Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)

Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)Tách dòng và giải trình tự Gene mã hóa Enzyme Nattokinase từ B. subtilis. (Khóa luận tốt nghiệp)

- - BACILLUS SUBTILIS : nh quy Chuyên ngành : Khoa : CNSH - CNTP : 2011-2015 Thái Nguyên - 2015 - - MÃ HỐ ENZYME BACILLUS SUBTILIS : Chính quy Chuyên ngành : : Khoa s : CNSH - CNTP : 2011 - 2015 : Thái Nguyên - 2015 i cô, , Th.S ,C B Thái Nguyên, B N Tôi ! Thái Nguyên, ngày 18 tháng Sinh viên ii Trang g nhân gene aprE .13 16 20 .23 HindIII EcoRI 26 BamHI SacI 26 iii Trang Hình 1: Hình 2: .8 Hình 3: 15 aprE Hình 4: B subtilis 18 Hình 5: .21 Hình 6: B subtilis 28 Hình 7: S aprE B subtilis 28 Hình 8: 29 Hình 9: .30 Hình 10: K 31 Hình 11: .32 Hình 12: 33 Hình 13: aprE 34 Hình 15: 37 Hình 16: aprE 38 Hình 17: 39 iv Amp Ampicillin Bp Base pair BLAST Basic Local Aligenment Search Tool DNA Deoxyribonucleic axit dNTP Deoxynucleotide Triphotphate E coli Escherichia coli B subtilis Bacillus subtilis Et al IPTG Isopropyl Thiogalactoside Kb Kilo base kilo base nito LB Lauria Broth SDS Sodium Dodecyl Sulfate PCR Polymerase Chain Reaction - Ph n ng chu i trùng h p TAE Tris- acetate- EDTA EDTA Etilenduamin tetraacetic acid TE Tris- EDTA X -gal 5-bromo-4-chloro-3indoly- -D-galactoside v : : 2.2 Nattokinase .4 .4 2.3 Nattokinase 2.3.2 So 2.4 T 2.4.2 , h 2.4.4 2.5 Nattokinase 2.5.1 2.5.2 2.6 N 10 2.6.1 .10 2.6.2 .11 : .12 .12 B subtilis 12 vi .12 .13 16 17 .17 18 aprE 3.4.1 B subtilis 18 19 19 .19 20 .21 22 3.4.8 pTUAF 23 E.coli 24 .24 3.4.11 26 26 aprE i Ngân hàng Gen bank 27 : .28 B subtilis .28 aprE .28 agarose 29 30 31 31 32 32 .34 aprE 4.6.2 34 aprE 38 vii : .40 40 .40 THAM O 41 41 .41 1.1 , ( có Nguyên khác, ó có - (Yanagisawa, Chatake et al 2010) men bán B subtilis (Sumi, Hamada et al 1987) cao B subtilis (Nguyen Sle, Quyen et al 2014) , mã hóa B subtilis, 31 có kháng sinh amp 6 Hình 10 1,2,3,4,5,6 , 4,5,6 aprE 32 , tơi t tách dòng enzyme aprE dòng plasmid d : dòng 4, dòng dòng Plasmid Xanh pha lỗng L D6 L D4 D5 825 bp Hình 11: PCR k L : Ladder kb xanh, 6, 4, aprE D4 D aprE m dòng aprE , SacI hai BamHI plasmid aprE aprE BamHI Sac aprE 89 bp 33 xen hai enzyme HindIII EcoRI tra vector tách dòng Hin HindIII aprE HindIII EcoRI 705 pTUAF-aprE HindIII 05 bp t 44 ladder kb di, bp 705 bp 825 bp 705 bp Hình 12 :C BamHI SacI EcoRI HindIII L : Ladder kb 34 c ta ul Hình aprE 35 trình bày hai p f R -600 bp, gene aprE tr aprE BamHI SacI Sau có e bank) 36 Hình aprE aprE AB 734700 Gen bank 37 99 % (Indentities aprE = 800/807) aprE 427 Sbjct a) b) c) e) d) f) g) Hình 15 khác aprE aprE 38 aprE 4.6.2 h mã aprE peptide peptide : 39 Hình 17: Sbjct: en bank 99 % (Indentities = 266/268) - 30 ba 15 - 55 ( ) ba 15 sai khác) trình amino aprE sai khác Sai khác , 40 - tách dòng thành cơng gene aprE 825 B.subtilis aprE thơng qua vector tách dòng pTUAF, E coli aprE aprE Bacillus subtilis aprE M2AB 734700 công 99% trình tách dòng gene aprE B.subtilis - thành công aprE t E coli nattokinase nattokinase - - Phân tích chi ti 41 THAM O , 34(3): 99104,2012 Elahi, M M., et al (2015) "Consequence of patient substitution of nattokinase for warfarin after aortic valve replacement with a mechanical prosthesis." Proceedings (Baylor University Medical Center) 28(1): 81-82 Kim, J Y., et al (2008) "Effects of nattokinase on blood pressure: a randomized, controlled trial." Hypertension Research 31(8): 1583-1588 Kim, W., et al (1996) "Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced from Bacillus sp strain CK 11-4 screened from Chungkook-Jang." Applied and Environmental Microbiology 62(7): 24822488 Kim, W., et al (1996) "Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced from Bacillus sp strain CK 11-4 screened from Chungkook-Jang." Appl Environ Microbiol 62(7): 2482-2488 Mansell, P and J P Reckless (1991) "Garlic." BMJ : British Medical Journal 303(6799): 379-380 Nakamura, T., et al (1992) "Nucleotide sequence of the subtilisin NAT gene, aprN, of Bacillus subtilis (natto)." Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 56(11): 1869-1871 Nguyen Sle, T., et al (2014) "Highly effective renaturation of a streptokinase from Streptococcus pyogenes DT7 as inclusion bodies overexpressed in Escherichia coli." Biomed Res Int 2014: 324705 42 Okamoto, A., et al (1995) "Anti-hypertensive substances in fermented soybean, natto." Plant Foods for Human Nutrition 47(1): 39-47 10 Sumi, H (1999) "Accumulation of Vitamin K (Menaquinone-7) in Plasma after Ingestion of Natto and Natto Bacilli (B subtilis natto)." Food Science and Technology Research 5(1): 48-50 11 Sumi, H., et al (1990) "Enhancement of the fibrinolytic activity in plasma by oral administration of nattokinase." Acta Haematol 84(3): 139-143 12 Sumi, H., et al (1987) "A novel fibrinolytic enzyme (nattokinase) in the vegetable cheese Natto; a typical and popular soybean food in the Japanese diet." Experientia 43(10): 1110-1111 13 Suzuki, Y., et al (2003) "Dietary supplementation with fermented soybeans suppresses intimal thickening." Nutrition 19(3): 261-264 14 Tai, M W and B V Sweet (2006) "Nattokinase for prevention of thrombosis." Am J Health Syst Pharm 63(12): 1121-1123 15 Toki, N., et al (1985) "Transport of urokinase across the intestinal tract of normal human subjects with stimulation of synthesis and/or release of urokinase-type proteins." Journal of Clinical Investigation 75(4): 1212-1222 16 Weng, M., et al (2009) "Enhancement of oxidative stability of the subtilisin nattokinase by site-directed mutagenesis expressed in Escherichia coli." Biochim Biophys Acta 1794(11): 1566-1572 17 Yanagisawa, Y., et al (2010) "Purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction experiment of nattokinase from Bacillus subtilis natto." Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 66(Pt 12): 1670-1673 anger aprE ... aprE hàng gene (Gene bank) - ý trình phân tích - tách dòng gene - Nattokinase sau Nattokinase (1600 1868) , chôn ng (Elahi, Choi et al 2015) , , , natto , , sung B subtilis , cho vào V nyl... 24 37ºC /g Nattokinase 2.2 2.2.1 (Kim, Gum et al 2008) Tên enzyme Nattokinase Cardiokinase aprE Gene mã hoá B subtilis 86029 [NCBI] 275 aa 28 kDalton 6,79 2.2.2 Enzyme Nattokinase Nattokinase... 12-24 Lên men: Nattokinase 2.5.2 Nattokinase Nattokinase vi s Nattokinase E coli , E coli 10 E coli E coli DNA ch galactosidase , E coli Nattokinase aprE Nattokinase E coli 2.6 Tình Nattokinase