịt bột huyết để làm sở liệu cho máy NIRS 5000”, rút kết luận sau: Kết sử dụng phương trình đường chuẩn để dự đốn nhanh thành phần hóa học bột xương thịt cho thấy dự đốn nhanh hàm lượng vật chất khơ, protein thơ, béo thơ, khống tổng số, canxi phospho bột xương thịt; bột huyết dựa vào đường chuẩn máy NIRS cho phép dự đốn nhanh kết vật chất khơ với độ xác cao Đây kết bước đầu xây dựng đường chuẩn cho máy NIRS 5000 02 nguyên liệu bột xương thịt bột huyết với tiêu Tuy chưa đạt độ xác cao tiêu dự đoán so với kết phân tích hóa học kết thu cho thấy khả ứng dụng NIRS phân tích thành phần hóa học ngun liệu thức ăn chăn nuôi lớn 5.2 ĐỀ NGHỊ Ứng dụng đường chuẩn bột xương thịt cho máy NIRS 5000 để dự đoán nhanh thành phần vật chất khơ, protein thơ, béo thơ, khống tổng số, canxi phospho.Ứng dụng đường chuẩn bột huyết cho máy NIRS 5000 để dự đoán nhanh tiêu vật chất khô Xây dựng đường chuẩn cho loại thức ăn hỗn hợp Xây dựng thêm nhiều đường chuẩn cho nguyên liệu thức ăn khác khô dầu đậu phộng, khô dầu dừa, bã cọ, bột gan mực vv 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt 1.Dương Thanh Liêm, Bùi Huy Như Phúc Dương Duy Đồng, 2006 Thức ăn dinh dưỡng động vật Nhà xuất Nơng Nghiệp TP Hồ Chí Minh 2.Viện Chăn Ni Quốc gia, 1995 Thành phần giá trị dinh dưỡng thức ăn gia súc – gia cầm Việt Nam Nhà xuất Nơng Nghiệp, Hà Nội 3.Giáo trình lý thuyết thực hành dinh dưỡng, Khoa Chăn Nuôi Thú Y, Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 4.Trần Văn Có, 2009 Xác định thành phần hóa học bắp, khoai mì, cám gạo để xây dựng để xây dựng sở liệu cho hệ thống NIRS Khóa luận tốt nghiệp Thú Y chuyên ngành Dược Thú Y, Trường Đại học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 5.Ngô Thị Mỹ Trang, 2010 Xây dựng đường chuẩn cho máy NIRS 5000 năm nguyên liệu thức ăn chăn ni phổ biến Việt Nam Khóa luận tốt nghiệp Thú Y chuyên ngành Dược Thú Y, Trường Đại học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 6.Trần Nguyễn Phương Uyên, 2010 Xây dựng đánh giá kết lập đường chuẩn cho máy NIRS 5000 đậu nành ngun hạt đậu nành nghiền thơ Khóa luận tốt nghiệp Thú Y chuyên ngành Dược Thú Y, Trường Đại học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 7.Phạm Hữu Yên Phương, 2009 Ưu nhược điểm phương pháp NIRS 8.Phùng Quốc Quãng Nguyễn Xuân Trạch, 1993 Thức ăn gia súc nhiệt đới NXB Nông Nghiệp Hà Nội (Tổ Chức Lương Thực Nông Nghiệp Liên Hiệp Quốc – FAO) Tr 389 – 391 9.Lê Văn Liễn, Nguyễn Khắc Huy, Nguyễn Thị Liên, 1997 Công nghệ sau thu hoạch sản phẩm chăn nuôi NXB Nông Nghiệp Hà Nội Tr 187- 206 36 10.Trần Ngọc Huệ, 2003 Thử nghiệm sử dụng bột huyết bột huyết tương thức ăn cho heo sau cai sữa (35 – 60 ngày tuổi) Luận văn tốt nghiệp chuyên ngành Chăn Nuôi, Trường Đại học Nông Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 11.Lê Minh Nghĩa, 2004 Bước đầu sử dụng qui trình cơng nghệ chế biến thử nghiệm bột huyết Luận văn tốt nghiệp Khoa Công Nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Nông Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 12.Đỗ Minh Giang, 2009 Nghiên cứu sử dụng chế phẩm RIBE 2.0 thủy phân bột xương thịt sản xuất phân hữu sinh học khảo sát hiệu phân rau cải Khóa luận tốt nghiệp chun ngành Cơng Nghệ Sinh Học, Trường Đại học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Tài liệu tiếng Anh 13.NRA, 2004 Use of MBM and PBM in fish feed Asia Regional Office, National Renderers Association, Inc Hong Kong 14.Given D.I et al., 1997 The principles, practices and some future applications of near infrared spectroscopy for predicting the nutritive value of foods for animals and humans Nutrition Research Reviews, 27: 83 - 114 15 Arminda M, Bruno-Soares, Ian Murray, Rhonda, M Paterson and Jose M.F Abreu, 1998 Use of NIRS for the prediction of the chemical composition and nutritional attitudes of green crop cereal Animal Feed Science and Technology, 43: 15 – 25 16.Barton, F.E , II & Windham, W.R.1998 Determination of acid detergent fibre and crude protein in forages by NIRS, Collaborative study Journal of the Association of Official Analytical Chemists, 24: 1162 – 1167 17 Lloyd Saunders, 2009 Using NIRs for Analysing ingredient sample, Foss 18.Shenk J.S, 1977 Optical matching of near infranred reflectance monochromator instruments for the analysis of ground and whole weet Near Infrared Spectroscopy, 12: 167 - 178 37 19.William P.C and Norriss K.H., 2001 Near infrared technology in the agricultural and food industries American Association of Creal chemist, St, Paul, Minnesots, USA 20 AOAC Official Methods of Analysis of the Association of Official Agricultural Chemist, 1990 15th Edition Publish by the Association of Official Agricultural Chemist, P.O Box 540, Benjamin Franklin Station, Washing 4, D.C 38 PHỤ LỤC Phương pháp phân tích hóa học 1.1 Phân tích tỷ lệ vật chất khơ ™ Cách tiến hành Chén sứ sấy 100 – 105 oC, Lấy ra, để nguội bình hút ẩm Cân trọng lượng chén sứ (L1) Cân vào chén sứ khoảng gram mẫu (P), đặt vào tủ sấy 100 – 105 oC - Lấy để nguội bình hút ẩm, đem cân (L2) Tiếp tục sấy mẫu thêm khoảng Lấy ra, để nguội bình hút ẩm đem cân lại (L3) Nếu trọng lượng lần cân không chênh lệch Nếu trọng lượng thay đổi tiếp tục sấy đến trọng lượng khơng đổi ™ Tính kết %VCK = (Ln – L1) / P × 100% Trong L1 trọng lượng chén sứ (gram _ g) Ln trọng lượng (chén sứ + mẫu) sau sấy (g) P trọng lượng mẫu cân (g) 1.2 Phân tích tỷ lệ protein thơ ™ Cách tiến hành Bao gồm giai đoạn  Giai đoạn vơ hóa Cân khoảng 0,5 - 1g mẫu tờ giấy lọc, gói mẫu lại, cho vào bình Kjeldahl 500 ml Cho vào khoảng g chất xúc tác 25 ml H2SO4 đậm đặc Đặt bình lên bếp đốt dung dịch bình có màu xanh nhạt hoàn toàn  Giai đoạn chưng cất Chuẩn bị 50 ml acid boric bình tam giác Đặt bình tam giác có chứa acid boric cho lượng acid phải ngập đầu ống nhựa hệ thống làm lạnh dẫn Cho thêm vào bình Kjeldahl có chứa sẵn mẫu đốt 150 ml nước cất 100 ml NaOH 40 % Đặt bình Kjeldahl lên hệ thống chưng cất Mỡ điện nước Màu hồng acid boric bình tam giác hứng phía chuyển sang màu vàng nhạt đạt 250 ml  Giai đoạn định phân Dùng ống nhỏ giọt có chứa HCl 0,1 N định phân đến dung dịch chuyể n sang màu hồng màu ban đầu acid boric dừng lại, ghi lại thể tích HCl 0,1 N để tính kết ™ Tính kết Nitơ tổng số = 0,001458 × a × 100 / P % CP = N × 6,25 Trong 0,001458 số gram nitơ tương ứng với ml HCl 0,1 N a số ml HCl 0,1 N thực dùng để tác dụng với NH3 mẫu (sau trừ lượng HCl mẫu trắng) (mililit - ml) P trọng lượng mẫu đem phân tích (g) 1.3 Phân tích tỷ lệ lipid thô ™ Cách tiến hành Cân khoảng – gram mẫu gói vào tờ giấy lọc Cho gói mẫu vào tủ sấy 100 – 105 oC - tiếng Lấy ra, để nguội bình hút ẩm, cân trọng lượng (L1) Đặt gói mẫu vào phận Soxhlet, rót ether vào bình cầu cùng, lắp hệ thống ngưng lạnh vào, cho hệ thống hoạt động Thời gian phân tích tùy theo hàm lượng béo mẫu Khi chiết béo xong, tắt hệ thống, để nguội ether sau lấy mẫu Đem sấy mẫu 100 – 105 oC tiếng, lấy mẫu để nguội bình hút ẩm, cân trọng lượng (L2) ™ Tính kết % EE = (L1 – L2) / P × 100% Trong P Trọng lượng mẫu cân (g) L1 Trọng lượng gói mẫu sau sấy trước chiết béo (g) L2 Trọng lượng gói mẫu sau sấy sau chiết béo (g) 1.4 Phân tích tỷ lệ xơ thô ™ Cách tiến hành Cân khoảng 1- 1,5 gram mẫu vào cốc lọc xơ Cho vào 150 ml H2SO4 0,255 N giọt octyl alcol - chất chống sủi bọt Đun hoàn lưu 30 phút (kể từ lúc bắt đầu sôi) Tráng qua nước cất xả dung dịch ngoà i qua hệ thống thoát nước Tiếp tục cho 10 ml KOH 25% nước cất cho vừa đủ 150 ml Thêm giọt octyl alcol Đun hồn lưu 30 phút (kể từ lúc bắt đầu sơi) Tráng qua nước cất xả dung dịch qua hệ thống thoát nước Rửa nhiều lần với nước cất sau rửa với khoảng 15 ml ethyl alcol Đem sấy cốc 100 – 105 oC Để nguội bình hút ẩm, cân trọng lượng (L1) Đốt cốc 500 – 550 oC khoảng Để nguội bình hút ẩm, cân trọng lượng (L2) ™ Tính kết % CF = (L1 – L2) / P × 100 Trong P trọng lượng mẫu cân (g) L1 trọng lượng cốc xơ thơ khoáng (g) L2 trọng lượng cốc + khoáng (g) 1.5 Phân tích tỷ lệ khống tổng số ™ Cách tiến hành Cho chén sứ vào tủ sấy 105 °C khoảng 30 phút sau dùng kẹp gắp cho vào bình hút ẩm Cân trọng lượng chén (P) Cân xác khoảng - g mẫu cho vào chén sứ (P1) Cho chén sứ vào lò đốt 500 – 550 °C - Sau mẫu chén sứ biến thành tro xốp màu trắng xám hay xám xanh được, lấy chén sứ để nguội bình hút ẩm tiến hành cân trọng lượng (P2) ™ Tính kết % Ash = ( P2 – P) / P1 × 100 Trong P trọng lượng chén sứ (g) P1 trọng lượng mẫu (g) P2 trọng lượng (chén sứ + mẫu) (g) 1.6 Phân tích tỷ lệ canxi ™ Cách tiến hành Pha dung dịch tro: lấy tro phân tích khống tổng số pha với khoảng 10 ml acid HCl đậm đặc vào chén sứ sau chuyển vào cốc đun 250 ml tráng chén sứ nhiều lần với 20 ml nước cất Đun sôi bay hết khoảng 15 ml Để nguội sau lọc qua giấy lọc vào bình định mức 100 ml Rửa cốc vào giấy lọc nhiều lần với nước cất đạt 100 ml đủ Dung dịch gọi dung dịch tro dùng để phân tích Canxi Phospho Lấy 50 ml dung dịch tro cho vào cốc 250 ml thêm vài giọt Methyl red dùng amonium hydroxyd trung hòa acid HCl xuất màu vàng nhạt Nếu có kết tủa sắt nhơm (ở dạng hydroxyd) phải lọc bỏ Lọc xong phải rửa nước hết ion Cl- (thử AgNO3 %, khơng kết tủa trắng hết ion Cl-) Rửa thêm acid acetic 25 % xuất màu hồng nhạt lại Đun sôi nhẹ dung dịch thêm giọt dung dịch amonium oxalate vào cốc hết 10 ml thời gian phút, làm lạnh, để nhiệt độ phòng qua đêm cho oxalate canxi kết tủa Lọc kết tủa Dùng amonium oxalat rửa kết tủa hết ion Cl-, sau rửa thêm nhiều lần với nướ cất Cho tờ giấy lọc vào cốc trở lại, thêm vào cốc (50 ml nước cất + 50 ml H2SO4 10 %) để hòa tan kết tủa Sau đó, đun nóng dung dịch đến 60 - 70 °C, dùng dung dịch potassium permanganate 0,05 N để chuẩn độ xuất màu hồng nhạt bền phút ™ Tính kết %Ca = 4VKMnO4 / 5P Trong V thể tích KMnO4 0,05 N dùng chuẩn độ (ml) P trọng lượng mẫu đem phân tích (g) 1.7 Phân tích tỷ lệ phospho ™ Cách tiến hành Dùng pipet hút lượng dung dịch tro pha trình làm Canxi khoảng 0,1- 0,5 ml cho vào bình định mức 50 ml Thêm vào bình khoảng 25 ml nước cất, thêm tiếp ml dung dịch ammonium molybdate lắc kỹ Thêm ml dung dịch ANSA cho nước cất đến vạch 50 ml đậy nắp, lắc kỹ Để yên 20 phút ta tiến hành đo độ hấp thu P có độ dài sóng 650 nm Trong q trình làm phải thực lúc với mẫu trắng (không chứa dung dịch tro) để tính kết cuối ™ Tính kết % P = 2,9 × (A / V × P mẫu) Trong A độ hấp thu máy so màu V thể tích dung dịch tro lấy (ml) P trọng lượng mẫu (g) ... triển nhanh chóng ngành chăn ni nước ta năm gần làm tăng nhu cầu sử dụng lượng lớn thức ăn, chi phí thức ăn chi m tỉ lệ cao Song song đó, việc cần xác định thành phần dinh dưỡng nguyên liệu yêu cầu... TS NGÔ HỒNG PHƯỢNG Tháng 08/2012 i XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực hiện: Phan Chí Hiếu Tên đề tài: “Phân tích thành phần hóa học bột xương thịt bột huyết để làm sở liệu... sống khoảnh khắc sinh viên đáng nhớ Xin chân thành cảm ơn! TP.HCM, ngày….tháng năm 2012 Người thực Phan Chí Hiếu iii TĨM TẮT LUẬN VĂN Đề tài nghiên cứu “Phân tích thành phần hóa học bột xương thịt