NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VI TỰ NHŨ CHỨA AMLODIPINE

Đề tài nghiên cứu điều chế hệ vi tự nhũ chứa AMlodipine nhằm tăng sinh khả dụng của hoạt chất nói riêng và nhóm hoạt chất khó tan nói chung. Đề tài mở ra hướng đi mới để giải quyết được vấn đề độ tan và sinh khả dụng của 1 nhóm thuốc lớn trị Rối loạn lipid Đái tháo đường Tăng huyết áp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

PHAN THỊ THANH NHÀN

KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO HỆ TỰ NHŨ CỦA

AMLODIPIN TRÊN MỘT SỐ HỆ TỰ NHŨ NỀN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS NGUYỄN THIỆN HẢI

Tp Hồ Chí Minh – Năm 2014

LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp “Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin trên một số hệ

tự nhũ nền” được thực hiện từ tháng 4/2014 đến tháng 7/2014 tại Bộ môn Công nghiệp

dược, Khoa Dược – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, dưới sự hướng dẫn của thầy

PGS.TS Nguyễn Thiện Hải

Em xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến thầy PGS.TS Nguyễn Thiện Hải đã luôn

quan tâm, động viên và tận tình truyền đạt những kiến thức, kinh nghiệm quý báu để giúp

em hoàn thành khóa luận

Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô trong Bộ môn Công nghiệp dược đã tạo mọi điều

khi chúng em thực hiện khóa luận tại Bộ môn

Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy GS.TS Lê Quan Nghiệm đã dành thời gian

quý báu để nhận xét, đánh giá và góp ý giúp cho khóa luận được hoàn thiện hơn

Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Khoa Dược – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh đã tận tình truyền đạt những kiến thức và kinh nghiệm quý giá trong suốt thời

gian em được học tập và rèn luyện tại trường

Con xin cảm ơn gia đình đã luôn là nguồn động viên, khuyến khích và là chỗ dựa vững chắc cho con vượt qua mọi khó khăn trong thời gian thực hiện khóa luận cũng như trong suốt thời gian học tập

Cảm ơn các bạn lớp Dược 2009 và các bạn cùng thực hiện khóa luận tại Bộ môn Công nghiệp dược Sự động viên, sẽ chia và giúp đỡ của các bạn đã là nguồn động lực lớn lao giúp tôi hoàn thành khóa luận và việc học tập

Xin chân thành cảm ơn!

Phan Thị Thanh Nhàn

MỤC LỤC

TỪ VIẾT TẮT viii

DANH MỤC BẢNG ix

DANH MỤC HÌNH xi

Chương 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

2.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ AMLODIPIN 2

2.1.1 Cấu trúc hóa học 2

2.1.2 Tính chất lý hóa 2

2.1.3 Định tính 3

2.1.4 Định lượng 3

2.1.5 Dược động học 3

2.1.6 Dược lý và cơ chế tác dụng 3

2.2 TỔNG QUAN VỀ VI NHŨ TƯƠNG – HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG 4

2.2.1 Tổng quan về vi nhũ tương 4

2.2.2 Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương 4

Chương 3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10

3.1 ĐỐI TƯỢNG 10

3.2 NGUYÊN LIỆU – HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ 10

3.2.1 Nguyên liệu – hóa chất: 10

3.2.2 Trang thiết bị 11

3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11

3.3.1 Điều chế amlodipin (base) từ amlodipin (besylate) 11

3.3.2 Khảo sát độ tan của amlodipin trong một số tá dược có khả năng điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương 12

3.3.3 Xây dựng công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

chứa amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base) bền, ổn định, có khả năng

hòa tan cao 13

3.3.4 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng amlodipin trong hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương 18

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22

4.1 ĐIỀU CHẾ AMLODIPINE (BASE) TỪ AMLODIPINE (BESYLATE) 22

4.2 KHẢO SÁT ĐỘ TAN CỦA AMLODIPIN TRONG MỘT SỐ TÁ DƯỢC CÓ KHẢ NĂNG ĐIỀU CHẾ HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG 23

4.3 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VÀ PHƯƠNG PHÁP BÀO CHẾ HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG CHỨA AMLODIPIN (BESYLATE) HOẶC AMLODIPIN (BASE) BỀN, ỔN ĐỊNH, CÓ KHẢ NĂNG HÒA TAN CAO 26

4.3.1 Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (besylate) và amlodipin (base) trên một số hệ tự nhũ nền 26

4.3.2 Đánh giá hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương tiềm năng chứa amlodipin (besylate) và amlodipin (base) 33

4.4 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG AMLODIPIN TRONG HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG 48

4.4.1 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng amlodipin (besylate) trong hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương 48

4.4.2 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng amlodipin (base) trong hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương 53

4.4.3 Định lượng 58

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 60

5.1 KẾT LUẬN 60

5.2 ĐỀ NGHỊ 61

TÀI LIỆU THAM KHẢO 62

Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại Học – Năm học 2013-2014

KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO HỆ TỰ NHŨ CỦA AMLODIPIN

TRÊN MỘT SỐ HỆ TỰ NHŨ NỀN

Phan Thị Thanh Nhàn Thầy hướng dẫn: PGS.TS NGUYỄN THIỆN HẢI Đặt vấn đề

Amlodipin là thuốc trị tăng huyết áp thuộc nhóm chẹn kênh calci, có tính tan kém và kéo theo sinh khả dụng đường uống của thuốc thấp Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương (SMEDDS) được chọn để nghiên cứu với mục tiêu xây dựng một hệ công thức tạo SMEDDS chứa amlodipin bền, ổn định, có độ hòa tan cao

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Đối tượng gồm amlodipin (besylate), amlodipin (base), các hệ tự nhũ nền

Phương pháp nghiên cứu bao gồm:

Khảo sát độ tan của amlodipin trong một số tá dược có khả năng điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin

Xây dựng công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin bền, ổn định, có khả năng hòa tan cao

Khảo sát, đánh giá hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin

Kết luận

Đã chọn lọc được một công thức hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương cho amlodipin (besylate) và cho amlodipin (base) đạt các yêu cầu đề ra

Final assay for the degree of BS Pharm – Academic year: 2013-2014

FORMULATION AND EVALUATION OF SMEDDS CONTAINING

AMLODIPINE FROM SOME INVESTIGATED TERNARY PHASE DIAGRAMS

Phan Thi Thanh Nhan Supervisor: Assoc Prof PhD NGUYEN THIEN HAI Introduction

Amlodipine, a calcium blocker drug, is used to treat hypertension However, it has low solubility and low oral bioavailability The self-microemulsifying drug delivery system (SMEDDS) containing amlodipine was investigated with aim to formulate a durable, stable, high dissolution amlodipine - SMEDDS

Materials and methods

Materials including amlodipine (besylate), amlodipine (base) and some investigated ternary phase diagrams

Methods

Screening solubility of amlodipine in potential oil phases, surfactans and co-surfactans Developing one formulation and method to construct durable, stable, high dissolution SMEDDS containing amlodipine

Evaluating characteristics of SMEDDS containing amlodipine

Results and discussion

About oils, amlodipine (besylate) has highest solubility in Capryol 90; amlodipine (base) has higher solubility in oleic acid and Capryol 90 than other oil-exipients

Developed formulations of SMEDDS containing amlodipine met standars of quality control, including some ingredients Capryol 90, Cremophore RH 40, Labrasol

Controled and evaluated the quality of SMEDDS containing amlodipine by using UV-Vis method

Conclusion

Developed one durable, stable, high dissolution SMEDDS containing amlodipine (besylate) or amlodipine (base) which met standars of quality control

TỪ VIẾT TẮT

BCS Biopharmaceutical Classification System

HPLC High performance liquid chromatography

SEDDS Self emulsifying drug delivery system SMEDDS Self micro-emulsifying drug delivery system SNEDDS Self nano-emulsifying drug delivery system

UV – Vis Ultraviolet – Visible

DANH MỤC BẢNG

Bảng 2.1 Một số chế phẩm hệ tự nhũ có trên thị trường 8

Bảng 3.1 Các nguyên liệu, hóa chất dùng trong thực nghiệm 10

Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng trong thực nghiệm 11

Bảng 3.3 Pha dãy dung dịch chuẩn amlodipine 18

Bảng 4.1 Kết quả điều chế amlodipin (base) 22

Bảng 4.2 Kết quả độ tan của amlodipin trong một số tá dược khảo sát 24

Bảng 4.3 Các công thức được lựa chọn từ những giản đồ pha xây dựng sẵn 29

Bảng 4.4 Kết quả thử nghiệm khả năng tải hoạt chất amlodipin (besylate) 30

Bảng 4.5 Kết quả thử nghiệm khả năng tải hoạt chất amlodipin (base) 32

Bảng 4.6 Kết quả thử nghiệm độ bền nhiệt động học của các vi nhũ tương chứa amlodipin (besylate) và amlodipin (base) 34

Bảng 4.7 Thành phần công thức pha chế hệ tự nhũ (mg) 36

Bảng 4.8 Kết quả khảo sát lặp lại khả năng tải hoạt chất trên những hệ tự nhũ tiềm năng 37

Bảng 4.9 Kết quả khảo sát lặp lại thử nghiệm độ bền nhiệt động học 37

Bảng 4.10 Kết quả độ bền của vi nhũ tương chứa amlodipin trong các môi trường pH 1,2; 4,5; 6,8 sau 48 giờ 38

Bảng 4.11 Kết quả đo phân bố kích thước giọt của các vi nhũ tương 40

Bảng 4.12 Hàm lượng amlodipin (%) theo thời gian khi pha loãng trong các môi trường pH khác nhau 45

Bảng 4.13 Kết quả thử nghiệm hòa tan của các chế phẩm nghiên cứu chứa amlodipin 46

Bảng 4.14 Kết quả thử nghiệm so sánh độ hòa tan của chế phẩm A với các chế phẩm nghiên cứu chứa amlodipin trong môi trường pH 1,2 47

Bảng 4.15 Kết quả dãy dung dịch chuẩn amlodipin (besylate) 50

Bảng 4.16 Kết quả thẩm định độ chính xác của quy trình định lượng amlodipin (besylate) 51

Bảng 4.17 Kết quả đo UV độ đúng mẫu amlodipin (besylate) 52

Bảng 4.18 Kết quả thẩm định độ đúng của quy trình định lƣợng amlodipin

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1 Công thức cấu tạo của amlodipin (besylate) 2

Hình 4.1 Phổ UV của amlodipin (base) trong methanol và methanol-HCl 22

Hình 4.2 Phổ UV của amlodipin besylate trong methanol 23

Hình 4.3 Biểu đồ so sánh độ tan của amlodipin (besylate) trong các tá dược khảo sát 24

Hình 4.4 Biểu đồ so sánh độ tan của amlodipin (base) trong các tá dược khảo sát 25 Hình 4.5 Giản đồ pha A 27

Hình 4.6 Giản đồ pha B 27

Hình 4.7 Giản đồ pha C 28

Hình 4.8 Giản đồ pha D 28

Hình 4.9 Các công thức chứa amlodipin (besylate) pha loãng 500 lần trong môi trường đệm phosphat pH 9,0 và đệm borat pH 9,2 thời điểm 0h 31

Hình 4.10 Các công thức chứa amlodipin (besylate) pha loãng 500 lần trong môi trường đệm phosphat pH 9,0 và đệm borat pH 9,2 thời điểm 24h 31

Hình 4.11 Pha loãng 500 lần hệ tự nhũ chứa amlodipin (base) 10% trong môi trường nước cất thời điểm 0h và thời điểm 24h 33

Hình 4.12 Kết quả thử nghiệm độ bền vi nhũ tương chứa amlodipin (besylate): chu kỳ nóng – lạnh và chu kỳ đông – rã đông 34

Hình 4.13 Kết quả thử nghiệm độ bền vi nhũ tương chứa amlodipin (base) (10%): chu kỳ nóng – lạnh và chu kỳ đông – rã đông 35

Hình 4.14 Sơ đồ điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin 36

Hình 4.15 Pha loãng công thức ABe.B1 trong các môi trường pH khác nhau tại thời điểm 0h và 24h 38

Hình 4.16 Pha loãng các công thức chứa Aba 10% trong môi trường pH 1,2 tại thời điểm 0h và 48h 39

Hình 4.17 Pha loãng các công thức chứa Aba 10% trong môi trường pH 4,5 tại thời điểm 0h và 48h 39

Hình 4.18 Pha loãng các công thức chứa Aba 10% trong môi trường pH 6,8 tại thời

điểm 0h và 48h 39

Hình 4.19 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương ABe.B1 (mẫu 1) 41

Hình 4.20 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương ABe.B1 (mẫu 2) 41

Hình 4.21 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương ABe.B1 (mẫu 3) 41

Hình 4.22 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B1 (mẫu 1) 42

Hình 4.23 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B1 (mẫu 2) 42

Hình 4.24 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B1 (mẫu 3) 42

Hình 4.25 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B2 (mẫu 1) 43

Hình 4.26 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B2 (mẫu 2) 43

Hình 4.27 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B2 (mẫu 3) 43

Hình 4.28 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B3 (mẫu 1) 44

Hình 4.29 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B3 (mẫu 2) 44

Hình 4.30 Đồ thị phân bố kích thước giọt vi nhũ tương Aba.B3 (mẫu 3) 44

Hình 4.31 Đồ thị biểu diễn hàm lượng (%) amlodipin (besylate) - công thức ABe.B1 và amlodipin (base) - công thức Aba.B1 trong các môi trường có pH khác nhau 45

Hình 4.32 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan của amlodipin (besylate) - công thức ABe.B1 và amlodipin (base)- công thức Aba.B1 trong các môi trường pH khác nhau 46

Hình 4.33 Đồ thị so sánh độ hòa tan của chế phẩm A và hai chế phẩm nghiên cứu chứa amlodipin 47

Hình 4.34 Phổ UV của mẫu chuẩn amlodipin (besylate) 48

Hình 4.35 Phổ UV của mẫu thử ABe.B1 49

Hình 4.36 Đường tuyến tính amlodipin (besylate) trong methanol 50

Hình 4.37 Phổ UV của mẫu chuẩn amlodipin (base) 54

Hình 4.38 Phổ UV của mẫu thử Aba.B1 54

Hình 4.39 Đường tuyến tính amlodipin (base) trong methanol 55

Chương 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Tăng huyết áp là bệnh hiện rất phổ biến trong số những bệnh lý liên quan đến hệ tim mạch Bệnh có thể xảy ra ở nhiều đối tượng khác nhau Các nhóm thuốc trị tăng huyết áp rất đa dạng như thuốc lợi tiểu, thuốc chẹn kênh calci, thuốc chẹn β, thuốc ức chế men chuyển, thuốc ức chế Angiotensin II tại receptor…Trong đó nhóm thuốc chẹn kênh calci với các hoạt chất amlodipin, nifedipin, felodipin…là nhóm thuốc hiện đang được sử dụng khá rộng rãi do phù hợp với người lớn tuổi – nhóm đối tượng chiếm tỷ lệ tăng huyết áp cao nhất Tuy nhiên, đa số các thuốc thuộc nhóm này lại có sinh khả dụng đường uống chưa cao do đặc tính khó tan và khả năng hấp thu hạn chế Nhiều phương pháp đã được nghiên cứu và ứng dụng để cải thiện đặc tính này trên những dược chất kém tan: tạo phức với β cyclodextrin, tạo dạng muối dễ tan, hệ phân tán rắn… Bên cạnh ưu điểm cải thiện được độ tan, những phương pháp này lại gặp một số hạn chế như hoạt chất dễ kết tinh lại, khối lượng viên lớn, ít phù hợp với những hoạt chất thuộc nhóm IV-BCS Hệ tự nhũ tạo nhũ tương hiện nay trở thành một phương pháp được các nhà khoa học trong và ngoài nước chú

ý hơn cả vì vừa cải thiện được độ tan của hoạt chất, vừa nâng cao sinh khả dụng do tăng tính thấm qua đường tiêu hóa Mặt khác, phương pháp điều chế hệ tự nhũ còn đơn giản, dễ thực hiện, có tính ứng dụng vào sản xuất cao

Nhóm nghiên cứu chúng tôi bước đầu đã tiến hành xây dựng thành công hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương cho một số thuốc trị bệnh đái tháo đường như glibenclamid, thuốc trị bệnh tăng

huyết áp như nifedipin, felodipin Từ các kết quả này, đề tài “Khảo sát khả năng tạo hệ

tự nhũ của amlodipin trên một số hệ tự nhũ nền” được thực hiện nhằm mục tiêu xây

dựng được công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin nói chung, amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base) nói riêng Để giải quyết vấn đề đặt

ra, đề tài được tiến hành với những nội dung sau:

1 Điều chế amlodipin (base) từ amlodipin (besylate) sẵn có

2 Khảo sát đánh giá độ tan của amlodipin (besylate) và amlodipin (base) trong một số tá dược có khả năng điều chế được hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

3 Lựa chọn một số hệ tự nhũ nền, từ đó xây dựng công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin (besylate) và amlodipin (base) với các tiêu chí: tỉ lệ dược chất cao, bền, ổn định, có khả năng hòa tan cao

4 Xây dựng và thẩm định qui trình định lượng cho các hệ tự nhũ chứa amlodipin

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ AMLODIPIN

2.1.1 Cấu trúc hóa học

Amlodipin là thuốc điều trị tăng huyết áp và một số bệnh tim mạch thuộc nhóm chẹn kênh calci thế hệ 2, loại dihydropyridin Amlodipin thường được sử dụng dưới dạng muối besylate

Trong nghiên cứu này amlodipin: gọi chung cho cả hai dạng amlodipin (besylate) – ABe

và amlodipin (base) - Aba

Công thức cấu tạo của amlodipin (besylate) được mô tả trong Hình 2.1 [11], [36]

Hình 2.1 Công thức cấu tạo của amlodipin (besylate)

- Tên khoa học: 3-Ethyl 5-methyl (4RS)-2-[(2-aminoethoxy) 6-methyl-1,4- dihydropyridine-3,5-dicarboxylate benzenesulfonate

- Bị phân hủy dưới ánh sáng [11], [36]

- Nhiệt độ nóng chảy: 130-144 oC (Aba); 199-201 oC (ABe) [4], [18]

2.1.3 Định tính

- Phổ hấp thu hồng ngoại (IR): so sánh với phổ amlodipin (besylate) chuẩn

- Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC): so sánh thời gian lưu với amlodipin (besylate) chuẩn [11], [36]

- Hấp thu: hấp thu qua đường tiêu hóa, sinh khả dụng tuyệt đối 64 – 90% Tác dụng làm hạ

huyết áp kéo dài ít nhất 24 giờ sau khi dùng thuốc

- Phân bố: khả năng gắn với protein huyết tương khoảng 93% Không bị ảnh hưởng bởi

thức ăn

- Chuyển hóa: bị chuyển hóa qua gan

- Thải trừ qua nước tiểu

- Thời gian bán thải: 30–50 giờ

- Liều dùng: từ 2,5–10 mg Dạng thường sử dụng trên thị trường hiện nay là viên nang hoặc viên nén [5]

2.1.6 Dược lý và cơ chế tác dụng

Amlodipin có tác dụng trong điều trị một số bệnh lý tim mạch như: tăng huyết áp, đau thắt ngực, nhồi máu cơ tim Trong điều trị tăng huyết áp, amlodipin thường được sử dụng ở bệnh nhân cao tuổi hoặc những bệnh nhân có bệnh kèm theo như: đau thắt ngực, hội chứng Raynaud, đau nửa đầu, suy tim rối loạn tâm trương [5]

Cơ chế tác dụng của amlodipin là ức chế kênh calci ở tiểu động mạch và cơ tim nên làm giản mạch, giảm sức cản ngoại biên và lưu lượng tim

2.2 TỔNG QUAN VỀ VI NHŨ TƯƠNG – HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG

2.2.1 Tổng quan về vi nhũ tương

2.2.1.1 Khái niệm vi nhũ tương

Vi nhũ tương là hệ phân tán dị thể, gồm hai pha lỏng không đồng tan vào nhau, trong đó một pha lỏng gọi là pha phân tán được phân tán đồng nhất dưới dạng giọt mịn trong một pha lỏng khác gọi là môi trường phân tán Các tiểu phần phân tán ở kích thước hạt keo, thường trong khoảng 10–100 nm [1]

2.2.1.2 Ưu điểm và ứng dụng của vi nhũ tương

- Vi nhũ tương có ưu điểm là rất bền, ổn định và trong suốt Quá trình bào chế vi nhũ tương thường đơn giản, dễ thực hiện, ít cần lực phân tán cơ học như dạng nhũ tương thông thường Chế phẩm tạo thành có thể bảo quản được trong thời gian dài

- Có nhiều ứng dụng về vi nhũ tương, nhất là trong ngành Dược như: vi nhũ tương dùng đường uống, đường tiêm, chế phẩm dùng ngoài da… [1]

Nhờ những vận động cơ học và dịch của đường tiêu hóa, nhũ tương được hình thành một cách dễ dàng khi chế hệ phẩm tự nhũ được uống vào cơ thể Các giọt nhỏ được tạo thành làm gia tăng đáng kể tổng diện tích bề mặt, giúp tăng cường khả năng hấp thu của những dược chất khó tan trong nước, từ đó giúp cải thiện sinh khả dụng của những thuốc này [6], [35], [38]

Dựa trên kích thước các tiểu phần của nhũ tương hình thành, có thể chia thành 3 loại hệ tự nhũ cơ bản:

- Hệ tự nhũ tạo nhũ tương (SEDDS) với kích thước các giọt từ 100-300 nm [34]

- Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương (SMEDDS) với kích thước các giọt từ 10-100 nm [30], [39]

- Hệ tự nhũ tạo siêu vi nhũ tương (SNEDDS) với kích thước các giọt dưới 50 nm [14] Trong 3 loại hệ tự nhũ trên, hệ SMEDDS hiện đang được quan tâm nhiều hơn do phương pháp đơn giản, dễ thực hiện, vi nhũ tương tạo thành ổn định, bền vững, có tính ứng dụng cao Những tá dược nhũ hóa, đồng nhũ hóa mới được sản xuất với công nghệ hiện đại là một điều kiện thuận lợi cho nghiên cứu và sản xuất các chế phẩm tự nhũ hiện nay

Hệ SMEDDS có thể được bào chế dưới dạng nang mềm, hoặc có thể chuyển thành dạng rắn (Solid SEDDS/SMEDDS) để đóng nang hoặc dập viên [10]

2.2.2.2 Thành phần của hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

Hệ tự nhũ bao gồm những thành phần chính là pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt Ngoài ra còn có thể có thêm chất đồng hòa tan [10], [13], [28], [34]

- Dầu: là thành phần đóng vai trò quan trọng trong công thức hệ tự nhũ, không chỉ vì khả

năng hòa tan những dược chất kém tan trong nước mà pha dầu còn là phương tiện vận chuyển dược chất qua các màng sinh học Các triglycerid mạch từ trung bình đến dài, với những độ bão hòa khác nhau đã được ứng dụng trong xây dựng công thức hệ tự nhũ cho những dược chất khác nhau Các tá dược thường được sử dụng làm pha dầu trong hệ tự nhũ là Labrafac lipophile WL 1349, Capryol 90, Labrafac PG, Maisine 35-1, peceol, acid oleic, isopropyl myristat… [16]

- Chất diện hoạt: thường sử dụng chất diện hoạt thân nước không ion hóa, có chỉ số HLB

cao (≥ 12), giúp hình thành ngay dạng nhũ tương dầu trong nước khi tiếp xúc với tướng ngoại Nồng độ chất diện hoạt thường được sử dụng trong khoảng 30-60% Chất diện hoạt được sử dụng thường có khả năng hòa tan một lượng lớn hoạt chất kém tan trong nước Điều này giúp giảm thiểu sự ảnh hưởng của các tác nhân khác trong đường tiêu hóa lên sự

ổn định của hoạt chất Một số chất diện hoạt thường sử dụng cho hệ tự nhũ là Tween 80, Tween 20, Span 80, Cremophore EL, Cremophore RH 40, Labrafil M 1944 CS, Labrasol… [25]

- Chất đồng diện hoạt: thường là alcol mạch ngắn đến trung bình, được thêm vào công

thức để giảm bớt nồng độ chất diện hoạt Các chất đồng diện hoạt cũng đảm bảo rằng lớp

mỏng phân cách bề mặt là đủ linh hoạt để sẵn sàng tạo thành từng giọt bằng cách xen giữa các phân tử chất diện hoạt chính để giảm sự tương tác giữa 2 đầu phân cực [25]

- Chất đồng hòa tan: như diethylen glycol monoethyl ether (Transcutol), propylen glycol,

polyethylen glycol, polyoxyethylen, propylen carbonate, alcol tetrahydrofurfuryl polyethylen glycol ether (Glycofurol), Transutol HP…, có thể giúp hòa tan một lượng lớn chất diện hoạt thân nước hay hoạt chất kỵ nước Các dung môi đôi khi cũng đóng vai trò chất đồng hòa tan trong các hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương [31]

2.2.2.3 Hiện tượng tự nhũ

Hiện tượng tự nhũ xảy ra do sự kết hợp giữa các thành phần tá dược khi hỗn hợp tiếp xúc với môi trường phân tán Đầu tiên là sự xâm nhập của pha nước vào pha dầu hình thành những giọt dầu nhỏ, kế tiếp đó các phân tử chất diện hoạt bao quanh làm ổn định cấu trúc hình thành Quá trình này xảy ra phụ thuộc vào pha dầu, chất diện hoạt và đồng diện hoạt được sử dụng; tỷ lệ giữa chúng; nồng độ sử dụng và nhiệt độ môi trường [10], [27], [30], [31], [33]

Sự kết hợp của các tá dược với nhau có ảnh hưởng rất lớn đến cấu trúc hình thành Do đó lựa chọn các tá dược phù hợp với nhau là một bước quan trọng trong xây dựng công thức của một hệ tự nhũ

2.2.2.4 Những bước xây dựng hệ tự nhũ và phương pháp đánh giá

Những giai đoạn chính khi xây dựng hệ tự nhũ

1 Xác định độ tan của hoạt chất trong các thành phần tá dược: pha dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt, chất đồng hòa tan

2 Lựa chọn pha dầu, các chất diện hoạt, đồng diện hoạt, các chất đồng hòa tan dựa trên độ tan của hoạt chất trong các thành phần này và xây dựng giản đồ pha

3 Xây dựng công thức cho hệ SMEDDS bằng cách phối hợp hoạt chất với các tá dược

Sự phối hợp hoạt chất vào các hệ SMEDDS rất dễ bị hạn chế do hoạt chất có thể cản trở quá trình tự nhũ hóa, từ đó làm thay đổi tỷ lệ tối ưu giữa các tá dược Vì vậy trong quá trình xây dựng công thức tối ưu cho hệ SMEDDS, cần phải tiến hành xây dựng cả giản đồ pha có và không có hoạt chất [10]

Phương pháp đánh giá hệ tự nhũ

Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương phải được đánh giá qua những thử nghiệm:

- Độ bền nhiệt động học: vi nhũ tương tạo thành phải bền qua các thử nghiệm chu kỳ nóng - lạnh, chu kỳ đông – rã đông, ly tâm

- Thử nghiệm phân tán: tiến hành trong môi trường HCl 0,1N hoặc nước cất ở 37 oC, vi nhũ tương tạo thành phải trong suốt, đồng nhất và ổn định

- Phân bố kích thước giọt: thường tiến hành đo trong vùng 10–5000 nm với điều kiện môi trường 25 o

C

- Đo thế Zeta: sự ổn định của vi nhũ tương bị ảnh hưởng trực tiếp bởi điện thế bề mặt các giọt Quá trình đo thế Zeta sử dụng phương pháp tán xạ ánh sáng

- Thời gian nhũ tương hóa

- Thử nghiệm khuếch tán in vitro: nhằm mục đích xác định khả năng khuếch tán của hoạt

chất qua màng, thường được tiến hành trong môi trường đệm phosphat pH 6,8

- Giải phóng hoạt chất in vitro: tiến hành trong 500 ml môi trường dịch dạ dày mô phỏng,

2.2.2.5 Ý nghĩa của hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

- Cải thiện sinh khả dụng đường uống của những dược chất kém tan trong nước Do cấu trúc hệ SMEDDS khi được phân tán trong dịch tiêu hóa sẽ hình thành nên vô số những hạt nhỏ (kích thước chỉ từ 1-100 nm) Diện tích bề mặt tiếp xúc tăng lên rất nhiều Thuốc được vận chuyển qua 1 ranh giới thân nước ở ruột non, sau đó tiếp tục thấm qua bờ bàn chải Chính những điều này đã dẫn đến tăng tính thấm và gia tăng sinh khả dụng của thuốc [16], [19]

- Dễ dàng sản xuất và mở rộng Ưu thế hơn những hệ thống phân phối thuốc khác do tính tiện nghi, đơn giản, không cần những trang thiết bị phức tạp Ngoài ra chế phẩm ổn định,

dễ bảo quản và tuổi thọ thuốc kéo dài hơn so với dạng nhũ tương truyền thống Đó là những lý do hệ SMEDDS hiện nay được chú ý nhiều trong công nghiệp dược phẩm

- Hạn chế ảnh hưởng của các yếu tố nội tại và bên ngoài, cũng như ảnh hưởng của thức ăn đến sự hấp thu của thuốc Hệ SMEDDS được một số nghiên cứu chứng minh là hiệu quả không bị cản trở bởi thức ăn, nhờ đó dễ sử dụng và bệnh nhân dễ tuân thủ

- Hệ SMEDDS có khả năng vận chuyển và phân phối những dạng peptid dễ bị phân hủy trong đường tiêu hóa Cholinesterase là tác nhân chính gây thủy phân các peptid Những hệ SMEDDS có thành phần Polysorbat 20 sẽ giúp bảo vệ hoạt chất khỏi tác nhân này [20], [34]

2.2.2.6 Một số chế phẩm hệ tự nhũ có trên thị trường

Một số chế phẩm hệ tự nhũ trên thị trường được trình bày trong Bảng 2.1 [30], [34]

Bảng 2.1 Một số chế phẩm hệ tự nhũ có trên thị trường

Neoral Cylosporin A/I Viên nang mềm Novartis

Norvir Ritonovir Viên nang mềm Abbott

Fortovase Sequinavir Viên nang mềm Hoffmann-La Roche Agenerase Amprenavir Viên nang mềm Glaxo Smithkline

Convulex Acid valproic Viên nang mềm Pharmacia

Lipirex Fenofibrat Viên nang cứng Genus

Sandimmune Cylosporin A/II Viên nang mềm Novartis

Targretin Bexaroten Viên nang mềm Ligand

Rocaltrol Calcitriol Viên nang mềm Roche

Gengraf Cylosporin A/III Viên nang cứng Abbott

2.2.2.7 Một số nghiên cứu cải thiện độ tan của amlodipin

Các nghiên cứu trong nước:

- Nghiên cứu ứng dụng tá dược microcrystal cellulose sản xuất trong nước để điều chế viên nén amlodipin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại Học năm 2006, do Trương Mỹ Linh thực hiện, giáo viên hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Thiện Hải

- Nghiên cứu bào chế viên nén phối hợp amlodipin 5 mg và atenolol 50 mg, Luận văn Thạc

sĩ Dược Học năm 2012, do Hoàng Mai Anh tiến hành, giáo viên hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Thiện Hải

Các nghiên cứu khác, trên thế giới:

- Hệ tự nhũ tạo siêu vi nhũ tương chứa amlodipin besylate do Gulshan Chhabra và cộng sự tiến hành vào năm 2011 [16]

- Viên nén chứa hệ phân tán rắn amlodpin besylate do Rashmi Dahima và cộng sự tiến hành vào năm 2010 [32]

- Tạo phức amlodipin besylate với cyclodextrin do Agnes Kapor và cộng sự tiến hành vào năm 2010 [7]

- Tạo micell amlodipin – glyceryl monolaurat – Tween 80 trong nước do N M Zadymova

và cộng sự tiến hành vào năm 2013 [26]

- Viên nén nổi hai lớp chứa amlodipin besylate và metoprolol succinat do M Sravanthy và cộng sự tiến hành vào năm 2014 [23]

- Nano – liposom chứa amlodipin besylate do Zhang Yangde và cộng sự tiến hành vào năm

2009 [40]

Chương 3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 ĐỐI TƯỢNG

- Amlodipin (besylate) tiêu chuẩn NSX (PL 1)

- Amlodipin (base)

- Các hệ tự nhũ nền [2], [3], [17]

3.2 NGUYÊN LIỆU – HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ

3.2.1 Nguyên liệu – hóa chất:

Các nguyên liệu, hóa chất dùng trong thực nghiệm được trình bày trong Bảng 3.1

Bảng 3.1 Các nguyên liệu, hóa chất dùng trong thực nghiệm

Nguyên liệu - Hóa chất Tiêu chuẩn Hãng cung cấp, quốc gia

Amlodipin (besylate) TCNSX Ercros (Tây Ban Nhà)

Labrafac lipophile WL 1349 TCNSX Gattefosse (Pháp)

3.2.2 Trang thiết bị

Các thiết bị sử dụng trong thực nghiệm được trình bày trong Bảng 3.2

Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng trong thực nghiệm

Máy quang phổ UV-Vis

Máy thử độ hòa tan

Máy vortex

Tủ sấy

MEMMERT WNB 22 MEMMERT WNB 29 ELMA T840DH SATORIOS TE412 KERN ABS 220-4 HITACHI CT6E EPPENDORF MINISPIN SHIMAZDU- UV 1601- PC PHARMATEST PTW S3C ORBITAL 3412 EU

ELEKTRO HELIOS

Đức Đức Đức Đức Đức Nhật Đức Nhật Đức

Mỹ Thụy điển

3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.3.1 Điều chế amlodipin (base) từ amlodipin (besylate)

Quá trình điều chế amlodipin (base) từ amlodipin (besylate) sẵn có được thực hiện như sau: [4], [18]

- Hòa tan amlodipin (besylate) (14,6 mmol; 8,28 g) trong 1800 ml H2O ở 40-45 oC Làm lạnh dung dịch xuống 3-5 oC rồi thêm từ từ dung dịch NaOH 1 M (15,84 ml) và khuấy liên tục trong 1 giờ Lọc và rửa tủa với 18 ml H2O Sấy sản phẩm ở 50 oC

- Tinh chế amlodipin (base): hòa tan 15 g amlodipin (base) chưa tinh chế trong 138 ml ethanol nóng Thêm 276 ml H2O rồi làm nguội hỗn hợp đến nhiệt độ phòng Tủa bắt đầu xuất hiện Tiếp tục làm lạnh trong 1 giờ Lọc và rửa tủa với 25 ml H2O Sấy ở nhiệt độ 50

oC đến khối lượng không đổi

- Kiểm định sản phẩm tạo thành:

* Nhiệt độ nóng chảy: 130-144 oC

* Phổ hấp thu UV: hòa tan mỗi 0,1 g amlodipin (base) trong 100 ml hai môi trường methanol và dung dịch 1% của HCl 0,1 M trong methanol Pha loãng đến nồng độ khoảng

10 µg/ml Quét phổ UV để xác định các đỉnh hấp thu cực đại của amlodipin (base) trong hai môi trường Tiến hành song song với 0,1 g amlodipin (besylate) được chuẩn bị tương

tự trong môi trường methanol So sánh các đỉnh hấp thu của amodipin (besylate) và amlodipin (base) trong các môi trường

* Độ tan trong nước: cho một lượng thừa amlodipin (base) (100 mg) vào bình định mức

25 ml Thêm nước nước cất, lắc đều trong 10 phút Siêu âm trong 20 phút và thêm nước đến vạch Lọc và pha loãng dịch lọc đến nồng độ thích hợp Đo UV tại bước sóng 237 nm

và xác định độ tan của amlodipin (base) trong nước

3.3.2 Khảo sát độ tan của amlodipin trong một số tá dược có khả năng điều chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương

Độ tan của amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base) trong các thành phần: pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt được xác định bằng cách đo nồng độ bão hòa của amlodipin trong các thành phần này

- Một lượng thừa dược chất (amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base)) được thêm vào từng eppendorf có sẵn 1 ml từng loại tá dược: Labrafac lipophile WL 1349, Capryol 90, acid oleic, Cremophore EL, Cremophore RH 40, Tween 80, Tween 20, Labrasol, PEG-

400, PG, Transcutol và ethanol

- Các eppendorf được vortex (5-10 phút) để trộn đều, siêu âm (10 phút) Sau đó mẫu được đặt trong máy lắc ngang và lắc tại nhiệt độ phòng với tốc độ 120 vòng/phút trong vòng 48 giờ Mẫu được để yên trong 10 phút cho ổn định trước khi ly tâm với tốc độ 13500 vòng/phút trong 5 phút Lọc qua màng lọc cellulose acetat kích thước lỗ lọc 0,45 µm Pha loãng những mẫu thử bằng methanol đến nồng độ thích hợp và sử dụng phương pháp quang phổ UV-Vis với bước sóng hấp thu cực đại 237 nm để xác định nồng độ bão hòa của amlodipin trong các tá dược [8], [10], [13], [24]

* Mẫu chuẩn: cân chính xác 100,0 mg amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base) cho vào bình định mức 100 ml, thêm methanol, lắc đều và siêu âm trong 10 phút Điều chỉnh methanol đủ 100 ml thu được dung dịch gốc A Lấy chính xác 1 ml dung dịch gốc A pha loãng bằng methanol trong bình định mức 10 ml, thu được dung dịch B Tiếp tục lấy chính xác 1 ml dung dịch B pha loãng bằng methanol trong bình định mức 10 ml Thu được dung

dịch chuẩn B1 với nồng độ 10 µg/ml Trong nghiên cứu này, cách pha dung dịch chuẩn B1 được áp dụng cho tất cả các thử nghiệm về sau

* Mẫu thử: dùng micropipet hút 0.5 ml từng hỗn hợp amlodipin – tá dược đã được lọc cho vào bình định mức, pha loãng đến nồng độ thích hợp bằng methanol

* Mẫu trắng: tá dược sử dụng cho từng mẫu thử được pha loãng trong methanol Độ pha loãng tương ứng với độ pha loãng của mẫu thử

- Tiến hành đo: quét phổ mẫu chuẩn B1 amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base) trong vùng bước sóng 200-400 nm, xác định các bước sóng hấp thu cực đại và độ hấp thu của mẫu chuẩn (Ac) Tại bước sóng hấp thu cực đại của amlodipin, đo lần lượt các mẫu thử, xác định độ hấp thu của mẫu thử (At) Tính toán độ tan của dược chất trong các tá dược Mỗi mẫu thử được đo lặp lại 3 lần

- Nồng độ amlodipin bão hòa trong mỗi tá dược được xác định bằng công thức:

C (mg/ml) = Trong đó:

Ac: độ hấp thu của mẫu chuẩn

At: độ hấp thu của mẫu thử

m: khối lượng cân của mẫu chuẩn (mg)

ĐPL: độ pha loãng của mẫu thử (lần)

3.3.3 Xây dựng công thức và phương pháp bào chế hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin (besylate) hoặc amlodipin (base) bền, ổn định, có khả năng hòa tan cao

3.3.3.1 Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (besylate) và amlodipin (base) trên một số hệ tự nhũ nền

Nhằm mục đích lựa chọn cùng giản đồ pha để khảo sát cho cả amlodipin (besylate) và amlodipin (base), thử nghiệm khả năng tải hoạt chất được tiến hành trước với amlodipin (besylate) Giản đồ pha chứa các hệ tự nhũ nền có khả năng tải hoạt chất amlodipin (besylate) tốt sẽ được tiếp tục thực hiện cho amlodipin (base)

Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (besylate)

Lựa chọn một số hệ tự nhũ nền

Dựa trên kết quả độ tan của amlodipin (besylate) trong các tá dược khảo sát, lựa chọn một

số giản đồ pha đã được nghiên cứu Ưu tiên những giản đồ pha có thành phần pha dầu, chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt có khả năng hòa tan tốt hoạt chất Với từng giản đồ pha lấy ít nhất 3 điểm trong vùng có khả năng tạo vi nhũ tương Xác định thành phần của các chất có trong công thức tại mỗi điểm

Một số giản đồ pha đã được nhóm nghiên cứu của chúng tôi tiến hành xây dựng và đánh giá cho các hoạt chất thuộc cùng nhóm chẹn kênh calci là felodipin và nifedipin với thành phần như sau:

- Capryol, Smix (Cremophore EL - Labrasol (1:1)), Transcutol cho hoạt chất felodipin [3], [21]

- Capryol, Cremophore RH và Labrasol cho hoạt chất nifedipin [2]

Các giản đồ pha nói trên cùng với một số giản đồ pha phù hợp khác được xây dựng sẵn sẽ được lựa chọn để tiến hành khảo sát

Khảo sát khả năng tải hoạt chất trên những hệ tự nhũ nền được lựa chọn

Từ những công thức chọn lựa từ các giản đồ pha Tiến hành tải hoạt chất với các tỷ lệ hoạt chất 5%, 6,5%, 7,5%

Tiến hành: cân chính xác khoảng 0,5 g hỗn hợp từng công thức vào eppendorf, vortex để trộn đều Cân chính xác lượng hoạt chất theo tỷ lệ cho vào eppendorf chứa hệ tá dược, vortex đều và siêu âm trong 20 phút Đun cách thủy ở nhiệt độ 40 o

C trong 15 phút (nếu cần) cho hoạt chất tan hết Để ổn định trong 24 giờ sau đó ly tâm với tốc độ 13500 vòng/phút trong 5 phút để xác định có kết tủa hay không Công thức đạt khi không có tủa hoạt chất sau khi ly tâm [22], [34]

Đánh giá khả năng phân tán của hệ SMEDDS

Các công thức đạt thử nghiệm ly tâm sẽ được để yên ít nhất 24 giờ tại nhiệt độ phòng sau

đó pha loãng với nước cất, dung dịch đệm phosphat pH 9,0 và dung dịch đệm borat pH 9,2 Độ pha loãng lần lượt là 10 lần, 20 lần, 50 lần, 100 lần và 500 lần Đánh giá bằng cảm quan Các công thức đạt là những công thức tạo được vi nhũ tương trong suốt hoặc gần trong suốt như nước cất, đồng nhất, không đục và không có tủa hoạt chất ngay sau pha loãng và sau khi để ở nhiệt độ phòng 24 giờ [9], [29]

Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (base)

Dựa trên kết quả khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (besylate) trên những hệ

tự nhũ tiềm năng và kết quả độ tan của amlodipin (base) trong các tá dược khảo sát Lựa chọn giản đồ pha phù hợp để tiến hành khảo sát khả năng tạo nhũ của amlodipin (base) Các bước tiến hành và đánh giá tương tự như với amlodipin (besylate), môi trường pha loãng cho amlodipin (base) là nước cất

3.3.3.2 Đánh giá hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương tiềm năng chứa amlodipin (besylate) và amlodipin (base)

Đánh giá độ bền nhiệt động học của các vi nhũ tương

Các công thức được pha loãng 100 lần với nước cất và lần lượt tiến hành những thử nghiệm đánh giá sau:

- Chu kỳ nóng – lạnh: các công thức được khảo sát qua 6 chu kỳ nhiệt độ (4 oC và 45 oC) với tổng thời gian lưu trữ ở mỗi nhiệt độ không được ít hơn 48 giờ Sau thử nghiệm các công thức không có hiện tượng đục, tách lớp, kết tủa sẽ được chọn cho thử nghiệm tiếp theo [22]

- Ly tâm: các công thức hệ tự nhũ sau khi pha loãng, đem ly tâm với tốc độ 3500 vòng/phút (2537,5 ×g) trong 30 phút Không được có hiện tượng tách lớp hay kết tủa xảy

ra [37]

- Chu kỳ đông - rã đông: 3 chu trình đông và rã đông được thực hiện với tổng thời gian lưu trữ tại mỗi nhiệt độ không được ít hơn 48 giờ Các công thức không có hiện tượng tách lớp, kết tủa sẽ được chọn cho thử nghiệm tiếp theo [20], [38]

Khảo sát lặp lai thử nghiệm tải hoạt chất và độ bền nhiệt động học trên hệ tự nhũ tạo

vi nhũ tương tiềm năng

Trong số các công thức đạt thử nghiệm về độ bền nhiệt động học của các vi nhũ tương

Lựa chọn các công thức với tỷ lệ hoạt chất cao và khảo sát tính lặp lại của các thử nghiệm: khả năng tải hoạt chất, khả năng phân tán, các thử nghiệm độ bền nhiệt động học của vi nhũ tương Mỗi thử nghiệm được lặp lại 3 lần

Yêu cầu: trong cả ba lần thử nghiệm lặp lại đều phải cho kết quả giống với kết quả thử

nghiệm ban đầu

Đánh giá sự ảnh hưởng của pH lên độ bền vững của hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương chứa amlodipin

Pha loãng các công thức 100 lần ở các môi trường đệm pH 1,2; 4,5; 6,8 và để yên ở nhiệt

độ phòng trong 48 giờ Quan sát và đánh giá bằng cảm quan, ghi nhận thời điểm hoạt chất

bị tủa lại hoặc hệ bị đục, tách lớp

Các công thức ổn định qua 48 giờ tại cả ba môi trường đệm, không có hiện tượng đục, kết tủa hay tách lớp sẽ được chọn cho thử nghiệm tiếp theo

Xác định sự phân bố kích thước giọt của vi nhũ tương hình thành

Tiến hành đo phân bố kích thước giọt của các vi nhũ tương tạo thành sau khi pha loãng 100 lần với nước cất Lựa chọn hệ có phân bố kích thước giọt tốt nhất [20], [27]

Yêu cầu: những công thức đạt phải có dải phân bố kích thước giọt nằm trong vùng 10 –

Hàm lượng amlodipin được xác định bằng công thức sau:

mX (mg) =

X% =

× 100%

Trong đó:

Ac: độ hấp thu của mẫu chuẩn

At: độ hấp thu của mẫu thử

mc: khối lượng của mẫu chuẩn (mg)

mt: khối lượng cân của mẫu thử (mg)

mtt: khối lượng cân thực tế của hoạt chất trong 100 mg mẫu thử (mg)

ĐPL: độ pha loãng của mẫu thử (lần)

Thử nghiệm hòa tan với chế phẩm nghiên cứu chứa amlodipin và so sánh với chế phẩm trên thị trường

Thử nghiệm hòa tan với chế phẩm nghiên cứu chứa amlodipin

Mẫu: hệ tự nhũ được đóng vào viên nang cứng và được tiến hành thử độ hòa tan trong ba môi trường có pH khác nhau là 1,2; 4,5; 6,8 với điều kiện thử nghiệm như sau:

Mẫu chuẩn đối chiếu B1 (Ac)

Phần trăm độ hòa tan được tính theo công thức:

Xi% (w/w) =

× 100%

Xi% lũy tiến (w/w) = Xi% ∑

× 10Trong đó:

Ac: độ hấp thu của mẫu chuẩn

At: độ hấp thu của mẫu thử

i: thời điểm lấy mẫu (phút)

mc: khối lượng của mẫu chuẩn (mg)

mlt: khối lượng lý thuyết của hoạt chất trong 100 mg mẫu thử (mg)

So sánh với chế phẩm trên thị trường

Tiến hành thử nghiệm hòa tan trong môi trường đệm pH 1,2 với chế phẩm viên nang cứng Amlodipin Stada 5 mg (chế phẩm AD) hiện đang có trên thị trường So sánh với hai chế phẩm hệ tự nhũ nghiên cứu chứa amlodipin (besylate) và amlodipin (base)

3.3.4 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng amlodipin trong hệ

Mẫu chuẩn B1 có hàm lượng hoạt chất 10 µg/ml

Mẫu thử: cân chính xác khoảng một lượng mẫu thử thích hợp, pha loãng đến nồng độ gần bằng nồng độ mẫu chuẩn

Mẫu trắng: methanol

Mẫu placebo: chuẩn bị giống mẫu thử nhưng không có hoạt chất amlodipin

- Phân tích bằng phương pháp quang phổ UV-Vis

b Yêu cầu: Kết quả phổ UV của mẫu thử và mẫu chuẩn phải có cùng giá trị λmax, đồng thời mẫu trắng và mẫu placebo không có đỉnh trùng với đỉnh hấp thu của mẫu chuẩn và mẫu thử amlodipin

3.3.4.2 Tính tuyến tính

Chuẩn bị mẫu

- Pha dung dịch gốc amlodipin 250 µg/ml: cân chính xác 62,5 mg amlodipine (besylate) hoặc amlodipin (base) cho vào bình định mức 250 ml, hòa tan bằng một lượng vừa đủ methanol, lắc đều, siêu âm, thêm methanol đến vạch

- Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: các dung dịch chuẩn được pha từ dung dịch gốc và được trình bày trong Bảng 3.3

Bảng 3.3 Pha dãy dung dịch chuẩn amlodipine

Nồng độ (µg/ml) 2,5 5 7,5 10 12,5 15 17,5 20 25 30

MeOH vừa đủ (ml) 100 50 100 50 100 50 100 50 50 25

Đo độ hấp thu tại λmax cho mỗi mẫu và ghi lại kết quả

Vẽ đường biểu diễn sự tương quan giữa nồng độ và độ hấp thu

Sử dụng ―phân tích hồi quy‖ với để kiểm tra ý nghĩa các hệ số trong phương trình hồi quy

và kiểm tra tính thích hợp của phương trình hồi quy

Trắc nghiệm tính tương thích của phương trình hồi qui

Giả thuyết:

Ho: phương trình hồi quy không có tính tương thích

HA: phương trình hồi quy có tính tương thích

Với α = 0,05

Nếu P (significance F) < α ⇒ Bác bỏ Ho chấp nhận HA, độ tin cậy 95%

Nếu P (significance F) > α ⇒ Chấp nhận Ho, độ tin cậy 95%

Trắc nghiệm ý nghĩa hệ số hồi quy

Giả thuyết

Ho: hệ số hồi quy không có ý nghĩa

HA: hệ số hồi quy có ý nghĩa

Với α = 0,05

Nếu P (significance F) < α ⇒ Bác bỏ Ho chấp nhận HA, độ tin cậy 95%

Nếu P (significance F) > α ⇒ Chấp nhận Ho, độ tin cậy 95%

3.3.4.3 Độ chính xác

Độ chính xác của một quy trình phân tích được biểu thị bằng độ lệch chuẩn tương đối giữa các kết quả thử riêng rẽ với giá trị trung bình thu được khi áp dụng quy trình đề xuất cho cùng một mẫu thử được làm đồng nhất trong cùng điều kiện

Chuẩn bị mẫu

- Mẫu chuẩn B1 với nồng độ 10 µg/ml (Ac)

- Mẫu thử: 6 dung dịch thử được chuẩn bị bằng cách cân chính xác khoảng 100 mg mẫu thử vào bình định mức 10 ml Pha loãng thích hợp

Tiến hành đo UV tại bước sóng λmax cho 6 mẫu thử (Ac) Xác định giá trị ̅ và RSD

Yêu cầu: phương pháp định lượng đạt độ chính xác khi RSD ≤ 2%

Hàm lượng hoạt chất trong 100 mg mẫu thử được xác định theo công thức:

X (mg) =

Trong đó:

Ac: độ hấp thu của mẫu chuẩn

At: độ hấp thu của mẫu thử

mc: khối lượng cân của mẫu chuẩn (mg)

mt: khối lượng cân của mẫu thử (mg)

ĐPL: độ pha loãng của mẫu thử (lần)

3.3.4.4 Độ đúng

Độ đúng của quy trình phân tích được thể hiện bằng tỷ lệ phục hồi (%) giá trị thực tìm thấy của chất chuẩn so với giá trị thêm vào mẫu thử khi áp dụng quy trình đề xuất và tiến hành trong cùng điều kiện

Yêu cầu: phương pháp định lượng đạt độ đúng khi tỷ lệ phục hồi thực nghiệm nằm trong giới hạn cho phép 98-102% ở mỗi nồng độ chuẩn thêm vào và giá trị RSD ≤ 2%

90-Hàm lƣợng hoạt chất định lƣợng (%) đƣợc tính toán dựa trên công thức:

X (%) =

× 100%

Trong đó:

Ac: độ hấp thu của mẫu chuẩn

At: độ hấp thu của mẫu thử

mc: khối lƣợng cân của mẫu chuẩn (mg)

mt: khối lƣợng cân của mẫu thử (mg)

mlt: khối lƣợng lý thuyết của hoạt chất trong 100 mg mẫu thử (mg) ĐPL: độ pha loãng của mẫu thử (lần)

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

4.1 ĐIỀU CHẾ AMLODIPINE (BASE) TỪ AMLODIPINE (BESYLATE)

Kết quả điều chế amlodipin (base) được thể hiện trong Bảng 4.1; Hình 4.1 và Hình 4.2

Bảng 4.1 Kết quả điều chế amlodipin (base)

Khối lượng amlodipin (besylate) nguyên liệu 15,87 g (27,98 mmol)

Khối lượng amlodipin (base) trước tinh chế 10,9054 g

Khối lượng amlodipin (base) sau tinh chế 8,9604 g

Hình 4.1 Phổ UV của amlodipin (base) trong methanol (A) và methanol-HCl (B)

Hình 4.2 Phổ UV của amlodipin besylate trong methanol

Nhận xét: kết quả từ bảng 4.1.; Hình 4.1 và Hình 4.2 cho thấy amlodipin (base) điều chế

được là chất rắn màu trắng, không tan trong nước Các đỉnh hấp thu của amlodipin (base)

và amlodipin (besylate) là không khác nhau trong các môi trường Do đó, có thể dùng amlodipin base làm nguyên liệu cho nghiên cứu

4.2 KHẢO SÁT ĐỘ TAN CỦA AMLODIPIN TRONG MỘT SỐ TÁ DƯỢC CÓ KHẢ NĂNG ĐIỀU CHẾ HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG

Dựa trên kết quả quét phổ mẫu chuẩn amlodipin (besylate) và amlodipin (base) Ta có hai bước sóng hấp thu cực đại là 237 nm và 360 nm Độ hấp thu của hoạt chất tại bước sóng

237 nm cao hơn so với tại bước sóng 360 nm

Các tá dược khảo sát hầu như đều có thể pha loãng tương tự như mẫu thử để làm mẫu trắng

và đo tại bước sóng 237 nm Ngoại trừ labrafac lipophile WL 1349 và acid oleic có độ hấp thu đáng kể tại bước sóng 237 nm nên được tiến hành đo tại bước sóng 360 nm

Kết quả độ tan của amlodipin (besylate) và amlodipin (base) được thể hiện trong Bảng 4.2; Hình 4.3 và Hình 4.4

Bảng 4.2 Kết quả độ tan của amlodipin trong một số tá dược khảo sát (n = 3)

STT Tá dược

Bước sóng (nm)

Độ pha loãng

1 La WL.1349 360 25 2000 Không tan 32,09 ± 3,66

107.4 91.34 232.06

87.68

142

80.44

0 50 100 150 200

Hình 4.4 Biểu đồ so sánh độ tan của amlodipin (base) trong các tá dược khảo sát

- Đối với chất đồng hòa tan, khả năng tan của amlodipin (besylate) được xếp theo thứ tự giảm dần như sau: PEG 400, Transcutol, PG, ethanol

Khả năng hòa tan của dược chất trong pha dầu là quan trọng hơn so với hòa tan trong chất diện hoạt và đồng diện hoạt Do khi pha loãng hệ SMEDDS trong nước làm giảm nồng độ chất diện hoạt và đồng diện hoạt, dược chất nếu chủ yếu hòa tan trong những thành phần này sẽ rất dễ bị kết tinh [16]

Vì vậy việc lựa chọn giản đồ pha để khảo sát sẽ tập trung ưu tiên những giản đồ pha có sử dụng pha dầu là Capryol 90

Về amlodipin (base)

- Đối với pha dầu, khả năng tan của amlodipin (base) được xếp theo thứ tự giảm dần như sau: acid oleic, Capryol 90, Labrafac lipophile WL 1349 Từ kết quả, amlodipin (base) có thể tan tốt trong acid oleic và Capryol 90 Ưu tiên lựa chọn những giản đồ pha có thành phần pha dầu là acid oleic và Capryol 90

32.09

175.8 131.79

0 50 100 150 200 250

- Đối với chất diện hoạt và chất đồng diện hoạt, khả năng tan của amlodipin (base) được xếp theo thứ tự giảm dần như sau: Labrasol, Tween 20, Cremophore EL, Tween 80, Cremophore RH 40

- Đối với chất đồng hòa tan, khả năng tan của amlodipin (base) được xếp theo thứ tự giảm dần như sau: Transcutol, ethanol, PEG 400, PG

4.3 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VÀ PHƯƠNG PHÁP BÀO CHẾ HỆ TỰ NHŨ TẠO VI NHŨ TƯƠNG CHỨA AMLODIPIN (BESYLATE) HOẶC AMLODIPIN (BASE) BỀN, ỔN ĐỊNH, CÓ KHẢ NĂNG HÒA TAN CAO 4.3.1 Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (besylate) và amlodipin (base) trên một số hệ tự nhũ nền

4.3.1.1 Khảo sát khả năng tạo hệ tự nhũ của amlodipin (besylate) trên một

số hệ tự nhũ nền

Lựa chọn một số hệ tự nhũ nền

Các giản đồ pha được lựa chọn có thành phần hệ tá dược như sau:

- Giản đồ pha A: Capryol 90, Smix (Cremophore EL – Labrasol (1:1)), Transcutol [3], [21]

- Giản đồ pha B: Capryol 90, Cremophore RH 40, Labrasol [2]

- Giản đồ pha C: Capryol 90, Tween 20, PEG 400 [17]

- Giản đồ pha D: Capryol 90, Tween 20, PG [17]

Một số hình ảnh về các giản đồ pha được lựa chọn được thể hiện trong Hình 4.5, Hình 4.6; Hình 4.7 và Hình 4.8

Hình 4.5 Giản đồ pha A [21]

Hình 4.6 Giản đồ pha B [2]