Kỹ thuật nhân giống vô tính invitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KĨ THUẬT NHÂN GiỐNG VƠ TÍNH IN VITRO Gvhd: Nguyễn Thị Lý Anh Nhóm thảo luận số  Đồng Văn Dương 550330  Nguyễn Thị Vân Trang 560884  Chu Thị Nhàn 560842  Bùi Thị Khánh Linh 560820  Phạm Thị Thuý Hằng 560800  Lê Thị Bích 560777  Nguyễn Kim Tuyến 570845  Hồng Thị Tình 560878 Khái niệm II/ Tính cấp thiết kỹ thuật in vitro ƯU ĐiỂM Có hệ số nhân cao Cho cá thể tương đối đồng mặt di truyền Có thể nhân giống quy mô công nghiệp, đối tượng khó nhân Chủ động giống sản xuất Tạo giống trồng bệnh Các sau nhân in vitro có xu hướng trẻ hóa nên nâng cao hiệu nhân phương pháp thông thường sau Nhược điểm Chi phí cao phương pháp nhân giống khác nên khó cạnh tranh Một số rễ bị biến dị nhân giống in vitro Nhân giống in vitro áp dụng tất đối tượng  Nuôi cấy non trưởng thành  Nuôi cấy quan: rễ, thân, lá, hoa, quả, bao phấn, noãn chưa thụ tinh  Nuôi cấy mô sẹo   (callus) Nuôi cấy tế bào đơn (huyền phù tế bào) Nuôi cấy Protoplast: nuôi cấy phần bên tế bào thực vật sau tách vỏ, gọi ni cấy tế bào trần IV/ Các bước tiến hành nhân giống vơ tính in vitro Bước 1: Chọn lọc chuẩn bị mẹ: Bước 2: Nuôi cấy khởi động  Các phương thức phát triển hoàn chỉnh từ đỉnh sinh trưởng nuôi cấy sau:  Phát triển trực tiêp:  Đỉnh sinh trưởng Chồi nách Cây  Phát triển thông qua giai đoạn protocorm  Đỉnh sinh trưởng Protocorm Cây  Tái sinh hoàn chỉnh từ phận khác  Sơ đồ Mẫu mô phát sinh callus, callus tạo chồi phát triển hồn chỉnh (thơng qua phương thức phát sinh chồi bất định) Tái sinh hoàn chỉnh từ phận khác 2.1 Nuôi cấy chồi bất định        Đỉnh chồi bất định phát triển trực tiếp mẫu vật gián tiếp từ mô callus, mà mơ callus hình thành bề mặt vết cắt mẫu vật - Đoạn thân: thuốc lá, cam, chanh, cà chua, bắp cải… - Mảnh lá: thuốc lá, cà chua, bắp cải, cà phê, ca cao… - Cuống lá: thủy tiên… - Các phận hoa: súp lơ, lúa mỳ, thuốc lá… - Nhánh củ: họ hành, họ lay ơn, họ thủy tiên… - Đoạn mầm: măng tây  Sự phát sinh chồi bất định trực tiếp bắt đầu tế bào nhu mô nằm biểu bì phía bề mặt thân; số tế bào trở thành mô phân sinh túi nhỏ gọi thể phân sinh phát triển Các thể phân sinh rõ ràng có nguồn gốc từ tế bào đơn Tuy nhiên, chiều hướng phản ứng thực vật tùy thuộc vào nồng độ phytohormone 2.2 Nhân giống thông qua giai đoạn callus Tế bào callus cấy chuyển nhiều lần không ổn định mặt di truyền Để tránh tình trạng thiết phải sử dụng loại callus vừa phát sinh, tức callus sơ cấp để tái sinh hy vọng thu tái sinh đồng  Nhân giống thông qua phát sinh phơi vơ tính  Năm 1958, Street Reinert hai tác giả mô tả hình thành phơi vơ tính từ tế bào đơn cà rốt (Daucus carota)  Năm 1977, Murashige cho phơi vơ tính trở thành biện pháp nhân giống in vitro  Phơi vơ tính cá thể nhân giống có cực tính bắt nguồn từ tế bào soma  Ở nhiều cây, người ta nhận thấy tế bào phân chia vô tổ chức tạo nên callus ni cấy Có thể thay đổi hướng phát triển chúng để tạo phơi vơ tính với bước phát sinh hình thái giống với trường hợp phơi hữu tính  Khả tạo phơi vơ tính ni cấy mơ thực vật, ngồi điều kiện vật lý, hóa học thuận lợi cho tạo phơi, phụ thuộc lớn vào lồi, vào giống, dòng lồi VI/Hạn chế vi nhân giống  Hạn chế chủng loại sản phẩm  Chi phí sản xuất  Hiện tượng sản phẩm bị biến đổi kiểu hình VII/ QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY BA KÍCH (Morinda officenalis How)  Vật liệu nghiên cứu Đoạn thân ba kích năm tuổi có nguồn gốc từ huyện Hồnh Bồ, tỉnh Quảng Ninh Phương pháp nghiên cứu 2.1 Khử trùng mẫu cấy  Đoạn thân ba kích chứa mắt ngủ có kích thước khoảng 1,5 cm sau cắt từ mẹ ngâm nước Sau rửa nước xà phòng lỗng rửa lại vòi nước chảy Tiếp theo, mẫu cấy khử trùng cồn 70% phút, khử trùng lần Ca(HClO)2 10% 15 phút, lần HgCl20,1% phút, rửa nước cất vô trùng 3-4 lần 2.2 Tái sinh chồi từ mẫu cấy  Mẫu cấy sau khử trùng cấy vào môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) bổ sung 0,25 mg/l kinetin kết hợp với BA với nồng độ mg/l để tái sinh chồi, cụm chồi 2.3 Nhân nhanh  Chồi tái sinh từ mẫu cấy có chiều cao 2-2,5 cm 2-3 cặp chuyển sang môi trường nhân nhanh môi trường MS, bổ sung 3mg/l BA  Các chồi cấy chuyển sang môi trường 45 ngày lần 2.4 Tạo rễ cho chồi in vitro  Các chồi có chiều cao 3-3,5cm, sinh trưởng phát triển bình thường cấy chuyển sang môi trường MS bổ sung 0.2mg/l IBA, 0,4mg/l than hoạt tính để kích thích tạo rễ  Môi trường nuôi cấy điều chỉnh pH = 5,8 trước hấp khử trùng áp suất 1,1 atm, nhiệt độ 1210C 20 phút  Điều kiện nuôi cấy in vitro: 14h sáng, cường độ ánh sáng 2000 -2500 lux, nhiệt độ 25 ± 20C 2.5 Thích nghi ngồi vườn ươm Cây in vitro hồn chỉnh chuyển ravườn ươm, sử dụng giá thể đất (đất cát pha đất tầng B - lớp đất thứ từ mặt xuống, sau lớp tầng đất mặt hay tầng lớp canh tác (đất tầng A), tích tụ chất rửa trôi từ tầng A xuống) giá thể hữu gồm 50% bột dừa 50% phế liệu sản xuất nấm ăn Cảm ơn ý lắng nghe cô bạn ... II/ Tính cấp thiết kỹ thuật in vitro ƯU ĐiỂM Có hệ số nhân cao Cho cá thể tương đối đồng mặt di truyền Có thể nhân giống quy mơ cơng nghiệp, đối tượng khó nhân Chủ động giống sản xuất Tạo giống. .. tính trở thành biện pháp nhân giống in vitro  Phơi vơ tính cá thể nhân giống có cực tính bắt nguồn từ tế bào soma  Ở nhiều cây, người ta nhận thấy tế bào phân chia vô tổ chức tạo nên callus... sau nhân in vitro có xu hướng trẻ hóa nên nâng cao hiệu nhân phương pháp thơng thường sau Nhược điểm Chi phí cao phương pháp nhân giống khác nên khó cạnh tranh Một số rễ bị biến dị nhân giống