bai bao cao thực hanh lý sinh

BÀI 3 :XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN TẾ BÀO HỒNG CẦUI.Yêu cầu:  Phân biệt các loại môi trường ngoài  Phản ứng của tế bào hồng cầu với các loại môi trường trên  Xác định thành phần nào của tế bào h

Bài 1 :XÁC ĐỊNH NĂNG LƯỢNG HOẠT HÓA CỦA QUÁ TRÌNH

CO BÓP TIM ẾCH TẮCH RỜI

I/ Cơ sở lý thuyết

Như ta đã biết, để một phản ứng xảy ra thì nguyên tử, phân tử tham giaphản ứng phải tiến lại gần với nhau tạo ra một cấu hình không gian mới Tuynhiên khi tới một khoảng cách xác định thì giữa các nguyên tử, phân tử xuất hiệnlực đẩy culông làm cản trở quá trình hình thành phân tử mới.Vậy cần phải cung

cấp năng lượng cho chúng Năng lượng tối thiểu cần phải cung cấp cho cácnguên tử, phân tử để thắng đươc lực đẩy culông được gọi là năng lượng hoạt hóa(Ehh).

Sự phụ thuộc của tốc độ phản ứng vào nhiệt độ được thể hiện qua biểu thứctoán học Arenius

KT = P Z exp() (1)Trong đó:

P : hệ số lập thể (biểu thị cấu hình không gian của các nguyên tử, phân

hh E RT

Z : hệ số va chạm

R : hằng số khí

T : nhiệt độ tuyệt đối

Ngoài ra, ta còn biểu thức liên hệ Vanhoff:

Q10 = (2)

Từ (1) và (2) rút ra phương trình của Ehh

10

T T

K K



hh E exp

hh E

 ( 10)

ln 10



 Dùng ống thông tim luồn thẳng vào động mạch chủ trái và vào tâm thấttrái (nếu có thể vẩy hết máu trong tim thì tốt)

 Dùng chỉ dư khoảng 15cm cột chặt phía dưới chỗ lỗ thủng có ống thôngtim Cẩn thận dỡ bỏ tim, tách rời tim ra khỏi cơ thể (yêu cầu tim vẫn đập 1cách bình thường)

 Đưa tim vào trong bình cồn để nuôi Để cách bề mặt dung dịch ringerkhoảng 1cm

 Chờ sau 1 phút, dùng đồng hồ bấm giờ để tính tần số co bóp của tim Đưa

toàn bộ bình ẩm vào trong nươc đá để hạ nhiệt độ xuống 10oC tương ứngvới thời gian ngâm là 3 phút Sau đó đưa ra ngoài để tính tần số co bópcủa tim( mỗi lần tính thời gian cần thực hiện 3 lần)

Kết quả : Sau 3 lần đo ta được bảng giá trị tần số K như sau :

T = 2860K 42 42 42 42

Áp dụng công thức (1)Q10 = =

Áp dụng công thức (2)Ehh = 0,46 (T+10)T.lgQ10

= 0,46 (273+13).(273+23).lg = 14.118 (kcal/mol)

Vậy năng lượng hoạt hoá của quá trình co bóp tim ếch tách rời là: 14.118 (kcal/mol)

T

T

K

K531023 53 23

BÀI 2: XÁC ĐỊNH TÍNH THẤM MỘT CHIỀU CỦA DA ẾCH

 Màng tế bào là 1 hệ thống mở, vì vậy mà chúng có khả năng trao đổi các chất từ trong ra ngoài và ngược lại, dồng thời đào thải các chat cặn bã ra ngoài môi trường.

 Da ếch là một trong những đối tượng kiểm tra tính thấm 1 chiều

I/ Cơ sở lí thuyết:

Da ếch cấu tạo từ 2 lớp:

 Lớp ngoài : là tế bào biêu mô được cấu tạo từ 3 – 8 lớp tế bào, lớp ngoài cùng lớp màng cutin, có nguồn gốc ở tuyến nhầy của da ếch

 Lớp thứ 2 là lớp tế bào sừng, lớp thứ 3 là lớp té bào hình tròn xếp thưa nhau, nhờ đó tạo nên khoảng gian bào

 Lớp thứ 4: là lớp tế bào hình lăng trụ, có nhân là hình ovan, sắp xếp

kiềm yếu như metylblue, da ếch chỉ cho thấm từ trong ra ngoài.

BÀI 3 :XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN TẾ BÀO HỒNG CẦU

I.Yêu cầu:

 Phân biệt các loại môi trường ngoài

 Phản ứng của tế bào hồng cầu với các loại môi trường trên

 Xác định thành phần nào của tế bào hồng cầu làm cho nó thay đổi hình dạng

 Xác định được nồng độ bền bằng cách nào

II.Lý thuyết

Cấu trúc màng tế bào hồng cầu giống các loại màng sinh chất khác gồm 3 lớp kép Ngoài ra ở bề mặt bên trong của màng tế bào hồng cầu có tồn tại mạng lưới spectrin có nguồn gốc là các protein dạng sợi có trọng lượng là 200.000 – 220.000 daltol

Nhờ có mạng lưới này mà tế bào hồng cầu có thể thay đổi hình dạng (co tròn hay duỗi dài) giúp chúng đi qua các mao mạch nhỏ

Đối với tế bào hồng cầu già hoặc những tế bào hồng cầu bị thoái hóa chức

năng thì khả năng co bị suy giảm vì vậy chúng lọt qua các mao mạch kiểm soát rồi bị tiêu hủy ở lách.

Sự thay đổi của các loại tế bào hồng cầu phụ thuộc vào môi trường ngoài

Có 3 loại môi trường ngoài:

 Ưu trương: Tế bào hồng cầu bị teo lại

 Đẳng trương: Tế bào hồng cầu bền vững

 Nhược trương: Tế bào hồng cầu trương lên tới một nồng độ nào đó thì màng tế bào không còn khả năng giữ vững bị vỡ và giải phóng chất nội

bào gọi là hiện

tượng huyết tiêu

Nhiệm vụ thực hành: Xác định nồng độ nhược trương lớn nhất bằng bao nhiêu chưa đủ gây ra hiện tương huyết tiêu thì nồng độ đó chính là nồng độ bền

III.Hóa chất và dụng cụ

 Ống nghiệm, pipette, máy ly tâm

 Dung dịch NaCl 1%, nước cất, máu chống đông

IV Cách tiến hành

 Pha 10 dung dịch với 10 nồng độ khác nhau thay đổi từ 0% đến 0,9%, thể tích của mỗi ống nghiệm là 10 ml

 Thả vào mỗi ống nghiệm một giọt hồng cầu

 Đảo nhẹ ống 2 lần rồi cố định trong 30 phút

 Đem ly tâm với tốc độ 2500 vòng/phút trong 5 phút

hồng cầu làm cho nước đi vào làm thề tích tế bào tăng, chúng trương phồng lên rồi bị vỡ ra, và giải phóng các chất ra ngoài môi trường gây ra hiện tượng huyết tiêu.

Lượng nước đi vào các ống nghiệm giảm dần từ ống 1 đến ống 6 (vì nồng độ NaCl tăng dần từ ống 1 đến ống 6 và thể tích ở mỗi ống nghiệm không đổi) nên các tế bào trong ống 1 bị vỡ nhiều nhất làm cho dung dịch có màu đậm nhất Ngược lại ở ống 6 tuy nước đi từ môi trường vào trong tế bào nhưng chưa đủ để gây ra hiện tượng huyết tiêu tức là tế bào hồng cầu trương lên tới mức tối đa

nhưng chưa vỡ.

 Nồng độ nhược trương lớn nhất chưa đủ gây ra hiện tượng huyết tiêu là 0,6%Các ống 7,8 hồng cầu không bị vỡ ra lắng xuống đáy dung dịch trong suốt dầnỐng 9: dung dịch thu được trong suốt, lượng nước đi ra và đi vào tế bào là như nhau, do có sự cân bằng nồng độ NaCl trong và ngoài màng tế bào Dung dịch thu được trong ống 9 là dung dịch đẳng trương

BÀI 6:CÁC DẪN XUẤT CỦA HEMOGLOBIN(Hb)

200 triệu phân tử Hb Một phân tử Hb có thể chứa 9.000 nguyên tử các loại C,H,O,S,N……… trọng lượng phân tử Hb là 67000 Dal

Hb được cấu tạo bởi 2 thành phần chính : protein globin + nhóm chức Hem Nhóm chức Hem bao gồm 1 nguyên tử Fe ++ nằm giữa 4 vòng pyrol Nhờ nguyên tử

Fe ++ nên tế bào hồng cầu có khả năng thu nhận và giải phóng Oxi từ Phân tử Hb cho các tế bào của mô.

Cấu trúc protein globin : phức tạp, cấu tạo bởi 4 chuỗi polypeptit Trong đó có

2 chuỗi là α-polypeptit và 2 chuỗi β-polypeptit, có tính chất khác nhau Hình dạng của

2 chuổi polypeptit khi kết hợp với Oxi cũng khác nhau Chuỗi β-polypeptit khi kết hợp

với oxi sẽ bị cuộn tròn lại, khi nhả oxi ra, nó lại duỗi thẳng Chuỗi α-polypeptit khi kết hợp cũng như khi không kết hợp, hình dạng không thay đổi.

III Dụng cụ :

1 máy ly tâm, ống nghiệm

Hóa chất : K 3 [Fe(CN) 6 ]:kaliferixyanua; Na 2 S 2 O 3 :Detionitnatri; dung dịch sinh

lý PBS với pH=7,2; máu đã chống đông.

IVCách tiến hành và kết quả:

- Thu nhận HbO 2 : lấy máu chống đông cho vào máy ly tâm, ly tâm tốc độ 1500vòng/phút trong 5 phút để loại bỏ huyết tương để thu nhận được hồng cầu (hồng cầu lắng xuống, huyết tương màu vàng nhạt nổi lên)

Lấy ra loại bỏ huyết tương Rửa tế bào hồng cầu bằng

dung dịch PBS 3 lần bằng cách đem li tâm 1500 vòng/phút trong thời gian 5 phút Làm huyết tiêu hồng cầu (cho nước cất vào lắc nhẹ) Sau đó ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút trong 5 phút nhằm loại bỏ màng tế bào hồng cầu Thu được dịch màu đỏ tươi : HbO 2.

-Thu nhận metHb : lấy khoảng 3ml HbO 2 , sau đó thêm vào một vài giọt

K 3 [Fe(CN) 6 ] lắc nhẹ, thu được dung dịch màu nâu sẫm Đó chính là metHb.

-Thu nhận hemoglobin: lấy dung dịch oxyhemoglobin, thả 1-2 giọt Na 2 S 2 O 3

vào, thu được dung dịch màu xanh thẫm, đó chính là Hb.

Na 2 S 2 O 3 + HbO2  Hb + Na 2 S 2 O 5