khả năng chống oxy hóa và phenolic acid của dầu dừa tinh khiết

Bài dịch 2: KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA VÀ PHENOLIC ACID CỦA DẦU DỪA TINH KHIẾT Mục Lục I.TÓM TẮT Các đặc tính chống oxy hóa dầu dừa tinh khiết sản xuất thơng qua q trình lên men lạnh nghiên cứu so sánh với dầu dừa tinh chế, dầu dừa tẩy trắng khử mùi dầu dừa tinh khiết cho thấy khả chống oxy hóa tốt so với dầu dừa tinh chế, dầu dừa tẩy trắng khử mùi(RBD) Dầu dừa tinh khiết sản xuất thông qua phương pháp lên men có ảnh hưởng mạnh mẽ đến việc làm (scavenge) 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl hoạt động chất chống oxy cao dựa phương pháp tẩy trắng linoleate b-carotene Tuy nhiên, dầu dừa tinh khiết thu thơng qua phương pháp làm lạnh có khả khử giảm cao Các axit phenolic phát ferulic acid axit p-coumaric Mối tương quan cao tìm thấy tổng hàm lượng phenolic hoạt động làm (0,91= r), Và tổng hàm lượng phenolic giảm khả khử (0,96= r) Cũng có mối tương quan cao tổng axit phenolic b -carotene hoạt động tẩy trắng Nghiên cứu khả chống oxy hóa dầu dừa tinh khiết hợp chất phenolic II.GIỚI THIỆU Các gốc tự tham gia vào phản ứng sinh lý khác gây thiệt hại nghiêm trọng thường dẫn đến bất hoạt hoàn toàn tế bào Phân tử sinh học protein, lipid DNA bị hư hỏng, gây số bệnh thối hóa (Valco et al 2007) nhiên, Các phản ứng có hại, ngăn ngừa chất chống oxy hóa làm gốc tự giải độc cho thể (Tepe et al 2005) Chất chống oxy hóa hoạt động làm triệt để gốc, chất khử, khả oxy hóa phức tạp cảu kim loại ngăn chặn hình thành phân tử oxy (Ramadan et al 2003) Một mối quan hệ trực tiếp tìm thấy hàm lượng phenolic chống oxy hóa thực vật (Cowan 1999; Robards et al 1999.) Axit phenolic phenol đơn giản, có nguồn gốc từ axit benzoic acid cinnamic Chúng thường tìm thấy axit tự este chúng, glycosides phức chất (Gruz et al 2008) Axit phenolic ý với vai trò chất chống oxy hóa phần thực phẩm báo cáo có gốc antimutagenic, antiproliferative, anticarcinogenetic (Shahidi Naczk 1995; Duthie et al 2000; Kampa et al 2004) Ví dụ, axit ferulic báo cáo có chất chống oxy hóa hoạt động chống viêm tác dụng hiệu ngăn ngừa ung thư (Ou Kwok năm 2004), axit p-coumaric biết đến với chemoprotectant thuộc tính chất chống oxy hóa (Mussatto et al 2007) Dầu dừa có nguồn gốc từ hạt dừa, Cocos nucifera dầu dừa thương phẩm làm từ cơm dừa thịt khô hạt nhân dừa qua trình tinh chế, tẩy khử mùi Mặt khác, dầu dừa tinh khiết (VCO) thu từ tươi, hạt nhân trưởng thành dừa phương pháp học tự nhiên, có khơng có việc sử dụng nhiệt khơng trải qua tinh luyện hóa (Villarino et al 2007) Dầu chưa tinh chế trở thành mối quan tâm lớn nhu cầu người tiêu dùng sản phẩm thực phẩm tự nhiên an toàn Dầu dừa xem chất béo bão hòa có chứa 90% axit béo bão hòa Nghiên cứu dịch tễ học cho việc tiêu thụ cao lượng chất béo bão hòa cholesterol dẫn đến cholesterol cao máu (tiếng Đức Dillard 2004) Tuy nhiên, dầu dừa chứa lượng cao chuỗi trung bình triacylglycerol, có lợi cho sức khỏe (Chế Mân Marina 2006) Ngoài ra, Nevin Rajamohan (2004) báo cáo phần phenolic tách từ VCO ngăn cản trình oxy hóa chất béo mật độ thấp lipoprotein, VCO bổ sung chế độ ăn uống tăng tình trạng chống oxy hóa chuột (Nevin Rajamohan 2006) Tuy nhiên, nghiên cứu thành phần phenolic VCO hạn chế Một số axit phenolic xác định VCO axit caffeic, p-coumaric acid axit ferulic (Seneviratne Dissanayake 2008) Có thơng tin khả chất chống oxy hóa dầu dừa VCO tương quan với hợp chất phenolic Các nghiên cứu tiến hành để đánh giá khả chống oxy hóa phần phenolic VCO sản xuất phương pháp khác sau xác định mối tương quan với hợp chất phenolic III.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 1.Vật liệu Giống dừa Mawar mua từ thị trường địa phương Selangor, Malaysia Loại dừa sử dụng để sản xuất VCO dầu dừa Tinh chế, tẩy khử mùi (RBD) (Selangor, Malaysia) mua từ Moi Foods Sdn Bhd 2.Chuẩn bị mẫu VCO sản xuất theo phương pháp Nevin Rajamohan (2004) với số sửa đổi Nội nhũ sữa dừa trưởng thành nạo làm thành bùn sền sệt vắt qua miếng vải thưa để có sữa dừa Để có VCO qua (CH) kỹ thuật lạnh, sữa dừa ly tâm (model 2100; Kubota, Fujioka, Nhật Bản) 3.500 rpm Kem dừa thu được đông lạnh 48 sau sưởi ấm nhẹ (508C) lò nhiệt (model ULM 500; Memmert, Schwabach, Đức) 2h Kem dừa bị ly tâm 3500 rpm để tách dầu loại kem Để có VCO thơng qua kỹ thuật lên men (FE), sữa dừa lại để nhiệt độ phòng 12h Dầu lên lớp hút sử dụng để phân tích thêm Dầu dừa RBD sử dụng kiểm soát.Tất hóa chất thuốc thử sử dụng loại phân tích 3.Chuẩn bị chiết xuất polyphenol Chiếc xuất phenolic từ dầu thử nghiệm theo Nevin Rajamohan (2004) Một thời gian ngắn, 10 g dầu hòa tan 50 ml hexan chiết xuất với 60% methanol (3? 20 ml) liên tục Ba chiết xuất gộp chung dung môi bốc đến khô (408C) cách sử dụng thiết bị bay quay (model R-210; Buchi, Flawil, Thụy Sĩ) Các kết chiết xuất hòa tan lượng biết methanol để tiếp tục phân tích 4.Xác định tổng hàm lượng phenolic Tổng hàm lượng phenolic xác định theo phương pháp Gutfinger (1981) với số sửa đổi.Phân ước mẫu thử (1 mg / ml) pha trộn với ml thuốc thử Folin? Ciocalteu (trước pha loãng đến 10 lần với nước cất) Một dung dịch natri cacbonat 7,5% (0,8 ml) thêm vào để yên nhiệt độ phòng 30 phút độ hấp thụ đọc 725 nm Tổng hàm lượng phenolic thể tương đương axit gallic 100g dầu 5.Xác định khả chống oxy hóa hoạt động làm Gốc tự DPPH Các hoạt động làm gốc tự bền vững 1,1-diphenyl-2 picrylhydrazyl (DPPH) xác định theo phương pháp Shimada et al (1992) methanol chiết xuất dầu (210 mg / ml) trộn với ml dung dịch methanol có chứa gốc DPPH (0,2 mM) Hỗn hợp lắc mạnh để 30 phút bóng tối, sau hấp thụ xạ 517 nm với mẫu trắng tỷ lệ phần trăm ức chế hoạt động tính toán sau [(A0? A1) / A0] x 100, A0 độ hấp thụ mẫu chuẩn (không chứa chiết xuất mẫu) A1 độ hấp thụ chiết xuất Các EC50 (mg / ml) giá trị tính tốn dựa số lượng dầu dừa chiết xuất cần thiết để làm giảm gốc tự DPPH ban đầu nồng độ 50% a-Tocopherol sử dụng điều khiển tích cực a-Tocopherol thường sử dụng để chống lại gốc tự thực phẩm hệ thống sinh học, thường dùng chất chống oxy hóa mẫu Hoạt động tẩy trắng b-carotene - linoleate Các hoạt động chống oxy hóa chiết xuất b-carotene -linoleate đánh giá hệ thống mẫu mô tả Amin Tân (2002) Phương pháp dựa mát màu vàng b-carotene tương tác với gốc tự hình thành q trình oxy hóa axit linoleic nhũ tương Một ml dung dịch b-carotene (0,2 mg / ml chloroform) hút vào bình đáy tròn (250 ml) chứa 0,02 ml axit linoleic 0,2 ml 100% chất nhũ tương 20 Hỗn hợp bốc 40oC 10 phút pha loãng với 100 ml nước cất Phân ước năm ml nhũ tương chuyển vào ống nghiệm khác có chứa 0,2 ml mẫu nồng độ cuối mg / ml Các ống đồng hóa đặt cốc nước 45oC 2h Độ hấp thụ mẫu đọc 470 nm vào thời điểm ban đầu (t0) với mẫu trắng, bao gồm nhũ tương mà khơng có b-carotene Tiêu chuẩn (a-tocopherol) nồng độ tương tự mẫu sử dụng để so sánh Một mẫu 0,2 ml methanol ml nhũ tương sử dụng mẫu chuẩn Các phép đo thực khoảng thời gian 15 đến 120 phút Các hoạt động chống oxy hóa (AA) đo lường dựa phương trình: AA (%)? [1- (A0 – At) / (Ao0 - Aot)] X 100, A giá trị hấp thụ đo thời gian ban đầu mẫu, Ao0 giá trị hấp thụ đo thời gian ủ bệnh ban đầu để kiểm soát, At giá trị hấp thụ đo mẫu t 120 phút, At giá trị hấp thụ đo kiểm soát t 120 phút 6.Khả khử Khả khử xác định theo Yên Duh (1995) Nồng độ methanol Khác chiết suất (2.0? 10 mg / ml) pha trộn với dung dịch phosphate đệm(2,5 ml, 0,2 M, pH 6.6) potassium ferricyanide (2,5 ml, 1% w / v) ủ 50oC 20 phút Sau thêm 2,5 ml axit tricloaxetic (10% w / v), hỗn hợp ly tâm (model 2100; Kubota) 10 phút 3.000 rpm Các lớp dung dịch (2,5 ml) trộn với nước cất (2,5 ml) sắt III clorua (0,5 ml, 0,1% w / v) Độ hấp thụ sau đọc 700 nm 7.Xác định hợp chất phenolic Điều ngược pha hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao gồm aWaters 2965 điều khiển với mảng photodiode dò Waters 2996 (Waters Inc., Milford, MA, USA) sử dụng nghiên cứu Một Sperisorb ODS-2 cột (5 mm, 250 mm, 4.6 mm id; Waters, Luton, Anh) sử dụng Các mẫu tách rửa theo phương pháp Owen et al (2000) với số sửa đổi Sự tách biệt đạt cách sử dụng đường chuẩn pha động gồm 2% axit axetic nước (dung dịch A) methanol (dung dịch B) Đường chuẩn bắt đầu sử dụng 95% dung dịch A 5%, dung dịch B phút Trong phút tiếp theo, dung dịch A giảm xuống 70% dung dịch B tăng lên đến 30% Một thành phần 65% dung dịch A 35% dung dịch B sử dụng thêm 10 phút Một lượng giải pháp A B sử dụng 10 phút Cuối cùng, 100% dung dịch B sử dụng hoàn thành việc chạy 40 phút Các điều kiện hoạt động sau: Nhiệt độ cột, 308C; khối lượng tiêm, 20 ml; mảng phát photodiode, 278 nm; tỷ lệ, ml / phút Xác định hợp chất phenolic đạt cách so sánh thời gian lưu giữ chúng với tiêu chuẩn xác thực Các phần mềm Empower (Waters Inc.) sử dụng để xử lý liệu 8.Phân tích thống kê Dữ liệu thể độ lệch chuẩn trung bình ba lần phân tích Phân tích phương sai xét nghiệm khác biệt quan trọng tiến hành để xác định khác biệt phương tiện sử dụng SAS thống kê máy tính trọn gói phiên 6.12 (SAS, Cary, NC, USA) Ý nghĩa thống kê P Dầu CH> dầu RBD (Bảng II) Có ý nghĩa khác biệt (PB0.05) giá trị EC50 số loại dầu nghiên cứu Theo Moure et al (2001), điều kiện chế biến dẫn đến mức giảm gốc tự hoạt động làm So với dầu FE, dầu CH trải qua nhiều bước xử lý trình chuẩn bị mẫu, chẳng hạn làm lạnh sưởi ấm, điều giải thích hoạt động làm gốc tự thấp so với dầu FE Khơng có liệu có sẵn tài liệu liên quan đến hoạt động làm VCO để so sánh kết nghiên cứu Bảng II hoạt động làm gốc tự (EC50) VCO (dầu FE dầu CH) dầu dừa RBD 10 Việc tẩy trắng phương pháp b-carotene sử dụng để đánh giá hoạt động chất chống oxy hóa loại dầu nghiên cứu so với số chất chống oxy hóa tổng hợp biết đến a-tocopherol Các gốc peroxyl, hình thành từ tách nguyên tử hydro từ nhóm methylene diallylic axit linoleic, công vào cao phân tử b-carotene không bão hòa Kết là, b-carotene oxy hóa, chia nhỏ màu da cam (Jayaprakasha et al 2001) Việc bổ sung chất chiết xuất từ dầu nghiên cứu có khả ngăn chặn tẩy trắng b-carotene mức độ khác Tỷ lệ AA giảm theo thứ tự a-tocopherol> Dầu FE> Dầu CH> Dầu RBD (Hình 2) So với a-tocopherol (tiêu chuẩn), VCO có AA thấp đáng kể Dầu FE cho thấy hoạt động quan trọng chống oxy hóa (71%), giải thích (PB0.05) cao tổng hàm lượng phenolic đáng kể (Hình 1) Dầu RBD (56%) chứng minh hoạt động ức chế thấp Kết thỏa thuận với nghiên cứu Dia et al (2005), theo dầu dừa RBD cho thấy hoạt động chống oxy hóa thấp Bảng III trình bày khả khử dầu so với a-tocopherol Các tính khử tăng với gia tăng nồng độ mẫu Mặc dù lớn tính khử quan sát thấy tiêu chuẩn (a-tocopherol), VCO trưng bày hoạt tính khử mạnh CH dầu sở hữu tính khử cao với độ hấp thụ 1.02, dầu FE (0.64) dầu RBD (0.37) 10 mg / ml Các kết VCO có khả khử tốt so với dầu RBD 11 Hình AA (%) VCO (dầu FE dầu CH) dầu dừa RBD sử dụng bcarotene tẩy trắng khảo nghiệm Giá trị với chữ thường khác khác đáng kể P