DSpace at VNU: Phát hiện người mang gen bệnh tăng sản thượng thận thể thiếu enzym 21 – hydroxylase bằng kỹ thuật MLPA

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dƣơng Thị Giang PHÁT HIỆN NGƢỜI MANG GEN BỆNH TĂNG SẢN THƢỢNG THẬN THỂ THIẾU ENZYM 21- HYROXYLASE BẰNG KỸ THUẬT MLPA LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dƣơng Thị Giang PHÁT HIỆN NGƢỜI MANG GEN BỆNH TĂNG SẢN THƢỢNG THẬN THỂ THIẾU ENZYM 21- HYROXYLASE BẰNG KỸ THUẬT MLPA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS BS Trần Huy Thịnh PGS.TS Nguyễn Quang Huy Hà Nội - Năm 2015 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Khoa Sinh học, Bộ môn Sinh lý thực vật Hóa sinh Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc Gia Hà Nội hết lòng tạo điều kiện để chúng tơi học tập tốt đạt thành ngày hôm Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS.BS Trần Huy Thịnh, Phó trưởng Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội, người Thầy tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Quang Huy, Chủ nhiệm Khoa Sinh học, Trường Đại học khoa Học tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội giúp đỡ bảo cho tơi q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Lãnh đạo Trung tâm nghiên cứu Gen- Protein, Trường Đại học Y Hà Nội, toàn thể nhân viên Trung tâm tạo điều kiện giúp đỡ cho q trình nghiên cứu để hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn Lãnh đạo Khoa Xét Nghiệm, Bệnh viện Đại học Y Hà Nội, anh chị em Khoa giúp đỡ cho q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận văn Và cuối tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình người bạn ln bên động viên, giúp đỡ suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2015 Dương Thị Giang TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thúy Giang (2008), Nghiên cứu phát triển thể chất số yếu tố ảnh hưởng trẻ TSTTBS điều trị Bệnh viện Nhi trung ương, Luận văn Thạc sĩ Y học, Trường đại học Y Hà Nội Triệu Quốc Khánh (2004), Nghiên cứu nhận thức bố mẹ bệnh nhân bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh, Luận văn Thạc sĩ Y học, Trường đại học Y Hà Nội Võ Thị Kim Huệ (2000), Góp phần nghiên cứu chẩn đốn điều trị bệnh TSTTBS thiếu enzyme 21- hydroxylase trẻ em, Luận án Tiến sĩ khoa học Y học, Trường Đại học Y Hà Nội Trần Kiêm Hảo (2007), Xác định số đột biến CYP21 gây bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thiếu enzym 21- hydroxylase phát người lành mang gen bệnh, Luận án Tiến sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thị Phương Mai, Lý Thanh Hà, Nguyễn Mai Hương cộng (2008), “Xét nghiệm di truyền chẩn đoán trước sinh bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh”, Tạp chí nghiên cứu y học, 57(4), tr 259 - 264 Thái Thiên Nam (2001), Phát đột biến gen CYP21 tăng sản thượng thận bẩm sinh so thiếu enzym 21-hydroxylase trẻ em, Luận văn Thạc sỹ y khoa, Trường Đại học Y Hà Nội Thái Thiên Nam, Nguyễn Thị Phượng, Võ Thương Lan (2002), “Phát đột biến gen CYP21 tăng sản thượng thận bẩm sinh thiếu enzyme 21-hydroxylase trẻ em gia đình trẻ bị bệnh viện Nhi”, Nhi khoa; tập 10, số đặc biệt chào mừng 100 năm Trường Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thu Nhạn (1994), “Dậy sớm”, Cẩm nang điều trị Nhi khoa Nhà xuất Y học, tr 245 - 246 Nguyễn Thu Nhạn, Cao Quốc Việt, Nguyễn Nguyệt Nga, Nguyễn Thị Phượng, Nguyễn Thị Hồn, Trần Thị Hòa (1991), “Bệnh rối loạn nội tiếtchuyển hóa di truyền viện bảo vệ sức khỏe trẻ em”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học 10 năm (1981 – 1990), tr 66 - 75 10 Nguyễn Thị Phượng (1996), “Đặc điểm di truyền hội chứng sinh dục thượng thận”, Di truyền học ứng dụng, tr - 11 Nguyễn Thanh Thúy (2010), “Sử dụng kỹ thuật PCR lồng phát AND thai từ huyết mẹ ứng dụng chẩn đốn trước sinh”, Tạp chí thơng tin Y – Dược Số đặc biệt chào mừng ngày gặp mặt liên viện hàng năm giảng dạy nghiên cứu miễn dịch học lần thứ 20, tr 41 - 45 12 Khuất Hữu Thanh (2005), Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật 13 Tạ Thành Văn (2010), PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử, Nhà xuất Y học, tr 28 - 32 Tiếng Anh 14 Aysha H Khan, Muniba Aban, Jamal Raza (2011), “Ethnic disparity in 21 – hydroxylase gene mutations identified in Pakistani congenital adrenal hyperplasia patients”, BMC Endocrine Disorders, Biomed central, pp.1 - 13 15 Angel O K Chan, But M W (2011), “Molecular analysis of congenital adrenal hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency in Hong Kong Chinese patients”, Steroids, 76, pp 1057 - 1062 16 Amor M, Parker K.L, Globerman H, New M.I, White P.C (1998), “Mutation in the CYP21B gene (I12172→Asn) cause steroid 21- hydroxylase deficiency”, Proc Natl Acad Sci USA, 85, pp 1600 - 1604 17 Book C G D (2000), “Antenatal Treatment of a Mother Bearing a Fetus with Congenital Adrenal Hyperplasia”, Archive Disease Children Fetal Neonatal Ed, 82, pp 176 - 181 18 Dorr HG, Sippell WG (1993), “Prenatal dexamethasone treatment in pregnancies at rick for congenital adrenal hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency: effect on midgestational amniotic fluid steroid levels”, J Clin Endocrinol Metab 76(1), pp 117 - 120 19 Fernanda B Coeli., Fernanda C Soardi, (2010), “Novel deletion alleles carrying CYP21A1P/A2 chimeric genes in Brazilian patients with 21hydroxylase deficiency”, BMC medical Genetics 20 Fibkielstain P.G, Chen W, Mehta P.S (2010), "Comprehensive genetic analysis of 182 unrelated families with congenital adrenal hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency" J Clin Endocrinol Metab, 96 (1), pp 161 - 172 21 Forest G Maguelone (2004), “Recent advances in the diagnosis and management of congenital adrenal hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency”, Human Reproduction, Vol 10, No6, pp 469 - 485 22 Gelehrter T.D, Collin F.S (1990), Principles of Medical Genetics, William and Wilkins, pp 299 - 312 23 Ghizzoni Lucia, Marco Cappa (2011), “Relationship of CYP21A2 genotype and serum 17 – hydroxyprogesterone and cortisol levels in a large cohort of Italian children with premature pubarche”, European Journal of Endocrinology, 165, pp 307 - 314 24 Higashi Y, Yoshioka H, Yamane M, Gotoh O, Fuji – K.Y (1986), “Complete Nucleotide Sequence of Two Steroid 21- Hydroxylase Genes Tandemly Arranged in Human Chromosome: A pseudogene and A Genuine Gene”, Proc Natl Acad Sci USA, 83, pp 2841 - 2845 25 Juan Tian, Guohua Yang (2011), “Molecular diagnosis of two families with classic congenital adrenal hyperplasia”, Gene No, pp 368 - 89 26 Keegan C E, Killeen A A (2001), “An Overview of Molecular Diagnosis of Steroid 21 – Hydroxylase Deficiency”, Journal of Molecular Diagnostics, 3(2), pp 49 - 53 27 Koppens P.F.J (2002), “Molecular genetics and epidemiology of steroid 21hydroxylase deficiency origin of disease- causing mutations”, Optima grafische communicate, Rotterdam, The Netherland 28 Larsen et al (2003), Congenital Adrenal Hyperplasia, Williams textbook of Endocrinology10th ed, pp 458 - 513 29 Levine L.S (2000), “Congenital Adrenal Hyperplasia”, Pediatrics in Review, 21 (5), pp 159 - 169 30 Marie I New (1998), “Diagnosis and management of congenital adrenal hyperplasiase”, Annul Rev Med, 49, pp 311 - 328 31 New M.I, Carlson A, Obeid J, Marshall I, Cabrera M.S (2001), “Prenatal Diagnosis for Congenital Adrenal Hyperplasia in 532 Pregnancies”, The journal of clinical Endocrinology & Metabolism, 86 (12), pp 5651 - 5657 32 Nike M M L Stikkelbroeck (2003), “CYP21 Gene Mutation Analysis in 198 Patients with 21 – hydroxylase Deficiency in the Netherlands: Six Novel Mutations and a Specific Cluster of Four Mutations”, Jounal Clin Endocrinol Metab, 88, pp 3852 - 3859 33 Nils Krone, Felix G (2005), “Functional Characterization of Two Novel Point mutations in the CYP21Gene causing simple virilizing forms of congenital Adrenal hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency”, The Journal of clinical Endocrinology and Metabolism, 90(1), pp 445 - 454 34 Paola Concolino (2009), “Multiplex ligation – dependent probe amplification (MLPA) assay for the detection of CYP21A2 gene deletions/ duplications in Congenital Adrenal Hyperplasia: First technical report”, Clinical Chimica Acta, 402, Elsevier B.V, pp.164 - 170 35 Paulino.L.C (1999), “Mutation distribution and CYP21/C4 locus variability in Brazilian families with the classical form of 21 – Hydroxylase Deficiency”, Journal Acta Pediatric, 88, pp 275 - 283 36 Speiser P W (2005), “The Genetics of Steroid 21 – Hydroxylase Deficiency”, The Endocrinologist, 15 (1), pp 37 - 41 37 Speiser P.W (2000), “Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21hydroxylase deficiency”, Endocrine Reviews, 21(3), pp 245 - 291 38 Theodoropoulou M, Barta C, Szoke M, Staub M, Ja’nos S, (2001), “Prenatal Diagnosis of Steroid 21- Hydroxylase Deficiency by Allene – Specific Amplification”, Fetal Diagnosis and Therapy, 16, pp 237 - 240 39 Vu C.D, Bui P.T, Kate Armstrong (2010), Growing numbers of children with CAH in Vietnam, Abstract submitted for 6th Congress of APPES 40 Zuzana Vrzalova (2011), “Chimeric CYP21A1P/CYP21A2 genes identified in Czech patients with congenital adrenal hyperplasia”, European Journal of Medical Genetics, No 54 pp 112 - 117 41 White P.C., Grossberger D, Onufer B.J, Chaplin D.D, Dupont B, (1985), “Two genes Encoding Steroid 21- Hydroxylase Are Located Near The Genes Encoding the Fourth Component of Complement in Man”, Proc Natl Acad Sci USA, 82 pp 1089 - 1093 PHỤ LỤC Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh TSTTBS thể thiếu enzym 21-OH Triệu chứng suy thƣợng thận cấp thiếu hụt Cortisol Aldosteron - Trẻ nôn nhiều, nôn tự nhiên không liên quan đến bữa bú, kèm theo ỉa chảy - Do nôn nhiều trẻ bị nước, da nhăn nheo, sụt cân, mặt hốc hác, mắt trũng, môi khô - Xạm da, đặc biệt phận sinh dục - Trẻ tình trạng sốc: Da vân tím, mạch nhanh nhỏ khó bắt, huyết áp tụt, loạn nhịp tim Trong trường hợp trẻ bị chẩn đốn nhầm với tiêu chảy cấp nước, viêm ruột hoại tử bệnh nhiễm trùng khác - Rối loạn điện giải nặng: Na+ giảm, Cl- giảm, K+ tăng cao 5,2 mEq Không xử lý kịp trẻ tử vong trụy mạch ngừng tim Triệu chứng nam hóa tăng Testosteron - Ở trẻ trai: dương vật to, dài so với tuổi, vùng bìu thâm, tinh hoàn bé tương đương với tuổi - Ở trẻ gái: bị nam hóa, âm vật phì đại dương vật, nên có trẻ sinh tưởng nhầm trai Hai mơi lớn dính vào nhau, nhìn trơng giống bìu, khơng có tinh hồn Trong trường hợp trẻ bị khai sinh nhầm trai * Thể nam hóa đơn Biểu lâm sàng chủ yếu cường Testosteron gây nam hóa - Trẻ trai: Dậy sớm giả, dương vật to, dài so với tuổi thể tích tinh hồn bé tương đương với tuổi bệnh nhân, không tương xứng với dương vật Mọc lông sinh dục sớm - Trẻ gái: Âm vật phì đại trơng dương vật Âm vật phì đại chia theo typs Prader Hai mơi lớn dính nhau, trơng giống bìu Khơng có tinh hồn khám lâm sàng kiểm tra siêu âm Phải làm xét nghiệm nhiễm sắc thể xác định giới tính xác nữ với Karyotyp 46.XX - Tốc độ lớn nhanh, bắp phát triển trông trẻ lực lưỡng Tuổi xương sớm so với tuổi thực xương đóng sớm nên đến tuổi dậy trẻ thấp so với trẻ lứa tuổi khác - Giọng ồm, mọc trứng cá, mọc lông sinh dục sớm so với tuổi Triệu chứng xét nghiệm - Xét nghiệm máu - Cortisol máu giảm - Aldosteron giảm - Testosteron tăng cao >1 nmol/l - Progesteron, 17- OH prgesteron tăng cao > 6.0 nmol/l - Điện giải đồ rối loạn: Na+ < 130 mEq/l, Cl- giảm, K+ tăng cao > mEq/l - Định lượng enzym 21- hydroxylase thiếu hụt có giá trị chẩn đoán đặc hiệu chưa làm - Xét nghiệm giải trình tự gen MLPA để tìm đột biến gen CYP21A2 ... TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dƣơng Thị Giang PHÁT HIỆN NGƢỜI MANG GEN BỆNH TĂNG SẢN THƢỢNG THẬN THỂ THIẾU ENZYM 21- HYROXYLASE BẰNG KỸ THUẬT MLPA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114... trước sinh bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh”, Tạp chí nghiên cứu y học, 57(4), tr 259 - 264 Thái Thiên Nam (2001), Phát đột biến gen CYP21 tăng sản thượng thận bẩm sinh so thiếu enzym 21- hydroxylase. .. Nội Trần Kiêm Hảo (2007), Xác định số đột biến CYP21 gây bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thiếu enzym 21- hydroxylase phát người lành mang gen bệnh, Luận án Tiến sỹ y học, Trường Đại học Y Hà