Nghiên cứu sự biến đổi của Super Oxidase Dimutase, Glutathion Peroxidase và tình trạng chống oxy hóa toàn phần (TAS) ở bệnh nhân viêm gan B mạn tính (FULL TEXT)

ĐẶT VẤN ĐỀ Trong các bệnh gan mạn tính, viêm gan vi rút B là một bệnh truyền nhiễm ở người do vi rút viêm gan B (Hepatitis B virus, HBV) gây nên, một bệnh để lại nhiều hậu quả nghiêm trọng [7], [96]. Theo báo cáo của Tổ chức Y tế Thế giới năm 2012, ước tính có hơn 2 tỷ người đã nhiễm HBV và khoảng 240 triệu người đang mang HBV mạn tính [111]. Bệnh nhân viêm gan B mạn tính (Chronic Hepatitis B - CHB) không được điều trị thường tiên lượng xấu, có thể sẽ dẫn đến xơ gan hoặc ung thư tế bào gan [75]. Hàng năm trên thế giới có khoảng 500 - 700 nghìn người tử vong vì hậu quả của nhiễm HBV [111]. Nhiễm HBV mạn tính là một yếu tố nguy cơ quan trọng trong sinh bệnh học của viêm gan mạn tính, xơ gan và ung thư gan [51], [85]. Đột biến vùng lõi, vùng Pres và gen X là những yếu tố quan trọng trong sinh bệnh học của ung thư biểu mô tế bào gan [32], [51], [91]. Cả hai yếu tố này đều được gắn liền với quá trình stress oxy hóa, quá trình này có thể gây tổn thương lipid, protein và DNA ở mức độ tế bào. Trong cơ thể luôn hình thành một sự cân bằng giữa các dạng oxy hoạt động và các chất chống oxy hóa, đây là một trạng thái cân bằng nội môi nhằm duy trì hoạt động bình thường. Khi mất cân bằng làm gia tăng các dạng oxy hoạt động, được gọi là trạng thái stress oxy hóa… Như vậy, trạng thái stress oxy hóa chính là rối loạn cân bằng giữa các chất chống oxy hóa và chất oxy hóa theo hướng thiên về tạo ra các chất oxy hóa [36]. Tình trạng strees oxy hóa đóng có một vai trò nhất định trong bệnh sinh của bệnh gan mạn tính [19]. Tế bào gan sẽ bị tổn thương khi có dư thừa các gốc tự do trong cơ thể có nguồn gốc từ oxy và nitơ [51]. Ngoài ra stress oxy hóa cũng liên quan đến mức độ của bệnh, ở những bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính, quá trình peroxy hóa lipid và tổn thương DNA tăng cao [19], [53], [58]. Các enzym như superoxid dismutase (SOD) và glutathion peroxidase (GPx) là những enzym chống oxy hóa cơ bản nhất của cơ thể, trong đó SOD có tác dụng thu dọn các gốc tự do khơi mào phản ứng; GPx có tác dụng làm giảm nồng độ các gốc tự do hoạt động [22]. Bên cạnh đó, tình trạng chống oxy hoá toàn phần trong cơ thể (TAS) có ý nghĩa vô cùng quan trọng trong việc dự báo khả năng đáp ứng cơ thể với hiệu quả loại bỏ gốc tự do sinh ra. Nhiều nghiên cứu cho thấy hoạt độ SOD, GPx và nồng độ TAS giảm đáng kể ở nhóm bệnh nhân viêm gan B mạn tính so với nhóm chứng khỏe mạnh hoặc nhóm người mang vi rút không triệu chứng [18], [24]; đồng thời theo một số tác giả qua việc xác định hoạt độ của các chất chống oxy hóa có thể đánh giá tình trạng stress oxy hóa [41]. Những vấn đề này ở Việt Nam chưa được nghiên cứu có hệ thống ở bệnh nhân viêm gan B mạn tính. Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài này nhằm mục tiêu: 1. Xác định hoạt độ SOD, GPx và tình trạng chống oxy hóa toàn phần (TAS) huyết tương ở bệnh nhân viêm gan B mạn tính. 2. Đánh giá mối liên quan hoạt độ SOD, GPx và TAS trong huyết tương với lâm sàng và cận lâm sàng ở bệnh nhân viêm gan B mạn tính.

0 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO – BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN BẠCH ĐẰNG NGHIÊN CỨU SỰ BIẾN ĐỔI CỦA SUPER OXIDASE DIMUTASE, GLUTATHION PEROXIDASE VÀ TÌNH TRẠNG CHỐNG OXY HĨA TỒN PHẦN (TAS) Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN B MẠN TÍNH LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC HÀ NỘI 2017 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong bệnh gan mạn tính, viêm gan vi rút B bệnh truyền nhiễm người vi rút viêm gan B (Hepatitis B virus, HBV) gây nên, bệnh để lại nhiều hậu nghiêm trọng [7], [96] Theo báo cáo Tổ chức Y tế Thế giới năm 2012, ước tính có tỷ người nhiễm HBV khoảng 240 triệu người mang HBV mạn tính [111] Bệnh nhân viêm gan B mạn tính (Chronic Hepatitis B - CHB) không điều trị thường tiên lượng xấu, dẫn đến xơ gan ung thư tế bào gan [75] Hàng năm giới có khoảng 500 - 700 nghìn người tử vong hậu nhiễm HBV [111] Nhiễm HBV mạn tính yếu tố nguy quan trọng sinh bệnh học viêm gan mạn tính, xơ gan ung thư gan [51], [85] Đột biến vùng lõi, vùng Pres gen X yếu tố quan trọng sinh bệnh học ung thư biểu mô tế bào gan [32], [51], [91] Cả hai yếu tố gắn liền với trình stress oxy hóa, q trình gây tổn thương lipid, protein DNA mức độ tế bào Trong thể ln hình thành cân dạng oxy hoạt động chất chống oxy hóa, trạng thái cân nội mơi nhằm trì hoạt động bình thường Khi cân làm gia tăng dạng oxy hoạt động, gọi trạng thái stress oxy hóa… Như vậy, trạng thái stress oxy hóa rối loạn cân chất chống oxy hóa chất oxy hóa theo hướng thiên tạo chất oxy hóa [36] Tình trạng strees oxy hóa đóng có vai trò định bệnh sinh bệnh gan mạn tính [19] Tế bào gan bị tổn thương có dư thừa gốc tự thể có nguồn gốc từ oxy nitơ [51] Ngồi stress oxy hóa liên quan đến mức độ bệnh, bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính, trình peroxy hóa lipid tổn thương DNA tăng cao [19], [53], [58] Các enzym superoxid dismutase (SOD) glutathion peroxidase (GPx) enzym chống oxy hóa thể, SOD có tác dụng thu dọn gốc tự khơi mào phản ứng; GPx có tác dụng làm giảm nồng độ gốc tự hoạt động [22] Bên cạnh đó, tình trạng chống oxy hố tồn phần thể (TAS) có ý nghĩa vơ quan trọng việc dự báo khả đáp ứng thể với hiệu loại bỏ gốc tự sinh Nhiều nghiên cứu cho thấy hoạt độ SOD, GPx nồng độ TAS giảm đáng kể nhóm bệnh nhân viêm gan B mạn tính so với nhóm chứng khỏe mạnh nhóm người mang vi rút khơng triệu chứng [18], [24]; đồng thời theo số tác giả qua việc xác định hoạt độ chất chống oxy hóa đánh giá tình trạng stress oxy hóa [41] Những vấn đề Việt Nam chưa nghiên cứu có hệ thống bệnh nhân viêm gan B mạn tính Vì vậy, chúng tơi thực đề tài nhằm mục tiêu: Xác định hoạt độ SOD, GPx tình trạng chống oxy hóa tồn phần (TAS) huyết tương bệnh nhân viêm gan B mạn tính Đánh giá mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS huyết tương với lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân viêm gan B mạn tính CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số hiểu biết gốc tự y sinh học 1.1.1 Khái niệm gốc tự Gốc tự nguyên tử, nhóm nguyên tử hay phân tử mà lớp ngồi chúng có điện tử đơn độc quỹ đạo (điện tử khơng cặp đơi) [89], chúng mang điện tích âm khơng mang điện có khả phản ứng cao Quá trình sinh gốc tự q trình chuyển hóa bình thường thể Bình thường gốc tự tồn thể với nồng độ thấp tham gia vào số chức sinh lý định Với việc nhận điện tử oxy tạo gốc superoxyd (O2-), gốc tự hình thành có khả phản ứng cao hydro peroxyd (H2O2), oxy đơn bội (1O2), gốc hydroxyl (HO), lipid peroxyd (LO) …, người ta gọi dạng oxy hoạt động 1.1.2 Đặc điểm gốc tự (R∙) Các gốc tự có tính oxy hóa mạnh, có xu hướng lấy điện tử phân tử bên cạnh ghép đôi với điện tử gốc tự Phân tử bị điện tử lại trở thành gốc tự tác dụng lan truyền, nguyên nhân sinh chuỗi phản ứng gốc Vì chứa điện tử khơng cặp đôi nên gốc tự bất ổn định lượng mặt động học Gốc tự có xu hướng điện tử để trở thành gốc khử nhận điện tử để trở thành gốc oxy hóa Các gốc tự chủ yếu dạng oxy hoạt động hình thành qua chuỗi hơ hấp tế bào, q trình peroxyd hóa lipid acid béo chưa bão hòa có nhiều liên kết đơi Các gốc tự dạng oxy hoạt động có khả phản ứng hóa học mạnh, chúng tác dụng dễ dàng với phân tử sinh học gồm lipid, protein, acid nucleic gây tác hại đến tính chất sinh học phân tử Hậu trình bẻ gãy liên kết, tạo gốc tự để hình thành liên kết mới, chất qua phản ứng gốc Trong đời sống tế bào bình thường, oxy nhiên liệu chủ yếu cần thiết cho sống tế bào nguồn gốc sản sinh gốc tự Các dạng oxy hoạt động (reactive oxygen species - ROS) gốc tự do, ion hoạt động, phân tử có chứa nguyên tử oxy, có khả sinh gốc tự hoạt hóa gốc tự [89] Các gốc tự thể tạo thường xuyên: qua chuỗi hô hấp tế bào, tác nhân phóng xạ, hội chứng viêm, tượng thiếu máu cục - tưới máu lại, tác nhân xenobiotic số tác nhân khác Những dạng ROS quan trọng thể sinh vật gồm: anion superoxyd O2-, hydrogen peroxyde (H2O2), gốc hydroxyl (•OH), oxy đơn bội O2, gốc alkoxyl (LO•) peroxyl (LOO•) … Hình 1.1 Các dạng oxy hoạt động thể Nguồn: Jes´us Medina and Ricardo Moreno-Otero (2006)[76] + Superoxyd tạo thành từ chuỗi hô hấp tế bào từ số phản ứng tự oxy hóa q trình bùng nổ hô hấp tượng thực bào e- + •O-O• O2- + Hydrogen peroxyd (H2O2) hình thành sau phản ứng dị ly O2- phản ứng khử hai điện tử oxy [89] H2O2 có hoạt tính hóa học hạn chế, chất tan lipid xuyên qua màng sinh học + Gốc hydroxyl (•OH) hình thành từ phản ứng Fenton phản ứng Haber-Weiss xảy chậm [89] H2O2 + Fe2+ Fe3+ + -OH + -OH Khả phản ứng gốc hydroxyl lớn mơi trường sinh học, có khả phản ứng với nhiều thành phần tế bào + Gốc alkoxyl (LO•) peroxyl (LOO•), tạo tác động gốc tự có chứa oxygen (O2-, HO• ) chuỗi acid béo có nhiều nối đôi + Oxy đơn bội (1O2) dạng oxy có lượng cao, hình thành O2 cung cấp lượng, khơng phải gốc tự có khả oxy hóa cực mạnh Oxy đơn bội tạo thành hệ thống sinh học số sắc tố chlorophyll, retinal flavin chúng chiếu sáng với có mặt oxy Tất gốc tự oxy dạng oxy hoạt động gọi chất oxy hóa (oxydant) tác nhân gây stress oxy hóa 1.1.3 Quá trình hình thành gốc tự Các gốc tự thể tạo thường xuyên: qua chuỗi hơ hấp tế bào, tác nhân phóng xạ, hội chứng viêm, tượng thiếu máu cục - tưới máu lại, tác nhân xenobiotic số tác nhân khác 1.1.3.1 Chuỗi hô hấp tế bào Hô hấp tế bào thực ty thể, bao gồm phản ứng oxy hóa khử oxy để sinh nước lượng dạng ATP (phản ứng oxy hóa khử q trình cho nhận điện tử, sản sinh gốc), O2 mà hít thở nhận điện tử bước tạo O2- O2- sinh tỷ lệ thuận với cường độ hô hấp tế bào (tỷ lệ với lượng sinh ra), gốc anion độc hại mức trung bình chúng bị phân hủy nhiều chế khác Sự phân huỷ O2- xúc tác enzym SOD, chuyển thành H2O2 theo chế tự oxy hóa khử O2- + 2H+ H2O2 + O2 H2O2 thường xuyên sinh phân hủy O2-, nồng độ H2O2 (10-8 mol/L) O2- (10-12 mol/L) tế bào tương đối ổn định Tuy nồng độ thấp vậy, tồn đồng thời chúng môi trường sinh học nguy hại Phản ứng chúng sinh sản phẩm 1O2 nguy hại, gốc •OH với hoạt tính cao, có khả phá hủy cấu trúc hữu bền vững thể gây trình bệnh lý Khi khơng có mặt ion Fe2+, Cu2+ phản ứng xảy chậm, gọi phản ứng Harber-Weiss O2- + H2O2 HO• + HO- + 1O2 Khi có mặt ion Fe2+, Cu2+ tốc độ phản ứng xảy nhanh (phản ứng Fenton) Hai tiểu phân O2- H2O2 khơng độc tạo 1O2, • OH có khả phản ứng cao, dễ dàng phản ứng với chất hữu tạo peroxyd từ tạo nhiều sản phẩm độc hại cho tế bào O2- + H+ H2O2 + O2 Và ion kim loại chuyển tiếp (Fe2+, Cu2+) dễ dàng phân tách H2O2 thành gốc hydroxyl [89] HO• + HO- + Fe3+ Fe2+ + H2O2 Gốc •OH có khả phản ứng mạnh với hầu hết phân tử sinh học tốc độ khuếch tán, thường phản ứng trước khuếch tán tới nơi có khoảng cách xa tế bào 1.1.3.2 Tác nhân phóng xạ Các tia phóng xạ xạ có lượng cao, có khả bẻ gãy phân tử tạo hay nhiều gốc tự Trong thể chiếm phần lớn nước, xạ có lượng cao tác động thể, phân huỷ nước tạo thành phân tử khác sản sinh gốc tự 1.1.3.3 Trong hội chứng viêm Khi tác nhân (là kháng nguyên) xâm nhập vào thể bị bạch cầu đa nhân trung tính bắt giữ, đồng thời lại kích hoạt bạch cầu đa nhân trung tính tăng tiêu thụ oxy, kích thích enzym màng tế bào NADPH-oxydase, từ gây phản ứng xúc tác enzym này, kết cuối tạo O2- Nếu số lượng gốc tự sinh nhiều gây nên tỷ lệ bạch cầu bị chết, giải phóng gốc ROS ngoại bào gây nên tượng viêm 1.1.3.4 Trong trình thiếu máu cục tưới máu lại Khi thiếu máu cục lòng mạch máu bị hẹp có cục máu đơng, chất xanthine tích lũy tăng thối hóa ATP xanthine oxydase hoạt hóa Khi có tưới máu trở lại, với có mặt oxy, xanthine oxydase xúc tác phản ứng chuyển điện tử từ hypoxanthine xanthine sang O2 phản ứng oxy hóa xảy mạnh, lượng lớn gốc O2- hình thành lại chuyển thành H2O2, •OH 1O2 [89] H+ Xanthin dạng oxy hoá + O2- Xanthin + O2 H+ O2- H2O2 + O2 1.1.3.5 Tác nhân xenobiotic Các chất xenobiotic (thuốc trừ sâu, thuốc diệt cỏ, chì, CCl 4, dioxyn ) xâm nhập vào thể nhiều đường khác nhau, vào thể bị chuyển hóa làm biến đổi sinh học Sau q trình chuyển hóa đó, cấu trúc xenobiotic bị biến đổi rõ rệt, chúng gắn thêm nhóm -OH, -NH2, -SH, -COOH tạo thành chất dễ tan nước tiếp tục liên hợp với chất, đào thải khỏi thể Trong trình chuyển hóa chất xenobiotic, tạo dạng ROS O2-, 1O2 có độc tính cao gây tình trạng stress oxy hóa Các chất chống oxy hóa thể SOD, catalase, protein có nhóm SH, ceruloplasmin hồng cầu gan nhạy cảm với xenobiotic Do vậy, có xenobiotic xâm nhập vào thể, chất chống oxy hóa thay đổi theo hướng chống lại tác nhân 1.1.3.6 Một số tác nhân khác Trong số bệnh lý: bệnh đái đường, vữa xơ động mạch, bệnh lý nhãn khoa, lão hóa, bệnh Parkinson Alzheimer…cũng tăng tạo dạng ROS 1.1.4 Trạng thái Stress oxy hóa Khoa học minh chứng, oxy vào thể tham gia nhiều phản ứng hóa học kết q trình phản ứng tạo lượng cho hoạt động sống đồng thời nguồn sinh gốc tự Bình thường gốc tự tồn thể với nồng độ thấp tham gia vào số chức sinh lý định Với việc nhận điện tử oxy tạo gốc superoxyd (O2-), gốc tự hình thành có khả phản ứng cao hydro peroxyd (H2O2), oxy đơn bội (1O2), gốc hydroxyl (HO), lipid peroxyd (LO) …, người ta gọi dạng oxy hoạt động Các nghiên cứu cho thấy nhiều chất có khả loại bỏ dạng oxy hoạt động gọi chất chống oxy hóa Các chất chống oxy hóa có chất enzym như: SOD, GPx, glutathion (GSH) Các chất chống oxy hóa có chất khơng enzym vitamin C, vitamin E, vitamin A, selen, β-caroten [22], [89] Trong thể ln hình thành cân dạng oxy hoạt động chất chống oxy hóa Nếu lý (cơ thể nhiễm xạ, hóa chất, độc tố, nhiễm vi rút, viêm nhiễm cấp tính ) làm gia tăng dạng oxy hoạt động, khơng cân chất oxy hóa chất chống oxy hóa, người ta gọi trạng thái stress oxy hóa [36] Nếu stress oxy hóa mức độ nhẹ, phân tử sinh học bị tổn thương sửa chữa thay Ở mức độ nặng nề hơn, stress oxy hóa gây tổn thương không hồi phục chết tế bào [116] 1.2 Hệ thống chống oxy hóa thể Hệ thống chống oxy hóa (antioxydant - system) thể đa dạng phức tạp bao gồm enzym chất khơng có chất enzym [22] Trong thể tồn dạng oxy hoạt động, đồng thời tồn hệ thống chống oxy hóa để loại bỏ tác hại chúng Hệ thống hoạt động theo đường sau: (1) Tạo phức làm khả xúc tác kim loại chuyển tiếp (transferin); (2) Làm gián đoạn phản ứng lan truyền (α-tocoferol); (3) Làm giảm nồng độ gốc tự hoạt động (glutathion); (4) Thu dọn gốc tự tham gia khơi mào phản ứng (superoxyd dismutase) 1.2.1 Các chất chống oxy hóa có chất enzym 1.2.1.1 Superoxyd dismutase (SOD) Superoxyd dismutase enzym chống oxy hóa có chứa kim loại thuộc lớp oxydoreductase thực chức xúc tác phản ứng chuyển hóa superoxyd thành O2 H2O2 [22]: O2- + 2H+ 2H2O + O2 Bệnh viện 103 Khoa: MẪU BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU (Mã NC: ) Hành chính: Họ tên bệnh nhân: Tuổi: Giới: Nam/ Nữ Địa chỉ: Ngày vào viện: Ngày viện: Số bệnh án: Số lưu trữ: Tóm tắt bệnh sử: 2.1 Lý vào viện: 2.2 Quá trình bệnh lý Thời gian bắt đầu phát HbsAg (+): Tiền sử tăng men gan: Có Tiền sử điều trị thuốc kháng vi rút: Khơng Có Gia đình: Triệu chứng lâm sàng Mệt mỏi: Có Khơng Ăn kém: Có Khơng Sợ mỡ: Có Khơng Rối loạn tiêu hóa: Có Khơng Khơng Đau tức vùng gan: Có Khơng Vàng da, vàng niêm mạc: Có Khơng Ngứa: Có Khơng Tiểu vàng: Có Khơng Gan to bờ sườn: Có Khơng Chảy máu chân răng: Có Khơng Xuất huyết da: Có Khơng Xét nghiệm máu 4.1 Các xét nghiệm sinh hóa huyết học Chỉ tiêu Kết XN Albumin máu (g/l) Bilirubin toàn Chỉ tiêu Kết XN AST (UI/L) phần ALT (UI/L) (µmol/l) Bilirubin trực tiếp (µmol/l) GGT Ure máu (mmol/l) Hồng cầu (G/l) Creatinin máu (mmol/l) Bạch cầu (T/l) Protein máu (g/l) Tiểu cầu (g/l) HST (g/l) 4.2 Các xét nghiệm dấu ấn huyết - HBsAg: Dương tính Âm tính - anti HBc – IgG: Dương tính Âm tính - HbeAg: Dương tính Âm tính - anti Hbe: Dương tính Âm tính - Anti HCV: Dương tính Âm tính - Anti HIV: Dương tính Âm tính 4.3 Các xét nghiệm đông máu PT (s): APTT (s): Fibrinogen (g/l): 4.4 Định lượng nồng độ vi rút HBV - DNA Kết xét nghiệm giải phẫu mô bệnh học, tế bào học Mức độ tổn thương Điểm Knodell Ghi Hoại tử mối gặm cầu nối Thối hóa tiểu thùy, hoại tử ổ Viêm khoảng cửa Xơ Tổng điểm số hoạt động mô học (HAI) Mức độ viêm gan mạn: Nhẹ Vừa Nặng Giai đoạn: Không xơ Xơ vừa Xơ Xơ nhẹ nặng Kết xét nghiệm hoạt độ chất chống oxy hóa SOD (U/ml) GPx (U/ml): Trạng thái chống oxy hóa tồn phần – TAS (U/ml): Xác nhận GVHD Nghiên cứu sinh MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số hiểu biết gốc tự y sinh học 1.1.1 Khái niệm gốc tự 1.1.2 Đặc điểm gốc tự (R∙) 1.1.3 Quá trình hình thành gốc tự 1.1.4 Trạng thái Stress oxy hóa 1.2 Hệ thống chống oxy hóa thể 1.2.1 Các chất chống oxy hóa có chất enzym 9 1.2.2 Hệ thống chống oxy hoá có chất khơng enzym 12 1.2.3 Trạng thái chống oxy hóa tồn phần (TAS) 14 1.3 Bệnh gan mạn tính vi rút B 15 1.3.1 Tình hình nhiễm HBV mạn tính giới Việt Nam 15 1.3.2 Đặc điểm cấu trúc hệ gen HBV 17 1.3.3 Quá trình nhân lên HBV 20 1.3.4 Đáp ứng miễn dịch nhiễm HBV mạn tính 22 1.3.5 Diễn biến tự nhiên nhiễm HBV mạn tính 23 1.3.6 Chẩn đốn viêm gan B mạn tính 25 1.4 Stress oxy hóa bệnh lý viêm gan B mạn tính 27 1.4.1 Stress oxy hóa bệnh nhân viêm gan B mạn tính 28 1.4.2 Vai trò chất chống oxy hóa bệnh nhân viêm gan B 33 mạn tính 1.5 Một số nghiên cứu nước hoạt độ SOD, GPx 35 TAS bệnh nhân viêm gan B mạn tính CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 39 39 2.1.1 Nhóm bệnh 40 2.1.2 Nhóm chứng 41 2.2 Phương pháp nghiên cứu 41 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 41 2.2.2 Cỡ mẫu 41 2.2.3 Phương tiện nghiên cứu 41 2.3 Nội dung tiêu nghiên cứu 42 2.3.1 Nghiên cứu lâm sàng 42 2.3.2 Nghiên cứu cận lâm sàng 43 2.3.3 Xét nghiệm hoạt độ enzym chống oxy hoá trạng thái 44 trạng thái chống oxy hóa tồn phần 2.3.4 Sinh thiết gan 53 2.4 Xử lý số liệu 57 2.5 Các biện pháp khống chế sai số hạn chế đề tài 57 2.5.1 Các biện pháp khống chế sai số 57 2.5.2 Hạn chế đề tài 58 2.6 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 58 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 60 3.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu nhóm chứng 60 3.1.1 Đặc điểm tuổi giới 60 3.1.2 Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh nhân viêm gan B 61 mạn tính 3.2 Xác định hoạt độ SOD, GPx tình trạng chống oxy hóa 64 toàn phần (TAS) huyết tương bệnh nhân viêm gan B mạn tính 3.3 Đánh giá mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS 64 huyết tương với lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân viêm gan B mạn tính 3.3.1 Mối liên quan với tuổi 66 3.3.2 Mối liên quan với đặc điểm lâm sàng 68 3.3.3 Mối liên quan với đặc điểm cận lâm sàng 71 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 83 4.1 Một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh nhân 84 viêm gan B mạn tính 4.1.1 Đặc điểm tuổi giới tính 84 4.1.2 Một số đặc điểm lâm sàng 87 4.1.3 Một số đặc điểm cận lâm sàng 88 4.1.4 Đặc điểm mơ bệnh học nhóm bệnh nhân sinh thiết gan 92 4.2 Hoạt độ SOD, GPx tình trạng chống oxy hóa tồn phần 95 (TAS) huyết tương bệnh nhân viêm gan B mạn tính 4.2.1 Hoạt độ SOD huyết tương 96 4.2.2 Hoạt độ GPx 98 4.2.3 Trạng thái chống oxy hóa toàn phần (TAS) 100 4.3 Đánh giá mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS 99 huyết tương với lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân viêm gan B mạn tính 4.3.1 Liên quan với tuổi giới 102 4.3.2 Mối liên quan với số đặc điểm lâm sàng 4.3.3 Liên quan với đặc điểm cận lâm sàng 4.3.4 Liên quan với mô học 103 103 106 KẾT LUẬN 108 KIẾN NGHỊ 110 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN TT Phần viết tắt ALD Phần viết đầy đủ (Alcoholic Liver Disease) Bệnh gan rượu ALT Alanine aminotransferase AST Aspartate aminotransferase BN Bệnh nhân CHB Chronic Hepatitis B: Viêm gan B mạn DNA Deoxyribonucleic acid ER Endoplasmic Reticulum: Lưới nội chất GPx Glutathione Peroxydase GTBT 10 HAI Giá trị bình thường Histology Activity Index: số hoạt động mô bệnh học 11 HBcAb Hepatitis B core antibody: kháng thể kháng kháng nguyênlõi vi rút viêm gan B 12 HBeAb Hepatitis B e antibody: kháng thể kháng kháng nguyên e vi rút viêm gan B 13 HBeAg Hepatitis B e antigen: kháng nguyên e vi rút viêm gan B 14 HBsAb Hepatitis B surface antibody: kháng thể kháng kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B 15 HBsAg Hepatitis B surface antigen: kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B 16 HBV Hepatitis B virus Vi rút viêm gan B TT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ 17 HCC Ung thư biểu mô tế bào gan 18 HCV Hepatitis C virus Vi rút viêm gan C Kháng thể 19 KT 20 OHdG 21 SL Giá trị p kiểm định Mann - Whitney 22 p** Giá trị p kiểm định Kruskal - Wallis 23 SL Số lượng 24 ROS Hydroxydeoxyguanosine Reactive oxygen Species Dạng oxy hoạt động 25 SOD Super Oxydase Dimutase 26 TAS Total antioxydant status Trạng thái chống oxy hóa toàn phần thể Tỷ lệ 27 TL 28 UTTBG 29 VGC 30 VGMT Viêm gan mạn tính 31 VRVG B Viêm gan vi rút B 32 XG Ung thư tế bào gan Viêm gan cấp Xơ gan DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Tên bảng Giá trị tham chiếu số số huyết học áp dụng Trang 43 Bệnh viện 103 2.2 Giá trị tham chiếu số số hóa sinh áp dụng 44 Bệnh viện 103 2.3 Tổn thương mô bệnh học theo Knodell năm 1981 56 3.1 Đặc điểm tuổi 60 3.2 Đặc điểm giới tính 60 3.3 Các triệu trứng lâm sàng hay gặp 61 3.4 Xét nghiệm Enzym gan 61 3.5 Kết xét nghiệm HBV – DNA 62 3.6 Kết xét nghiệm HBeAg 63 3.7 Đặc điểm tổn thương gan mô bệnh học 63 3.8 Mức độ viêm gan mạn tính theo phân loại Knodell 64 3.9 Tỷ lệ bệnh nhân định lượng hoạt độ SOD, GPx 64 TAS huyết tương 3.10 Hoạt độ SOD (U/ml) bệnh nhân viêm gan B mạn tính 65 3.11 Hoạt độ GPx (U/ml) bệnh nhân viêm gan B mạn tính 65 3.12 Hoạt độ TAS (U/ml) bệnh nhân viêm gan B mạn tính 66 3.13 Mối liên quan hoạt độ SOD huyết tương với tuổi 66 3.14 Mối liên quan hoạt độ GPx huyết tương với tuổi 67 3.15 Mối liên quan hoạt độ TAS huyết tương với tuổi 67 3.16 Mối liên quan hoạt độ SOD huyết tương 68 với đặc điểm lâm sàng 3.17 Mối liên quan hoạt độ GPx huyết tương 69 với đặc điểm lâm sàng Bảng 3.18 Tên bảng Trang Mối liên quan hoạt độ TAS huyết tương 70 với đặc điểm lâm sàng 3.19 Mối liên quan tỷ lệ bệnh nhân phát SOD 71 với bilirubin toàn phần 3.20 Mối liên quan tỷ lệ phát TAS 71 với bilirubin toàn phần 3.21 Mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS huyết tương 72 với bilirubin toản phần 3.22 Mối liên quan tỷ lệ phát SOD với enzym gan 72 3.23 Mối liên quan tỷ lệ phát TAS với enzym gan 73 3.24 Mối liên quan hoạt độ SOD với Enzym gan 74 3.25 Mối liên quan hoạt độ GPx huyết tương với enzym gan 75 3.26 Mối liên quan hoạt độ TAS huyết tương với Enzym gan 76 3.27 Mối tương quan SOD, GPx TAS huyết tương với 77 enzym gan 3.28 Mối tương quan SOD, GPx TAS huyết tương 78 với công thức máu 3.29 Mối liên quan tỷ lệ phát SOD với HBV-DNA 78 3.30 Mối liên quan tỷ lệ phát TAS với HBV-DNA 79 3.31 79 Mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS huyết tương với HBV - DNA 3.32 Mối liên quan tỷ lệ phát SOD với HBeAg 3.33 Mối liên quan tỷ lệ phát TAS với HBeAg 3.34 80 80 Mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS huyết 80 tương với HBeAg 3.35 Mối liên quan tỷ lệ phát SOD với mức độ viêm gan 81 mạn tính theo phân loại Knodell Bảng 3.36 Tên bảng Trang Mối liên quan tỷ lệ phát TAS với mức độ viêm gan theo 81 phân loại Knodell 3.37 Mối liên quan hoạt độ SOD, GPx TAS huyết tương 82 với mức độ viêm gan mạn tính 3.38 Mối tương quan SOD, GPx TAS huyết tương với 82 điểm hoạt độ mô học (HAI) 3.39 Mối liên quan hoạt độ TAS với tổn thương gan 80 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tên biểu đồ Trang 3.1 Xét nghiệm Bilirubin máu 62 3.2 Mối liên quan hoạt độ GPx enzym AST 75 3.3 Mối liên quan hoạt độ GPx với enzym GGT 76 DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Các dạng oxy hoạt động thể 1.2 Phân bố tỷ lệ nhiễm vi rút viêm gan B giới 15 1.3 Mơ hình chu trình thâm nhập nhân lên HBV 22 1.4 Stress oxy hóa gây HBV 34 2.1 Máy đọc ELISA DAR 800 47 2.2 Hình ảnh kim sinh thiết Hepafix 54 ... viêm gan mạn tính, xơ gan cuối ung thư gan Tình trạng strees oxy hóa có ý nghĩa định góp phần làm sáng tỏ chế b nh sinh b nh gan b nh gan rượu, viêm gan vi rút mạn tính, b nh gan tự miễn b nh gan. .. peroxydase (GPx) trạng thái chống oxy hóa tồn phần (TAS) thể để đánh giá tình trạng stress oxy hóa [41] 29 Nhiễm vi rút viêm gan B mạn tính yếu tố nguy quan trọng sinh b nh học viêm gan mạn tính, ... hóa Như vậy, trạng thái stress oxy hóa rối loạn cân chất chống oxy hóa chất oxy hóa theo hướng thiên tạo chất oxy hóa [36] Tình trạng strees oxy hóa đóng có vai trò định b nh sinh b nh gan mạn