Nghiên cứu tạo vector và biểu hiện gen drr c từ chủng xạ khuẩn streptomyces peucetius

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ******************** KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Formatted: Left Formatted: Centered Formatted: Font: Not Italic, Portuguese (Brazil) ĐỀ TÀI: Formatted: Portuguese (Brazil) Nghiên cứu tạo vetor biểu gen drr C từ chủng xạ khuẩn streptomyces peucetius “Nghiên cứu thiết kế vect or pIBR25-drr C biểu gen drr C chủng xạ khuẩn Streptomyces lividans TK24 Formatted: Font: Not Italic, Portuguese (Brazil) Formatted: Portuguese (Brazil) Formatted: Font: Not Italic, Portuguese (Brazil) Formatted: Portuguese (Brazil) Formatted: Font: Not Italic, Portuguese (Brazil) Formatted: Portuguese (Brazil) ” Formatted: Font: Not Italic, Portuguese (Brazil) Formatted: Portuguese (Brazil) Formatted: Font: Not Italic, Portuguese (Brazil) Formatted: Portuguese (Brazil) Formatted: Centered Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên: TS Ta Thị Thu Thủy Nguyễn Trọng Duy Formatted: Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.3 li Formatted Table Formatted: Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.3 li Lớp : CNSH-1301 Khoa: Công Nghệ Sinh Học Formatted: Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.3 li Formatted: Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.3 li Formatted: Font: 21 pt Formatted: Tab stops: 2.64", Left HÀ NỘI – 2017 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC ******************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Formatted: Left ĐỀ TÀI: “Nghiên cứu tNghiên cứu tạo vetor biểu gen drr C từ Formatted: Font: Not Italic Formatted: Font: 16 pt chủng xạ khuẩn streptomyces peucetius hiết kế vector pIBR25- Formatted: Font: Not Italic drr C biểu gen drr C chủng xạ khuẩn Streptomyces Formatted: Font: Not Italic Formatted: Font: Not Italic lividans TK24” Formatted: Font: Not Italic Giáo viên hướng dẫn: TS Ta Thị Thu Thủy Sinh viên: Nguyễn Trọng Duy Lớp : CNSH-1301 Khoa: Công Nghệ Sinh Học HÀ NỘI – 2017 Formatted: Centered Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Formatted: Header distance from edge: 0.43", Footer distance from edge: 0.43" LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo công tác khoa Công Nghệ Sinh Học – Viện Đại Học Mở Hà Nội tạo điều kiện cho chúng em học tập môi trường khoa học hồn thiện Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến cô giáo – TS Tạ Thị Thu Thủy Người dành nhiều thời gian tâm huyết đinh hướng nghiên cứu, giúp đỡ em suốt q trình thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn chị Nguyễn Thị Phương Thảo - Kỹ sư công nghệ sinh học nhiệt tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt trình thực tập hồn thành đề tài nghiên cứu Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, người thân, tồn thể bạn phòng thí nghiệm Sinh Học Phân Tử động viên, giúp đỡ em suốt thời gian học tập nghiên cứu Trong trình nghiên cứu đề tài, thân em có nhiều cố gắng, khơng thể tránh khỏi thiếu sót, hạn chế nên em mong nhận góp ý q thầy – để khóa luận em đầy đủ hoàn chỉnh Em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội , ngày 17 19 tháng năm 2017 Sinh viên Nguyễn Trọng Duy SV: Nguyễn Trọng Duy Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh Học MỤC LỤC Formatted: Font: 14 pt, Bold Formatted: Normal, Centered Contents Error! Hyperlink reference not valid Formatted: Font: 14 pt MỞ ĐẦU 1978 Formatted: TOC Heading, Justified, Tab stops: Not at 2.2" + 6.1" PHầN I:.TỔNG QUAN 21910 Formatted: Font: 14 pt 1.1 Xạ KHUẩN 29910 1.1.1 Xạ khuẩn Streptomyces peucetius 29910 Formatted: TOC Heading, Justified, Tab stops: 6.1", Right,Leader: … + Not at 6.1" Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified 1.1.2 Xạ khuẩn Streptomyces lividans TK24 30910 1.2 TổNG QUAN Về KHÁNG SINH DOXORUBICIN 311011 1.2.1 Giới thiệu chung kháng sinh Doxorubicin 311011 1.2.2.Cấu trúc kháng sinh Doxorubicin 311112 1.2.3 Con đường sinh tổng hợp Doxorubicin 321112 1.2.4.Cơ chế hoạt động hoạt tính sinh học kháng sinh Doxorubicin 351516 1.3.CÁC NGHIÊN CứU VÀ ứNG DụNG CủA KHÁNG SINH DOXORUBICIN TRÊN THế GIớI 371718 1.3.1 Lịch sử nghiên cứu Doxorubicin 371718 1.3.2 Ứng dụng cuả Doxorubicin 381819 1.3.3.Thành tựu nghiên cứu 391920 1.4.GEN DRRC 492122 1.5 TổNG QUAN Về VECTOR TÁCH DÒNG VÀ VECTOR BIểU HIệN 502123 1.6 MụC TIÊU VÀ NộI DUNG NGHIÊN CứU 522425 1.6.1 Mục tiêu nghiện cứu 522425 1.6.2 Nội dung nghiên cứu 522425 PHẦN II:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 552627 2.1 VậT LIệU, HĨA CHấT, MƠI TRƯờNG VÀ THIếT Bị 552627 2.1.1 Vật liệu 552627 2.1.2 Môi trường nuôi cấy 582627 2.1.3 Hóa chất 602829 SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh Học 2.1.4 Thiết bị 633132 2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CứU 643233 2.2.1 Phương pháp tách chiết DNA genome từ xạ khuẩn 643233 2.2.2 Phương pháp PCR 663334 2.2.3 Phương pháp điện di DNA gel agarose 663334 2.2.4 Phương pháp tinh DNA từ gel agarose 673435 2.2.5 Phương pháp tách DNA plasmid từ tế bào vi khuẩn 683435 2.2.6 Phương pháp chuyển gen vào E coli sốc nhiệt 683536 2.2.7 Phương pháp nối DNA 703637 2.2.8 Phương pháp cắt DNA enzyme giới hạn 703638 2.2.9 Phương pháp chuyển gen vào xạ khuẩn Streptomyces lividans tế bào trần 713738 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 733839 3.1 TÁCH DÒNG GEN 733839 Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified 3.1.1 Tách DNA tổng số từ xạ khuẩn Streptomyces peucetius 733839 3.1.2 Nhân gen drr C phản ứng PCR 743940 3.1.3 Tạo vector tái tổ hợp pGEM-T-drr C 764041 3.2 THIếT Kế VECTOR BIểU HIệN PIBR25-DRRC TRÊN VI KHUẩN E.COLI JM 109 794243 3.3.CHUYểN VECTOR PIBR25-DRR C VÀO Tế BÀO TRầN (STREPTOMYCES LIVIDANS) 824445 3.3.1 Ảnh hưởng nồng độ kháng sinh Thiostrepton phủ tế bào 834445 3.3.2 Ảnh hưởng thời gian phản ứng enzyme (lysozyme) 854546 3.3.3.Ảnh hưởng nồng độ PEG bổ sung chuyển gene 854647 3.4 TÁCH VÀ THU NHậN HỗN HợP ENZYME THÔ DRR C 864647 4.1 KếT LUậN 884849 4.2 Đề XUấT 884849 TÀI LIỆU THAM KHẢO 914950 SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học HÌNH 1.1.8: QUY TRÌNH THựC HIệN 34 MỞ ĐẦU PHầN I:.TỔNG QUAN 10 1.1 Xạ KHUẩN 10 Formatted: Justified 1.1.1 Xạ khuẩn Streptomyces peucetius 10 1.1.2 Xạ khuẩn Streptomyces lividans TK24 10 1.2 TổNG QUAN Về KHÁNG SINH DOXORUBICIN 11 1.2.1 Giới thiệu chung kháng sinh Doxorubicin 11 1.2.2.Cấu trúc kháng sinh Doxorubicin 12 HÌNH 1.1 CấU TRÚC KHƠNG GIAN HÓA HọC CủA DOXORUBICIN Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt 12 1.2.3 Con đường sinh tổng hợp Doxorubicin 12 HÌNH 1.2 CấU TRÚC KHƠNG GIAN CủA DAUNORUBICIN VÀ Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt DOXORUBICIN 13 HÌNH 1.3 CÁC GEN THAM GIA VÀO QUÁ TRÌNH SINH TổNG HợP KHÁNG SINH DXR [32] 14 HÌNH 1.4 CÁC GEN THAM GIA VÀO Q TRÌNH MÃ HĨA CHO CÁC ENZYME POLYKETIDE SYNTHASE LOạI II VÀ TổNG HợP HợP CHấT TRUNG GIAN Ε-RHODOMYCINONE 15 HÌNH 1.5 CƠ CHế VÀ CON ĐƯờNG TổNG HợP DNR VÀ DXR Từ ΕRHODOMYCINONE 16 1.2.4.Cơ chế hoạt động hoạt tính sinh học kháng sinh Doxorubicin 16 1.3.CÁC NGHIÊN CứU VÀ ứNG DụNG CủA KHÁNG SINH DOXORUBICIN TRÊN THế GIớI 18 1.3.1 Lịch sử nghiên cứu Doxorubicin 18 1.3.2 Ứng dụng cuả Doxorubicin 19 SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Justified Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học 1.3.3.Thành tựu nghiên cứu 20 1.4.GEN DRRC 22 1.5 TổNG QUAN Về VECTOR TÁCH DÒNG VÀ VECTOR BIểU HIệN 23 HÌNH 1.6: CấU TRÚC PGEM – T VECTOR DÙNG TRONG TÁCH Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt DÒNG GEN 23 HÌNH 1.7 CấU TRÚC VETCOR BIểU HIệN PIBR25 24 1.6 MụC TIÊU VÀ NộI DUNG NGHIÊN CứU 25 Formatted: Justified 1.6.1 Mục tiêu nghiện cứu 25 1.6.2 Nội dung nghiên cứu 25 1.7.2 Nội dung nghiên cứu 26 HÌNH 1.8: QUY TRÌNH THựC HIệN 26 Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt PHẦN II:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 VậT LIệU, HĨA CHấT, MƠI TRƯờNG VÀ THIếT Bị 27 Formatted: Justified 2.1.1 Vật liệu 27 - THIếT Kế MồI 27 2.1.2 Môi trường nuôi cấy 27 2.1.3 Hóa chất 29 BảNG 1.1 HÓA CHấT Sử DụNG 29 2.1.4 Thiết bị 32 BảNG 1.2 THIếT Bị Sử DụNG 32 2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CứU 33 2.2.1 Phương pháp tách chiết DNA genome từ xạ khuẩn 33 2.2.2 Phương pháp PCR 34 2.2.3 Phương pháp điện di DNA gel agarose 34 2.2.4 Phương pháp tinh DNA từ gel agarose 35 2.2.5 Phương pháp tách DNA plasmid từ tế bào vi khuẩn 35 2.2.6 Phương pháp chuyển gen vào E coli sốc nhiệt 36 2.2.7 Phương pháp nối DNA 37 SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học 2.2.8 Phương pháp cắt DNA enzyme giới hạn 38 2.2.9 Phương pháp chuyển gen vào xạ khuẩn Streptomyces lividans tế bào trần 38 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 TÁCH DÒNG GEN 39 Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified 3.1.1 Tách DNA tổng số từ xạ khuẩn Streptomyces peucetius 39 HÌNH 3.1 ĐIệN DI DNA TổNG Số 40 3.1.2 Nhân gen drr C phản ứng PCR 40 HÌNH 3.2 ĐIệN DI CHạY PCR GEN DRRC 41 3.1.3 Tạo vector tái tổ hợp pGEM-T-drr C 41 HINH 3.3 QUI TRINH TạO VECTOR PGEM-T-DRRC 41 Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt HÌNH 3.4 ĐIệN DI KIểM TRA PLASMID Từ KHUẩN LạC 42 HÌNH 3.5 ĐIệN DI PLASMID PGEM-T-DRRC ĐƯợC CắT BằNG ENZYME ECORI VÀ HINDIII 43 3.2 THIếT Kế VECTOR BIểU HIệN PIBR25-DRRC TRÊN VI KHUẩN E.COLI JM 109 Formatted: Justified 43 HÌNH 3.6 CHạY ĐIệN DI VECTOR TÁI Tổ HợP PIBR25-DRRC 44 3.3.CHUYểN VECTOR PIBR25-DRR C VÀO Tế BÀO TRầN (STREPTOMYCES Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified LIVIDANS) 45 Để tìm điều kiện phù hợp cho thành công tạo tế bào tái tổ hợp thí nghiệm khảo sát yếu tố ảnh hưởng quan trọng đến hiệu xuất chuyển gen là: i) Thời gian ủ lysozim để loại bỏ lớp thành tế bào (petidoglycan) từ 20 đến 70 phút; ii) nồng độ PEG xúc tác cho trình chuyển gen từ 10 đến 60% iii) nồng độ kháng sinh phủ bề mặt đĩa chuyển gen từ 50 đến 100 µg.ml-1 45 3.3.1 Ảnh hưởng nồng độ kháng sinh Thiostrepton phủ tế bào 45 BảNG 2.1 ẢNH HƯởNG NồNG Độ KHÁNG SINH KHI PHủ Bề MặT ĐĨA NUÔI Tế BÀO (OVERLAY) 45 SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh Học 3.3.2 Ảnh hưởng thời gian phản ứng enzyme (lysozyme) 46 BảNG 2.2 KHảO SÁT NồNG Độ LYSOZYME THÍCH HợP CHO CHUYểN Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt GENE 46 3.3.3.Ảnh hưởng nồng độ PEG bổ sung chuyển gene 47 BảNG 2.3 ẢNH HƯởNG NồNG Độ PEG ĐếN HIệU SUấT CHUYểN Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt GENE 47 3.4 TÁCH VÀ THU NHậN HỗN HợP ENZYME THÔ DRR C 47 PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 49 4.1 KếT LUậN 49 NGHIÊN CứU ĐÃ THựC HIệN ĐƯợC KếT QUả NHƯ SAU: 49 4.2 Đề XUấT 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified Formatted: Justified, Space Before: pt, After: pt Formatted: Justified, Space Before: pt Formatted: Font: 14 pt Phần I:.TỔNG QUAN Formatted: Normal Formatted: Normal, Justified, Tab stops: Not at 6.1" 1.1 Tổng quan kháng sinh 1.1.1.Định nghĩa kháng sinh 1.1.2 Lịch sử kháng sinh 1.1.3 Phân loại kháng sinh 11 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh 12 1.1.5 Các nghiên cứu gần kháng sinh 15 1.2 Xạ Khuẩn 16 1.2.1 Xạ khuẩn Streptomyces peucetius 16 1.2.2 Xạ khuẩn Streptomyces lividans TK24 17 1.3 Tổng quan kháng sinh Doxorubicin 17 1.3.1 Giới thiệu chung kháng sinh doxorubicin 17 1.3.2.Cấu trúc kháng sinh Doxorubicin 18 1.3.3 Con đường sinh tổng hợp Doxorubicin SV: Nguyễn Trọng Duy 19 Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Hình 3.8 Điện di enzyme tổng số của: (1) chủng tái tổ hợp nhiệt độ 280C; (băng 2) enzyme tổng số biểu nhiệt độ 370C; (băng 4) nhiệt độ 320C; (Băng 3) enzyme tổng số chủng đối chứng ; M: thang protein chuẩn Formatted: List Paragraph, Left PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Formatted: (none) Formatted: Centered, Right: -0.2" Formatted: (none) 4.1 Kết luận Formatted: Font: pt Nghiên cứuSau trình nghiên cứu thực kết sau: Formatted: Normal, Left, Right: -0.2" Formatted: Font: 13 pt, (none) - Tách dòng thành cơng gen drrC - Formatted: Heading 2, Left, Right: -0.2" Tạo vector tái tổ hợphiết kế vector tái tổ hợp p pIBPR25-drr C vi khuẩn E coli JM109 để biểu vật chủ Streptomyces lividans Formatted: Font: 13 pt, (none) Formatted: Normal, Left, Right: -0.2" Formatted: Font: Italic TK24 - Formatted: Font: 13 pt Formatted Đã tìm điều kiện để chuyển gene vào tế bào trần vật chủ S.lividans, tạo Formatted: Font: Italic chủng tái tổ hợp S.lividans -pIBR25 drr C - Biểu nhóm gene drr C tế bào vật chủ S lividans thu nhận Formatted: Font: Italic hỗn hợp enzyme thô từ tế bào 4.2 Đề xuất - Formatted: Font: 13 pt, (none) Thực nghiên cứu để xác định hoạt tính hỗn hợp enzyme thô - Formatted: Font: 13 pt Formatted: Font: 13 pt, (none) Ứng dụng enzyme vào chuyển hoá 13C- Daunorucinon thành doxorubicin phản ứng enzyme ống nghiệm SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Heading 2, Left, Right: -0.2" 88 Formatted: Font: 13 pt Formatted: Expanded by 0.1 pt Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Formatted: Centered Formatted Formatted: Normal, Left Formatted 4.3 Ứng dụng khả phát triển đề tài Formatted: (none) Formatted: Centered 4.3.1 Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc Formatted: (none) phòng Formatted: Font: Bold, Not Italic, (none) Doxorubicin loại kháng sinh chống ung thư có giá thành đắt Formatted: Font: Bold, Not Italic Formatted: Font: Bold, Not Italic, (none) Việt Nam chưa sản xuất Việc thiết kế thành công vector biểu pIBR25-drr C nhằm nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh DXR Từ Formatted: Font: Not Italic Formatted: Font: Not Italic giúp giảm giá thành kháng sinh Doxorubicin Formatted: (none) 4.3.2 Khả ứng dụng kết nghiên cứu đề tài Formatted: Font: Not Italic Kết nghiên cứu đề tài ứng dụng lĩnh vực y tế Tách chiết thu nhận kháng sinh Doxorubicin sản xuất kháng sinh có tác dụng điều trị loại bệnh khối u cứng, ung thư hệ tạo máu, khối u hệ Lympho ung thư bàng quang, ung thư vú, ung thư cổ tử cung, ung thư máu Nhờ làm giảm số lượng người tử vong mắc phải bệnh ung thư nói Formatted: Font: Bold, Not Italic, (none) Formatted: Font: Bold, Not Italic Formatted: Font: Bold, Not Italic, (none) Formatted: Font: Bold, Not Italic Formatted: Font: Not Italic Formatted: Font: 13 pt, (none) Formatted: Font: Bold, Not Italic, (none) Formatted: (none) 4.3.3.Khả phát triển đề tài Formatted: Font: Not Italic, (none) Đề tài: “Nghiên cứu thiết kế vector pIBR25-drr C biểu nhóm gen drr C Formatted: Font: 13 pt, Not Italic, (none) chủng xạ khuẩn Streptomyces lividans” Có hội phát triển tốt Formatted: (none) thời gian tới việc làm tăng hàm lượng kháng sinh Doxorubicin vấn SV: Nguyễn Trọng Duy 89 Formatted: Font: Not Italic, (none) Formatted: (none) Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh Học đề trọng, kháng sinh Doxorubicin có tác dụng phòng điều Formatted: (none) trị số bệnh ung thư mà Việt Nam chưa sản xuất giá thành cao SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Font: Not Italic, (none) 90 Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học TÀI LIỆU THAM KHẢO Formatted: Font: 13 pt, (none) Formatted: Vietnamese (Vietnam) Cao Văn Thu, (2000), giảng kháng sinh vitamin, Bộ môn công nghệ Dược Formatted: Normal - trường Đại Học Dược Hà Nội Formatted: Font: Italic, Vietnamese (Vietnam) PGS.TS Kiều Hữu Ảnh, giáo trình vi sinh vật học tập Formatted: Vietnamese (Vietnam) Lê Xuân Phương (2000), vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuất xây dựng Hà Nội, tr 47-49 Cao Văn Thu, (2000), giảng kháng sinh vitamin, Bộ môn công nghệ Dược - trường Đại Học Dược Hà Nội3 PGS.TS Kiều Hữu Ảnh, giáo trình vi sinh vật học tập Formatted: Vietnamese (Vietnam) Kämpfer, Peter (2006) "The Family Streptomycetaceae, Part I: Taxonomy" In Dworkin, Martin; Falkow, Stanley; Rosenberg, Eugene; Schleifer, Karl-Heinz; Stackebrandt, Erko.The Prokaryotes Formatted: Font: 13 pt, Font color: Black Euzéby JP (2008) "Genus Streptomyces" List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature Formatted: Font color: Black Formatted: Font color: Black Formatted: Font: 13 pt, Font color: Black Formatted: Font: 13 pt, Font color: Black Brawner, Mary; Poste, George; Rosenberg, Martin; Westpheling, Janet (1991) "Streptomyces: A host for heterologous gene expression" Current Opinion in Biotechnology2 Madigan M, Martinko J, ed (2005) Brock Biology of Microorganisms (11th ed.) Formatted: Font color: Black Howard T Dulmage (March 1953) "The Production of Neomycin by Streptomyces fradiae in Synthetic Media" Applied Microbiology Formatted: Font: 13 pt, Font color: Black Aklanonic acid-producing mutants of Streptomyces galilaeus and Streptomyces peucetius var caesius Dr B Schlegel, C Stengel, G Schumann, H Prauser and K Eckardt, Journal of Basic Microbiology, 1987, Volume 27, Issue 2, pases 107–111 10 Physical map of the Streptomyces lividans 66 genome and comparison with that of the related strain Streptomyces coelicolor A3 11 Doxorubicin Overproduction in Streptomyces peucetius: Cloning and Characterization of the dnrU Ketoreductase and dnrV Genes and the doxACytochrome P-450 Hydroxylase Gene 12 The Streptomyces peucetius drrC gene encodes a UvrA-like protein involved in daunorubicin resistance and production SV: Nguyễn Trọng Duy 91 Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh Học 13 Zhang JF, Liu JJ, Lu MQ, Cai Cj, Yang Y, Li H, Xu C, Chen GH, Rapamycin in hibits cell growth by induction of apoptosis on hepatocellular carcinoma cells in vitro, Transpl Immunol, 2007/4, 17 (3): 162 - 170 14 Waksman, S A (1961) The Actinomycetes Classification, identification and descriptions of genera and species, vol 2, The Williams Wilkins Co, Baltimore, USA 15 Weiss RB (December 1992): "The anthacylines will we ever find a better Doxorubicin " Seminars in Oncology 19 (6): 670- 86 16 Tan C, Tasaka H, Yukp, Murphy ML, Karnofsky DA (March 1967): " Daunorubicin an antitumor antibiotic in the treatment of neoplastic disease clinical evaluation with special reference to childhood leukemia ", Cancer 20 (3): 333-53 17 Arcamone F, CassineHG, Fantini G et al (1996): " Adriamycin 14Hydroxydaunomycin, a new antitunmor antibiotic from Streptomyces Peucetius Varaesius " , Biotechnol Bioeng 11 (6): 1101-10 18 Lomovskaya N, Otten SL, Doikatayama Y et al (1999) : " Daunorubicin over production in Streptomyces Peucetius: Cloning and characterization of the dnrU keto recductase and dnrV gene and the Dox a Cytochrome P-450 hydroxylase gene", J Bacteriol 181 (1): 305-18 19 Di Marco A, Gaetani M, Scarpinato B (February 1969) : "Adriamycin (NSC123,127): a new antibiotic with antitumor activity" Cancer Chemother Rep 53 (1): 33–7 20 Walcazak RJ, Dickens ML, Priestley ND, Strohl WR (1999): "Purification, Properties, and Characterization of Recombinan Streptomyces sp Strain C5 DoxA, a Cytochrome P-450 Catalyzing Multiple Steps in Doxorubicin Biosynthesis 21 Fornari FA, Randolph JK, Yalowich JC, Ritke MK, Gewirtz DA (April 1994): "Interference by doxorubicin with ADN unwinding in MCF-7 breast tumor cells" Mol Pharmacol 45 (4): 649–56 22 Momparler RL, Karon M, Siegel SE, Avila F (August 1976) : "Effect of adriamycin on ADN, RNA, and protein synthesis in cell-free systems and intact cells" Cancer Res36 (8): 2891–5 23."National Academy of Sciences: NAS Award in Molecular Biology" National Academy of Science Retrieved 2009-01-07or Unwinding the ADN Topoisomerase Story: the Work of James C Wang 24 Yves (May 28, 2010) "ADN topoisomerases and their poisoning by anticancer and antibacterial drugs" Chemistry & Biology Retrieved May 28, 2010 SV: Nguyễn Trọng Duy 92 Khóa Luận Tốt Nghiệp Khoa Cơng Nghệ Sinh Học 25 Champoux JJ (2001) "ADN topoisomerases: structure, function, and mechanism" Annu Rev Biochem 70: 369–413 doi:10.1146/annurev.biochem.70.1.369 26 Caroline A.A , Katherline L.M ,(1998) Eukaryotic ADN Topoisomease II beta Review BioEssays 20:215-226 Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li, Pattern: Clear, Tab stops: Not at 0.69" + 0.79" Formatted: Font: Not Italic, Font color: Black Lê Xuân Phương (2000), vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuất xây dựng Hà Formatted: Font color: Black Nội, tr 47-49 Cao Văn Thu, (2000), giảng kháng sinh vitamin, Bộ môn công nghệ Dược - trường Đại Học Dược Hà Nội PGS.TS Kiều Hữu Ảnh, giáo trình vi sinh vật học tập Brawner, Mary; Poste, George; Rosenberg, Martin; Westpheling, Janet (1991) "Streptomyces: A host for heterologous gene expression" Current Opinion in Biotechnology2 Howard T Dulmage (March 1953) "The Production of Neomycin by Field Code Changed Streptomyces fradiae in Synthetic Media" Applied Microbiology Formatted: Font color: Black Fornari FA, Randolph JK, Yalowich JC, Ritke MK, Gewirtz DA (April 1994): "Interference by doxorubicin with ADN unwinding in MCF-7 breast tumor cells" Mol Pharmacol 45 (4): 649–56 Euzéby JP (2008) "Genus Streptomyces" List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature.I Aklanonic acid-producing mutants of Streptomyces Field Code Changed Formatted: Font color: Black galilaeus and Streptomyces peucetius var caesius Dr B Schlegel, C Stengel, G Schumann, H Prauser and K Eckardt, Journal of Basic Microbiology, 1987, Volume 27, Issue 2, pases 107–111 Physical map of the Streptomyces lividans 66 genome and comparison with that of the related strain Streptomyces coelicolor A3 Kämpfer, Peter (2006) "The Family Streptomycetaceae, Part I: Taxonomy" In Dworkin, Martin; Falkow, Stanley; Rosenberg, Eugene; Schleifer, Karl-Heinz; Stackebrandt, Erko.The Prokaryotes SV: Nguyễn Trọng Duy 93 Field Code Changed Formatted: Font color: Black Khóa Luận Tốt Nghiệp 10 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Doxorubicin Overproduction in Streptomyces peucetius: Cloning and Characterization of the dnrU Ketoreductase and dnrV Genes and the doxACytochrome P-450 Hydroxylase Gene 11 Caroline A.A Katherline L.M (1998) Eukaryotic ADN Topoisomease II beta Review BioEssays 20:215-226 12 The Streptomyces peucetius drrC gene encodes a UvrA-like protein involved in daunorubicin resistance and production 1327 Momparler RL, Karon M, Siegel SE, Avila F (August 1976): "Effect of Formatted: Font color: Black adriamycin on ADN, RNA, and protein synthesis in cell-free systems and intact cells" Cancer Res36 (8): 2891–5 1428 Madigan M, Martinko J, ed (2005) Brock Biology of Microorganisms (11th ed.) 15 Champoux JJ (2001) "ADN topoisomerases: structure, function, and mechanism" Annu Rev Biochem 70: 369–413 doi: 10.1146/annurev.biochem.70.1.369 SV: Nguyễn Trọng Duy Formatted: Font color: Black, Condensed by 0.3 pt Formatted: Font color: Black, Condensed by 0.3 pt Formatted: Font: Not Italic, Font color: Black, Condensed by 0.3 pt Formatted: Font color: Black 94 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/20/2017 11:14:00 AM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/18/2017 9:51:00 PM 5/20/2017 3:49:00 AM 5/20/2017 3:49:00 AM 5/20/2017 3:49:00 AM 5/20/2017 3:49:00 AM 5/20/2017 3:49:00 AM 5/20/2017 3:49:00 AM ... Nghiên c u tạo vetor biểu gen drrC từ chủng xạ khuẩn streptomyces Formatted: Font: 13 pt peucetius kế vector pIBR25-drrC biểu nhóm gen drrC chủng xạ Formatted: English (United States) khuẩn Streptomyces. .. số từ xạ khuẩn Streptomyces peucetius 45 3.1.2 Nhân gen drr C phản ứng PCR 45 3.1.3 Tạo vector tái tổ hợp pGEM-T -drr C 46 3.2 Thiết kế vector biểu pIBR25-drrC vi khuẩn E.coli JM 109 48 3.3.Chuyển... Formatted: Font: 16 pt chủng xạ khuẩn streptomyces peucetius hiết kế vector pIBR25- Formatted: Font: Not Italic drr C biểu gen drr C chủng xạ khuẩn Streptomyces Formatted: Font: Not Italic Formatted: Font: