Nhằm mục đích giúp quản lý tốt người mang gen và cung cấp những thông tin hữu ích cho tư vấn di truyền và chẩn đoán trước sinh, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Phát hiện người mang gen bệnh tăng sản thượng thận thể thiếu enzym 21- Hydroxylase bằng kỹ thuật MLPA với mục tiêu: Phát hiện người mang đột biến dị hợp tử gen CYP21A2 ở các thành viên gia đình bệnh nhân bị bệnh TSTTBS thể thiếu enzym 21 - OH.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dương Thị Giang PHÁT HIỆN NGƯỜI MANG GEN BỆNH TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN THỂ THIẾU ENZYM 21 HYROXYLASE BẰNG KỸ THUẬT MLPA LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội Năm 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dương Thị Giang PHÁT HIỆN NGƯỜI MANG GEN BỆNH TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN THỂ THIẾU ENZYM 21 HYROXYLASE BẰNG KỸ THUẬT MLPA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: 1. TS. BS Trần Huy Thịnh 2. PGS.TS Nguyễn Quang Huy Hà Nội Năm 2015 LỜI CẢM ƠN Trướ c tiên, tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Khoa Sinh h ọc, Bộ mơn Sinh lý thực vật và Hóa sinh Trườ ng Đạ i học Khoa học Tự nhiên Đại học Quốc Gia Hà Nội đã hết lòng tạo điều kiện để chúng tơi có thể học tập tốt và đạt đượ c những thành quả như ngày hơm nay. Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới TS.BS Trần Huy Thịnh, Phó trưởng Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội, người Thầy đã tận tình hướng dẫn, tạo mọi điều kiện và giúp đỡ tơi trong suốt q trình nghiên cứu và hồn thành luận văn này Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Quang Huy, Chủ nhiệm Khoa Sinh học, Trường Đại học khoa Học tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội đã giúp đỡ và chỉ bảo cho tơi trong q trình học tập và nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Lãnh đạo Trung tâm nghiên cứu Gen Protein, Tr ường Đại học Y Hà Nội, cùng tồn thể nhân viên trong Trung tâm đã tạo điều kiện giúp đỡ cho tơi trong q trình nghiên cứu để hồn thành luận văn này Tơi xin cảm ơn Lãnh đạo Khoa Xét Nghiệm, Bệnh viện Đại học Y Hà Nội, cùng các anh chị em trong Khoa đã giúp đỡ cho tơi trong q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận văn Và cuối cùng tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình và những người bạn đã ln ở bên động viên, giúp đỡ tơi trong suốt q trình học tập, nghiên cứu và hồn thành luận văn này Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2015 D ương Th ị Giang DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CYP Cytochrome P450 CYP21 Cytochrome P450 21(steroid 21 hydroxylase) DNA Deoxyribonucleic acid DOC Deoxycorticosterone E Exon I Intron Ig2 Đột biến điểm ở intron 2( 656A/C →G) HLA Human leukocyte antigen KCĐ Khơng cổ điển MM Mất muối MHC Major histocompatibility complex MLPA Multiplex Ligation – dependent Probe Amplification NHĐT Nam hóa đơn thuần PCR Polymerase Chain Reaction Stop codon Mã kết thúc TSTTBS Tăng sản thượng thận bẩm sinh 3β HDS 3β hydroxysteroid dehydrogennase 17OHP 17 – hydroxyprogesteron 21OH 21 hydroxylase ∆8bp Mất 8bp ở exon 3 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1 4 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1. GIỚI THIỆU VỀ BỆNH TSTTBS THỂ THIẾU ENZYM 21HYDROXYLASE 4 1.1. Một số nét khái quát về bệnh TSTTBS 4 1.2. Vài nét về tình hình nghiên cứu bệnh TSTTBS 5 1.2.1. Tình hình nghiên cứu bệnh TSTTBS trên thế giới 5 1.2.2. Tình hình nghiên cứu bệnh TSTTBS tại Việt Nam 6 1.3. Tần suất mắc bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh 7 1.4. Cơ chế bệnh sinh của bệnh TSTTBS 8 1.5. Lâm sàng bệnh TSTTBS 9 2. CƠ SỞ PHÂN TỬ VÀ ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN CỦA BỆNH TSTTBS 12 2.1. Cơ sở phân tử của bệnh TSTTBS 12 2.1.1 Vị trí, cấu trúc, chức năng gen CYP21 12 2.1.2 Một số đột biến gen CYP21A2 gây bệnh TSTTBS 13 2.2. Đặc điểm di truyền của bệnh TSTTBS 15 2.3. Biểu hiện lâm sàng, cận lâm sàng của người mang gen dị hợp tử 17 2.4. Phát hiện người lành mang gen bệnh 17 3. CHẨN ĐOÁN BỆNH TSTTBS 18 3.1. Chẩn đoán lâm sàng và cận lâm sàng 18 3.1.1. Chẩn đoán xác định 18 3.1.2. Chẩn đoán phân biệt 19 3.2. Các phương pháp sinh học phân tử phát hiện đột biến gen CYP21A2 gây bệnh TSTTBS 21 3.2.1. Kỹ thuật PCR 21 3.2.2. Kỹ thuật giải trình tự gen (DNA Sequencing) 22 3.2.3. Kỹ thuật Souther blot 23 3.2.4. Kỹ thuật MLPA (Multiplex Ligation Dependent Probe Aplification) 23 CHƯƠNG 2 28 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1. Đối tượng nghiên cứu 28 2.2. Dụng cụ, trang thiết bị và hóa chất nghiên cứu 28 2.2.1. Dụng cụ và trang thiết bị 28 2.2.2. Hoá chất 28 2.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu 30 2.4. Đạo đức trong nghiên cứu 30 2.5. Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu tiến cứu mô tả, cắt ngang. 31 2.5.1. Thiết kế nghiên cứu 31 2.5.2 Tiến hành xét nghiệm 32 Chương 3 39 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1. Kết quả tách chiết DNA 39 3.2. Kết quả phát hiện đột biến gen trên bệnh nhân và phát hiện người lành mang gen bệnh 41 KÊT LUÂN ́ ̣ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tần số mắc bệnh TSTTBS thể thiếu enzym 21 OH trên thế giới 8 Bảng 1.2: Các đột biến gen CYP21 thường gặp gây TSTTBS cổ điển [4],[35], [39] 14 Bảng 1.3. Tên, kích thước và vị trí của các sản phẩm PCR trong Kit MLPA P050B2 (MRC Holland) 25 Bảng 3.1. Các thành viên trong gia đình bệnh nhân 41 Bảng 3.2. Kiểu đột biến gen của bệnh nhân và thành viên gia đình 42 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1. Sơ đồ tổng hợp hormon vỏ thượng thận do thiếu hụt enzym [35] 8 Hình 1.2. Nhiễm sắc thể số 6 và vị trí gen CYP21 [19] 12 Hình 1.3. Cấu trúc phân tủ của gen CYP21 [18] 13 Hình 1.4. Quy luật di truyền gen lặn trên NST thường 15 Hình 1.5. Phả hệ của một gia đình có con bị bệnh di truyền lặn trên NST thường (Autosome Recessive) 16 Thế hệ I, II, khơng có người bị bệnh, thế hệ III có người bị bệnh. . 16 Hình 1.6. Giá trị 17OHP sau nghiệm pháp kích thích ACTH trong các thể bệnh và người mang gen dị hợp tử [36]. 18 Hình 1.7. Các bước cơ bản của kỹ thuật PCR 22 Hình 1.8. Các giai đoạn của kỹ thuật MLPA 24 Hình 1.9. Sơ đồ và vị trí một số probe của Kit MLPA P050B2 26 Hình 1.10. Hình ảnh minh họa kết quả MLPA 26 Hình 2.1. Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 32 Hình 2.2. Sơ đồ và vị trí một số probe của Kit MLPA P050B2 [4] 36 Hình 3.1. Kết quả kiểm tra chất lượng DNA tách từ mẫu bệnh phẩm 39 Hình 3.2. Kết quả điện di kiểm tra DNA tổng số 40 Hình 3.3. Phả hệ gia đình số 01 44 Hình 3.4. Kết quả MLPA gia đình mã số 01 46 Hình 3.5. Phả hệ gia đình số 02 47 Hình 3.6. Kết quả MLPA của gia đình mã số 02 48 Hình 3.7. Phả hệ gia đình số 03 49 Hình 3.8. Kết quả MLPA của gia đình mã số 03 50 Hình 3.9. Phả hệ gia đình số 04 51 Hình 3.10. Kết quả MLPA của gia đình mã số 04 53 Hình 3.11. Phả hệ gia đình số 05 53 Hình 3.12. Kết quả MLPA của gia đình mã số 05 56 Hình 3.13. Phả hệ gia đình số 06 57 Hình 3.14. Kết quả MLPA của gia đình mã số 06 58 Kết quả phát hiện đột biến gen và phát hiện người lành mang gen bệnh của gia đình MS06: Hình 3.13. Phả hệ gia đình số 06 Ở thế hệ thứ 3 có 1 con gái 18 tháng, mang đột biến dị hợp xóa đoạn exon 1 đến exon 3 với kiểu hình mất muối. Bố 30 tuổi và mẹ 28 tuổi. Anh trai 5 tuổi khơng có biểu hiện bệnh. Trong phả hệ khơng ai bị bệnh giống bệnh nhân 57 Kiểu gen của gia đình số 06 Người bình thường C4B C4A Ex3 Ex4 E10P Ex8 Ex1 Ex6 E1P Y SALSA MLPA KIT P050-B2 CAH, MRC-Holland Hình 3.14. Kết quả MLPA của gia đình mã số 06 58 I2P Hình ảnh phân tich gen băng ky tht MLPA trên gen ́ ̀ ̃ ̣ CYP21A2 cho thấy ở người bình thường xuất hiện đủ các đỉnh trong khi đó bệnh nhân các đỉnh từ exon 1 đến exon 3 chỉ bằng 1/2 người bình thường, vì vậy bệnh nhân có đột biến dị hợp xóa đoạn từ exon 1 đến exon 3. Phân tích kết quả ở người bố thấy các đỉnh của exon 1 đến exon 3 chỉ bằng 1/2 so với người bình thường, chứng tỏ bố bệnh nhân là người mang gen bệnh, còn hình ảnh MLPA người mẹ bệnh nhân cho thấy tất cả các đỉnh của gen CYP21A2 đều bình thường, chứng tỏ mẹ khơng có đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 59 KÊT LN ́ ̣ Ở nhóm bệnh nhân có đột biến, phát hiện 2/6 bệnh nhân có đột biến đồng hợp tử xóa đoạn exon 1 3 hoặc exon 1 8 và 1 bệnh nhân có đột biến dị hợp tử xóa đoạn kết hợp với đột biến I172N dị hợp tử. Các bệnh nhân còn lại mang đột biến dị hợp tử xóa đoạn exon 1 3 hoặc dị hợp tử xóa đoạn exon 1 8 Ở nhóm bố mẹ và các thành viên gia đình bệnh nhân (em trai, em gái), phát hiện 4/6 người bố mang gen và 5/6 người mẹ mang gen, 1 em gái của bệnh nhân có đột biến dị hợp tử xóa đoạn exon 1 3 kết hợp với đột biến dị hợp tử I172N 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thúy Giang (2008), Nghiên cứu sự phát triển thể chất và một số yếu tố ảnh hưởng trẻ TSTTBS đang điều trị tại Bệnh viện Nhi trung ương, Luận văn Thạc sĩ Y học, Trường đại học Y Hà Nội. Triệu Quốc Khánh (2004), Nghiên cứu nhận thức của bố mẹ và bệnh nhân bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh , Luận văn Thạc sĩ Y học, Trường đại học Y Hà Nội Võ Thị Kim Huệ (2000), Góp phần nghiên cứu chẩn đốn và điều trị bệnh TSTTBS thiếu enzyme 21 hydroxylase ở trẻ em , Luận án Tiến sĩ khoa học Y học, Trường Đại học Y Hà Nội Trần Kiêm Hảo (2007), Xác định một số đột biến CYP21 gây bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thiếu enzym 21 hydroxylase và phát hiện người lành mang gen bệnh, Luận án Tiến sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội. Nguyễn Thị Phương Mai, Lý Thanh Hà, Nguyễn Mai Hương và cộng sự (2008), “Xét nghiệm di truyền trong chẩn đốn trước sinh bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh”, Tạp chí nghiên cứu y học, 57(4), tr. 259 264 Thái Thiên Nam (2001), Phát hiện đột biến gen CYP21 trong tăng sản thượng thận bẩm sinh so thiếu enzym 21hydroxylase ở trẻ em, Luận văn Thạc sỹ y khoa, Trường Đại học Y Hà Nội Thái Thiên Nam, Nguyễn Thị Phượng, Võ Thương Lan (2002), “Phát hiện đột biến gen CYP21 trong tăng sản thượng thận bẩm sinh do thiếu enzyme 21hydroxylase trẻ em và gia đình trẻ bị bệnh tại viện Nhi”, Nhi khoa; tập 10, số đặc biệt chào mừng 100 năm Trường Đại học Y Hà Nội 61 Nguyễn Thu Nhạn (1994), “Dậy thì sớm”, Cẩm nang điều trị Nhi khoa. Nhà xuất bản Y học, tr. 245 246 Nguyễn Thu Nhạn, Cao Quốc Việt, Nguyễn Nguyệt Nga, Nguy ễn Th ị Phượng, Nguyễn Thị Hồn, Trần Thị Hòa (1991), “Bệnh rối loạn nội tiết chuyển hóa và di truyền tại viện bảo vệ sức khỏe trẻ em”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học 10 năm (1981 – 1990), tr. 66 75 10 Nguyễn Thị Phượng (1996), “Đặc điểm di truyền của hội chứng sinh dục thượng thận”, Di truyền học và ứng dụng, tr. 1 5 11 Nguyễn Thanh Thúy (2010), “Sử dụng kỹ thuật PCR lồng phát hiện AND thai từ huyết thanh mẹ và ứng dụng trong chẩn đốn trước sinh”, Tạp chí thơng tin Y – Dược. Số đặc biệt chào mừng ngày gặp mặt liên viện hàng năm về giảng dạy và nghiên cứu miễn dịch học lần thứ 20, tr. 41 45 12 Khuất Hữu Thanh (2005), Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen , Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật 13 Tạ Thành Văn (2010), PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử, Nhà xuất bản Y học, tr. 28 32 Tiếng Anh 14 Aysha H. Khan, Muniba Aban, Jamal Raza (2011), “Ethnic disparity in 21 – hydroxylase gene mutations identified in Pakistani congenital adrenal hyperplasia patients”, BMC Endocrine Disorders, Biomed central, pp.1 13 15 Angel. O. K Chan, But. M. W (2011), “Molecular analysis of congenital adrenal hyperplasia due to 21 hydroxylase deficiency in Hong Kong Chinese patients”, Steroids, 76, pp. 1057 1062 16 Amor M, Parker K.L, Globerman H, New M.I, White P.C (1998), “Mutation in the CYP21B gene (I12172→Asn) cause steroid 21 hydroxylase deficiency”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, pp. 1600 1604 62 17 Book C. G. D (2000), “Antenatal Treatment of a Mother Bearing a Fetus with Congenital Adrenal Hyperplasia”, Archive Disease Children Fetal Neonatal Ed, 82, pp. 176 181 18 Dorr HG, Sippell WG (1993), “Prenatal dexamethasone treatment in pregnancies at rick for congenital adrenal hyperplasia due to 21 hydroxylase deficiency: effect on midgestational amniotic fluid steroid levels”, J Clin Endocrinol Metab 76(1), pp. 117 120 19 Fernanda B Coeli., Fernanda C Soardi, (2010), “Novel deletion alleles carrying CYP21A1P/A2 chimeric genes in Brazilian patients with 21 hydroxylase deficiency”, BMC medical Genetics. 20 Fibkielstain P.G, Chen W, Mehta P.S (2010), "Comprehensive genetic analysis of 182 unrelated families with congenital adrenal hyperplasia due to 21 hydroxylase deficiency". J Clin Endocrinol Metab, 96 (1), pp. 161 172 21 Forest G Maguelone (2004), “Recent advances in the diagnosis and management of congenital adrenal hyperplasia due to 21 hydroxylase deficiency”, Human Reproduction, Vol 10, No6, pp. 469 485 22 Gelehrter T.D, Collin F.S (1990), Principles of Medical Genetics, William and Wilkins, pp. 299 312 23 Ghizzoni Lucia, Marco Cappa (2011), “Relationship of CYP21A2 genotype and serum 17 – hydroxyprogesterone and cortisol levels in a large cohort of Italian children with premature pubarche”, European Journal of Endocrinology, 165, pp. 307 314 24 Higashi Y, Yoshioka H, Yamane M, Gotoh O, Fuji – K.Y. (1986), “Complete Nucleotide Sequence of Two Steroid 21 Hydroxylase Genes Tandemly Arranged in Human Chromosome: A pseudogene and A Genuine Gene”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, pp. 2841 2845 25 Juan Tian, Guohua Yang (2011), “Molecular diagnosis of two families with classic congenital adrenal hyperplasia”, Gene No, pp. 368 89 63 26 Keegan C. E, Killeen A. A (2001), “An Overview of Molecular Diagnosis of Steroid 21 – Hydroxylase Deficiency”, Journal of Molecular Diagnostics, 3(2), pp. 49 53. 27 Koppens P.F.J. (2002), “Molecular genetics and epidemiology of steroid 21 hydroxylase deficiency origin of disease causing mutations”, Optima grafische communicate, Rotterdam, The Netherland 28 Larsen et al (2003), Congenital Adrenal Hyperplasia, Williams textbook of Endocrinology10th ed, pp. 458 513 29 Levine L.S (2000), “Congenital Adrenal Hyperplasia”, Pediatrics in Review, 21 (5), pp. 159 169 30 Marie I New (1998), “Diagnosis and management of congenital adrenal hyperplasiase”, Annul. Rev. Med, 49, pp. 311 328 31 New M.I, Carlson A, Obeid J, Marshall I, Cabrera M.S. (2001), “Prenatal Diagnosis for Congenital Adrenal Hyperplasia in 532 Pregnancies”, The journal of clinical Endocrinology & Metabolism, 86 (12), pp. 5651 5657 32 Nike M. M. L Stikkelbroeck (2003), “CYP21 Gene Mutation Analysis in 198 Patients with 21 – hydroxylase Deficiency in the Netherlands: Six Novel Mutations and a Specific Cluster of Four Mutations”, Jounal Clin Endocrinol Metab, 88, pp. 3852 3859 33 Nils Krone, Felix G (2005), “Functional Characterization of Two Novel Point mutations in the CYP21Gene causing simple virilizing forms of congenital Adrenal hyperplasia due to 21 hydroxylase deficiency”, The Journal of clinical Endocrinology and Metabolism, 90(1), pp. 445 454 34 Paola Concolino (2009), “Multiplex ligation – dependent probe amplification (MLPA) assay for the detection of CYP21A2 gene deletions/ duplications in Congenital Adrenal Hyperplasia: First technical report”, Clinical Chimica Acta, 402, Elsevier B.V, pp.164 170 64 35 Paulino.L.C (1999), “Mutation distribution and CYP21/C4 locus variability in Brazilian families with the classical form of 21 – Hydroxylase Deficiency”, Journal Acta Pediatric, 88, pp. 275 283 36 Speiser P W (2005), “The Genetics of Steroid 21 – Hydroxylase Deficiency”, The Endocrinologist, 15 (1), pp. 37 41 37 Speiser P.W. (2000), “Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21 hydroxylase deficiency”, Endocrine Reviews, 21(3), pp. 245 291 38 Theodoropoulou M, Barta C, Szoke M, Staub M, Ja’nos S, (2001), “Prenatal Diagnosis of Steroid 21 Hydroxylase Deficiency by Allene – Specific Amplification”, Fetal Diagnosis and Therapy, 16, pp. 237 240 39 Vu C.D, Bui P.T, Kate Armstrong (2010), Growing numbers of children with CAH in Vietnam, Abstract submitted for 6th Congress of APPES. 40 Zuzana Vrzalova (2011), “Chimeric CYP21A1P/CYP21A2 genes identified in Czech patients with congenital adrenal hyperplasia”, European Journal of Medical Genetics, No 54. pp. 112 117 41 White P.C., Grossberger D, Onufer B.J, Chaplin D.D, Dupont B, (1985), “Two genes Encoding Steroid 21 Hydroxylase Are Located Near The Genes Encoding the Fourth Component of Complement in Man”, Proc. Natl. Acad Sci. USA, 82. pp. 1089 1093 65 PHỤ LỤC 1 Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh TSTTBS thể thiếu enzym 21OH 1. Triệu chứng suy thượng thận cấp do thiếu hụt Cortisol và Aldosteron Trẻ nôn nhiều, nôn tự nhiên không liên quan đến bữa bú, đôi khi kèm theo ỉa chảy Do nôn nhiều trẻ bị mất nước, da nhăn nheo, sụt cân, mặt hốc hác, mắt trũng, môi khô Xạm da, đặc biệt là bộ phận sinh dục Trẻ trong tình trạng sốc: Da nổi vân tím, mạch nhanh nhỏ khó bắt, huyết áp tụt, loạn nhịp tim. Trong những trường hợp này trẻ có thể bị chẩn đốn nhầm với tiêu chảy cấp mất nước, viêm ruột hoại tử hoặc một bệnh nhiễm trùng khác Rối loạn điện giải nặng: Na+ giảm, Cl giảm, K+ tăng cao trên 5,2 mEq. Khơng xử lý kịp trẻ sẽ tử vong do trụy mạch hoặc ngừng tim Triệu chứng nam hóa do tăng Testosteron Ở trẻ trai: dương vật to, dài hơn so với tuổi, vùng bìu thâm, tinh hồn bé tương đương với tuổi Ở trẻ gái: bị nam hóa, âm vật phì đại như dương vật, nên có trẻ mới sinh tưởng nhầm con trai. Hai mơi lớn dính vào nhau, nhìn trơng hơi giống bìu, khơng có tinh hồn. Trong trường hợp này trẻ bị khai sinh nhầm con trai * Thể nam hóa đơn thuần Biểu hiện lâm sàng chủ yếu do cường Testosteron gây nam hóa Trẻ trai: Dậy thì sớm giả, dương vật to, dài hơn so với tuổi tuy vậy thể tích tinh hồn bé tương đương với tuổi bệnh nhân, khơng tương xứng với dương vật. Mọc lơng sinh dục sớm Trẻ gái: Âm vật phì đại trơng như dương vật. Âm vật phì đại được chia theo 5 typs của Prader. Hai mơi lớn dính nhau, trơng giống bìu. Khơng có tinh hồn cả khi khám lâm sàng và kiểm tra bằng siêu âm. Phải làm xét nghiệm nhiễm sắc thể mới xác định giới tính chính xác là nữ với Karyotyp 46.XX Tốc độ lớn nhanh, cơ bắp phát triển trơng trẻ lực lưỡng. Tuổi xương sớm so với tuổi thực nhưng do xương đóng sớm nên đến tuổi dậy thì trẻ thấp hơn so với trẻ cùng lứa tuổi khác Giọng ồm, mọc trứng cá, mọc lông sinh dục sớm so với tuổi Triệu chứng xét nghiệm Xét nghiệm máu Cortisol máu giảm Aldosteron giảm Testosteron tăng cao >1 nmol/l Progesteron, 17 OH prgesteron tăng cao > 6.0 nmol/l Điện giải đồ rối loạn: Na+ 5 mEq/l Định lượng enzym 21 hydroxylase thiếu hụt có giá trị chẩn đốn đặc hiệu nhưng hiện nay chưa làm được Xét nghiệm giải trình tự gen và MLPA để tìm đột biến gen CYP21A2 PHỤ LỤC 2 Điều trị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh Nguyên tắc điều trị Tăng sản thượng thận thận bẩm sinh là bệnh điều trị được bằng liệu pháp thay thế hormon thiếu hụt suốt đời, giúp ức chế hormon Testosteron, nhưng tùy theo thể lâm sàng khác nhau, dùng thuốc khác nhau. Bệnh cần phát hiện sớm, điều trị sớm mới tránh được tử vong cho trẻ và đưa trẻ về cuộc sống bình thường Điều trị cụ thể trong cơn suy thượng thận cấp + Thay thế hormon thiếu hụt: *Cortisol: thường dùng Hydrocortison 30 50 mg/m2 hoặc Prednisonlon 15 30 mg tiêm tĩnh mạch chậm, chia hai lần trong ngày * DOCA hoặc DCA 5 mg/ống tiêm bắp sâu hàng ngày Khi trẻ hết nơn, hết mất nước, ăn uống bình thường thì thơi khơng tiêm nữa. Chuyển sang uống Hydrocortison viên 10mg với liều 15 25 mg/m 2 da. Uống Florinef viên 0,1 mg với liều 0,005 0,15 mg/ 24 giờ + Truyền dịch: muối 9 0/00, đường 5% theo tỷ lệ 1:1, sau khi có kết quả điện giải đồ thì bù theo điện giải đồ, đến khi Na+ tăng, K+ giảm về bình thường, trẻ khơng nơn, hết mất nước thì thơi + Nếu K+ tăng cao, phải xử trí cấp cứu thì tiêm Gluconate Canxi 0,5g theo đường truyền tĩnh mạch + Chống nhiễm toan chuyển hóa bằng Bicarbonate 14% theo kết quả của khí máu Điều trị duy trì suốt đời Hydrocortison 10 25 mg/ m2/ ngày, dạng viên 10 mg uống lúc no. Nếu khơng có Hydrocortison thì dùng Prednisolon 5 mg/24 giờ viên uống lúc no Florinef viên 0,1 mg; 0,05 0,15 mg/ngày cho thể mất muối. Uống thêm nước muối đường hàng ngày với lượng Na+ 1 5 mmol/l/ngày Nếu có yếu tố sang chấn nhiễm khuẩn, chấn thương, tăng liều Prednisolon hoặc Hydrocortison 2 3 lần trước khi đưa trẻ đến bệnh viện Phẫu thuật tạo hình cho trẻ gái Nếu bệnh nhân gái sau khi điều trị nội khoa ổn định cần phải mổ phẫu thuật chỉnh hình cắt bỏ âm vật phì đại, tạo hình niệu đạo. Trước đây mổ hai thì, hiện nay mổ một thì. Phẫu thuật có thể từ 6 tháng tuổi giúp cải thiện tình trạng tâm lý cho bệnh nhân và gia đình cải thiện được chức năng sinh dục, sinh sản cho bệnh nhân sau này PHỤ LỤC 3 QUY ƯỚC CÁC KÝ HIỆU SỬ DỤNG TRONG SƠ ĐỒ PHẢ HỆ THEO QUI ĐỊNH CỦA HỘI DI TRUYỀN NGƯỜI QUỐC TẾ Nam, nữ khơng bị bệnh Mối quan hệ vợ chồng Người mang gen dị hợp tử trong di truyền liên kết giới tính Kết hơn cận huyết Người mang gen dị hợp tử Số thứ tự của con trong bệnh di Bệnh nhân Anh, chị, em ruột Khơng rõ giới tính Vơ sinh truyền lặn NST Sinh đơi khác trứng Đối tượng nghiên cứu thường Chết Sinh đôi cùng trứng 11,19,21,23,27,30,33,34,39,41,43,45,47,48,50 110,1218,20,22,2426,28,29,31,32,3538,40,42,44,46,49,51 ... tài: Phát người mang gen bệnh tăng sản thượng thận thể thiếu enzym 21 Hydroxylase bằng kỹ thuật MLPA với mục tiêu: Phát hiện người mang đột biến dị hợp tử gen CYP21A2 ở các thành viên gia đình... TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dương Thị Giang PHÁT HIỆN NGƯỜI MANG GEN BỆNH TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN THỂ THIẾU ENZYM 21 HYROXYLASE BẰNG KỸ THUẬT MLPA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC... sớm bệnh ở các nước phát triển [1] 2.4. Phát hiện người lành mang gen bệnh Người mang gen bệnh (dị hợp tử) rất khó phát hiện khơng biểu hiện tính trạng ra ngồi. Người mang gen bệnh thường có dấu hiệu về lâm sàng hoặc sinh