NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VI TỰ NHŨ CHỨA FELODIPINE

Đề tài nghiên cứu điều chế hệ vi tự nhũ chứa Felodipine nhằm tăng sinh khả dụng của hoạt chất nói riêng và nhóm hoạt chất khó tan nói chung.Đề tài mở ra hướng đi mới để giải quyết được vấn đề độ tan và sinh khả dụng của 1 nhóm thuốc lớn trị Rối loạn lipid Đái tháo đường Tăng huyết áp

Chương 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Trên thị trường dược phẩm hiện nay, số sản phẩm có dạng bào chế dùng qua đường uống chiếm trên 80% và không ngừng gia tăng tỷ lệ so với những đường dùng khác trong những năm vừa qua Tuy nhiên, theo thống kê, gần 50% dược chất có tiềm năng trị liệu thuộc nhóm 2 BCS tức là có tính thấm tốt nhưng lại kém tan trong nước dẫn đến sinh khả dụng đường uống không cao, dễ bị ảnh hưởng bởi thức ăn, môi trường đường tiêu hóa làm cho sinh khả dụng đường uống không cao và không đồng đều dẫn đến tác dụng điều trị không được như mong muốn, đôi khi còn gây ra độc tính cho người sử dụng đối với những thuốc có khoảng trị liệu hẹp Nhiều phương pháp đã được nghiên cứu để cải thiện độ tan của các dược chất thuộc này như phương pháp tạo muối, tạo phức với beta-cyclodextrin, tạo hệ phân tán rắn,… và đạt được một số thành công [16] Trong những năm gần đây, hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương - với những ưu điểm lớn như tăng khả năng hòa tan cũng như khả năng thấm qua màng cùa hoạt chất, bền về mặt nhiệt động học, phương pháp bào chế không phức tạp - được quan tâm nghiên cứu nhằm cải thiện sinh khả dụng đường uống của những dược chất kém tan trong nước Trong điều trị cao huyết áp hiện nay, felodipin được sử dụng ngày càng phổ biến hơn

do kết quả điều trị tốt, ít ảnh hưởng đến nhịp tim, ít tác dụng phụ, tuy nhiên, do là dược chất thuộc nhóm 2 BCS nên sinh khả dụng đường uống vẫn chưa cao

Đề tài "Khảo sát một số tá dược dùng điều chế hệ tự nhũ chứa felodipin" được thực

hiện nhằm mục tiêu tạo được một công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa felodipin có độ tan tốt, bền và ổn định

Để giải quyết mục tiêu đề ra, đề tài được thực hiện với những nội dung cụ thể sau:

1 Khảo sát độ tan của felodipin trong một số tá dược có khả năng điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa felodipin

2 ây dựng công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa felodipin bền, ổn định, có khả năng hòa tan cao

3 Khảo sát, đánh giá hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa felodipin

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ FELODIPIN

2.1.1 Cấu trúc hóa học [20]

- Felodipin thuốc nhóm thuốc điều trị các bệnh về tim mạch và cao huyết áp, theo cơ chế ức chế kênh canci chọn lọc trên mạch máu

Hình 2.1 Công thức cấu tạo của felodipin

- Tên khoa học : Ethyl methyl

- Hấp thu : hấp thu qua đường tiêu hóa, sinh khả dụng 15-20%

- Chuyển hóa : bị chuyển hóa lần đầu ở gan bởi CYP3A4

- Thải trừ : thải trừ qua thận

- Liều dùng : từ 2,5 – 10 mg Hiện nay trên thị trường, felodipine thường được bào chế dưới dạng viên nén phóng thích kéo dài

- Sinh khả dụng của felodipine bị ảnh hưởng bởi thức ăn Nhiều nghiên cứu cho thấy nước nho do ức chế CYP3A4 dẫn đến việc nồng độ felodipine tăng cao trong máu có thể gây độc tính cho người sử dụng [12]

2.1.4 Một số phương pháp định lượng felodipin [20,30]

- Chuẩn độ thể tích

- Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với đầu dò UV-Vis

- Phương pháp UV-Vis : đo độ hấp thu tại 2 bước sóng 238 nm và 361 nm

2.2 TỔNG QUAN VỀ VI NHŨ TƯƠNG

2.2.1 Lịch sử tìm ra vi nhũ tương: năm 1943 hai nhà khoa học Hoar và Shulman

tại đại học Cambridge, vương quốc Anh trong một lần tình cờ hòa nhũ tương sữa vào hexanol đã tìm ra vi nhũ tương [5]

2.2.2 Khái niệm vi nhũ tương: vi nhũ tương là hệ phân tán dị thể, gồm pha dầu và

pha nước phân tán đồng nhất vào nhau và được ổn định bằng phân tử các chất diện hoạt ở trên bề mặt phân cách hai pha, có tính đẳng hướng về mặt quang học, ổn định về mặt nhiệt động học như một dung dịch lỏng [1, 5]

2.2.3 Ưu điểm của vi nhũ tương so với nhũ tương [5, 11, 15]

- Nhiêt động học của vi nhũ tương tương đối ổn định còn nhũ tương thì kém hơn Nếu

để lâu nhũ tương có thể bị tách lớp

- Về mặt cảm quan, vi nhũ tương trong suốt hoặc trong mờ còn vi nhũ tương thì đục hơn nhiều Kích thước tiểu phân của vi nhũ tương nằm trong khoảng 10 - 140 nm còn nhũ tương thì nằm trong khoảng 100 – 600 nm

- Phương pháp bào chế vi nhũ tương khá đơn giản còn nhũ tương cần lực phân tán mạnh để tạo thành

2.3 HỆ TỰ NHŨ

2.3.1 Khái niệm hệ tự nhũ

- Hệ tự nhũ là hệ thống gồm có pha dầu, dược chất, các chất nhũ hóa, đồng nhũ hóa, chất đồng hòa tan có khả năng tạo nhũ một cách tự động, nhẹ nhàng khi tiếp x c với pha nước

- Tùy thành phần, tính chất của dược chất và các hợp phần trong hệ tự nhũ, hệ tự nhũ

có thể chia làm 3 loại dựa theo cấu tr c:

+ Hệ tự nhũ tạo nhũ tương (SEDDS–Self Emulsion Drug Delivery System)

Hệ tự nhũ này khi hòa với nước s tạo thành nhũ tương dầu trong nước

Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương (SMEDDS–Self Micro-Emulsion Drug Delivery System)

Hệ tự nhũ này khi hòa với nước s tạo thành vi nhũ tương dầu trong nước

Hệ tự nhũ tạo siêu vi nhũ tương (SNEDDS–Self Nano-Emulsion Drug Delivery System)

Hệ tự nhũ này khi hòa với nước s tạo thành siêu vi nhũ tương dầu trong nước

rong 3 hệ thống tr n hệ tự nhũ t o vi nhũ tương được quan t m nghi n cứu nhiều

g n đ nh sự phát triển c ng nghệ tá dược với các chất nhũ hóa đ ng nhũ hóa có

hả n ng t o nhũ tốt phương pháp đơn giản d thực hiện

2.3.2 Hệ tự nhũ t o vi nhũ tương (SMEDDS)

Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương là hỗn hợp có thành phần chính gồm pha dầu, chất đồng hòa tan, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt, trong suốt, có khả năng nhũ hòa một cách tự nhiên để tạo thành hệ vi nhũ tương dầu trong nước khi hòa vào pha nước

2.3.3 Ưu nhược điểm của hệ tự nhũ t o vi nhũ tương [5, 15, 24, 27]

2.3.3.1 Ưu điểm:

- Bảo vệ hoạt chất trước những điều kiện của môi trường đường tiêu hóa và không bị biến đổi bởi thức ăn

- Giảm liều sử dụng, khả năng tải (loading) hoạt chất tốt, tăng độ ổn định, bảo quản dễ dàng, tuổi thọ thuốc được kéo dài

- Dễ dàng sản xuất ở quy mô lớn, có thể sử dụng được với nhiều dạng bào chế, thích hợp điều chế các thuốc phóng thích có kéo dài hay phóng thích có kiểm soát

- Khi vào cơ thể, hệ tự nhũ phối hợp với nước tạo thảnh hệ vi nhũ tương dầu/nước với kích thước giọt nhỏ, tăng khả năng hòa tan cũng như khả năng thấm qua màng cùa hoạt chất gi p làm tăng sinh khả dụng; đồng thời nhờ kích thước giọ nhỏ nên thuốc được phân phối đồng đều và nhanh chóng trong đường ruột, giảm thiểu sự kích ứng khi tiếp

x c lâu với niêm mạc đường tiêu hóa

- So với hệ tự nhũ cấu tr c nhũ tương, hệ tự nhũ cấu tr c vi nhũ tương có ưu điểm nổi trội hơn đó là hệ nhiệt động học ổn định gi p dễ bảo quản thuốc, kích thước giọt nhỏ hơn từ đó làm tăng diện tích bề mặt tiếp x c giữa thuốc với tế bào gi p tăng khả năng phân tán và hấp thu trong cơ thể, đi qua hệ tiêu hóa dễ dàng hơn từ đó tăng sinh khả dụng; sự hấp thu thuốc ổn định theo thời gian dạng bào chế đa dạng hơn

- Có khả năng phân phối các peptid tránh được sử thủy phân của các enzyme trong đường tiêu hóa

2.3.3.2 Nhược điểm:

- Chưa hoàn thiện phương pháp và phương tiện đánh giá chất lượng của thuốc in vivo cũng như in vitro

- Tỷ lệ chất diện hoạt cao, khó xác định chính xác tỷ lệ các thành phần trong công thức

- Ngoài ra, sự bay hơi của một số chất đồng hòa tan thường dùng trong công thức khi đóng nang có thể làm tủa hoạt chất

2.3.4 hành ph n của hệ tự nhũ t o vi nhũ tương [5, 10, 11, 18, 23]

Hệ tự nhũ bao gồm 3 thành phần chính : pha dầu, chất đồng hòa tan, chất diện hoạt / chất đồng diện hoạt

có thể được sử dụng làm pha dầu Ngoài ra, việc pha trộn giữa triglycerid với monoglycerid và diglycerid có thể là tăng khả năng hòa tan hoạt chất thân dầu

Một số pha dầu được sử dụng trong bào chế hệ tự nhũ : dầu mè, dầu thầu dầu, capryol

90, labrafac PG…

2.3.4.2 Chất diện hoạt / chất đồng diện hoạt

Một thành phần đóng vai trò quan trọng trong việc hình thành hệ tự nhũ là chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt

Chất diện ho t:

- Chất diện hoạt là hợp chất mà trong công thức bao gồm 2 phần : đầu thân nước và đuôi thần dầu, có tác dụng làm giảm sức căng bề mặt tại mặt phân cách giữa 2 chất lỏng không thể trộn lẫn với nhau và qua đó tạo thành hệ phân tán đồng nhất

- Việc sử dụng chất diện hoạt trong công thức hệ tự nhũ góp phần làm tăng sinh khả dụng thông qua các cơ chế như : tăng độ tan của hoạt chất, tăng khả năng thấm qua biểu mô ruột non, làm giảm hoặc ức chế tác động đào thải của transporter p-glycoprotein Tuy nhiên, nếu chất diện hoạt được sử dụng với một lượng lớn có thể kích ứng niêm mạc đường tiêu hóa

- Chất diện hoạt được phân loại thành 4 nhóm chính : anion, cation, không phân cực và lưỡng cực Trong số đó chỉ có 1 số chất diện hoạt có thể sử dụng được bằng đường uống, đặc biệt trong xây dựng công thức hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương thường sử dụng

các chất diện hoạt không phân cực và có chỉ số HLB lớn hơn 12, tỷ lệ chất diện hoạt có trong công thức hệ tự nhũ thường dao động từ 30-60%

- Một số chất diện hoạt thường dùng: nhóm polysorbate (các Tween), các Span, Labrasol, Cremophor…

Chất đ ng diện ho t:

- Là những chất được phối hợp chung với chất diện hoạt trong công thức, góp phần quan trọng trong việc hình thành hệ tự nhũ Chất đồng diện hoạt gi p tăng tính linh động của bề mặt phân cách 2 pha, điều chỉnh giá trị HLB của chất diện hoạt, giảm tỷ lệ

sử dụng chất diện hoạt, phá hủy các tinh thể hoặc cấu tr c gel, tăng độ tan của hoạt chất gi p hình thành hệ tự nhũ bền và ổn định

- Thông thường các chất đồng diện hoạt có giá trị HLB từ 10-14 được sử dụng trong xây dựng công thức hệ tự nhũ Một số nhóm thường được dùng làm chất đồng diện hoạt như : alcol mạch ngắn, alcol hoặc amin, các acid mạch trung bình, các glycol… Tuy nhiên việc sử dụng các alcol mạch ngắn dễ bay hơi có thể gây tủa hoạt chất khi sử dụng đóng nang

2.3.3.3 Chất đồng hòa tan

Nhằm làm tăng độ tan của hoạt chất trong pha dầu, đôi khi người ta cho thêm vào hệ chất đồng hòa tan Một số nhóm thường được sử dụng làm chất đồng hòa tan: alcol mạch ngắn, các glycol, các ester của glycol…

Ngoài ra trong hệ tự nhũ còn có một số chất khác như chất tạo mùi, chất tăng tính thấm, chất bảo quản, chất ức chế enzym đường tiêu hóa,…

2.3.5 Giản đ pha

- Giản đồ pha là phương tiện thường dùng để xác định các vùng có cấu tr c khác như vùng tạo vi nhũ tương, vùng tạo nhũ tương… Giản đồ ba pha có hình tam giác, mỗi cạnh tương ứng với một thành phân dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt có lượng tương ứng là 100% trong công thức Trong trường hợp công thức có nhiều hơn 3 thành

phần thì một cạnh của hình tam giác s gồm 2 thành phần như chất diện hoạt/chất đồng diện hoạt, pha dầu/chất đồng hòa tan,… với các tỷ lệ xác định

- Nhằm tạo thuận lợi cho việc xây dựng giản đồ pha, người ta thường đánh giá sơ bộ độ tan của hoạt chất trong pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt nhằm chọn ra các chất có khả năng hòa tan hoạt chất nhiều nhất để xây dựng giản đồ pha Trong xây dựng giản đồ pha, người ta thường phối hợp các thành phần với nhau theo các tỷ lệ khác nhau nhằm chọn ra công thức tối ưu nhất mà ở đó vùng tạo được hệ tự nhũ có cấu

tr c vi nhũ tương là rộng nhất

2.3.6 Phương pháp bào chế hệ tự nhũ [2, 28, 31]

- Cân chính xác rồi phối hợp các thành pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt theo công thức sau đó vortex cho đều Sau đó ta tiến hành cân và phối hợp hoạt chất vào hệ rồi vortex và siêu âm để tạo hệ đồng nhất Nếu có sử dụng chất đồng hòa tan thì phối hợp hoạt chất với chất đồng hòa tan trước khi trộn vào hệ

- Do hệ tự nhũ là hệ có khả năng tự nhũ hóa do đó thứ tự phối hợp các chất cũng như

độ mạnh của lực phân tán không ảnh hưởng nhiều đến sự hình thành và độ bền của hệ

2.3.7 Các ti u chí đánh giá hệ tự nhũ t o vi nhũ tương [1, 5, 11, 22, 28, 29]

Cảm quan: hệ phải trong suốt và đồng nhất Khi pha loãng 100 lần với nước phải tạo

được hệ vi nhũ tương trong suốt hoặc trong mờ, đồng nhất và không có tủa

Kích thước tiểu phân: pha loãng 100 lần với nước, kích thước các tiểu phân phải nằm

trong khoảng 10-140nm Đánh giá bằng các phương pháp tán xạ ánh sáng, dùng kính hiển vi điện tử hoặc đo thế zeta

Độ bền nhiệt động học:

- Chu trình nóng lạnh: pha loãng 100 lần với nước cất, thực hiện 6 chu kỳ ở 2 mức nhiệt độ của tủ lạnh (2 - 8 oC) và 45 oC, thời gian lưu trữ ở mỗi mức nhiệt độ tại mỗi chu kỳ không ít hơn 4 giờ Hệ đạt yêu cầu nếu sau 6 chu kỳ không bị kết tủa, kết bông hay xảy ra sự tách lớp

- Chu trình đông – rã đông: pha loãng 100 lần với nước cất, thực hiện 6 chu kỳ đông-rã đông với mỗi chu trình không ít hơn 6 giờ Hệ đạt yêu cầu khi không có sự kết tủa, kết bông hay xảy ra sự tách lớp

- Ly tâm: pha loãng 100 lần với nước cất sau đó đem ly tâm với tốc độ 10000 vòng trong vòng 15 phút và quan sát sự đồng nhất của hệ Hệ đạt yêu cầu nếu không bị kết tủa hoặc tách lớp sau khi ly tâm

Chỉ số khúc xạ và độ truyền qua: pha loãng 100 lần với nước cất và đánh giá Hệ đạt

yêu cầu nếu chỉ số kh c xạ gần tương đương với chỉ số kh c xạ của nước (1,333) và độ truyền qua lớn hơn 99%

Đánh giá độ hòa tan in-vitro: hệ tự nhũ được đóng vào nang cứng và bỏ vào bình chạy

hòa tan cùng với 900 mL đệm được pha sẵn với tốc độ cánh quay 100 vòng/ph t tại nhiệt độ 37oC Tiến hành với 3 môi trường đệm có pH lần lượt là 1,2; 4,5; 6,8 tương ứng với sự biến đổi pH trong đường tiêu hóa của người Trong quá trình chạy, mẫu được r t ra sau mỗi chu kỳ thời gian và định lượng để đánh giá độ hòa tan tại các thời điểm khác nhau Bên cạnh đó, thử nghiệm cũng cho ta biết được ảnh hưởng của pH đến sự giải phóng hoạt chất

Đánh giá khả n ng hấp thu qua đư ng ti u h a tr n tr n súc v t th nghiệm: có thể

đánh giá khả năng hấp thu dược chất trong hệ tự nhũ bằng cách thử nghiệm trên chuột, chó… và r t mẫu định lượng nồng độ dược chất trong máu trong các khoảng thời gian

- Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương quá bão hòa (Supersaturable SMEDDS): việc điều chế hệ này gi p giảm tỷ lệ chất diện hoạt trong công thức nhằm hạn chế tác dụng phụ cũng như sự kích ứng niêm mạc đường tiêu hóa khi dùng thuốc

- Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương rắn (solid SMEDDS): là hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương được hóa rắn dùng để đóng nang cứng hoặc nang mềm, làm viên nén được tiên đoán có thể giảm liều sử dụng thuốc do hệ tự nhũ làm tăng sinh khả dụng của thuốc

- ây dựng hệ trị liệu phóng thích kéo dài và ổn định

2.3.9 Các nghi n cứu về hệ tự nhũ tr n thế giới hiện na

2.3.9.1 Các chế phẩm hệ tự nhũ tr n thị trư ng

Bảng 2.1 Một số chế phẩm hệ tự nhũ trên thị trường [23]

TT Hoạt chất Tác dụng dƣợc lý Tên sản phẩm Nhả sản xuất

1 Cyclosporine A Ức chế miễn dịch Neoral® Novartis, Thụy Sĩ

5 Valproic Acid Chống động kinh Convulex® Pharmacia, Thụy Điển

2.3.9.2 Một số nghi n cứu về hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương hiện nay

Bảng 2.2 Một số hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương của một số hoạt chất gần đây [3 ,26, 31]

Chương 3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỐI TƯỢNG

Felodipin

3.2 NGUYÊN LIỆU – HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ

3.2.1 Ngu n liệu – hóa chất: các nguyên liệu, hóa chất dùng trong thực nghiệm được trình bày trong Bảng 3.1

Bảng 3.1 Các nguyên liệu, hóa chất dùng trong thực nghiệm

Nguyên liệu – Hóa chất Tiêu chuẩn Hãng cung cấp, quốc gia

Gattefosse (Pháp) Gattefosse (Pháp) Gattefosse (Pháp) Trung Quốc Trung Quốc

Natrii hydroxide

Acid hydroclorid

TCNSX TCNSX

Trung Quốc Trung Quốc

3.2.2 rang thiết bị

Các thiết bị dùng trong thực nghiệm được trình bày trong Bảng 3.2

Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng trong thực nghiệm

3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.3.1 Khảo sát độ tan của elodipin trong một số tá dược có hả n ng điều chế hệ tự nhũ t o vi nhũ tương

- Độ tan của felodipin trong các pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt được xác định bằng phương pháp quá bão hòa

- Tiến hành: Lấy một lượng thừa felodipin cho vào từng eppendorf có sẵn 1 ml từng loại tá dược Hỗn hợp thu được đem vortex (1 ph t) và siêu âm (10 ph t) sau đó cho vào máy lắc ngang (tốc độ 100 lần / ph t) lắc liên tục trong 24 giờ ở nhiệt độ phòng Dịch thu được đem ly tâm 8000 vòng/ph t trong 7 ph t, lọc qua lọc 0,45 m, pha loãng bằng methanol tới nồng độ thích hợp rồi đem đo UV ở bước sóng 360 nm

ác định lượng chất tan, từ đó chọn lựa các tá dược có tiềm năng để điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

3.3.2 dựng c ng thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ t o vi nhũ tương chứa felodipin bền n định có hả n ng h a tan cao

3.3.2.1 Khảo sát giản đồ pha t các tá dược nền đ chọn lọc cho điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

- Dựa trên độ tan của felodipin trong pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt,

sàng lọc các giản đồ pha tham khảo từ các giản đồ pha đã được báo cáo trong các nghiên cứu trên thế giới, ưu tiên những giản đồ pha trong công thức có chức thành phần pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt có khả năng hòa tan tốt nhất

- Tiến hành: ở mỗi giản đồ pha, lựa chọn từ 3-6 điểm trải đều trong vùng tạo cấu tr c vi nhũ tương rồi xác định thành phần các chất có trong công thức tại mỗi điểm Sau đó lần lượt cân từng công thức cho vào eppendorf rồi đem đi vortex để thu được hệ tá dược đồng nhất, để yên 24h rồi thử độ pha loãng tối đa của các công thức bằng cách nhỏ từ

từ từng giọt nước đến khi hệ chuyển sang đục

- Giản đồ pha có nhiều công thức đạt được độ pha loãng tốt nhất trong khảo sát s được dùng cho việc tải hoạt chất ở giai đoạn tiếp theo

3.3.2.2 Khảo sát khả n ng tải loading dược chất tr n hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương c tiềm n ng

- Từ các giản đồ pha có tiềm năng chọn được từ khảo sát ở trên, chọn lựa thành phần công thức và tiến hành tải hoạt chất với các tỷ lệ dược chất lần lượt là 5; 7,5 và 10%

- Tiến hành: Cân chính xác 0,5g cho từng hệ tá dược với tỷ lệ các thành phần đã xác định cho vào eppendorf sau đó cân chính xác tỷ lệ dược chất theo khảo sát cho vào và đem đi vortex, siêu âm cho tan hết đồng thời ly tâm ở tốc độ 7000 vòng trong 8 ph t để xác định có kết tủa hay không

- Các công thức được để yên trong vòng 24 giờ tại nhiệt độ phòng sau đó đem đi pha loãng 100 lần với nước cất và đánh giá bằng cảm quan Giản đồ pha chứa tỷ lệ hoạt chất nào cho nhiều hệ đạt yêu cầu nhất (sau khi pha loãng hệ phải trong suốt hoặc trong mờ) được chọn để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo

- Khảo sát khả năng lặp lại trên hệ tự nhũ tạo nhũ tương có tiềm năng

3.3.2.3 Cải thiện công thức hệ tá dược dùng điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

và xây dựng giản đồ pha

- Cải thiện giản đồ được chọn bằng cách phối hợp thêm chất nhũ hóa và chất đồng nhũ hóa vào thành phần công thức nhằm tăng khả năng nhũ hóa, tăng độ bền của công thức

- ây dựng giản đồ pha dựa trên 3 thành phần: pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt với các chất thêm vào cải thiện công thức

- Cách tiến hành: đối với mỗi giản đồ pha, lần lượt chọn các điểm từ rìa đi vào, xác định công thức tại các điểm đó, cân chính xác, vortex cho đều rồi pha loãng 100 lần với nước Giản đồ pha được xây dựng là vùng tập hợp các điểm cho hệ vi nhũ tương bền, trong suốt hoặc trong mờ khi pha loãng với nước

- Chọn giản đồ pha có vùng tạo hệ tự nhũ rộng nhất để làm tiếp các thử nghiệm tiếp theo và so sánh với công thức giản đồ pha có sẵn tốt nhất đã sàng lọc ở trên

3.3.2.4 ây dựng công thức và phương pháp điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

- Sử dụng các giản đồ pha đã chọn ở trên để điều chế hệ tự nhũ

- Đối với mỗi giản đồ pha, chọn các điểm trải đều trong vùng tạo được cấu tr c vi nhũ tương, tải hoạt chất với tỷ lệ 5% sau đó tiến hành pha loãng với nước 100 lần

- Cách tiến hành : đối với mỗi công thức, cân chính xác 0,5 g hệ tá dược theo tỷ lệ có sẵn cho vào eppendorf rồi cân chính xác 25 mg felodipine cho vào hệ, đem đi vortex, siêu âm để trộn đều, để yên 24 giờ sau đó ly tâm với tốc độ 7000 vòng/ph t trong 8

ph t để kiểm tra xem hoạt chất có bị tủa lại hay không

- Các công thức sau khi chuẩn bị xong được để yên trong 48 giờ trước khi tiến hành các đánh giá tiếp theo

3.3.3 Khảo sát đánh giá hệ tự nhũ t o vi nhũ tương chứa felodipin

3.3.3.1 ác định độ bền của vi nhũ tương hình thành trong quá trình nghi n cứu

Pha loãng các công thức 100 lần với nước cất, sau đó tiến hành các thử nghiệm sau:

- Ly tâm: hệ vi nhũ tương đem đi ly tâm với tốc độ 10000 vòng/ph t trong thời gian 15

ph t Hệ đạt yêu cầu khi không xảy ra sự kết tủa, kết bông hay hiện tượng tách lớp

- Sốc nhiệt : thực hiện chu trình đông – rã đông với 6 chu trình, thời gian mỗi chu trình

là 6 tiếng Hệ đạt yêu cầu khi không xảy ra sự kết tủa, kết bông hay tách lớp

- Bảo quản trong các điều kiện khác nhau: bảo quản các hệ vi nhũ tương ở 4 oC, nhiệt

độ phòng và 50 oC trong thời gian 10 ngày Hệ đạt yêu cầu khi không xảy ra sự kết tủa, kết bông hay hiện tượng tách lớp

3.3.3.2 ác định ảnh hư ng của p l n độ bền v ng của hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa felodipin

Pha loãng các công thức 100 lần ở các môi trường đệm pH 1,2 ; 4,5 và 6,8 sau đó tiến hành đánh các yêu cầu sau :

- Thời gian mà hệ đạt độ bền : các công thức được để yên trong vòng 48 tiếng đồng hồ tại nhiệt độ phòng trong các hệ đệm có pH khác nhau, ghi nhận thời gian mà hoạt chất

bị tủa lại hoặc hệ bị đục

- Khảo sát hàm lượng felodipin theo thời gian sau khi pha loãng trong các pH khác nhau: Các công thức sau khi pha loãng được để yên trong vòng 48 tiếng đồng hồ tại nhiệt độ phòng trong các hệ đệm có pH khác nhau, sau đó lần lượt r t mẫu đem đi định lượng bằng phương pháp UV-Vis trong các khoảng thời gian 1 giờ, 2 giờ, 6 giờ, 12 giờ

và 24 giờ

3.3.3.3 Đo phân bố kích thước hạt vi nhũ tương tạo thành

Tiến hành đo phân bổ kích thước cỡ hạt của các vi nhũ tương tạo thành sau khi pha loãng Chọn lựa hệ có phân bố cỡ hạt tốt nhất

3.3.3.4 ây dựng và thẩm định quy trình định lượng felodipin trong hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

Chuẩn bị mẫu

- Pha dung dịch gốc felodipin 250 µg/ml: cân chính xác 25 mg felodipin, cho vào bình định mức 100 ml, hòa tan bằng một lượng vừa đủ methanol, lắc đều và siêu âm, thêm methanol đến vạch

- Mẫu thử: cân một lượng hệ tự nhũ felodipin tương ứng với 5 mg felodipin cho vào bình định mức 500 ml, thêm methanol, lắc đều rồi siêu âm, thêm methanol đến vạch

Tính đặc hiệu

- Thử nghiệm tính đặc hiệu đối với quy trình định lượng gi p đảm bảo kết quả xác định

hàm lượng chất cần phân tích trong mẫu là chính xác, tránh ảnh hưởng của các thành phần khác có trong mẫu

- Tiến hành: Chuẩn bị mẫu thử, mẫu trắng, mẫu chuẩn và mẫu placebo Mẫu placebo được chuẩn bị giống mẫu thử nhưng không có hoạt chất felodipin Phân tích bằng quang phổ UV và nhận xét kết quả

- Yêu cầu: Kết quả phổ UV của mẫu thử phải có đỉnh của felodipin như mẫu chuẩn với cùng λmax, đồng thời mẫu trắng và mẫu placebo không có đỉnh trùng với đỉnh felodipin tại λmax như mẫu chuẩn và thử

Đo độ hấp thu tại λmax cho mỗi mẫu và ghi lại kết quả

V đường biểu diễn sự tương quan giữa nồng độ và độ hấp thu

Sử dụng “phân tích hồi quy” với trắc nghiệm t (Student) để kiểm tra ý nghĩa của các hệ

số trong phương trình hồi quy và trắc nghiệm F (Fisher) để kiểm tra tính thích hợp của phương trình hồi quy

Độ đúng

- Độ đ ng của một quy trình phân tích được biểu thị bằng tỷ lệ phục hồi (%) của các giá trị tìm thấy so với giá trị thực của chất chuẩn được thêm vào mẫu thử khi áp dụng quy trình đề xuất và được làm đồng nhất trong cùng điều kiện

- Tỷ lệ phục hồi (%): Y  X /   100 %

trong đó: Y là tỷ lệ phục hồi, X là lượng tìm thấy và là lượng lý thuyết

- Tiến hành: để thử độ đ ng của một quy trình thử nghiệm, thêm một lượng chất chuẩn vào mẫu thử Lượng chất chuẩn thêm vào tương đương với 80%, 100%, 120% của hàm lượng hoạt chất tương ứng trong mẫu thử Lần lượt thực hiện trên 3 mẫu tương ứng với thêm 80%, 100%, 120% chất chuẩn

- Yêu cầu: Phương pháp định lượng đạt độ đ ng khi tỷ lệ phục hồi thực nghiệm nằm trong giới hạn cho phép 98-102% tỷ lệ phục hồi lý thuyết

Độ chính xác

- Độ chính xác của một quy trình phân tích được biểu thị bằng độ lệch chuẩn tương đối giữa các kết quả thử riêng r với giá trị trung bình thu được khi áp dụng quy trình đề xuất cho cùng một mẫu thử được làm đồng nhất trong cùng điều kiện

- Chuẩn bị 6 dung dịch mẫu thử như mục 3.8.1.1

- Tiến hành đo độ hấp thu mỗi mẫu tại λmax

- Yêu cầu: Phương pháp định lượng đạt độ chính xác khi giá trị RSD ≤ 2%

3.3.3.5 Định lượng

- Tiến hành định lượng hàm lượng felodipin trong các công thức hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương có các kết quả kiểm định chất lượng tốt nhất

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

4.1 KHẢO SÁT ĐỘ TAN CỦA FELODIPIN TRONG MỘT SỐ TÁ DƯỢC

CÓ KHẢ NĂNG ĐIỀU CHẾ HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG

Trước khi khảo sát độ tan của felodipin trong pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt, tiến hành quét phổ của các tá dược được pha loãng 100 lần trong dung môi methanol Kết quả cho thấy:

- Đỉnh hấp thu của tá dược hầu hết nằm ở vùng bước sóng nhỏ hơn 300 nm

- Tại đỉnh 238 nm: phần lớn các tá dược có độ hấp thu lớn tại đây có thể gây sai số khi

đo độ hấp thu với hoạt chất; tại đỉnh 360 nm: tất cả các tá dược có độ hấp thu không đáng kể (< 0,05) tại đỉnh này Tiến hành với mẫu tá dược pha loãng cùng điều kiện làm mẫu trắng cho thấy không có sự hấp thu tại đỉnh 360 nm Do đó có thể định lượng felodipin trong mẫu khảo sát bằng phương pháp quang phổ UV ở bước sóng 360 nm Kết quả độ tan felodipin trong các tá dược được thể hiện trong Bảng 4.1 và Hình 4.1

Bảng 4.1 Kết quả độ tan của felodipin trong một số tá dược khảo sát

Hình 4.1 Biểu đồ so sánh độ tan của felodipin trong các tá dược

Nhận xét : kết quả từ bảng 4.1 cho thấy felodipin có khả năng tan tốt trong các pha

dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt

- Đối với pha dầu: các pha dầu có khả năng hòa tan tốt nhất felodipin được xếp giảm dần theo thứ tự sau : capryol 90, labrafil M, maisine 35:1, IPM

- Đối với chất diện hoạt và đồng diện hoạt: các tá dược có khả năng hòa tan tốt nhất felodipin được xếp giảm dần theo thứ tự sau: labrasol, transcutol P, PEG 400, tween

80, labrafac, PG, cremophor EL, cremophor RH40

Từ kết quả thu được nêu trên, tiến hành sàng lọc, lựa chọn trong các giản đồ pha đã có sẵn để tiến hành khảo sát độ pha loãng, ưu tiên khảo sát đối với các giản đồ pha chứa các thành phần có khả năng hòa tan tốt nhất

4.2 X DỰNG C NG THỨC VÀ PHƯƠNG PHÁP BÀO CHẾ HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG CHỨA FELODIPIN BỀN, ỔN ĐỊNH, CÓ KHẢ NĂNG HÒA TAN CAO

4.2.1 Khảo sát giản đ pha t các tá dược nền đ chọn lọc cho điều chế hệ tự nhũ t o vi nhũ tương

Kết quả độ pha loãng khi sàng lọc giản đồ pha được thể hiện trong bảng 4.2

Bảng 4.2 Kết quả độ pha loãng dùng để sàng lọc các công thức giản đồ pha

TT Kí hiệu Pha dầu Tỷ lệ

%

Chất diện hoạt Tỷ lệ

%

Chất đồng diện hoạt Tỷ lệ %

1A3 Capryol 90 30 Tween 80 28 Transcutol P 28 14 5x

1A4 Capryol 90 10 Tween 80 40 Transcutol P 40 10 10x

1B

1B1 Capryol 90 24 Tween 80 34 Transcutol P 17 25 2x

1,5x 1B2 Capryol 90 20 Tween 80 44 Transcutol P 22 14 2x

1B3 Capryol 90 16 Tween 80 28 Transcutol P 14 42 1x

1B4 Capryol 90 4 Tween 80 24 Transcutol P 12 60 1x

1C

1C1 Capryol 90 20 Tween 80 30 Transcutol P 10 40 1x

2,25x 1C2 Capryol 90 10 Tween 80 22,5 Transcutol P 7,5 60 1x

1C3 Capryol 90 10 Tween 80 37,5 Transcutol P 12,5 40 2x

1C4 Capryol 90 10 Tween 80 52,5 Transcutol P 17,5 20 5x

2

21 IPM 8 Tween 80 60 Ethanol 20 12 2x

2,75x

22 IPM 16 Tween 80 45 Ethanol 15 24 5x

23 IPM 10 Tween 80 40,5 Ethanol 13,5 36 2x

24 IPM 38 Tween 80 39 Ethanol 13 10 2x

3

31 IPM 10 Cremophor EL 57 Ethanol 19 14 1x

1,75x

32 IPM 28 Cremophor EL 48 Ethanol 16 8 2x

33 IPM 20 Cremophor EL 45 Ethanol 15 20 2x

34 IPM 32 Cremophor EL 36 Ethanol 12 20 2x

4

41 IPM 21 Tween 80 45 Ethanol 15 19 2x

2,67x

42 IPM 10 Tween 80 60 Ethanol 20 10 5x

43 IPM 8 Tween 80 39 Ethanol 13 40 1x

6A

6A1 Maisine 78 Tween 80 5 PEG 400 5 12 2x

2x 6A2 Maisine 60 Tween 80 5 PEG 400 5 30 2x

6A3 Maisine 45 Tween 80 3 PEG 400 3 49 2x

6B

6B1 Maisine 67 Tween 80 20 PEG 400 10 3 5x

3x 6B2 Maisine 78 Tween 80 6 PEG 400 3 13 2x

6B3 Maisine 53 Tween 80 28 PEG 400 14 5 2x

6C

6C1 Maisine 60 Tween 80 27 PEG 400 9 4 1x

1,33x 6C2 Maisine 70 Tween 80 12 PEG 400 4 14 1x

6C3 Maisine 50 Tween 80 7,5 PEG 400 2,5 40 2x

6D

6D1 Maisine 60 Tween 80 25 PEG 400 5 10 5x

3x 6D2 Maisine 70 Tween 80 7,5 PEG 400 2,5 21 2x

6D3 Maisine 50 Tween 80 5 PEG 400 1 44 2x

102 Capryol 90 26 Labrasol 65 Transcutol P 9 - 5x

103 Capryol 90 25 Labrasol 60 Transcutol P 15 - 10x

104 Capryol 90 25 Labrasol 70 Transcutol P 5 - 5x

11A

11A1 Capryol 90 50 Cremophor EL 20 Labrasol 20 10 5x

5x

11A2 Capryol 90 20 Cremophor EL 30 Labrasol 30 20 5x

11A3 Capryol 90 10 Cremophor EL 25 Labrasol 25 40 5x

11B

11B1 Capryol 90 65 Cremophor EL 20 Labrasol 10 5 5x

5x

11B2 Capryol 90 25 Cremophor EL 40 Labrasol 20 15 5x

11B3 Capryol 90 10 Cremophor EL 28 Labrasol 14 48 5x

11C

11C1 Capryol 90 75 Cremophor EL 16,5 Labrasol 5,5 35 10x

23,3x

11C2 Capryol 90 20 Cremophor EL 45 Labrasol 15 20 10x

11C3 Capryol 90 10 Cremophor EL 30 Labrasol 10 50 50x

11D

11D1 Capryol 90 62 Cremophor EL 28 Labrasol 7 3 2x

3x 11D2 Capryol 90 20 Cremophor EL 48 Labrasol 12 20 5x

11D3 Capryol 90 10 Cremophor EL 40 Labrasol 10 40 2x

Nhận xét: từ kết quả thử nghiệm độ pha loãng của bảng 4.2, 5 giản đồ pha 9, 10, 11A,

11B và 11C có độ pha loãng trung bình cao nhất được chọn lựa và khảo sát xây dựng công thức hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa felodipin

4.2.2 Khảo sát hả n ng tải loading dược chất tr n hệ tự nhũ t o vi nhũ tương có tiềm n ng

4.2.2.1 Kết quả th nghiệm khả n ng tải hoạt chất được trình bày trong bảng 4.3:

Bảng 4.3 Kết quả khảo sát khả năng tải felodipin của các công thức

CT Kết quả ly tâm Kết quả pha loãng 100 lần

101 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

102 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

103 Đạt Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt

104 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

11A1 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

11A2 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

11A3 Đạt Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt 11B1 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

11B2 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

11B3 Đạt Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt 11C1 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt -

11C2 Đạt Đạt Đạt Không đạt Không đạt Không đạt 11C3 Đạt Đạt Đạt Đạt Không đạt Không đạt

Kết quả được đánh giá là đạt nếu sau khi ly tâm không bị kết tủa và pha loãng 100 lần với nước cất thu được hệ trong suốt hoặc trong mờ và sau 24 giờ, hệ vẫn ổn định không

xảy ra hiện tượng kết tủa, kết bông hay tách lớp

Nhận xét:

- tỷ lệ 5%: felodipin tan tốt trong tất cả các công thức và không bị kết tủa sau khi ly tâm đồng thời một số công thức (CT 91, 92, 93, 94, 95, 11C3) vẫn mang được hoạt chất khi pha loãng 100 lần với nước cất

- tỷ lệ 7,5%: felodipin tan tốt trong tất cả các công thức và không bị kết tủa sau khi

ly tâm nhưng chỉ có một công thức (CT 94) mang được hoạt chất sau khi pha loãng

100 lần với nước cất

- tỷ lệ 10%: felodipin trong một số công thức (CT 91, 95, 101, 102, 104, 11A1, 11A2, 11B1, 11B2, 11C1) bị kết tủa lại sau khi ly tâm đồng thời không có công thức nào mang được hoạt chất khi pha loãng 100 lần với nước cất

- Chọn giản đồ pha số 9 tiến hành khảo sát sự lặp lại