báo cáo thực tập ngành y tế môi trường THAM QUAN QUY TRÌNH sản XUẤT THUỐC tại NHÀ máy số 2 – CÔNG TY CP MEDIPLANTEX KHẢO sát CÔNG NGHỆ sản XUẤT VACCINE tại xí NGHIỆP THUỐC THÚ y TW

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THU HOẠCH (Ngành Y tế- Môi trường) Đề tài: THAM QUAN QUY TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC TẠI NHÀ MÁY SỐ – CÔNG TY CP MEDIPLANTEX & KHẢO SÁT CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TW Giáo viên hướng dẫn: T.s Nguyễn Thị Tâm Sinh viên : Trần Thị Giang Lớp: CĐ.08-02 Hà Nội 4/2011 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Lời cảm ơn! Trong trình học tập tìm hiểu thực tế , em vơ biết ơn giảng dạy hướng dẫn nhiệt tình thầy cô giúp chúng em gắn kết hình dung phần lý thuyết thực tế Xin gửi tới thầy giáo, cô giáo khoa Công nghệ sinh học – Viện Đại học Mở Hà Nội, lời chúc sức khỏe công tác tốt! Sinh viên : Trần Thị Giang -2- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH I MỞ ĐẦU Ngày Công nghệ sinh học coi ngành công nghệ tiên phong nhân loại tiến vào kỷ 21 Trong , cơng nghệ vi sinh vật học sản xuất kháng sinh, vacxin, vitamin hoạt chất ứng dụng y học, thực phẩm , nơng nghiệp…đang có bước tiến vượt bậc Ở nước phát triển giới việc ứng dụng tiến di truyền học phân lập, sàng lọc, cải tạo giống cho phép tạo chủng vi sinh vật có khả sinh tổng hợp hoạt chất sinh học với hiệu suất ngày cao Trình độ tự động hóa, tin học hóa cao cho phép xây dựng hệ thống sản xuất ổn định với hiệu suất tối ưu Cùng với giải pháp công nghệ giúp tiết kiệm mặt nhân công, bảo vệ môi trường sinh thái Ở Việt Nam, chưa thể đưa công nghệ vi sinh vật ứng dụng lên men sản xuất kháng sinh phần khiêm tốn vốn đầu tư ngành có nhiều thách thức mang tính cạnh tranh khốc liệt quy mơ tồn cầu, có nhiều cơng ty ( bao gồm Nhà nước Tư nhân) sản xuất, hoàn thiện nhiều lọai thuốc, dược phẩm, lên men sản xuất vacxin…v.v có uy tín nhiều năm Nhà máy Dược phẩm số thuộc công ty CP Mediplantex , Xí nghiệp thuốc Thú y TW hai số thương hiệu nhiều năm nước nhiều nơi giới công nhận -3- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH II PHẦN Đại cương kháng sinh , vacxin & công nghệ lên men sản xuất kháng sinh ,công nghệ sản xuất vacxin II.1 Đại cương kháng sinh công nghệ lên men sản xuất kháng sinh II.1.1 Định nghĩa kháng sinh: Dựa theo định nghĩa kinh điển Walksmann (1942), ngày nay, nhà khoa học cho khái niệm kháng sinh nói chặt chẽ : “ kháng sinh sản phẩm trao đổi chất thứ cấp vi sinh vật, có nguồn gốc thực vật, tổng hợp theo đường hóa học ,có tác dụng ức chế tiêu diệt chọn lọc vi sinh vật khác II.1.2 Đơn vị kháng sinh: Để biểu thị độ lớn giá trị hoạt tính kháng sinh ml dung dịch (đv/ml) hay 1mg chế phẩm (đv/mg) thường dùng đơn vị kháng sinh Đó lượng kháng sinh tối thiểu hòa tan thể tích mơi trường xác định có tác dụng ức chế hay tiêu diệt vi sinh vật kiểm định Đơn vị quốc tế IU VD: 1IU penicillin G = 0.6µg (1mg =1667IU), 1IU Streptomycin = 1µg ( 1mg = 1000IU), 1mg neomycin chứa 300 IU (1 IU = 3,3µg)… II.1.3 Phân loại kháng sinh: Danh sách kháng sinh phát ngày nhiều, việc phân loại kháng sinh cần thiết giúp nhà nghiên cứu tốn thời gian nghiên cứu kháng sinh cấu trúc hóa học , chế tác động, độc tính Có thể phân loại kháng sinh theo cách: -4- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Phân loại theo nguồn gốc kháng sinh: xạ khuẩn, vi khuẩn, vi nấm (nấm mốc, nấm men) tạo - Phân loại theo chế tác dụng : kháng sinh tác dụng lên thành tế bào , kháng sinh tác động lên trình tổng hợp protein, tổng hợp DNA, mRNA… - Phân loại theo cấu trúc hóa học: cách phân loại khoa học Theo , chất kháng sinh chia làm nhiều nhóm +) Các chất kháng sinh chứa hydratcacbon ( đường tinh khiết, aminoglycosid, N-glycosid, glycopeptid ): streptomycin, eveaninomicin, vancomycin,moenomicin… +) Các lactomacrocylic ( chất kháng sinh macrolid polien , macrotetrolit, azamycin) : rifamycin, tetranactinerythromycin, nystatin +) Các kháng sinh quinon dẫn xuất: tetracylin, adriamycin, actinorodin… +) Các kháng sinh peptid acid amin : cycloloserin, penicillin, bacitracin, actinomycin, bleomycin +) Các kháng sinh dị vòng chứa nitơ: kháng sinh nucleoside (polysome)… +) Các kháng sinh mạch vòng no : chất ankan, kháng ainh steroid : cycloheximic, axit fuzidic +) Các kháng sinh chứa nhân thơm : chloramphenicol, gliseofulvin, novobiocin… +) Các kháng sinh mạch thẳng: phosphomycin II.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh: Các kháng sinh tác dụng qua việc ức chế phản ứng tổng hợp khác tế bào vi sinh vật gây bệnh Chúng liên kết vào vị trí xác phân tử đích tế bào vi sinh vật mà tạo phản ứng trao đổi chất Các đích tác dụng đặc trưng cho nhóm kháng sinh , nhiên nhiều trường hợp người ta chưa biết hết xác Có mức tác dụng khác tế bào vi khuẩn nấm: thành tế bào, màng tế bào, tổng gen( chép phiên mã) tổng -5- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH hợp protein, dịch mã mRNA , chao đổi chất hô hấp trao đổi chất trung gian Một số ví dụ chế tác dụng kháng sinh Mức tác dụng Tổng hợp thành tế bào: Transpeptid hóa Tổng hợp murein Màng nguyên sinh Thay đổi cấu trúc Thay đổi chức DNA Phân chia Dịch mã Tổng hợp protein Ribosome Liên kết t-RNA Kéo dài Trao đổi chất hơ hấp Trao đổi chất folat Ví dụ β-lactam (penicillin) Vancomycin, phosphomycin, cycloserin,bacitracin Polymixin, amphotericin, polyen, gramicidin, sideromycin valinomycin Actinomycin ,antracyclin, rifamicin Aminogucosid , macrolid( erythromycin) chlorocid, tetracycline, acid fuzidic Antimycin , oligomycin Sulfamid … II.1.5 Tính kháng kháng sinh: Khái niệm “ tính kháng thuốc” lần đề cập Nhật (1959-1960) Nguyên nhân tượng kháng thuốc vi sinh vật vốn nhạy cảm sử dụng thuốc bừa bãi Định nghĩa tính kháng thuốc : kháng thuốc tượng vi sinh vật tính nhạy ban đầu thời gian hay vĩnh viễn tác dụng kháng sinh hay hóa trị liệu Có hai kiểu kháng thuốc : Kháng thuốc tự nhiên: đặc trưng nòi vi sinh vật định dối với số kháng sinh định đó, tính chất có từ trước sử dụng kháng sinh.Điều liên quan đến phổ tác dụng kháng sinh Ví dụ: proteus kháng tetracyclin, trực khuẩn G- kháng penicillin G, streptococcus -6- NGÀNH Y TẾ-MƠI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH nhóm D kháng lincomycin Về mặt sinh hóa : tính thấm tế bào thiếu vắng phân tử đích Kháng thuốc nhận: Xuất chọn lọc tự nhiên chủng đề kháng quần thể vi sinh vật nhạy cảm sử dụng kháng sinh Một vi sinh vật trở thành kháng thuốc phát triển với hàm lương cao đáng kể kháng sinh so với quần thể vi sinh vật mà có nguồn gốc Về mặt chế di truyền học có ngun nhân chính: - Do đột biến NST, kiểu chiếm 10% vi sinh vật kháng thuốc Ví dụ : β-lactam, aminosid, cloramphenicol, rifamycin… - Do nhân tố di truyền Plasmid: kiểu kháng thuốc phổ biến ( chiếm 90% vi sinh vật kháng thuốc) Plasmid lan truyền từ tế bào sang tế bào khác qua chế : biến nạp, tải nạp, tiếp hợp… Về chế sinh hóa kháng thuốc nhận có chế chính: + Thay đổi tính thấm thành tế bào + Vơ hiệu hóa kháng sinh enzyme, acetyl hóa, phosphoryl hóa khiến cho aminosid bị biến đổi , làm chúng không qua thành tế bào + Thay đổi phân tử đích ( đích tác dụng kháng sinh) + Xây dựng đường trao đổi chất mà kháng sinh không tác dụng II.1.6 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh: 2.1.6.1 Khái qt hóa q trình lên men tổng hợp kháng sinh: Các sản phẩm trao đổi chất bậc gắn liền với trình sinh trưởng, xảy thời gian sinh trưởng kéo dài sau sinh trưởng kết thúc Các sản phẩm trao đổi chất bậc hai (sản phẩm trao đổi chất thứ cấp) sản phẩm mà có khơng cần thiết cho sinh trưởng, xảy sau sinh trưởng kết thúc, tức giai đọan cân Do gọi lên men hai pha : pha sinh trưởng - pha sản xuất ( trophosphase -idophase).Tại thời kỳ thứ hai, sản phẩm trao đổi chất tích tụ chủ yếu pha Thời kỳ đầu pha hai ( pha log) vi sinh -7- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH vật có khả sinh tổng hợp cao, cuối pha này, sinh khối giảm.do tế bào tích tụ sản phẩm chậm Hơn số sản phẩm trở thành nguồn dinh dưỡng vi sinh vật Do ta nên kết thúc lên men trước thời điểm cuối pha hai để tránh tượng đồng hóa trở lại sản phẩm làm giảm hiệu suất lên men để tránh tượng tế bào tự phân gây nhớt Đường cong sinh trưởng vi sinh vật Sự chuyển tiếp pha pha 2, thành phần mơi trường ảnh hưởng đến hình thái hoạt lực giống Dinh dưỡng cung cấp vi sinh vật sử dụng để tổng hợp RNA đồng hóa cacbon Nếu lượng P dư, hàm lượng RNA mức cao thời gian dài làm chop khéo dài, pha hai chậm Bắt đầu rút ngắn khơng cịn chuyển từ pha sang pha hai, hàm lượng RNA giảm dần, dó P mơi trường -8- NGÀNH Y TẾ-MƠI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH vi sinh vật sử dụng hết pha thứ hai Nếu tế bào , chất nhân nhanh hàm lượng DNA cao làm rút ngắn pha hai, kích thích nấm mốc , xạ khuẩn sinh bào tử, làm giảm hoạt lực sinh tổng hợp * Nhiệm vụ q trình lên men : - Chọn điều kiện tối ưu giống pha để rút ngắn giai đoạn - Xác định điều kiện chuyển tiếp từ pha sang pha hai - Tìm nguyên nhân làm giảm hàm lượng sản phẩm sau đạt mức tối đa * Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men: - pH : ( [H] +, [OH]- )có ảnh hưởng trực tiếp đến tính keo mơt trường, hoạt lực hệ enzyme, Ở mức độ giám tiếp pH điều chỉnh mức độ phân ly hợp chất thành phần mơi trường - O2 : Làm cho đồng hóa vi sinh vật tốt Nếu sục O2 mạnh làm hư hỏng học tế bào - Trong sản xuất kháng sinh, O pha để phục vụ cho vi sinh vật phát triển, tạo điều kiện cho hệ enzyme tạo thành , xúc tác pha hai 2.1.6.2 Nguyên liệu phương pháp lên men: * Nguyên liệu ( tạo môi trường lên men) : - Nguồn cacbon: loại cacbonhydrat nguồn nguyên liệu truyền thống công nghiệp kháng sinh vitamin Vi dụ loại dường làm môi trường: sacaroza ( lên men sản xuất fumagillin), glucoza, lactoza ( lên men sản suất penicillin) Hay nguồn tinh bột ( ngô, sắn, khoai tây) dextrin dùng cho chủng vi sinh vật có khả tạo enzyme amylaza ( lên men aminoglucosid)… - Các nguồn nitơ: Có thể sử dụng muối amoni, muối nitrat : ( NH4)2 SO4 , NaNO3 , NH4NO3 KNO3… ví dụ : cao ngơ, cao nấm men , bột đậu tương… -9- NGÀNH Y TẾ-MƠI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Ngồi , chất khống, vi lượng chất kích thích cần cho lên men * Giống vi sinh vật cho trình lên men tổng hợp kháng sinh: Giống chủng vi sinh vật có khả sinh tổng hợp kháng sinh phân lập từ mẫu khác ( đất, nước, bùn…), sau ni cấy kiểm định ( nhờ mẫu vi sinh vật kiểm định) khả sinh tổng hợp kháng sinh Vi sinh vật kiểm định: chủng vi sinh vật xác định có độ nhạy cảm định với loại kháng sinh ta kiểm định * Các hóa chất dụng cụ cần thiết : Que cấy, que trang, ống nghiệm, hộp pertri, que đục lỗ thạch ,buồng cấy , nồi hấp, cân phân tích, tủ sấy vơ trùng , tủ ấm, máy lắc * Lên men: Có hai kiểu lên men để sản xuất sinh tổng hợp kháng sinh : - Lên men bề mặt : Là q trình ni cấy vi sinh vật môi trường rắn, dặc, hay lỏng Ví dụ : cám, bột ngơ, hay nước bã rượu , rỉ đường… - Lên men chìm : Tuyệt đại đa số kháng sinh ngày sản xuất theo phương pháp lên men chìm Ở , vi sinh vật phát triển theo môi trường lỏng, phát triển chiều Giống cho lên men tạo cho cấp giống khác + Giống cấp I : ni cấy bình nón, máy lắc ( 100ml/ 500ml) + Giống cấp II : ni bình giống 50l + Giống cấp III : nuôi bình từ : 1m3 - m3 -10- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Cách thử: Lấy lượng bột viên tương ứng với 0,5g bột mộc hương, them 10ml ethanol 96 0( TT), lọc để dung dịch thử (T) Dung dịch đối chiếu: lấy 0.5g bột mộc hương, hòa tan 10ml ethanol 96 0, ngâm 1h, lọc để dung dịch đối chiếu (C) Triển khai sắc ký: chấm 10µl dung dịch thử(T) 10µl dung dịch đối chiếu lên mỏng Lấy mỏng để khô, phun thuốc thử vanilin1%, H2SO4 đậm đặc, sấy 1100C từ 5-10 phút Kết quả: sắc lý đồ dung dịch T phải cho vết tương ứng với vết sắc ký đồ dung dịch C màu sắc R1 - định lượng: Cách thử: Dung dịch chuẩn: Cân xác 80g berberin clorid vào bình định mức 500ml, hịa tan nước nóng Để nguội đến nhiệt độ phòng, thêm nước tới vạch, lắc Lấy xác 5ml dich đem pha với nước cất vừa đủ 100ml Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình, nghiền thành bột mịn Cân xác bột lượng bột viên tương ứng 80g berberin clorid, them 10ml nước để thấm ẩm nhiều bột viên,sau them khoảng 200ml nước sơi khuấy kỹ 5phút Để nguội chuyển vào bình định mức 500ml Thêm nước đến vạch, lắc đều, để lắng tự nhiên đem ly tâm Lấy xác 5ml dịch pha với nước cất vừa đủ 100ml Đo độ hấp phụ mẫu thử mẫu đối chiếu điều kiện bước song 345nm, với mấu trắng nước cất, cốc dày 1cm  Đóng gói ghi nhãn: - Đóng gói vỉ nhôm, vỉ viên - Nhãn rõ rang, quy chế - Bảo quản nơi khô mát, tránh ánh sáng - Hạn dùng : 36 tháng kể từ ngày sản xuất -24- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH  Phiếu kiểm nghiệm sản phẩm: Tên mẫu: viên nang Antesik Hàm lượng: Berberin clorid 50,0 mg Bột rrễ mộc hương 200,0mg Số kiểm soát: Hạn dùng: Số lượng viên: 10000 viên Tiêu chuẩn kiểm nghiệm: TCCS Yêu cầu Hình thức: Viên nang số 0, đầu màu vàng, đầu màu xanh, bên chứa bột thuốc màu vàng, mìu thơm mộc hương, vị đắng cay Định tính: Chế phẩm phải có phép thử định tính Berberin clorid bột mộc hương Độ đồng đề khối lượng: KLTB ± 7,5% Mất khối lượng làm khô : không 9% Độ rã : không 30 phút Định lượng: chế phẩm phải chứa từ 93,0%-110.0%, so với hàm lượng ghi nhãn, tính theo khối lượng trung bình viên Độ nhiễm khuẩn: Đạt D ĐVN III phụ lục 10.7, độ nhiễm khuẩn mức Bao bì đóng gói: vỉ viên, hộp vỉ Kết Đạt Đúng Đạt Đạt Đạt Đạt 100,8% Đạt Đúng Kết luận, mẫu thuốc đạt tiêu chuẩn chất lượng 3.4 Một số dược phẩm kháng sinh có mặt trên thị trường:  Tên thuốc: Neazi Dạng viên nén, dạng bao film, bột pha tiêm, bột pha uống, - Thành phần: Azithromycin, kháng sinh bán tổng hợp , phổ rộng, thuộc nhóm Macrolid -25- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Cơ chế tác dụng: Azithromycin gây ức chế trình tổng hợp protein vi sinh vật cách gắn vào tiểu phần 50S phân tử ribosome - Chỉ định: +) Nhiễm trùng đường hô hấp trên: nhiễm trùng tai , mũi ,họng, viêm xoang, viêm họng, viêm tai giữa, viêm amidan +) Nhiễm trùng đường hô hấp dưới: Viêm phổi, viêm phế quản cấp  Tên thuốc : Acyclovir , dạng viên nén, tiêm , thuốc mỡ - Thành phần: Acyclovir 200mg - Cơ chế tác dụng : Có tác dụng chọn lọc tế bào nhiễm vi khuẩn Herpes Ở giai đoạn đầu: acyclovir enzyme virus Thymidinkinase acyclovir monophosphat acyclovir diphosphat acyclovir triphosphat, đó, ức chế tổng hợp DNA nhân lên virus Độc tính acyclovir triphosphat tế bào bình thường thấp so với tế bào bị nhiễm virus - Chỉ định: Điều trị nhiễm herpes simplex da niêm mạc , khởi phát tái phát Dự phòng bệnh nhân suy giảm miễn dịch -26- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH  Tên thuốc: Lincomycin 500 mg , dạng tiêm viên nang - Thành phần: Lincomycin Đây kháng sinh thuộc nhóm Lincosamid - Cơ chế tác dụng: chúng gắn vào tiểu phần 50S ribosome gây ức chế tring sinh tổng hợp protein - Chỉ định: thuốc có tác dụng kìm khuẩn chủ yếu Chống lại số bệnh vi khuẩn: staphylococcus, streptococcus, pneumococcus, người bệnh có dị ứng với penicillin áp xe gan., nhiễm khuẩn xương, nhiễm khuẩn tan huyết, nhiễm khuẩn kháng penicillin… - Được chuyển hóa gan thả trừ qua phân, thời gian bán thải: 5h  Tên thuốc: Mediclion -27- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Thành phần: Metronidazole 250mg Là dẫn xuất : 5-nitro-imidazol, có tác dụng lên động vật nguyên sinh( amip, giardia), vi khuẩn kỵ khí - Cơ chế tác dụng: Khi vào tế , dẫn xuất 5-nitơ gây độc cho tế bào, chúng gắn vào phân tử DNA làm phá vỡ nó, gây chết tế bào - Chỉ định: điều trị nhiễm khuẩn trichomonas phận tiết niệu, nhiễm giardia lambia, lỵ amip, áp xe gan lỵ amip… IV PHẦN Khảo sát cơng nghệ sản xuất vacxin Xí nghiệp thuốc Thú y TW IV.1 Giới thiệu : Xí nghiệp thành lập năm 1956 vào hoạt động năm 1962, đến cung ứng nhiều loại vacxin phòng bệnh, dược phẩm chế phẩm có hoạt tính sinh học cho ngành chăn ni, thú y Xí nghiệp có riêng phân xưởng ( khu nhà A) sản xuất vacxin, bao gồm vacxin có nguồn gốc từ vi khuẩn virus, sở sản xuất vacxin nước Thành tựu Xí nghiệp: -28- NGÀNH Y TẾ-MƠI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH o Từ năm 1962 – 1990: tạo vacxin chống tụ dấu lợn - Vacxin tụ huyết trùng nhược độc lợn: AvP53 chủng phát phân lập Việt Nam - Vacxin đóng dấu lợn : VR2 chủng phân lập Rumani (1913) - Tạo giống ổn định, sản xuất thành công môi trường nuôi cấy vi trùng o Từ năm 1990 – 2000 : - Tạo vacxin liều nhỏ nhờ hệ thống công nghệ Từ chỗ 20 – 30 ml/liều 2ml/liều - Tạo thêm số sản phẩm o Từ năm 2000 đến nay: Cho đời số sản phẩm IV.2 Một số khâu công nghệ việc sản xuất vacxin: IV.2.1 Phân xưởng sản xuất vacxin virus đông khô:  Sản xuất vacxin virus đông khô môi trường thai trứng, phôi tế bào  Chia liều: vacxin thu được, chia liều , sau đưa vào hệ thống đông khô Làm việc điều kiện vô trùng  Hai máy đông khô làm việc khoảng 2h – 13h cho 10 nghìn lọ vacxin, lọ khoảng 100 liều, hệ thống điều khiển máy tính  Hồn thiện sản phẩm  Kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm vacxin virus đông khô Kiểm nghiệm mô bào sống, phôi thai(trứng), động vật ,sau đó, đặt tủ ấm (37 0C) để tạo điều kiện cho tổ chức sống phát triển IV.2.2 Phân xưởng sản xuất vacxin vi trùng : -29- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH  Tổ môi trường: nhiệm vụ sản xuất loại môi trường nuôi cấy cho vi trùng Nguyên liệu từ thịt bò (thịt bắp)  lọc bỏ gân, mỡ, mạch máu xay nhỏ đun chin (bằng nước) Sau cho sản phẩm thịt đun chín lượng men tiêu hóa (tripsin tách từ tế bào lục giác mô tụy tạng), đun 6h môi trường lên men ( nước + acid amin)  Một số loại mơi trường ni cấy: - Mơi trường thịt yếm khí: để ni cấy vi trùng yếm khí, vi trùng hơ hấp tùy tiện (trong thành phần có bổ sung phân tử glycogen) - Môi trường thạch nghiêng (thạch nấm): có thêm glucoza bổ sung glycerin -30- NGÀNH Y TẾ-MƠI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Mơi trường thạch thường: gồm nước thịch thường agar - Mơi tường có bổ sung formalin, muối chống nấm, để kiểm định vi trùng chết hoàn toàn hay chưa Nếu mơi trường phát triển môi trường khác phải nghi ngờ - Môi trường thạch máu: ngồi thạch có bổ sung hồng cầu cừu Ngồi việc ni cấy vi khuẩn cịn xác định -31- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH vi khuẩn khiết vi khuẩn dung huyết.( Giúp q trình kiểm định độ vơ khuẩn cuả vacxin, có mặt vi khuẩn gây dung huyết, tiêm cho gia súc gây tử vong tất nhanh) - Ngoài ra, huyết nguyên liệu nuôi cấy số vi trùng  Hệ thống lên men vi trùng : nồi lên men Pecnito Sau sản xuất thành công môi trường, tiến hành trình lên men Hệ thống lên men vi trùng gồm nồi lên men: nồi to có dung tích 180l, nồi nhỏ có dung tích 10l, tự động hóa điều khiển thông số môi trường nuôi cấy nhờ hệ thống máy tính điện tử Cơng nghệ lên men lên men có sục khí.Năng suất hệ thống : từ 6h-8h cho mẻ (1 triệu liều vacxin) Ở ln ln trì độ ẩm ( máy nén khơng khí  khơ khơng khí đến độ ẩm W = 4%), áp suất định cho máy làm việc  Tổ tiêu độc dụng cụ thiết bị thí nghiệm: Tất dụng cụ, thiết bị sau làm xong, cho vào lị hấp hấp nước nóng Hệ thồng lò hấp hai vỏ, muốn tăng nhiệt độ hấp, cần tăng áp lực nước vào Nhiệt độ cao, có hệ thống hút nhiệt -32- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH IV.3 Tìm hiểu quy trình kiểm nghiệm vacxin phó thương hàn lợn nhược độc IV.3.1 Đối tượng áp dụng: Quy trình áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin nhược độc chế từ chủng vi khuẩn Salmonella choleraesuis đông khô IV.3.2 Quy định kỹ thuật:  Lấy mẫu: Mẫu lấy theo TCVN 160-2008 “ Quy trình lấy mẫu thuốc thú y vacxin thú y để kiểm tra chất lượng”  Kiểm tra khiết: Theo tiêu chuẩn 161-2008 “ Vacxin thú y- quy trình kiểm tra khiết” bao gồm: o Kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn o Kiểm tra tạp nhiễm nấm mốc o Kiểm tra tạp nhiễm Mycoplasma o Vacxin kiểm tra môi trường đặc biệt như: o Môi trường MacConkey agar (màu đỏ) : môi trường thích hợp cho phát triển vi khuẩn Gr (-) cho lên men lactose Thành phần : - Pepton - Lactose - Mật muối( hỗn hợp acid steroid với ion natri) - Nacl - Toluylene đỏ (thuốc nhuộm) - Agar - Nước o Môi trường KIA: màu đỏ Thành phần : peptone, lactose/glucose = 10/1,dẫn xuất cuả lưu huỳnh, chất thị đỏ phenol, sắt (2) amoni citrate -33- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH o Ngồi vacxin cịn kiểm tra ngưng kết với acriflavin ( hoạt chất kháng khuẩn) 1/500 ( phản ứng lên bơng)  Kiểm tra an tồn: dùng phương pháp sau đây: o Tiêm vào da cho lợn cai sữa khỏe mạnh ( khơng có kháng thể chống Salmonella choleraesuis) ,(20-30kg /con), 10 liều vacxin quy định Tất lợn phải sống khỏe mạnh phát triển bình thường sau – 10 ngày theo dõi o Tiêm vào da cho chuột lang ( 300- 350g), liều vacxin quy định Tất chuột phải sống khỏe mạnh phát bình thường sau – 10 ngày theo dõi  Kiểm tra hiệu lực: vacxin kiểm tra hiệu lực hai cách sau:  Phương pháp đếm số vi khuẩn: Đếm số khuẩn lạc đĩa thạch ( Brain heart agar: BHA) Vacxin tiêu chuẩn có số khuẩn lạc khơng thấp 2.5×109/1 liều vacxin  Phương pháp tiêm chuột: Cho chuột lang, trọng lượng 300 – 350 kg/con, tiêm 1/5 liều vacxin ghi nhãn ( 0.5× 109 CFU), chuột sau tiêm trở thành chuột chuột miễn dịch 21 ngày sau tiêm chuột miễn dịch, ta tiêm lượng chủng thương hàn lợn cường độc với liều MLD cho hai : chuột miễn dịch chuột đối chứng Trong tuần theo dõi, chuột đối chứng phải chết hết chuột miễn dịch phải sống -34- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Ghi : MLD : liều nhỏ gây chết hết động vật thí nghiệm.( Minimum Lethal Dose) CFU : đơn vị khuẩn lạc ( Colony Forming Unit) IV.4 Một số vacxin thương mại hóa: IV.4.1 Vacxin cúm gia cầm:  Vacxin Lasota: loại vacxin nhược độc đông khơ chủng Lasota dùng để phịng “bệnh toi gà” cho gà tháng tuổi Thành phần: virus Newcastle nhược độ đông khô chủng Lasota, sản suất phôi thai trứng gà Mỗi liều vacxin tối thiểu 10 6EID50 virus Newcastle, chất bổ trợ Cách dùng: hòa tan với nước muối sinh lý, dùng cho gà hai tháng tuổi, cho uống nhỏ mắt  Vacxin Gumboro: Vacxin nhược độc đông khô chủng 2512, sản xuất môi trường tế bào xoư phôi gà lớp Thành phần : liều vacxin chứa 103TCID50 VR, chất bổ trợ -35- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Liều lượng cách dùng: hòa tan với nước sinh lý, cho gà uống nhỏ mắt Nếu gà mẹ chưa tiêm phịng vacxin Gumboro, phịng cho gà vào lúc 5-7 ngày tuổi Sau tuần nhắc lại lần Nếu gà mẹ tiêm, sử dụng vacxin cho gà đạt lúc tuần tuổi IV.4.2 Vacxin phòng bệnh cho lợn:  Vacxin phó thương hàn lợn Thành phần : vi khuẩn Salmonella cholera suis, chất bổ trợ Một liều vacxin chứa 2-2,5 tỉ CFU Tiêm vào bắp thịt da, tiêm cho loại lơn lứa tuổi 1ml/1con -36- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH  Vacxin tụ huyết trùng lợn: vacxin vô hoạt, dạng nước để phòng bênh tụ huyết trùng cho lợn Thành phần: giống vi khuẩn tụ huyết trùng lợn Pasteurella suis eptia, túyp B, formaldehyde, keo phèn Cách dùng : tiêm da cho lơn lứa tuổi, 1ml Sauk hi tiêm tuần, vật có miễn dịch miễn dịch kéo dài tháng Nơi có dịch tụ huyết trùng xảy nên tiêm phịng hai lần, cách 3-4 tuần, tiêm cho tồm đàn Không tiêm cho lợn ốm, đẻ hay đẻ non IV.4.3 Vacxin nhiệt thán cho trâu, bò: vacxin vơ độc nha bào dạng lỏng, phịng bệnh nhiệt thán cho trâu bò Thầnh phần : nha bào vi khuẩn nhiệt thán vô độc, không giác mô, liều vacxin cho khoảng 25 triệu nha bào, chất bổ trợ glyxerin Cách dùng: tiêm da cho trâu, bò MỤC LỤC PHẦN I : Mở đầu PHẦN : Đại cương kháng sinh vacxin, công nghệ lên men sản xuất kháng sinh, quy trình sản xuất vacxin Đại cương kháng sinh công nghệ lên men sản xuất kháng sinh .4 Định nghĩa kháng sinh .4 Đơn vị kháng sinh Phân loại kháng sinh -37- NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Cơ chế tác dụng kháng sinh Tính kháng kháng sinh .6 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh Đại cương vacxin công nghệ sản xuất vacxin 12 Định nghĩa : .12 Thành phần vacxin 12 Một số loại vacxin 13 Cơ chế hoạt động vacxin 13 Tác dụng phụ vacxin 13 Tác dụng phụ vacxin 13 Kiểm nghiệm vacxin 14 Quy trình sản xuất số loại vacxin .16 PHẦN Khảo sát quy trình cơng nghệ sản xuất thuốc Nhà máy dược phẩm số 18 Giới thiệu nhà máy 18 Sơ đồ quy trình sản xuất thuốc 19 Quá trình thử đặc tính lâm sàng thuốc Antesik .21 Một số dược phẩm kháng sinh có mặt trên thị trường 25 PHẦN : Khảo sát số công nghệ sản xuất vacxin Xí nghiệp thuốc thú y TW 28 Giới thiệu .28 Một số khâu công nghệ việc sản xuất vacxin .29 Tìm hiểu quy trình kiểm nghiệm vacxin phó thương hàn lợn nhược độc .32 Một số vacxin thương mại hóa 34 -38- ... 14 Quy trình sản xuất số loại vacxin .16 PHẦN Khảo sát quy trình cơng nghệ sản xuất thuốc Nhà m? ?y dược phẩm số 18 Giới thiệu nhà m? ?y 18 Sơ đồ quy trình sản xuất thuốc ... thực vật) III PHẦN Khảo sát quy trình công nghệ sản xuất thuốc nhà m? ?y Dược phẩm số III.1 Giới thiệu nhà m? ?y : Nhà m? ?y thành lập năm 20 05 vào hoạt động năm 20 07 với diện tích 20 .000 m2 Sản xuất. .. nhân) sản xuất, hoàn thiện nhiều lọai thuốc, dược phẩm, lên men sản xuất vacxin…v.v có uy tín nhiều năm Nhà m? ?y Dược phẩm số thuộc cơng ty CP Mediplantex , Xí nghiệp thuốc Thú y TW hai số thương