Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả chuyển gen tạo rễ tơ ở sâm ngọc linh ( Panax vietnamensis) thông qua vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ∗∗∗ VŨ THỊ HẠT NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN HIỆU QUẢ CHUYỂN GEN TẠO RỄ TƠ Ở SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium rhizogenes KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lí học thực vật Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS.PHẠM BÍCH NGỌC Th.S LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI, 2012 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Phạm Bích Ngọc - Viện Công nghệ sinh học ThS La Việt Hồng - Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Chu Hoàng Hà Trưởng phòng Cơng nghệ tế bào thực vật, Viện Cơng nghệ sinh học, TS Lê Văn Sơn, tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới CN Nguyễn Đình Trọng tồn thể cán Phòng Cơng nghệ tế bào thực vật, Viện Công nghệ sinh học tạo điều kiện làm việc, giúp đỡ truyền đạt nhiều kinh nghiệm làm việc quý báu suốt trình em hồn thành khóa luận Và hết, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người động viên ln bên em suốt trình thực đề tài Hà nội, ngày 10 tháng năm 2012 Sinh viên Vũ Thị Hạt LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận: “Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu chuyển gen tạo rễ tơ sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis) thông qua vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes” kết nghiên cứu riêng hướng dẫn TS Phạm Bích Ngọc- Viện Cơng nghệ sinh học ThS La Việt Hồng – Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Hà nội, ngày 10 tháng năm 2012 Sinh viên Vũ Thị Hạt MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG - BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu 3 Yêu cầu đề tài Ý nghĩa đề tài NỘI DUNG CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm hình thái sâm Ngọc Linh 1.2 Tình hình nghiên cứu sinh khối tế bào thực vật 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 1.3 Cơ sở khoa học phương pháp chuyển gen vào tế bào thực vật 1.3.1 Các phương pháp chuyển gen trực tiếp 1.3.2 Các phương pháp chuyển gen gián tiếp 11 1.3.2.1 Giới thiệu vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes 12 1.3.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu biến nạp gen thông qua Agrobacterium rhizogenes 14 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị 16 2.1.1 vật liệu 16 k2.1.2 Hóa 16 chất 16 2.1.3 Máy móc thiết bị .16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 16 2.2.1 Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 17 2.2.2 Phương pháp chuyển gen thông qua Agrobacteriumrhizogenes 18 2.2.3 Phương pháp nhuộm X – gluc .19 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng kháng sinh diệt khuẩn lên sinh trưởng phát 19 triển mô sâm Ngọc Linh tự nhiên 3.2 Ảnh hưởng điều kiện biến nạp lên sinh trưởng phát triển 21 mô sâm Ngọc Linh 22 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ khuẩn đến hiệu biến nạp .23 3.2.2 Ảnh hưởng thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu biến nạp 3.3 Kiểm tra hiệu chuyển gen thông qua Agrobacteriumrhizogenes 25 vào mô sâm Ngọc Linh bàng phương pháp nhuộm X – gluc 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 Kết luận .27 Kiến nghị 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 Tiếng Việt 28 Tiếng Anh 29 Trang web tham khảo 30 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG - BIỂU ĐỒ Danh mục bảng Bảng 1.1 Các nghiên cứu tạo hoạt chất từ sinh khối rễ tơ Bảng 2.1 Thành phần dung dịch nhuộm X-gluc Bảng 3.1 Ảnh hưởng cacbe cefo tới sinh trưởng mô sâm Ngọc Linh Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ khuẩn đến sống sót mơ sâm Ngọc Linh Bảng 3.3 Ảnh hưởng thời gian đồng nuôi cấy đến khả sống sót mơ sâm Ngọc Linh Danh mục biểu đồ Biểu đồ 3.1 Số mơ Sâm Ngọc Linh sống sót sau tuần môi trường chứa cefotaxim với nồng độ khác Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng nồng độ khuẩn đến số mơ sâm Ngọc Linh sống sót sau ngày Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng thời gian đồng ni cấy đến khả sống sót mơ sâm Ngọc Linh DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh sâm Ngọc Linh Hình 1.2 Sâm Ngọc Linh ni cấy in vitro Hình 1.3 Ni cấy rễ tơ G glabra Hình 1.4 Cấu trúc plasmid Ri Hình 3.1 Mô sâm Ngọc Linh úa vàng sau tuần để tủ tối Hình 3.2 Cơ chế nhuộm mơ tế bào X-gluc Hình 3.3 Kết nhuộm gen gus X-gluc DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Gus : β-glucuronidase AS : Acetosyringone SH : Schenk & Hildebrandt Cefo : Cefotaxim Vanco : Vancomycin Cacbe : Carbecillin X – gluc : - bromo - - chloro - - indolyl - β - D - glucuronide MỞ ĐẦU Sâm Đặt vấn đề Ngọc Linh (Panax vietnamensis) loại dược liệu quý hiếm, phân bố vùng núi cao sơn hệ Ngọc Linh thuộc số huyện Kon Tum Quảng Nam Vào năm 1973, Sâm Ngọc Linh DS Đào Kim Long nhà khoa học phát độ cao 1800 m vùng núi Ngọc Linh thuộc Kon Tum Tới năm 1988, TS Hà Thị Dụng GS Grushvisky xác định loài sâm giới đặt tên khoa học Panax vietnamensis Ha et Grushv, mà người thường gọi sâm Việt Nam [10], [12] Theo nghiên cứu khoa học, sâm Ngọc Linh có tác dụng chống trầm cảm, kích thích hệ miễm dịch, chống lão hóa, phòng chống ung thư, bảo vệ tế bào gan, tăng thị lực, sức đề kháng, nâng cao huyết áp người huyết áp thấp Hợp chất hóa học saponin chứa sâm Ngọc Linh thần dược với sức khỏe người khiến sâm Ngọc Linh bán thị trường với giá cao, vào năm 2005 năm 2008 1kg tươi sâm Ngọc Linh – Quảng Nam có giá 12-15 triệu đồng, lúc khan lên tới 25-30 triệu đồng; 1kg tươi sâm Triều 10 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hƣởng kháng sinh diệt khuẩn lên sinh trƣởng phát triển mơ sâm Ngọc Linh tự nhiên Chất kháng sinh gây độc cho mẫu thực vật trình chuyển gen thực vật, để nghiên cứu ảnh hưởng chất kháng sinh đến hiệu chuyển gen vào sâm Ngọc Linh mà hiệu chuyển gen đạt mà kháng sinh có tác dụng vi khuẩn, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng số loại chất kháng sinh lên sinh trưởng phát triển mô sâm Ngọc Linh Thí nghiệm thực sau: - Chọn mẫu sâm Ngọc Linh non nuôi cấy in vitro, cắt nhỏ mẫu cuống với kích thước khoảng 0,5-0,7 cm - Đặt mơ cuống sâm Ngọc Linh vào loại môi trường khác nhau: o MT1: Mơi trường SH có bổ sung vanco 100 mg/ml o MT2: Mơi trường SH có bổ sung carbe 200 mg/ml vanco 100 mg/ml o MT3: Mơi trường SH có bổ sung cefo 250 mg/ml vanco 100 mg/ml o MT4: Mơi trường SH có bổ sung cefo 300 mg/ml vanco 100 mg/ml o MT5: Mơi trường SH có bổ sung cefo 500 mg/ml vanco 100 mg/ml Theo dõi phát triển mẫu cuống sâm Ngọc Linh môi trường khác nhau, kết thể bảng 3.1 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng carbe cefo tới sinh trƣởng mô sâm Ngọc Linh Nồng độ cefo + vanco 100 (mg/ml) 250 300 500 ĐC (carbe 200+vanco 100) a a Tổng số mô 30 26 10 28 Số mơ trung bình sống sót 10,0 8,67 3,33 0,67 9,33 tổng số mô sâm Ngọc Linh sống sót mơi trường SH bổ sung nồng độ cefo khác nhau, đối chứng môi trường SH bổ sung (carbe 200+vanco 100), số lần nhắc lại cho công thức 3, kết đếm sau tuần Biểu đồ 3.1 Số mô sâm Ngọc Linh sống sót sau tuần mơi trƣờng chứa cefotaxim nồng độ khác Kết phân tích bảng 3.1 biểu đồ 3.1 cho thấy, chất kháng sinh cefotaxim có ảnh hưởng tới khả sống mơ sâm Ngọc Linh tự nhiên, mô nuôi cấy môi trường chứa vanco (môi trường không chứa cefotaxim) số mơ sống sót cao (trung bình 10 mơ/đĩa) hay 100% số mơ sống sót Giá trị cao so với đối chứng môi trường SH bổ sung carbe 200mg/ml (trung bình 9,3 mô/đĩa) Điều cho thấy, mô sâm Ngọc Linh nhạy cảm với nồng độ carbenicillin 200mg/ml Kết phù hợp với nghiên cứu tác giả trước đối tượng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens [7] Khi nồng độ cefotaxim môi trường nuôi cấy tăng lên, đặc biệt nồng độ cefotaxim 300mg/ml 500mg/ml ức chế sinh trưởng mô sâm Ngọc Linh 3.2 Ảnh hƣởng điều kiện biến nạp lên sinh trƣởng phát triển mô sâm Ngọc Linh Chúng tiến hành chuyển gen thông qua Agrobacterium rhizogenes theo phương pháp nêu, với dịch vi khuẩn có OD600nm = 0,543, thời gian đồng ni cấy ngày, môi trường chọn lọc môi trường SH có bổ sung carbe 200 mg/ml vanco 100 mg/ml, kết hình 3.1 Hình 3.1 Mô sâm Ngọc Linh úa vàng sau tuần để tủ tối Tuy nhiên, kết sau tuần để tủ tối để cảm ứng tạo rễ tơ chúng tơi thấy mẫu mơ sâm Ngọc Linh ni cấy úa vàng Điều chứng tỏ việc chuyển gen thông qua vi khuẩn A.rhizogenes ATCC 15834 để tạo rễ tơ sâm Ngọc Linh chưa thành cơng q trình chuyển gen khơng phụ thuộc vào nồng độ chất kháng sinh mà phụ thuộc vào điều kiện biến nạp như: nồng độ khuẩn, thời gian biến nạp, thời gian đồng nuôi cấy 3.2.1 Ảnh hƣởng nồng độ khuẩn đến hiệu biến nạp Trong thí nghiệm này, chúng tơi tìm hiểu ảnh hưởng nồng độ khuẩn tới hiệu chuyển gen vào mô sâm Ngọc Linh thông qua A.rhizogenes ATCC 15834 Sử dụng khuẩn A.rhizogenes ATCC 15834 với OD600nm khác tiến hành chuyển gen vào mô sâm Ngọc Linh theo phương pháp mô tả Sau ngày thứ quan sát thu bảng 3.2 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ khuẩn A.rhizogenes đến sống sót mơ sâm Ngọc Linh OD600nm 0,2 0,4 0,6 0,8 a Tổng số mô sâm a Ngọc Linh 18 18 18 18 Số mơ sống sót b 14 16 15 13 Tỷ lệ số mơ sống sót so với tổng số mô (%) 77,78 88,89 83,33 72,21 Giá trị thể tổng số mô sâm Ngọc Linh nuôi cấy môi trường SH bổ sung carbe 200 mg/ml vanco 100 mg/ml Mỗi công thức nhắc lại lần (trên đĩa petri) b Số mơ sống sót tương ứng với cơng thức thí nghiệm Biểu đồ 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ khuẩn đến số mơ sâm Ngọc Linh sống sót sau ngày Kết phân tích bảng 3.2 biểu đồ 3.2 cho thấy, nồng độ khuẩn ảnh hưởng tới khả sống sót mơ sâm Ngọc Linh, nồng độ khác ảnh hưởng không giống tới khả này, cụ thể OD600nm đạt giá trị thấp (OD600nm = 0,2) tỷ lệ mơ sống sót 77,78%, OD600nm đạt giá trị 0,4 0,6 cho tỷ lệ mơ sống sót cao nhất, 88,89% 83,33% Tuy nhiên mật độ khuẩn cao (OD600nm = 0,8) lại gây bất lợi cho sống mô sâm Ngọc Linh Như vậy, mật độ khuẩn A.rhizogenes thích hợp cho biến nạp OD600nm = 0,4 0,6 3.2.2 Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu biến nạp Quy trình đồng ni cấy tiến hành theo quy trình nêu chương Sau biến nạp, thời gian đồng nuôi cấy thay đổi đĩa khác từ 1, ngày Sau tiến hành rửa khuẩn xác định hiệu chuyển gen sau tuần Hiệu chuyển gen xác định số mô sâm Ngọc Linh sống sót mơi trường chọn lọc Bảng 3.3 Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy đến khả sống sót mơ sâm Ngọc Linh Thời gian đồng ni cấy (ngày) a a Tổng số mô 14 14 Số mơ sống b sót 12 Tỷ lệ mơ sống sót (%) 14,28 85,71 Giá trị thể tổng số mô sâm Ngọc Linh nuôi cấy môi trường SH bổ sung carbe 200 mg/ml + vanco 100 mg/ml Mỗi công thức nhắc lại lần (trên đĩa petri) b Số mơ sống sót tương ứng với cơng thức thí nghiệm Biểu đồ 3.3 Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy đến khả sống sót mơ sâm Ngọc Linh Đồng nuôi cấy mô sâm Ngọc Linh dung dịch khuẩn A.rhizogenes ATCC 15834 (có OD600nm = 0,4) 1, ngày, sau tuần quan sát kết bảng 3.3 biểu đồ 3.3 Phân tích cho thấy, thời gian đồng ni cấy mẫu sâm Ngọc Linh với khuẩn A.rhizogenes ATCC 15834 có ảnh hưởng đến kết biến nạp vi khuẩn này, cụ thể thời gian đồng nuôi cấy ngày số mơ sống sót thấp (14,28%), thời gian đồng nuôi cấy tăng lên ngày tỷ lệ mơ sống sót cao nhiều đạt 85,71% Kết giải thích thời gian đồng ni cấy tăng lên tăng độ bám dính vi khuẩn A.rhizogenes ATCC 15834 với vết thương mẫu thực vật Như vậy, thời gian đồng ni cấy thích hợp để tăng hiệu chuyển gen nhờ A.rhizogenes ngày Để kiểm tra hiệu chuyển gen nhờ A.rhizogenes ATCC 15834, chúng tơi tiến hành nhuộm mẫu sâm Ngọc Linh sống sót phương pháp nhuộm X-gluc 3.3 Kiểm tra hiệu chuyển gen thông qua Agrobacterium rhizogenes vào mô sâm Ngọc linh phƣơng pháp nhuộm X-gluc Gen thị gus thường sử dụng để đánh giá hiệu quy trình chuyển gen trước tiến hành chuyển gen đích mong muốn Đây gen mã hóa enzyme β-glucuronidase, hydrolase xúc tác cho q trình phân giải chất - bromo - - chloro - - indolyl - β - D - glucuronic acid (X – gluc) không màu chuyển thành màu xanh chàm đặc trưng dễ nhận biết bền vững [1] Hình 3.2 Cơ chế nhuộm mơ tế bào X – gluc Trong tự nhiên β-glucuronidase không tồn thực vật, sản phẩm phản ứng độc không độc với tế bào vật chủ, phương pháp phân tích sản phẩm đơn giản, thuận tiện, rẻ tiền, nhạy đặc thù, gen gus coi gen thị hữu hiệu kỹ thuật chuyển gen thực vật Nhưng nhược điểm phương pháp tái sử dụng mẫu sau thực thí nghiệm Trong nghiên cứu này, sử dụng vector pTN289 mang gen gus để chuyển gen thị gus vào mô sâm Ngọc Linh nhằm đánh giá hiệu quy trình chuyển gen vào mơ sâm Ngọc Linh, kết hợp với điều kiện môi trường nuôi cấy sâm Ngọc Linh, nồng độ chất kháng sinh, nồng độ dịch khuẩn OD600nm = 0,4, thời gian đồng nuôi cấy ngày Kết mẫu sâm Ngọc Linh sống sót sử dụng để phân tích hiệu chuyển gen phương pháp nhuộm X-gluc Tiến hành nhuộm mẫu sâm Ngọc Linh theo phương pháp nhuộm Xgluc nêu, sau tuần mẫu nhuộm quan sát kính hiển vi soi nổi, mơ sâm Ngọc Linh chuyển gen có nhuộm màu xanh đặc trưng gus Hình 3.3 Kết nhuộm gen gus X-gluc Như vậy, với quy trình chuyển gen thu mô sâm Ngọc Linh chuyển gen KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: - Phương pháp nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis) - Tối ưu điều kiện (dịch khuẩn có OD600nm = 0,4, thời gian đồng ni cấy ngày, mơi trường chọn lọc có bổ sung carbe 200 mg/ml vanco 100 mg/ml) để tăng hiệu chuyển gen nhờ vi khuẩn Agrobactrium rhizogenes ATCC15834 để tạo rễ tơ sâm Ngọc Linh Kiến nghị: - Tiếp tục có nghiên cứu hiệu chuyển gen dựa quy trình tìm thí nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2010), Tài liệu lớp đào tạo ngắn hạn công nghệ sinh học “cây ngô biến đổi gen”, Hà Nội Trần Quốc Dung, Nguyễn Hoàng Lộc, Trần Thị Lệ (2006), Giáo trình cơng nghệ chuyển gen động vật thực vật, Nxb Huế Nguyễn Huy Hoàng (2010), “Thiết kế vector mang gen HA1 mã hóa protein bề mặt vius H5N1 bước đầu chuyển gen HA1 tạo dòng rễ tơ chuyên gen thuốc lá” Luận văn thạc sĩ sinh học, Viện Công nghệ sinh học Trần Công Luận (2010), Công nghệ sinh học thực vật với tài nguyên thuốc Kỷ yếu hội thảo quốc tế tháng 4/2010 Nguyễn Văn Minh cs (2010), Báo cáo tổng kết đề tài: “Hợp tác nghiên cứu xây dựng quy trình tạo khối tế bào sâm Ngọc Linh làm nguyên liệu sản xuất chế phẩm phục vụ sức khỏe cộng đồng”, Học Viện Quân Y Nguyễn Đức Thành (2003), Chuyển gen thực vật, Nxb Khoa học kĩ thuật, Hà Nội Tiếng Anh Lin J.J, Assad-Garcia N, Kuo J (1995) “Plant hormone effect of antibiotics on the transformation effciency of plant tissues by Agrobacterium tumefaciens cells”, Plant science, 109, pp: 171-177 Chilton, M D., D A Tepfer, et al (1982), "Agrobacterium rhizogenes inserts T-DNA into the genomes of the host plant root cells.", Nature 295: 432-434 N M Duc, R Kasai, N T Nham, K Yamasaki and O Tanaka, "Saponin composition of Vietnamese ginseng and its significance from pharmacognostical points of view", Proceedings of "The First Indochina Conference on Pharmaceutical Sciences: Pharmacy in Harmony", May 20-23, 1997, Bangkok, Thailand 10 N.T Thanh et al (2007), “Effecting of medium composition on biomass and ginsenoside production in cell suspension culture of Panax vietnamensis Ha et Grushv", VNU Journal of Science, Natural Sciences and Technology, 269-274 11 Pham NB (2009), “Production and secretion of recombinant sweet-tasting thaumatin from suspension cells and hairy roots of Nicotiana tabacum”, University of Heidelberg PhD Thesis Trang web tham khảo 12 http://vi.wikipedia.org/wiki/Sâm_Ngọc_Linh 13 http://www.vncreatures.net 14 http://www.ejbiotechnology.info/content/vol11/issue2/full/6 15 http://vietbao.vn/Khoa-hoc/Quang-Nam-sam-Ngoc-Linh PHỤ LỤC Thành phần loại môi trƣờng Môi Thành phần trƣờng 0,4 g/l Yeast extract + 0,5 g/l K2HPO4.3H2O + 10 g/l YMP đặc mannitol + g/l MgSO4.7H2O + 0,1 g/l NaCl + 15 g/l bacto agar, pH = YMP 0,4 g/l Yeast lỏng 10 g/l mannitol + g/l MgSO4.7H2O + 0,1 g/l NaCl, pH = extract + 0,5 g/l K2HPO4.3H2O + 3,25 g/l Schenk & Hildebrandt + vitamin (5 mg/l nicotinic + SH lỏng 0,5 mg/l pyridoxin HCl + mg/l thiamine HCl + g/l myo –Inositol) + 30 g/l đường, pH = 5,8 3,25 g/l Schenk & Hildebrandt + vitamin (5 mg/l nicotinic + SH đặc 0,5 mg/l pyridoxin HCl + mg/l thiamine HCl + g/l myo –Inositol) + 30 g/l đường + 1,5 g/l gellan, pH = 5,8 ½ SH Tương tự SH nồng độ chất giảm nửa Phụ lục ảnh Hình Mơ sâm Ngọc Linh xanh môi trường MT1 sau tuần Hình Mơ sâm Ngọc Linh xanh mơi trường MT2 sau tuần Hình Mơ sâm Ngọc Linh xanh môi trường MT3 sau tuần Hình Mơ sâm Ngọc Linh úa vàng mơi trường MT2 sau tuần Hình Mơ sâm Ngọc Linh úa vàng môi trường MT3 sau tuần Hình Mơ sâm Ngọc Linh mơi trường có OD dịch khuẩn =0,2 Hình Mơ sâm Ngọc Linh mơi trường có OD dịch khuẩn = 0,4 Hình Mơ sâm Ngọc Linh mơi trường có OD dịch khuẩn = 0,6 Hình Mơ sâm Ngọc Linh mơi trường có OD dịch khuẩn = 0,8 ... tài: Nghiên cứu số yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu chuyển gen tạo rễ tơ sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis) thông qua vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes Mục tiêu nghiên cứu Xác định ảnh hưởng số yếu tố. .. tài liệu nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố (chất kháng sinh, nồng độ vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes, thời gian đồng nuôi cấy ) tới khả tạo rễ tơ sâm Ngọc Linh thông qua vi khuẩn A rhizogenes NỘI... chuyển gen tạo rễ tơ sâm Ngọc Linh thông qua chủng vi khuẩn A rhizogenes ATCC15834 Yêu cầu đề tài - Sử dụng chủng vi khuẩn A rhizogenes ATCC15834 biến nạp vào sâm Ngọc Linh - Xác định ảnh hưởng